淫羊藿苷基于GDF-9_Smads对多囊卵巢小鼠排卵的作用.pdf

h t t p:/X B Y Z.c b p t.c n k i.n e t淫羊藿苷基于G D F-9/S m a d s对多囊卵巢小鼠排卵的作用王小洁1,张云锋2,张彦敏31.邯郸市妇幼保健院中医妇科,邯郸 0 5 6 0 0 0;2.河北省沧州中西医结合医院中医专家门诊,沧州 0 6 1 0 0 0;3.石家庄市井陉矿区人民医院内科,石家庄 0 5 0 1 0 0摘要:目的 探讨淫羊藿苷(i c a r i i n,I C A)对多囊卵巢综合征(p o l y c y s t i c o v a r i a n s y n d r o m e,P C O S)小鼠排卵障碍和卵泡发育的作用。方法 取5 0只小鼠,4 0只用脱氢表雄酮法建立P C O S模型,随机分为模型组及I C A低剂量、中剂量和高剂量组,每组1 0只,剩余1 0只未建立模型的小鼠作为对照组。I C A低剂量、中剂量和高剂量组分别按2 5、5 0、7 5 m gk g-1 腹腔注射0.5 m L I C A(溶于9 gL-1氯化钠注射液0.5 m L中),对照组和模型组腹腔注射9 gL-1氯化钠注射液,比较各组小鼠激素水平、脏器指数、卵巢形态学差异、卵母细胞凋亡率、生长分化因子9(g r o w t h d i f f e r e n t i a t i o n f a c t o r-9,G D F-9)、骨形成蛋白型受体(b o n e m o r p h o-g e n e t i c p r o t e i n t y p e r e c e p t o r,BMP R-)、激活素受体样激酶5(a c t i v i n r e c e p t o r l i k e k i n a s e 5,A L K 5)、磷酸化S m a d蛋白2(p h o s p h o-S m a d p r o t e i n 2,p-S m a d 2)及p-S m a d 3蛋白水平的差异。结果 HE结果显示I C A各剂量组小鼠各级卵泡数量增多,颗粒细胞层数增加、囊性卵泡数量减少;I C A各剂量组睾酮激素(t e s t o s t e r o n e,T)、促黄体生成激素(l u t e i n i z i n g h o r m o n e,LH)、抗缪勒管激素(a n t i-M l l e r i a n h o r m o n e,AMH)水平、卵巢指数、囊性卵泡数量以及卵泡细胞凋亡率较模型组降低,卵泡刺激素(f o l-l i c l e s t i m u l a t i n g h o r m o n e,F S H)、雌二醇(e s t r a d i o l,E2)水平、子宫指数、生长卵泡数量、黄体数量、G D F-9、BMP R-、A L K 5、p-S m a d 2、p-S m a d 3蛋白表达水平较模型组升高(P0.0 5);T、LH、AMH水平及卵巢指数、囊性卵泡数量、卵泡细胞凋亡率与I C A呈剂量依赖性降低,E2、F S H水平、子宫指数、生长卵泡数量、黄体数量以及G D F-9、BMP R-、A L K 5、p-S m a d 2和p-S m a d 3蛋白的表达水平与I C A呈剂量依赖性升高(P0.0 5)。结论 I C A能有效调节P C O S小鼠生殖激素水平,改善内分泌代谢,促进卵泡发育、成熟,减少卵泡凋亡,改善排卵,可能与调控G D F-9/S m a d s信号通路蛋白的表达有关。关键词:淫羊藿苷;多囊卵巢综合征;排卵障碍;卵泡发育;生长分化因子9/S m a d蛋白家族D O I:1 0.3 9 6 9/j.i s s n.1 0 0 4-2 4 0 7.2 0 2 3.0 5.0 1 2中图分类号:R 9 6 5 文献标志码:A 文章编号:1 0 0 4-2 4 0 7(2 0 2 3)0 5-0 0 6 5-0 6E f f e c t o f i c a r i i n o n o v u l a t o r y d y s f u n c t i o n a l i n p o l y c y s t i c o v a r y m i c e t h r o u g h G D F-9/S m a d sWANG X i a o j i e1,Z HAN G Y u n f e n g2,Z HANG Y a n m i n31.D e p a r t m e n t o f G y n e c o l o g y o f T r a d i t i o n a l C h i n e s e M e d i c i n e(T CM),H a n d a n M a t e r n a l a n d C h i l d r e n H e a l t h H o s p i t a l,H a n d a n 0 5 6 0 0 0,C h i n a;2.T CM E x p e r t C l i n i c o f C a n g z h o u H o s p i t a l o f I n t e g r a t e d T r a d i t i o n a l C h i n e s e a n d W e s t e r n M e d i c i n e,C a n g z h o u 0 6 1 0 0 0,C h i n a;3.D e p a r t m e n t o f I n t e r n a l M e d i c i n e,P e o p l e s H o s p i t a l o f J i n g x i n g M i n i n g A r e a,S h i j i a z h u a n g 0 5 0 1 0 0,C h i n aA b s t r a c t:OO bb jj ee cc tt ii vv ee T o i n v e s t i g a t e t h e e f f e c t s o f i c a r i i n(I C A)o n o v u l a t i o n d i s o r d e r a n d f o l l i c u l a r d e v e l o p m e n t i n p o l y c y s t i c o v a r y s y n d r o m e(P C O S)m i c e.MM ee tt hh oo dd ss 5 0 m i c e w e r e t a k e n a n d 4 0 w e r e u s e d t o e s t a b l i s h P C O S m o d e l b y d e h y d r o e p i a n d r o s t e r o n e m e t h o d,w h i c h w e r e r a n d o m l y d i v i d e d i n t o m o d e l g r o u p,I C A l o w,m e d i u m a n d h i g h d o s e g r o u p s,w i t h 1 0 m i c e i n e a c h g r o u p,a n d t h e r e m a i n i n g 1 0 m i c e w i t h o u t m o d e l w e r e u s e d a s c o n t r o l g r o u p.T h e l o w,m e d i u m a n d h i g h d o s e g r o u p s o f I C A w e r e i n t r a-p e r i t o n e a l l y i n j e c t e d w i t h 0.5 m L o f 2 5,5 0 a n d 7 5 m gk g-1 I C A(d i s s o l v e d i n 9 gL-1 S o d i u m C h l o r i d e I n j e c t i o n s),a n d 9 gL-1 S o d i u m C h l o r i d e I n j e c t i o n s w e r e i n t r a p e r i t o n e a l l y i n j e c t e d i n t o t h e c o n t r o l g r o u p a n d t h e m o d e l g r o u p.T h e l e v e l s o f h o r m o n e,o r-g a n i n d e x,o v a r i a n m o r p h o l o g y,o o c y t e a p o p t o s i s,g r o w t h d i f f e r e n t i a t i o n f a c t o r-9(G D F-9),b o n e m o r p h o g e n e t i c p r o t e i n t y p e I I r e c e p t o r(BMP R-),a c t i v i n r e c e p t o r l i k e k i n a s e 5(A L K 5),p h o s p h o-S m a d p r o t e i n 2(p-s m a d 2)a n d p-S m a d 3 w e r e c o m p a r e d.RR ee ss uu ll tt ss T h e HE s t a i n i n g r e s u l t s s h o w e d t h a t t h e n u m b e r o f f o l l i c l e s a n d t h e n u m b e r o f g r a n u l a r c e l l l a y e r s i n c r e a s e d,t h e n u m b e r o f c y s t i c f o l l i c l e s d e c r e a s e d i n d i f f e r e n t d o s e g r o u p o f I C A.T h e l e v e l s o f t e s t o s t e r o n e(T),l u t e i n i z i n g h o r m o n e(LH),a n t i-M l l e r i a n h o r m o n e(AMH),o v a r i a n i n d e x,n u m b e r o f c y s t i c f o l l i c l e s a n d f o l l i c u l a r c e l l a p o p t o s i s i n I C A d i f f e r e n t g r o u p s w e r e l o w e r t h a n t h o s e i n m o d e l g r o u p,w h i l e t h e l e v e l s o f e s t r a d i o l(E2),f o l l i c l e s t i m u l a t i n g h o r m o n e(F S H),u t e r i n e i n d e x,n u m b e r o f g r o w i n g f o l l i c l e s,n u m b e r o f c o r p u s l u t e u m a n d t h e e x p r e s s i o n l e v e l s o f G D F-9,BMP R-,A L K 5,p-S m a d 2 a n d p-S m a d 3 p r o-t e i n w e r e h i g h e r t h a n t h o s e i n m o d e l g r o u p(P0.0 5).T h e l e v e l s o f T,LH,AMH,o v a r i a n i n d e x,t h e n u m b e r o f c y s t i c f o l l i c l e s a n d f o l l i c u l a r c e l l a p o p t o s i s d e c r e a s e d i n a d o s e-d e p e n d e n t m a n n e r w i t h I C A,w h i l e t h e l e v e l s o f E2,F S H,u t e r i n e i n d e x,t h e n u m b e r o f g r o w i n g f o l l i c l e s,t h e n u m b e r o f c o r p u s l u t e u m,a n d t h e e x p r e s s i o n l e v e l s o f G D F-9,BMP R-,A L K 5,p-S m a d 2 a n d 基金项目:2 0 2 2年度河北省中医药类科研计划课题项目(编号:2 0 2 2 6 0 2)56西北药学杂志 2 0 2 3年9月 第3 8卷 第5期h t t p:/X B Y Z.c b p t.c n k i.n e tp-S m a d 3 i n c r e a s e d i n a d o s e-d e p e n d e n t m a n n e r w i t h I C A(P0.0 5).CC oo nn cc ll uu ss ii oo nn I C A c a n e f f e c t i v e l y r e g u l a t e t h e l e v e l o f r e p r o-d u c t i v e h o r m o n e,i m p r o v e t h e e n d o c r i n e m e t a b o l i s m,p r o m o t e t h e f o l l i c u l a r d e v e l o p m e n t a n d m a t u r a t i o n,r e d u c e t h e f o l l i c u l a r a p o p t o s i s a n d i m p r o v e t h e o v u l a t i o n i n P C O S m i c e,w h i c h m a y b e r e l a t e d t o t h e r e g u l a t i o n o f G D F-9/S m a d s s i g n a l i n g p a t h w a y p r o t e i n s.K e y w o r d s:i c a r i i n;p o l y c y s t i c o v a r y s y n d r o m e;o v u l a t i o n d i s o r d e r;f o l l i c u l a r d e v e l o p m e n t;g r o w t h d i f f e r e n t i a t i o n f a c t o r 9/S m a d p r o t e i n f a m i l y 多囊卵巢综合征(p o l y c y s t i c o v a r i a n s y n d r o m e,P C O S)发病原因复杂,表现出长期无排卵或稀发排卵的高雄激素特征,严重影响患者的青春期心理、育龄期机体代谢等1-2。淫羊藿是我国传统的滋补类中草药,能增强机体性功能和免疫功能,在临床常被用于辅助治疗P C O S3-4。淫羊藿苷(i c a r i i n,I C A)作为淫羊藿的主要有效成分之一,具有抗氧化、抗癌、抗血管生成和抗炎等多种药理活性5。本研究用脱氢表雄酮法建立P C O S小鼠模型,研究I C A对P C O S小鼠排卵障碍和卵泡发育的影响及作用机制。1 仪器与材料1.1 仪器微量移液器(德国E p p e n d o r f公司);HM 3 5 5 S全自动轮转式石蜡切片机(德国M I C ON医疗技术有限公司);P o w e r P a c电泳仪(美国B i o-R a d公司)。1.2 试药脱氢表雄酮(上海恒渡生物科技有限公司);淫羊藿苷(质量分数 9 8%,上海吉至生化科技有限公司);雌二醇(e s t r a d i o l,E2)、睾酮激素(t e s t o s t e r o n e,T)、促黄体生成激素(l u t e i n i z i n g h o r m o n e,L H)、卵泡刺激素(f o l l i c l e s t i m u l a t i n g h o r m o n e,F S H)和 抗 缪 勒 管 激 素(a n t i-M l l e r i a n h o r m o n e,AMH)E L I S A试剂盒,均购自武汉华美生物工程有限公司;兔抗小鼠生长分化因子9(g r o w t h d i f f e r e n t i a t i o n f a c t o r 9,G D F-9)、骨形成蛋白型受体(b o n e m o r p h o g e n e t i c p r o t e i n t y p e r e c e p t o r,B M-P R-)、激活素受体样激酶5(a c t i v i n r e c e p t o r l i k e k i n a s e 5,A L K 5)、S m a d蛋白2(S m a d p r o t e i n 2,S m a d 2)、p-S m a d 2、p-S m a d 3、S m a d 3一抗和辣根过氧化物酶标记的山羊抗兔I g G,均购自美国A b c a m公司。1.3 动物雌性C 5 7 B L/6小鼠5 0只,S P F级,4周龄,体质量为(1 21)g,购自上海斯莱克实验动物有限责任公司,许可证号S C X K(沪)2 0 1 7-0 0 0 5。2 方法2.1 P C O S模型的建立用阴道组织涂片法连续2 0 d对5 0只小鼠阴道细胞涂片进行动情周期观察,随机选择动情周期完整的4 0只小 鼠,于 每日上午9点在小鼠 颈背部皮下 注射6 0 m gk g-1脱氢表雄酮(溶于注射用橄榄油0.2 m L),另取1 0只小鼠作为对照组,于相同时间注射橄榄油0.2 m L,均连续注射2 1 d6。造模7 d起,对小鼠阴道脱落细胞进行阴道细胞涂片,观察动情周期情况,阴道涂片显示无规律性的动情周期表明造模成功7。2.2 干预方法将4 0只建模成功的小鼠随机分为模型组及I C A低剂量、中剂量和高剂量组,每组1 0只。建模成功2 4 h后,I C A低剂量、中剂量和高剂量组分别按照2 5、5 0、7 5 m gk g-1腹腔注射I C A 0.5 m L(溶于9 gL-1氯化钠注射液中)8,对照组和模型组腹腔注射9 gL-1氯化钠注射液0.5 m L,每日1次,连续干预2周。2.3 检测激素水平末次干 预结束 后空腹1 2 h,称定质量,每日用3 0 m gk g-1戊巴比妥麻醉,迅速采集小鼠腹主动脉血液5 m L,常温静置2 0 m i n后以1 0 0 0 0 rm i n-1离心1 0 m i n(离心半径为1 0 c m),取血清样本2 m L,按照E L I S A试剂盒说明书进行操作,依次加样、孵育酶标抗体,加底物显色,终止反应,用酶标仪于4 5 0 n m处测定各孔吸光度值A,绘制标准曲线,计算待测样品中T、E2、LH、F S H和AMH水平。2.4 计算脏器指数取血后将各组小鼠双侧卵巢和子宫完整取出,去除周围脂肪组织,称定质量并记录,计算脏器指数。卵巢指数=卵巢质量(m g)/体质量(g)。子宫指数=子宫湿质量(m g)/体质量(g)。2.5 观察组织学变化用生理盐水冲洗卵巢组织,取右侧卵巢组织置于液氮中保存,取左侧卵巢组织置于4 0 gL-1多聚甲醛溶液中固定2 4 h,经脱水和石蜡包埋,制成厚度为4 m的切片,依次乙醇脱水、二甲苯透明、苏木素染色、盐酸乙醇分化、伊红染色、脱水、透明、中性树胶封片,于显微镜下观察组织形态。每张切片随机选取5个不同视野,计数生长卵泡数量、囊性卵泡数量和黄体数量。2.6 流式细胞术检测细胞凋亡取各组2.5项下液氮保存的小鼠部分卵巢组织置于P B S中,显微镜下用镊子挤压卵巢得到颗粒细胞和卵母细胞,静置1 0 m i n,去上清,加入1 gL-1的胰蛋白酶消化1 5 m i n,加入M 1 6培养液,静置1 0 m i n,去上清,再加入P B S以3 0 0 0 rm i n-1离心1 0 m i n,去上清,用P B S冲洗,加入B i n d i n g B u f f e r结合液4 0 0 L悬浮细胞,调整66西北药学杂志 2 0 2 3年9月 第3 8卷 第5期h t t p:/X B Y Z.c b p t.c n k i.n e t细胞密度为5 1 05个 m L-1,加入F I T C-A n n e x i n V 5 L和P I 5 L,混匀,避光静置1 0 m i n,上样检测细胞凋亡情况。2.7 检测卵巢组织中相关蛋白水平取各组2.5项下冷冻保存的小鼠卵巢组织1 0 0 m g,置于E P管中,加入R I P A试剂0.6 m L,剪碎匀浆,静置1 0 m i n,离心(2 0 m i n,4,8 0 0 0 rm i n-1,离心半径为1 0 c m),取上清,用B C A试剂盒蛋白定量,取11样本和上样缓冲液混匀进行S D S-P AG E电泳,1 0 0 V电转3 0 m i n,转至P V D F膜上,滴加适量封闭液处理2 h(室 温),将 膜 放 入G D F-9、BMP R-、A L K 5、p-S m a d 2、p-S m a d 3、S m a d 2和S m a d 3一抗中(均18 0 0稀释),4 摇床孵育过夜,T B S T洗膜,放入二抗(12 0 0 0稀释)中,室温摇床孵育1 h,T B S T洗膜,滴加显影液,于暗室曝光、显影,I m a g e J软件分析条带灰度值。2.8 统计学方法用软件S P S S 2 4.0处理数据,计量资料以(xs)描述,多样本比较用单因素方差分析,两两比较用L S D-t检验。P0.0 5为差异有统计学意义。3 结果3.1 各组小鼠激素水平的比较模型组T、LH和AMH的水平较对照组升高,E2、F S H的水平较对照组降低(P0.0 5);I C A各剂量组T、LH和AMH的水平较模型组降低,E2、F S H的水平较模型组升高(P0.0 5);T、LH和AMH的水平与I C A呈剂量依赖性降低,E2、F S H的水平与I C A呈剂量依赖性升高(P0.0 5)。见表1。表1 各组小鼠激素水平的比较(xs,n=1 0)T a b.1 C o m p a r i s o n o f t h e h o r m o n e l e v e l s i n v a r i o u s g r o u p s o f m i c e(xs,n=1 0)项目E2/(p gm L-1)T/(n gm L-1)LH/(m I Um L-1)F S H/(m I Um L-1)AMH/(n gm L-1)对照组7 0.5 64.5 70.8 40.1 03.9 00.4 52.1 40.2 05.1 50.3 8模型组4 1.7 93.6 4a2.6 60.2 0a9.2 00.6 7a0.8 10.0 7a1 0.4 50.9 4aI C A低剂量组4 7.8 93.2 5a b2.2 60.2 7a b8.1 70.4 8a b1.2 30.1 1a b8.5 70.4 4a bI C A中剂量组5 6.5 23.1 1a b c1.5 70.1 4a b c6.9 50.3 9a b c1.5 20.1 1a b c7.5 30.5 2a b cI C A高剂量组6 4.8 43.2 7a b c d1.0 90.1 2a b c d5.7 10.4 3a b c d1.8 30.1 0a b c d6.5 10.0.4 8a b c dF1 8 2.7 1 93 3 5.8 3 44 4 6.0 9 83 0 2.0 8 52 4 4.0 1 8P0.0 0 10.0 0 10.0 0 10.0 0 10.0 0 1 注:与对照组比较,aP0.0 5;与模型组比较,bP0.0 5;与I C A低剂量组比较,cP0.0 5;与I C A中剂量组比较,dP0.0 5。3.2 各组小鼠脏器指数的比较模型组的卵巢指数较对照组升高,子宫指数较对照组降低(P0.0 5);I C A各剂量组的卵巢指数较模型组降低,子宫指数较模型组升高(P0.0 5);卵巢指数与I C A呈剂量依赖性降低,子宫指数与I C A呈剂量依赖性升高(P0.0 5)。见表2。表2 各组小鼠脏器指数比较(xs,n=1 0)T a b.2 C o m p a r i s o n o f t h e o r g a n c o e f f i c i e n t i n v a r i o u s g r o u p s o f m i c e(xs,n=1 0)项目卵巢指数/(m gg-1)子宫指数/(m gg-1)对照组2.2 90.1 46.9 50.3 9模型组4.9 20.3 0a3.3 10.3 1aI C A低剂量组4.5 10.2 1a b4.6 30.2 8a bI C A中剂量组3.6 50.3 1a b c5.8 00.3 8a b cI C A高剂量组2.9 90.2 3a b c d6.4 80.3 1a b c dF1 7 1.4 3 71 9 1.4 1 5P0.0 0 10.0 0 1 注:与对照组比较,aP0.0 5;与模型组比较,bP0.0 5;与I C A低剂量组比较,cP0.0 5;与I C A中剂量组比较,dP0.0 5。3.3 各组小鼠卵巢组织形态学的比较对照组小鼠卵巢组织可见各时期的卵泡和黄体,有发育良好的生长卵泡且卵泡的颗粒细胞呈多层次。模型组小鼠的卵巢组织中较少见生长卵泡,颗粒细胞层数减少,卵巢囊性卵泡数量和闭锁卵泡数量增加,黄体数量减少;I C A各剂量组小鼠各级卵泡数量增多,卵泡内颗粒细胞层数增加、囊性卵泡数量减少,黄体数量增加。囊性卵泡数量与I C A呈剂量依赖性降低,生长卵泡数量、黄体数量与I C A呈剂量依赖性增加(P0.0 5)。见图1、表3。76西北药学杂志 2 0 2 3年9月 第3 8卷 第5期h t t p:/X B Y Z.c b p t.c n k i.n e t注:A.对照组;B.模型组;C.I C A低剂量组;D.I C A中剂量组;E.I C A高剂量组。图1 卵巢组织病理组织学观察(H E1 0 0)F i g.1 P a t h o l o g i c a l s t a i n i n g o f o v a r i a n t i s s u e(HE1 0 0)表3 各组小鼠卵巢组织生长卵泡、囊状卵泡和黄体数量比较(xs,n=1 0)T a b.3 C o m p a r i s o n o f t h e g r o w i n g f o l l i c l e s,c y s t i c f o l l i c l e s a n d c o r p u s l u t e u m n u m b e r s o f o v a r i a n t i s s u e i n v a r i o u s g r o u p s o f m i c e(xs,n=1 0)项目生长卵泡数量/个囊性卵泡数量/个黄体数量/个对照组1 8.0 01.1 51.6 00.5 21 9.7 01.0 6模型组9.0 01.1 5a5.2 01.4 0a1 4.7 01.1 6aI C A低剂量组1 2.8 01.1 4a b5.0 00.9 4a b1 5.8 01.1 4a bI C A中剂量组1 4.0 01.0 5a b c4.5 00.8 5a b c1 7.9 00.9 9a b cI C A高剂量组1 5.9 00.9 9a b c d2.5 00.8 5a b c d1 8.5 01.0 8a b c dF6 6.1 5 62 5.0 7 52 7.2 5 2P0.0 0 10.0 0 10.0 0 1 注:与对照组比较,aP0.0 5;与模型组比较,bP0.0 5;与I C A低剂量组比较,cP0.0 5;与I C A中剂量组比较,dP0.0 5。3.4 各组小鼠卵泡细胞凋亡率的比较模型组凋亡率较对照组升高(P0.0 5);I C A各剂量组凋亡率较模型组降低(P0.0 5);凋亡率与I C A呈剂量依赖性降低(P0.0 5),见表4。表4 各组小鼠卵母细胞凋亡率的比较(xs,n=1 0)T a b.4 C o m p a r i s o n o f t h e a p o p t o s i s o f o o c y t e s i n v a r i o u s g r o u p s o f m i c e(xs,n=1 0)项目凋亡率对照组3.8 6%1.1 2%模型组1 7.7 5%2.0 9%aI C A低剂量组1 3.6 7%1.8 6%a bI C A中剂量组1 1.2 5%1.3 2%a b cI C A高剂量组7.4 8%1.2 7%a b c dF1 1 6.5 1 1P0.0 0 1 注:与对照组比较,aP0.0 5;与模型组比较,bP0.0 5;与I C A低剂量组比较,cP0.0 5;与I C A中剂量组比较,dP0.0 5。3.5 卵巢组织相关蛋白水平的比较模型组G D F-9、BMP R-、A L K 5、p-S m a d 2和p-S m a d 3蛋白的表达水平均较对照组降低(P0.0 5);I C A各剂量组G D F-9、BMP R-、A L K 5、p-S m a d 2和p-S m a d 3蛋白的表达水平较模型组升高(P0.0 5);G D F-9、BMP R-、A L K 5、p-S m a d 2和p-S m a d 3蛋白的表达水平与I C A呈剂量依赖性升高(P0.0 5)。见表5、图2。表5 各组小鼠卵巢组织G D F-9、BMP R-、A L K 5、p-S m a d 2和p-S m a d 3蛋白水平的比较(xs,n=1 0)T a b.5 C o m p a r i s o n o f G D F-9,BMP R-,A L K 5,p-S m a d 2 a n d p-S m a d 3 p r o t e i n l e v e l s i n o v a r i a n t i s s u e i n v a r i o u s g r o u p s o f m i c e(xs,n=1 0)项目G D F-9BMP R-A L K 5p-S m a d 2/S m a d 2p-S m a d 3/S m a d 3对照组1.2 60.0 70.9 00.0 60.7 80.0 50.5 80.0 50.7 20.0 7模型组0.6 40.0 6a0.6 00.0 7a0.5 00.0 6a0.2 50.0 4a0.3 20.0 3aI C A低剂量组0.8 00.0 6a b0.6 40.0 6a b0.5 50.0 7a b0.3 30.0 4a b0.4 30.0 3a b86西北药学杂志 2 0 2 3年9月 第3 8卷 第5期h t t p:/X B Y Z.c b p t.c n k i.n e t表5(续)各组小鼠卵巢组织G D F-9、BM P R-、A L K 5、p-S m a d 2和p-S m a d 3蛋白水平的比较(xs,n=1 0)T a b.5(C o n t i n u e d)C o m p a r i s o n o f G D F-9,BMP R-,A L K 5,p-S m a d 2 a n d p-S m a d 3 p r o t e i n l e v e l s i n o v a r i a n t i s s u e i n v a r i o u s g r o u p s o f m i c e(xs,n=1 0)项目G D F-9BMP R-A L K 5p-S m a d 2/S m a d 2p-S m a d 3/S m a d 3I C A中剂量组0.9 70.0 6a b c0.6 90.0 5a b c0.6 00.0 5a b c0.4 00.0 4a b c0.5 10.0 4a b cI C A高剂量组1.0 60.0 8a b c d0.7 70.0 5a b c d0.6 70.0 5a b c d0.4 80.0 6a b c d0.6 00.0 6a b c dF9 6.2 3 73 1.0 9 93 8.8 0 36 0.4 4 08 7.5 1 9P0.0 0 10.0 0 10.0 0 10.0 0 10.0 0 1 注:与对照组比较,aP0.0 5;与模型组比较,bP0.0 5;与I C A低剂量组比较,cP0.0 5;与I C A中剂量组比较,dP0.0 5。注:A.对照组;B.模型组;C.I C A低剂量组;D.I C A中剂量组;E.I C A高剂量组。图2 卵 巢 组 织 中G D F-9、BM P R-、A L K 5、p-S m a d 2和p-S m a d 3蛋白检测F i g.2 G D F-9,BMP R-,A L K 5,p-S m a d 2 a n d p-S m a d 3 p r o-t e i n d e t e c t i o n i n o v a r i a n t i s s u e4 讨论P C O S是由多种因素调控的具有较高发病率的内分泌和代谢紊乱疾病,由于激素异常分泌,影响下丘脑-垂体-卵巢轴的平衡,使卵泡正常发育或正常排卵受到干扰,从而导致不孕9-1 0。本研究中I C A各剂量组小鼠卵巢指数和囊性卵泡数量较模型组降低,子宫指数、黄体和生长卵泡数量均较模型组升高,表明I C A可促进P C O S小鼠卵泡生长、发育,改善排卵功能。卵泡的正常发育主要基于下丘脑 垂体 性腺轴调控分泌的性激素共同维持生殖内分泌活动的稳定1 1。AMH是反映卵巢中生长卵泡数量的重要标志物,在P C O S中参与卵泡发育的2个过程,一是可抑制始基卵泡的起始募集,即阻止生长卵泡形成;二是可阻止F S H刺激的卵泡发育,即抑制生长卵泡的发育和优势卵泡的形成1 2-1 3。优势卵泡在LH和F S H作用下排卵,F S H主要促进颗粒细胞的增生与分化,通过与卵泡表面的F S HR结合促进卵泡 生长1 4。本研究中I C A各剂量组T、LH、AMH水平较模型组降低,E2、F S H水平较模型组升高,表明I C A可有效改善P C O S小鼠内分泌代谢,进一步缓解无排卵或稀发排卵。此外,卵泡颗粒细胞在卵泡发育中发挥着重要作