新生儿溶血病检测结果及其影响因素分析.pdf

海军医学杂志 2023 年 6 月第 44 卷第 6 期 Journal of Navy Medicine，Vol.44，No.6，Jun.2023新生儿溶血病检测结果及其影响因素分析程路玲，汪邦山摘要 目的分析新生儿溶血病（hemolytic disease of new born，HDN）的血清学检测结果及其影响因素。方法选取2020 年 1-12 月安徽省合肥市第一人民医院收治的 92 例疑似 HDN 的新生儿，采集患儿与母亲血液，使用微柱凝胶检测卡进行抗人球蛋白试验（直接法）、血清游离抗体试验、红细胞抗体释放试验检测，对存在 ABO 溶血病（ABOHDN）的患儿或血清游离抗体试验结果 2+以上的患儿进行抗体和抗原鉴定。结果92 例患儿中共检出 HDN 45 例，检出率为 48.91%。45 例男性患儿 HDN 检出率为 33.33%（15/45），47 例女性患儿 HDN 检出率为 63.83%（30/47），女性患儿 HND 检出率高于男性患儿（2=8.556，P=0.003）。日龄1 d 组、2 d 组、3 d 组、4 d 组、5 d 组、6 d 组患儿的 HDN 检出率分别为 71.43%（5/7）、76.92%（10/13）、69.23%（9/13）、53.85%（7/13）、41.67%（5/12）、26.47%（9/34），随着患儿的日龄增加，HDN 的检出率逐步降低（2=15.471，P0.05）。以红细胞抗体释放试验为金标准，血清游离抗体试验检测 HND 的灵敏度为 80.00%（36/45），抗人球蛋白试验（直接法）检测 HND 的灵敏度为 48.89%（22/45），并且日龄对抗人球蛋白试验（直接法）检测灵敏度有影响（2=11.556，P0.05）。共检出 ABOHDN 患儿 43 例，其中 IgG 抗 A 抗体引起 HDN 有 20 例（46.51%），IgG 抗 B 抗体引起 HDN 有 23 例（53.49%）。结论患儿性别和日龄会对 HDN 检出率造成影响。为避免出现抗体漏检，应尽早对疑似 HND 患儿进行血型鉴定及抗体筛查。关键词 新生儿溶血病；抗人球蛋白试验；血清游离抗体试验；红细胞抗体释放试验中图分类号 R722.18 文献标志码 A DOI 10.3969/j.issn.1009-0754.2023.06.022新生儿溶血病（haemolytic disease of newborn，HDN）是母婴血型不合引起的胎儿或新生儿免疫性溶血性疾病，以Rh 和 ABO 血型不合引起的 HDN（RhHDN 和 ABOHDN）最为常见1-2。HDN 主要通过血型鉴定和溶血三项试验（抗人球蛋白试验、血清游离抗体试验和红细胞抗体释放试验）进行确诊3。微柱凝胶卡式法是一种新型免疫检测方法，能够同时检测出 IgM 和 IgG 抗体，灵敏度较高，近年来在 HDN 血清学检测中的应用也逐渐增多4-5。本研究选取合肥市第一人民医院收治的有疑似溶血症状的患儿 92 例，采用微柱凝胶卡进行检测，分析检测结果及其相关影响因素。1对象与方法1.1研究对象选取 2020 年 112 月安徽省合肥市第一人民医院收治的 92 例疑似 HDN 的新生儿，存在高胆红素血症，主要症状为黄疸、贫血，其中男 45 例，女 47 例，出生时间 015 d，中位出生时间为 4.5 d。本研究通过安徽省合肥市第一人民医院伦理委员会审批。1.2检测方法采集患儿及其母亲抗凝全血，3 000 r/min 离心 10 min，分离红细胞与血清。使用微柱凝胶检测卡（ABORh 血型检测卡及抗人球蛋白卡）、配套专用设备及相关试剂（强生公司）进行检测。（1）血型检测：新生儿母亲 ABO 及 Rh 血型应用成人 ABORh 血型检测卡进行检测，新生儿 ABO 及 Rh 血型应用新生儿 ABORh 血型检测卡进行检测。（2）抗人球蛋白试验（直接法）：将新生儿的适量红细胞应用生理盐水进行洗涤，共进行 3 次，完毕后将上清液去除，加入生理盐水制备成 1%红细胞悬浮液。在检测卡的小孔内加入 50 l 的1%红细胞悬浮液，离心 5 min，完毕后观察结果。（3）血清游离抗体试验：在抗人球蛋白卡兑入 50 l 的 0.8%标准 ABO红细胞，再加入患儿 50 l 血浆，在孵育箱孵育 15 min，离心后观察。（4）红细胞抗体释放试验：取压积红细胞，用生理盐水洗涤 3 次，再加入相当于 1/2 压积红细胞的生理盐水与之混合，制备成红细胞悬液，放在 56 水浴箱孵育 10 min。完毕后取出离心，留下上层的放散液，在抗人球蛋白卡中加入50 L 的 0.8%标准 ABO 红细胞，再加入 50 L 放散液，孵育 15 min，离心后观察结果。（5）对于存在 ABOHDN 的患儿或血清游离抗体试验结果“+”以上的患儿进行抗体的特异性鉴定，同时对红细胞表面是否有与之相对应的抗原进行鉴定。1.3结果判读血型鉴定和抗人球蛋白试验（直接法）结果出现凝集即为阳性，血清游离抗体试验和红细胞抗体释放试验检出可以与新生儿红细胞出现反应的抗体即为阳性。以抗体释放试验阳性为金标准诊断6-7。短篇论著 作者单位 230061 安徽 合肥，合肥市第一人民医院输血科（程路玲）；中国科学技术大学生命科学学院（汪邦山）通信作者 程路玲，电子信箱：643海军医学杂志 2023 年 6 月第 44 卷第 6 期 Journal of Navy Medicine，Vol.44，No.6，Jun.20231.4统计学处理采用 SPSS 22.0.2 软件进行统计学分析。出生时间为计量资料，经 ShapiroWilk 检验显示不服从正态分布，以范围和中位数表示；计数资料以百分比表示，组间比较采用 检验。P0.05 为差异有统计学意义。2结果2.1患儿性别与 HDN 检出率的关系92 例疑似 HDN 患儿中，共检出 HDN 45 例，检出率为48.91%。其中男性患儿 HDN 检出率为 33.33%（15/45），女性患儿 HDN 检出率为 63.83%（30/47），女性患儿 HDN 检出率高于男性患儿（2=8.556，P=0.003）。2.2患儿日龄与 HDN 检出率的关系根据出生日龄，将疑似 HDN 患儿分为1 d 组、2 d 组、3 d 组、4 d 组、5 d 组、6 d 组，6 组患儿的 HDN 检出率分别为71.43%（5/7）、76.92%（10/13）、69.23%（9/13）、53.85%（7/13）、41.67%（5/12）、26.47%（9/34），可见日龄对新生儿 HDN的检出率具有影响，随着患儿的日龄增加，HDN 的检出率逐步降低（2=15.471，P0.05）。2.3HDN 患儿日龄与溶血三项试验灵敏度的关系以红细胞抗体释放试验为金标准，血清游离抗体试验检测 HDN 的灵敏度为 80.00%（36/45），抗人球蛋白试验（直接法）检测 HDN 的灵敏度为 48.89%（22/45）。按日龄进行分组后，统计学分析结果表明，日龄对抗人球蛋白试验（直接法）检测灵敏度有影响（2=11.556，P0.05）。见表 1。2.4ABO 血型抗体检出情况共检出 ABOHDN 患儿 43 例，其中 IgG 抗 A 抗体引起HDN 有 20 例（46.51%），IgG 抗 B 抗体引起 HDN 有 23 例（53.49%）。3讨论母婴血型不合为 HDN 的主要原因8。HDN 溶血三项试验中，抗人球蛋白试验（直接法）和红细胞抗体释放试验能对患儿红细胞结合血型抗体进行检测，血清游离抗体试验主要对患儿血清中的母体血型抗体进行检测，通过溶血三项试验与血型鉴定可以准确诊断 HDN9。本研究结果显示疑似HDN 的 92 例新生儿中，HDN 检出率为 48.91%（45/92），并且 女 性 患 儿 HDN 检 出 率 比 男 性 患 儿 高（63.83%vs 33.33%，P=0.003），与部分文献结果10-11一致。日龄1 d组、2 d 组、3 d 组、4 d 组、5 d 组、6 d 组患儿的 HDN 检出率分 别 为 71.43%、76.92%、69.23%、53.85%、41.67%、26.47%，HDN 的检出率随着患儿的日龄增加逐步降低（P0.05），表明患儿的日龄越小 HDN 的检出率越高。患儿出生24 h 之内，体内会存在一定数量的致敏红细胞、游离抗体，随着时间增加，致敏红细胞逐渐被破坏，游离抗体消失12。因此，为确保检测所得结果准确性，需要在新生儿发现存在高胆红素血症的同时，尽早进行血型鉴定和溶血三项试验检测。本研究以红细胞抗体释放试验为金标准，血清游离抗体试验和抗人球蛋白试验（直接法）检测 HDN 的灵敏度分别为80.00%和 48.89%，抗人球蛋白试验（直接法）的灵敏度较低，并且患儿日龄对抗人球蛋白试验（直接法）的检出率有影响（PEcCe，对 D 抗原进行检测为临床常规项，临床相关实践之中多考虑 RhDHDN，而容易忽略 Rh 其他分型的 HDN15。在二孩、三孩政策的推动下，Rh 其他分型HDN 出现的可能性逐渐增加16。结合相关研究结果，针对存在流产、输血史以及死胎的产妇，或是存在 HDN 病史者，均需要接受不规则抗体、Rh 血型分型检测，避免出现 HDN的漏检17-18。综上所述，母婴血型不合是 HDN 的主要病因，患儿性别和日龄会对 HDN 检出率造成影响。为避免出现抗体漏检，导致 HDN 诊断出现临床错误，应尽早对疑似 HDN 患儿进行血型鉴定及抗体筛查。参考文献1 刘娟，陈勇，唐海东，等脐带血血型血清学检测在新生儿溶血病中的应用 J 重庆医学，2021，50（14）：2492-24952 刘泉，刘玲，顾晓琴，等孕产妇母婴 ABO 血型不合导致新生儿溶血检测及意义 J 热带医学杂志，2021，21（7）：904-906，9153 Hassan SN，Thirumulu Ponnuraj K，Mohamad S，et alMolecular detection of glycophorins A and B variant phenotypes and their 表 1不同日龄 HDN 患儿与溶血三项试验灵敏度的关系 例（%）日龄分组1 d2 d3 d4 d5 d6 d合计HDN 例数510975945抗人球蛋白试验（直接法）4（80.00）7（70.00）4（44.44）3（42.86）2（40.00）2（22.22）22（48.89）血清游离抗体试验4（80.00）8（80.00）7（77.78）6（85.71）4（80.00）7（77.78）36（80.00）红细胞抗体释放试验5（100.00）10（100.00）9（100.00）7（100.00）5（100.00）9（100.00）45（100.00）644海军医学杂志 2023 年 6 月第 44 卷第 6 期 Journal of Navy Medicine，Vol.44，No.6，Jun.2023clinical relevanceJ Transfus Med Rev，2019，33（2）：118-1244 闻慧琴，杨鹏，朱帮强，等微柱凝胶法对新生儿溶血病的检测价值 J 中国医刊，2021，56（7）：799-8015 李亚742 例血型不合新生儿溶血病检测结果相关性分析 J 中国卫生检验杂志，2021，31（12）：1474-14766 陈小伍，于新发，田兆嵩输血治疗学 M 北京：科学出版社，2012：36-507 陈静思，裘晓乐530 例新生儿溶血病检测及危险因素分析 J 中国妇幼保健，2020，35（24）：4758-47608 马玲731 例胎儿和新生儿溶血病预防性检测结果分析 J 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s方式表达。对于定量资料和定性资料，应根据所采用的设计类型、资料所具备的条件和分析目的，选用合适的统计分析方法，前者不应盲目套用t检验和单因素方差分析，后者不应盲目套用2检验。要避免用直线回归方程描述有明显曲线变化趋势的资料。不宜用相关分析说明两种检测方法之间吻合程度的高低。对于多因素多指标资料，要在一元分析的基础上，尽可能运用多元统计分析方法，以便对因素之间的交互作用和多指标之间的内在联系作出全面、合理的解释。使用相对数时，分母不宜小于20；要注意区分百分率和百分比。统计学符号按GB 335882 统计学名词和符号 的有关规定书写，一律用斜体。（本刊编辑部）645