HPV分型的检测.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,宫颈癌筛查的首选,人乳头瘤病毒（HPV）分型的检测制作人：刘海峰,1,目录,宫颈癌与,HPV,关系,HPV,简介,HPV,的生物学特点,HPV,感染特点,HPV,基因分型检测原理,HPV,基因结构特点,常用,HPV,检测方法,HPV,的基因分型,HPV,标本的采集处理与保存,2,宫颈癌与HPV关系,豪森，德国人，,2008年10月诺贝尔奖获得者,研究了人乳头状瘤病毒与宫颈癌的关系。据权统计，全球每分钟就有一例宫颈癌新发病例，每2分钟就有一名妇女死于宫颈癌，在中国每4分钟就有一例宫颈癌新发病例，每天约80名妇女死于此疾病。近年来宫颈癌患病呈上升趋势。,3,哪些人群更容易患宫颈癌,性生活过早的妇女,早孕多产或多次人工流产的妇女,自身或性伴侣有多个性伴侣的妇女,曾经货正患有生殖道,HPV,、单纯疱疹病毒、,HIV,感染或其它性传播疾病的妇女。,吸烟、吸毒、营养不良的妇女,有宫颈病变（长期慢性宫颈炎、宫颈癌前病变、宫颈癌、子宫内膜癌、阴道癌或外阴癌）病变的妇女,4,感染途径,1、性传播途径,2、密切接触,3、间接接触：通过接触感染者的衣物、生活用品等,4、医源性感染：医务人员在治疗护理时防护不好，造,成自身感染或通过医务人员传给患者,5、母婴传播：是由婴儿通过,孕妇,产道的密切接触,5,常见宫颈癌筛查方法的对比,对比项目,细胞学检查,HPV检测（不分型）,HPV基因分型检测,范畴,细胞形态学检查,病原学检测,病原学检测,灵敏度,60左右,95,95,重复性,低,高,高,结果判读,对阅片医生要求高，受主观因素影响大,结果直观，受主观因素影响小,结果直观，受主观因素影响小,临床意义,判断是否发生细胞病变，但低灵敏度易导致漏诊,判断是否存在HPV感染，初步提示子宫病变风险,分型检测能更好的提示宫颈病变风险：1.可以明确患者是否是同一基因型持续感染。2.不同基因型感染，临床处理不同。,6,宫颈癌的首选,HPV检测,与细胞学检查相比，HPV检测具有更高的敏度,和重复性。国际权威机构欧洲生殖感染和肿瘤,研究组织推荐将HPV检测作为宫颈癌筛查的首选方,法。,7,简介,什么是人类乳突病毒？,人类乳突病毒（Human Papillomavirus，简称HPV）是一种嗜上,皮性病毒，有高度的特异性，长期以来，已知HPV可引起人类良性的,肿瘤和疣，如生长在生殖器官附近皮肤和粘膜上的人类寻常疣、尖锐,湿疣以及生长在粘膜上的乳头状瘤。像乙肝病毒一样，HPV也是一种,DNA病毒。它原是多瘤空泡病毒科的一员，1999年国际病毒分类委员,会（ICTV）取消多瘤空泡病毒科，代之以乳头瘤病毒科，因此，HPV,便归属此门下。,8,注：,如何对待HPV感染？,1.HPV 感染较为常见,2.多数 HPV 可以被清除,“一过性”感染不致宫颈病变,3.少数持续性感染会引发宫颈病变,4.HPV致CINI、CINII、CINIII到浸润癌需要相当长的时间，一般是810年,5.致宫颈癌的是高危型HPV,6.HPV(+)只说明是一种感染，并非是一种疾病,7.没有HPV感染可以不得宫颈癌,因此避免HPV感染可以避免发生宫颈癌,8.目前治疗 HPV 感染的方针是“治病不治毒”,对于HPV 感染的检查与治疗的轻视和过分恐惧都不适宜,9,HPV的生物学特点,1、HPV为小DNA病毒，通常引起生殖器疣、子宫颈及肛门、生殖道,癌。目前已完全鉴别到的HPV有80种型，型与型之间的差异在于基因结,构的不同，基因结构的差异决定其存在部位及可能导致的皮肤病变类,型。,2、乳头瘤病毒科的成员主要包括人乳头瘤病毒、牛乳头瘤病毒、,狗口腔乳头瘤病毒、棉尾兔乳头瘤病毒、多乳房小鼠乳头瘤病毒和鹿,乳头瘤病毒。,3、HPV呈球形，无包膜，20面体立体对称结构。HPV基因组是双链,环状，以共价闭合的超螺旋、开放的环状DNA结构。,10,HPV感染特点,初次感染,HPV,大部分可自行消退。与病毒的侵袭能力和感染者的免疫状态相关，连续多次的,HPV,感染会引发女性子宫颈发生病变，并可能导致子宫颈癌。,HPV,感染后以整合和非整合两种状态存在于宿主细胞。,性行为和年龄是两个,HPV,相关性肿瘤的高危因素。,感染高峰年龄,:17-33,岁；每年新感染的病例，高峰年龄为,20,24,岁。,11,HPV基因分型检测原理,采用,PCR,体外扩增和,DNA,反向点杂交相结合的,DNA,芯片技术。,利用,HPV,的基因特点设计特异引物，可以扩增出,23,种,HPV,基因型的目标片段，再将扩增产物与固定在膜条上的包括,18,种高危型和,5,种低危型在内的分型探针进行杂交，依据杂交信号的有无来判断是否有这些,HPV,基因型的存在。,12,HPV基因结构特点,为双链环状,DNA,，长约,8kb,，由,8,个,ORF,框组成，按基因功能可分为长控制区（上游调控区）、早期基因区（,E1,、,E2,、,E4-E7,）编码六个早期蛋白和晚期基因区（,L1,、,L2,）编码两个晚期蛋白。,E1,、,E2,与病毒的复制有关，,E6,、,E7,是癌基因，分别与抑癌基因,P53,、,pRb,结合并导致其失活，这是高危型,HPV,感染与子宫颈癌发生的重要分子机制。,L1,、,L2,编码病毒的结构蛋白形成病毒外壳，,L2,蛋白在病毒感染靶细胞的过程中及其感染后的生命周期中都发挥着重要的作用。不同型别,HPV L2,蛋白,8-81,、,90-115,和,280-333(,以,HPV16,为基准,),区域的氨基酸序列高度保守,。,13,HPV基因结构图,14,常用HPV检测方法的分析,一、染色镜检：,将疣状物作组织切片或生殖道局部粘液涂片，用帕尼科拉染剂染色,后，光镜下观察到特征性空泡细胞或角化,不良细胞和角化过度细,胞，可,初步HPV诊断。,二、HPVDNA检测：,根据不同标本采用点杂交或原位杂交检测HPV-DNA。亦可选择适当的,特异序列，合成引物做PCR后进行杂交，PCR具有敏感，特异及可选择不,同型别的引物扩增后分型等优点。,三、血清学试验：,应用重组技术表达抗原检测患者血清中lgG抗体。或抗原免疫动物制,备免疫血清或单克隆抗体检测组织或局部粘液中HPV抗原。,15,四、HPV基因检测,16,常见HPV的基因分型,依据,HPV,与宫颈癌发生相关性高低可分为高危型和低危型,经美国,FDA,确认的,HPV,高危型有：,HPV16,、,18,、,31,、,33,、,35,、,39,、,45,、,51,、,52,、,56,、,58,、,59,、,66,、,68,等,14,种,低危型有：,HPV6,、,11,、,42,、,43,、,44,等,5,种,现有文献报道的,HR,类型中基本都包含有：,HPV16,，,18,，,31,，,33,，,35,，,39,，,45,，,51,，,52,，,53,，,56,，,58,，,59,，,66,，,68,，,73,，,82,等,17,种,17,HPV亚型及地域分布,目前已有,120,多种,HPV,基因型被确定，其中,40,多种亚型与生殖道感染有关，同类型的不同类型的,HPV,感染可导致不同的临床病变。,HPV,有严格的嗜上皮特性，只能感染人的皮肤和粘膜层，根据,HPV,的组织嗜异性，将其分为皮肤类和粘膜类。后者又根据其致病力不同分为低危型和高危型。低危型包括,6,、,11,、,42,、,43,、,44,等亚型，主要引起肛门皮肤及男性外生殖器、女性大小阴唇、尿道口、阴道部位的外生性疣类病变和低度子宫颈上皮内瘤。高危型包括,16,、,18,、,31,、,33,、,35,、,45,、,52,、,53,、,56,、,58,等十多种亚型，除了可引起外生殖器疣外，还可引起外生殖器癌、宫颈癌及高度子宫颈上皮内瘤，尤其是宫颈癌。研究表明，,HPV,引起的肛门癌、阴茎癌、女阴癌和宫颈癌中，以宫颈癌最多，,99.7%,的宫颈癌中都能发现高危性,HPV,感染，其中以,16,、,18,型为主，约占发病的,65%,，是诱发宫颈癌首要潜在病因。,18,HPV引起的常见疾病与HPV亚型,19,标本的采集与处理,20,标本的保存,21,22,总结,总之，目前的HPV分型检测技术主要基于聚合酶链反应。HPV特定型别在宫颈疾病发展中的重要作用，考虑到HPV型谱的多样性和多重性HPV联合感染的高发率，准确的HPV检测显得尤为重要。不断寻求更准确，快速有效的检测技术。,23,谢谢！,24,