DB21∕T 3920-2024 辽西驴鲜精人工授精技术规程(辽宁省).pdf

ICS65.020.30CCS B 4321辽宁省地方标准DB21/T 39202024辽西驴鲜精人工授精技术规程Technical regulation of Liaoxi donkey artificial insemination with fresh semen2024-01-30 发布2024-03-01 实施辽宁省市场监督管理局发 布DB21/T 39202024I前言本文件按照GB/T 1.1-2020标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布单位不承担识别专利的责任。本文件由辽宁省农业农村厅提出并归口。本文件起草单位：辽宁农业职业技术学院、辽宁省现代农业生产基地建设工程中心、建平县芮林牧业有限公司。本文件主要起草人：孙亚波、于明、鄂禄祥、徐晓江、韩迪、刘衍芬、丁剑峰、赵红秋、孙成学、王春艳、孙淑琴、杨秋凤、单铁军。本文件发布实施后，任何单位和个人如有问题和意见建议，均可以通过来电和来函等方式进行反馈，我们将及时答复并认真处理，根据实际情况依法进行评估及复审。归口管理部门通讯地址：辽宁省农业农村厅（沈阳市和平区太原北街2号），联系电话：[phone]。文件起草单位通讯地址：辽宁农业职业技术学院（辽宁省营口市经济技术开发区熊岳镇育才里76-0号），联系电话：[phone]；辽宁省现代农业生产基地建设工程中心（沈阳市皇姑区陵园街7-1号）联系电话：[phone]；建平县芮林牧业有限公司（辽宁省建平县深井镇三元井村）联系电话：[phone]。DB21/T 392020241辽西驴鲜精人工授精技术规程1范围本文件规定了辽西驴母驴发情鉴定、公驴采精、精液品质检查与稀释、输精、早期妊娠诊断等技术要求。本文件适用于辽西驴的人工授精技术操作，其他驴可参照执行。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。NY/T 1335 牛人工授精技术规程3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1人工授精 artificial insemination采用人工方法利用器具采取公驴精液，并将检查处理后的精液输入发情母驴生殖道内，使其妊娠的技术。3.2发情周期 estrus cycle母驴从一次发情开始到下一次发情开始间隔的时间，一般为 18 d 25 d，平均为 21 d。3.3发情鉴定 estrus detection通过适当方法判定母驴发情程度的方法。3.4精子活率 sperm motility公驴精液中直线前进运动的精子数占总精子数的百分率。3.5DB21/T 392020242精子密度 sperm concentration1mL公驴精液中的精子数量。4母驴发情鉴定4.1外部观察法母驴出现阴门肿胀、叭嗒嘴、头低垂、耳后抿、频繁排尿，主动接近或追赶公驴的现象，鉴定为发情。每天观察次数不少于 2 次。4.2阴道检查法阴道黏膜由白色变为粉红色，初期有少量稀薄粘液、后期粘液变稠，子宫颈口出现充血、肿胀、松弛、开张的现象，鉴定为发情。4.3直肠检查法4.3.1 卵泡出现期卵巢一侧有卵泡出现，体积 1 cm 2 cm，弹性较强，无波动，排卵窝很深。此时母驴发情 1 d 2d。4.3.2 卵泡发育期卵泡体积增大，约为 3 cm 4 cm，卵泡液增多，卵泡稍有波动，排卵窝由深变浅。此时母驴发情 2 d 3 d。4.3.3 卵泡成熟期卵泡体积增至 5 cm 6 cm，弹力减弱，波动明显，似熟透的柿子，有一触即破的感觉。此时母驴发情 3 d 5 d。4.3.4 排卵期卵泡壁变薄，卵泡液逐渐流失，有两层皮感觉。此时母驴发情 5 d 6 d，是输精的最佳时期。4.4试情法将母驴转向试情公驴的头部，观察母驴的表现。如母驴有主动靠近公驴、举尾、张开后肢、频繁排尿等表现，可鉴定为发情。如未发情，则母驴躲避或踢咬公驴。5采精5.1公驴的选择DB21/T 392020243采精公驴应符合辽西驴种用特征，体质健康、年龄 2.5 岁10 岁。5.2器材和用品准备5.2.1器材假阴道、集精杯、显微镜、载玻片、玻璃棒、恒温水浴锅、温度计、无菌纱布、注射器、长臂手套等。5.2.2用品0.1%高锰酸钾消毒液、0.1%新洁尔灭、75%酒精、碘酊、葡萄糖、生理盐水、蒸馏水、柠檬酸钠、卵黄等。5.3器具清洗和消毒凡接触精液和驴生殖器的各种器具均清洗和消毒。按照 NY/T 1335 执行。5.4假阴道使用前处理安装好的假阴道消毒、注水及润滑：用 75%酒精擦拭内胎，酒精挥发后用生理盐水冲洗 2 次 3次；注入相当于假阴道容积 2/3 的 38 40温水；自假阴道内胎边缘向内涂抹凡士林，涂抹深度不超过整个内胎长度的三分之一。5.5采精台畜的准备选择性情温顺、体格适当、健康的发情母驴（或采精假台畜）作为台畜，以备公驴爬跨。将发情母驴牵引到采精栏内保定，将尾巴固定在身体一侧，用 0.1%的新洁尔灭擦拭母驴外阴，再用温生理盐水冲洗、擦干；或将发情母驴生殖道分泌物涂在采精假台畜后躯臀部。5.6采精公驴准备5.6.1生殖器的清洗按摩先用温开水冲洗包皮和勃起的阴茎，再用温生理盐水冲洗、擦干，按摩阴囊 10 s。5.6.2空爬增强性欲先使公驴空爬（假爬跨）2 次 3 次，以增强性欲和射精量。当阴茎充分勃起并排出少量分泌物时，即准备采精。5.7采精5.7.1采精操作DB21/T 392020244采精员在母驴后躯的一侧，用手横握假阴道。当公驴爬跨到母驴身上时，迅速用另一手取下遮盖假阴道口的纱布、托起公驴包皮将阴茎导入假阴道内，假阴道与地面角度呈 35 为宜。迅速用一手握假阴道、另一手扶住集精杯，待公驴射精后从台畜身体滑下时，采精员打开假阴道上的放气阀、顺势取下假阴道并竖起，放出空气和三分之一的温水。5.7.2采精频率每周采精4 d 5 d，每天1次2次。6精液品质检查与稀释6.1过滤先将灭菌烧杯置于31 温水中水浴，再用4层灭菌纱布盖住杯口，将精液由集精杯倒入烧杯内，过滤掉副性腺胶状物。6.2精液检查6.2.1外观检查辽西驴精液的正常颜色呈乳白色或灰白色，无味或略有腥味。用注射器吸取精液测定射精量，辽西驴射精量一般为 50 mL 100 mL。6.2.2显微镜检查室温 18 25 ，将精液放置在 37.5 的恒温载物台上，在 400 倍 600 倍的显微镜下检查，精液应呈翻滚的云雾状。要求精子活率不低于 60%，精子畸形率不超过 20%。6.2.3精子密度利用精子密度仪测定，要求达到 1.5108个/mL 以上。6.3精液稀释6.3.1常用稀释液稀释液配方 1：葡萄糖 7g，蒸馏水 100 mL，水浴煮沸 30 min，冷却至 28 后加入青霉素和链霉素粉剂各 80 万 IU，在 3内使用。稀释液配方 2：柠檬酸钠 1.4 g,葡萄糖 3.0 g,青霉素粉剂 80 万 IU100 万 IU,链霉素 80 万 IU,新鲜卵黄 8 mL10 mL,蒸馏水 100 mL，在 3h 内使用。6.3.2稀释DB21/T 392020245稀释后有效精子应不少于0.5 亿个/ml。在无菌室或超净台内用有刻度的容器，根据精子密度先确定好稀释比例，按比例将稀释液缓慢倒入精液中，慢慢摇匀。常温下鲜精稀释后6 h内使用。7输精7.1输精前准备7.1.1 输精器械准备输精管、注射器、长臂手套、毛巾等灭菌备用。7.1.2 输精员准备输精人员指甲剪短磨平，肥皂水洗手，再用 0.1 的高锰酸钾消毒，用 40左右温开水冲洗。7.2母驴外阴清洗消毒用38 40 的温水清洗母驴外阴，再用 0.1的高锰酸钾清洗，最后用温生理盐水冲洗擦干。7.3输精时间和次数当卵泡体积达到 3.0 cm以上，卵泡液增多，卵泡稍有波动，排卵窝由深变浅，卵泡壁紧张，弹性减弱或消失，卵泡壁非常薄，有一触即破的感觉，即为最佳输精时间，此时即可输精，每日1次，连续2次3次。7.4输精部位子宫颈内口向内 10 cm15 cm 处。7.5输精操作输精员戴无菌长臂手套，右手握住吸有精液的输精枪，五指呈锥形，将输精枪头部攥于手心，缓慢插入阴道，找到子宫颈口，将输精枪导入子宫颈内 10 cm15 cm，然后固定子宫颈，左手将输精枪抬高，将精液注入子宫内。抽出输精枪的同时右手轻轻按摩子宫颈口，或轻压背腰部使母驴伸展腰部，防止精液倒流。7.6输精量输精量为 15 mL20 mL，确保有效精子数为 5 亿6 亿个。8早期妊娠诊断8.1直肠检查DB21/T 392020246输精后 1525，孕侧子宫角基部出现蚕豆大小的突起胚泡。孕角侧卵巢比另一侧卵巢大。卵巢上有黄体，子宫壁变厚，有弹性。8.2超声波检查8.2.1 仪器选择兽用直肠线性探头的 B 型超声诊断仪。8.2.2 检查操作首先将母驴保定，检查人员戴上长臂手套，将手套润滑，清除直肠内的粪便。然后用手确定子宫的位置、大小和软硬程度。接着将直肠探头送入直肠至盆骨口，前向下成 4590角，从子宫体分别向两侧子宫角滑行、扫描检查，缓慢移动并不断调整角度，探查到有清楚的图像为止。8.2.3 妊娠诊断妊娠 21 d 时，孕体囊（妊娠囊）发育由圆形或椭圆形变成不规则的三角形，腔囊内有灰色影像的胚胎，可诊断为妊娠。妊娠初期胚胎发育影像变化见附录 A。9生产记录及时准确、清晰、完整地记录采精（日期、采精员姓名、公驴号、射精量、精子活率、精子密度等）、配种（稀释液配方、精液稀释比例、母驴号、输精日期、公驴号、母驴预产日期、输精员姓名等）、妊娠诊断方法和受胎情况等。档案由专人管理，分类归档，保存期为 20 年。DB21/T 392020247附录A（资料性）妊娠初期胚胎发育影像变化妊娠初期胚胎发育影像变化见图A.1。图 A.1 辽西驴妊娠初期胚胎发育过程 B 超影响