脱氧胆酸对HBV复制及肝癌细胞自噬影响的研究.pdf

本文引文格式:侯冰,高玉雪,杨鹏翔,等.脱氧胆酸对H B V复制及肝癌细胞自噬影响的研究J.右江民族医学院学报,2 0 2 3,4 5(4):5 4 5-5 5 1.【论著与临床报道】脱氧胆酸对H B V复制及肝癌细胞自噬影响的研究侯冰1,2,高玉雪2,杨鹏翔2,关媛月2,刘芃祥2,杨静1,陈德喜2(1.包头医学院基础医学与法医学院,内蒙古 包头 0 1 4 0 4 0;2.首都医科大学附属北京佑安医院北京肝病研究所,北京 1 0 0 0 6 9)摘 要:目的 观察脱氧胆酸(d e o x y c h o l i ca c i d,D C A)对乙型肝炎病毒(h e p a t i t i sBv i r u s,HB V)复制的影响,及其对肝癌细胞自噬的影响程度,探讨其可能的作用机制。方法 观察不同浓度D C A对H e p G 2及H e p G 2.2 1 5细胞活性的影响,进而测定不同浓度D C A对H e p G 2.2 1 5细胞HB VD NA的载量及H B s A g、H B e A g和H B c A g表达水平的影响,蛋白免疫印迹检测自噬水平;将H e p G 2.2 1 5细胞转染乙型肝炎病毒X(H B X)蛋白突变表达质粒后,观察H B X对D C A处理的H e p G 2及H e p G 2.2 1 5细胞的H B VD NA载量以及HB s A g、H B e A g和H B c A g表达水平的影响,蛋白免疫印迹检测细胞自噬水平。结果 C C K-8实验结果显示随着D C A浓度的 升高,细 胞 活力 均呈 现 梯度 下降 趋势(P0.0 1);H e p G 2.2 1 5细胞的HB VD NA载量以及HB s A g、H B e A g、H B c A g水平均随着D C A浓度的提高而上升(P0.0 1);H e p G 2与H e p G 2.2 1 5细胞的L C 3-/L C 3-比值升高(P0.0 1),H e p G 2细胞的p 6 2蛋白水平随着D C A浓度的升高而下降(P0.0 1),H e p G 2.2 1 5细胞的p 6 2蛋白水平随着D C A浓度的升高而上升(P0.0 1);未经D C A处理的对照组、经1 0 0m o l/LD C A处理的对照组、未经D C A处理的H B X突变表达质粒转染组、经1 0 0m o l/LD C A处理的H B X突变表达质粒转染组的H B VD NA载量、HB s A g、HB e A g、HB c A g水平、H B X蛋白水平以及L C 3-/L C 3-比值均呈现依次上升趋势(P0.0 1),p 6 2蛋白水平呈现依次下降趋势(P0.0 1)。结论 D C A处理可以降低肝癌细胞的活力;D C A可以促进H B V的复制;D C A可以促进H e p G 2细胞的自噬,在H e p G 2.2 1 5细胞中促进不完全自噬;D C A可以通过促进H B X蛋白的合成来加强HB V的复制,进而促进不完全自噬。关键词:脱氧胆酸;乙型肝炎病毒;自噬;肝肿瘤中图分类号:R 3 7 3.2 1 文献标识码:A 文章编号:1 0 0 1-5 8 1 7(2 0 2 3)0 4-0 5 4 5-0 7d o i:1 0.3 9 6 9/j.i s s n.1 0 0 1-5 8 1 7.2 0 2 3.0 4.0 0 1S t u d yo nt h e e f f e c t so fd e o x y c h o l i ca c i do nH B Vr e p l i c a t i o na n da u t o p h a g y i nh e p a t o c e l l u l a rc a r c i n o m ac e l l sH o uB i n g1,2,G a oY u x u e2,Y a n gP e n g x i a n g2,G u a nY u a n y u e2,L i uP e n g x i a n g2,Y a n gJ i n g1,C h e nD e x i2(1.S c h o o l o fB a s i cM e d i c i n ea n dF o r e n s i cM e d i c i n e,B a o t o uM e d i c a lC o l l e g e,B a o t o u0 1 4 0 4 0,I n n e rM o n g o l i a,C h i n a;2.B e i j i n gI n s t i t u t eo fH e p a t o l o g y,B e i j i n gY o uA nH o s p i t a l,C a p i t a lM e d i c a lU n i v e r s i t y,B e i j i n g1 0 0 0 6 9,C h i n a)A b s t r a c t:O b j e c t i v e T oo b s e r v et h ee f f e c t so fd e o x y c h o l i ca c i d(D C A)o nt h eh e p a t i t i sBv i r u s(H B V)r e p l i c a t i o na n dt h ee x t e n to fa u t o p h a g yi nh e p a t o c e l l u l a rc a r c i n o m ac e l l s,a n de x p l o r et h ep o s s i b l eu n d e r l y i n g545第4 5卷 第4期 右江民族医学院学报 V o l.4 5N o.42 0 2 3年8月 J o u r n a l o fY o u j i a n gM e d i c a lU n i v e r s i t yf o rN a t i o n a l i t i e s A u g.2 0 2 3基金项目:国家自然科学基金项目(8 2 0 7 3 6 7 6);北京市自然科学基金-北京市教委联合资助项目(K Z 2 0 2 0 1 0 0 2 5 0 3 7);包头医学院研究生科研创新项目(b y c x 2 0 2 1 0 0 1)第一作者简介:侯冰(1 9 9 7-),男,硕士,临床医学初级检验师,研究方向:生物学,E-m a i l:7 8 6 2 5 6 7 6 6q q.c o m 通讯作者简介:杨静(1 9 8 2-),女,博士,教授,硕士研究生导师,研究方向:生物学,E-m a i l:y a n g j i n g 2 5 6 9q q.c o m 共同通讯作者简介:陈德喜(1 9 6 1-),男,博士,教授,硕士研究生导师,研究方向:肝病研究工作,E-m a i l:d e x i c h e n c c m u.e d u.c nm e c h a n i s m s.M e t h o d s T h es t u d ya s s e s s e dt h ee f f e c t so fd i f f e r e n tD C Ac o n c e n t r a t i o n so nt h ev i a b i l i t yo fH e p G 2a n dH e p G 2.2 1 5c e l l s.A d d i t i o n a l l y,t h e i m p a c t o f d i f f e r e n tD C Ac o n c e n t r a t i o n so n t h eH B VD NAl o a da n de x p r e s s i o n l e v e l so fH B s A g,H B e A g,a n dH B c A gw e r e e v a l u a t e d i nH e p G 2.2 1 5c e l l s.W e s t e r nB l o t a n a l y-s i sw a sp e r f o r m e dt oa s s e s s t h e l e v e l so f a u t o p h a g y.M o r e o v e r,a f t e rH e p G 2.2 1 5c e l l sw e r e t r a n s f e c t e dw i t hap l a s m i do fm u t a n t e x p r e s s i o n i nh e p a t i t i sBv i r u sX(H B X)p r o t e i n,t h e e f f e c t so fH B Xo nH B VD NAl o a da n de x p r e s s i o n l e v e l so fH B s A g,H B e A g,a n dH B c A gw e r eo b s e r v e d i nb o t hH e p G 2a n dH e p G 2.2 1 5c e l l s t r e a t e dw i t hD C A.W e s t e r nB l o tw a su s e d t o t e s t c e l l u l a r a u t o p h a g y l e v e l s.R e s u l t s T h e r e s u l t so f t h eC C K-8e x-p e r i m e n t s h o w e dag r a d i e n t d e c r e a s e i nc e l l v i a b i l i t yw i t h i n c r e a s i n gc o n c e n t r a t i o n so fD C A(P0.0 1).T h eH B VD NAl o a da n dt h e l e v e l so fH B s A g,H B e A ga n dH B c A gw e r ee l e v a t e dw i t h i n c r e a s i n gc o n c e n t r a t i o n so fD C Ai nH e p G 2.2 1 5c e l l s(P0.0 1).T h er a t i oo fL C 3-/L C 3-w a si n c r e a s e di nb o t h H e p G 2a n dH e p G 2.2 1 5c e l l s(P0.0 1).T h ep r o t e i nl e v e l so fp 6 2w e r ed e c r e a s e dw i t hi n c r e a s e dD C Ac o n c e n t r a t i o n s i nH e p G 2c e l l s(P0.0 1),w h i l e i tw a s i n c r e a s e di nH e p G 2.2 1 5c e l l s(P0.0 1).T h eH B V D NAl o a d,H B s A g,H B e A g,H B c A g l e v e l s,H B Xp r o t e i n l e v e l s,a n dt h e r a t i oo fL C 3-/L C 3-s h o w e dg r a d e d i n c r e a s e(a n i n c r e a s i n gt r e n d i nt u r n)(P0.0 1),a n dt h ep r o t e i nl e v e lo fp 6 2s h o w e das e q u e n t i a ld e c r e a s e(P0.0 1)i nt h ec o n t r o l g r o u pw i t h o u tD C At r e a t m e n t,t h ec o n t r o l g r o u pt r e a t e dw i t h1 0 0m o l/LD C A,t h eg r o u pt r a n s f e c t e dw i t h t h eH B Xm u t a n t p l a s m i dw i t h o u tD C At r e a t m e n t a n d t h eg r o u p t r a n s f e c t e dw i t h t h eH B Xm u-t a n tp l a s m i d t r e a t e dw i t h1 0 0m o l/LD C A.C o n c l u s i o n D C At r e a t m e n t c a n r e d u c e t h ev i a b i l i t yo f h e p a t o-c e l l u l a rc a r c i n o m ac e l l s;D C Ac a np r o m o t eH B Vr e p l i c a t i o n;D C Ac a np r o m o t ea u t o p h a g y i nH e p G 2c e l l sa n d f a c i l i t a t e i n c o m p l e t e a u t o p h a g y i nH e p G 2.2 1 5c e l l s;D C Ac a ne n h a n c eH B Vr e p l i c a t i o nb yp r o m o t i n g t h es y n t h e s i so fH B Xp r o t e i n,w h i c ha c c e l e r a t e s i n c o m p l e t ea u t o p h a g y.K e yw o r d s:d e o x y c h o l i ca c i d;h e p a t i t i sBv i r u s;a u t o p h a g y;l i v e r t u m o r 人体中的胆汁酸是由肝脏合成并储存在胆囊中,同时肝脏也是人体内唯一具有胆汁酸合成所需的所有酶的器官1。胆汁酸根据其来源可分为两大类:初级胆汁酸与次级胆汁酸。初级胆汁酸是由肝脏初步合成,包括胆酸与鹅脱氧胆酸,并且与甘氨酸或牛磺酸结合后成为初级结合胆汁酸存储于胆囊中;初级胆汁酸释放进入肠道后,在肠道菌群的作用下转化为次级游离胆汁酸,包括脱氧胆酸(d e o x y c h o l i ca c i d,D C A)与石胆酸。当胆汁酸经胆囊释放通过肠道时,约9 5%的胆汁酸会参加胆汁酸的肝肠循环,在此过程中胆汁酸在末端回肠的刷状边界膜中被重吸收,由门静脉入血,流向肝窦并被肝细胞吸收,而最终剩余约5%的胆汁酸会随着粪便排出。胆汁酸对于人体的脂类代谢来说十分重要,胆汁酸的肠肝循环则保证了人体内胆汁酸池的稳定2。自噬是一个将自身的细胞质蛋白或细胞器包被进入囊泡,并与溶酶体融合形成自噬溶酶体,降解其所包裹的内容物的过程,细胞通过自噬可以实现其本身的新陈代谢3。目前已经发现许多可以促进自噬发生发展的信号分子以及信号通路,常见的信号通路包括P I 3 K-AK T-mTO R信号通路、AMP K信号通路以及MA P K信号通路,而这些通路中B e c l i n-1、B c l-2、L C 3-、L C 3-、p 6 2等蛋白产物是最常见的检测分子4-8。由乙型肝炎病毒(h e p a t i t i sBv i r u s,H B V)感染导致的慢性乙型肝炎是我国常见的慢性传染病,在我国因H B V感染而导致的肝硬化占比达到6 0%,而肝癌占比达到8 0%9。L IJH等1 0发现,H B V可诱导肝细胞的自噬,同时H B V的复制也需要自噬相关蛋白的参与,如H B V的包膜延长需要自噬过程中的重要分子L C 3-的参与,而L C 3-又是自噬溶酶体的必要组成分子,因此H B V的复制抑制了自噬溶酶体的形成与降解,导致不完全自噬的发生1 1-1 2。在这种自噬过程中L C 3-被H B V捕获并用于自身包膜的延长,促进了H B V的复制,同时因自噬溶酶体的形成与降解受阻,导致被自噬溶酶体包裹并降解的H B V数量减少,这是H B V产生免疫逃逸的一种机制。因此肝细胞的不完全自噬促进了H B V的复制,进一步加重了H B V的感染。胆汁酸对于自噬的影响具有双面性,既可以促进自噬的发生发展,又可以抑制自噬的发展进程,其中膜受体T G R 5与 核 受 体F X R在 这 里 起 到 重 要 作用1 3-1 4。R O E S L Y HB等1 5-1 7表明,D C A可以通过G蛋白偶联受体-5(T G R 5)与B e c l i n-1途径促进自噬的发生,进而促进了食管腺癌的发生。而在胆汁酸的肝肠循环中,经过肝细胞的D C A占比可达 到至少1 0%,在肝硬化、肝癌、胆汁淤积等情况下,又增加了6452 0 2 3年 右江民族医学院学报 第4期D C A与细胞接触及相互作用的时间,而D C A在慢性乙型肝炎中对H B V复制以及肝细胞生物学效应的影响还缺乏相应的研究,为此,本文将重点观察D C A对H B V复制的影响及自噬在其中的作用,并探讨可能的机制,为研究更精准、有效地治疗H B V感染导致的慢性乙型肝炎的手段提供理论依据。1 实验材料与方法1.1 主要实验材料 H e p G 2与H e p G 2.2 1 5肝癌细胞系(中国科学院上海生命科学院细胞库)、标准纯度的D C A(美国S i g m a公司)、E l i s a检测试剂盒(上海科华生物工程股份有限公司)、H B V核酸定量检测试剂盒(长沙圣湘生物科技股份有限公司)、L C 3-/抗体(美国c e l ls i g n a l i n gt e c h n o l o g y公司,4 1 0 8 S)、p 6 2抗体(美 国c e l ls i g n a l i n gt e c h n o l o g y公 司,5 1 1 4 S)、H B X抗体(美国a b c a m公司,a b 3 9 7 1 6)、H B c A g抗体(美国a b c a m公司,a b 8 6 3 7)、辣根过氧化物酶标记的山羊抗鼠/兔二抗(美国c e l ls i g n a l i n gt e c h n o l o g y公司,7 0 7 6 S,7 0 7 4 S)、A F 4 8 8荧 光 标 记 的 二 抗(美 国T h e r m oF i s h e r公司,A-1 1 0 0 8)、H B X突变表达质粒(北 京 博 迈 德 基 因 技 术 有 限 公 司,BM 4 0 1 5)、X-t r e m e G E N E H PD NA T r a n s f e c t i o nR e a g e n t质粒助转剂(瑞士R o c h e公司)。1.2 实验方法1.2.1 C C K-8检测细胞毒性 将生长状态良好的H e p G 2与H e p G 2 2.2 1 5细胞接种于9 6孔板中,每孔11 04个细胞,孵育1 2h后更换为含有0m o l/L、2 5m o l/L、5 0m o l/L、1 0 0m o l/L、1 5 0m o l/L D C A的培养基,孵育4 8h后每孔加入1 0L的C C K-8溶液,3 7孵育1h后读取吸光度。1.2.2 H B s A g、H B e A g以及H B VD NA载量测定 将细胞铺于6孔板中,每孔61 05个细胞,孵育1 2h后更 换 为 含 有0m o l/L、5 0m o l/L、1 0 0m o l/LD C A浓度的培养基,二氧化碳培养箱孵育7 2h后收集培养基上清用于E L I S A与H B VD NA载量测定实验。按照E L I S A检测试剂盒与核酸定量试剂盒说明书中的操作步骤进行实验。1.2.3 量化成像流式仪测定H B c A g水平 同1.2.2中将细胞铺板并更换培养基孵育后,收集细胞,使用4%的多聚甲醛固定,再加入冰冷的1 0 0%甲醇,用P B S稀释甲醇至终浓度9 0%以透化细胞,2 5m i n后加入H B c A g抗体,3 0m i n后加入荧光二抗,染色3 0m i n后上机检测。1.2.4 W e s t e r nB l o t检测蛋白 同1.2.2中将细胞铺板并更换培养基孵育后,收集细胞,使用R I P A裂解液收集细胞总蛋白,使用B C A蛋白定量试剂盒检测蛋白浓度,煮沸蛋白后进行传统WB的实验步骤:制胶-上样-电泳-转膜,P V D F膜使用对应的一抗孵育并洗膜后再使用对应的种属二抗孵育,洗膜后进行曝光检测。1.2.5 H B X突变表达质粒转染 将生长状态良好的H e p 2.2 1 5细胞接种于6孔板,待 生长融合 度 达 到9 0%后进行质粒转染实验,取出对应孔数的1.5m L无菌E P管,每管加入2 0 0L培养基、4LH B X突变表达质粒、1 2L助转剂,混匀后3 7孵育3 0m i n,在添加进相应的孔板中,转染6h后换液。1.3 统计学方法 采用S P S S2 0.0软件进行统计学分析。多组间比较采用方差齐性检验和单因素方差分析(O n eW a yANOVA)。进一步进行组间两两比较时,若方差齐时,采用S NK检验(S t u d e n t-N e wm a n-K e u l s法);若方差不齐时,采用G a m e s-H o w e l l检验,以P0.0 5为差异有统计学意义。2 实验结果2.1 D C A对肝癌细胞系活力的影响 经过实验发现,D C A对肝癌细胞均具有毒性作用,且随着浓度的升高,细胞活力呈现出逐渐降低趋势,具有浓度依赖性(P0.0 1)。见图1。注:与0m o l/LD C A的对照组相比,*P0.0 1。图1 D C A对H e p G 2与H e p G 2.2 1 5细胞活力的影响2.2 D C A对H B V复制的影响 H B s A g、H B e A g水平和H B c A g的荧光强度与荧光细胞占比以及H B VD NA载量均随着浓度的升高而升高,且具有梯度上升趋势(P0.0 1)。见图2。2.3 D C A对肝癌细胞自噬的影响 在H e p G 2细胞中,L C 3-/L C 3-比值随着D C A浓度的升高而升高,p 6 2蛋白水平随着D C A浓度的升高而下降,结果提示D C A促进了其自噬进程,促进了肝癌细胞的自噬(P0.0 1);而在H e p G 2.2 1 5细 胞 中,L C 3-/L C 3-比值与p 6 2蛋白水平均随着D C A浓度的升高而升高(P0.0 1)。见图3。7452 0 2 3年 右江民族医学院学报 第4期注:A.HB s A g测定结果,B.H B e A g测定结果,C.H B VD NA载量测定结果,D、E.H B c A g水平测定结果。与0m o l/LD C A的对照组相比,*P0.0 1。图2 D C A对H e p G 2.2 1 5细胞H B s A g、H B e A g、H B c A g水平与HB VD NA载量结果注:A.自噬蛋白水平检测,B.L C 3-/L C 3-比值测定,C.p 6 2/-a c t i n比值测定。两组细胞各自与组内0m o l/LD C A对照组相比,*P0.0 5,*P0.0 1。图3 D C A对H e p G 2与H e p G 2.2 1 5细胞自噬的影响2.4 D C A通过作用于H B X蛋白对H B V复制的影响 0m o l/L对照组、1 0 0m o l/L对照组、0m o l/L质粒转染组、1 0 0m o l/L质粒转染组的各项H B V复制指标均呈现依次上升结果(P0.0 1)。见图4。2.5 D C A通过作用于H B X蛋白对自噬水平的影响 0m o l/L对照组、1 0 0m o l/L对照组、0m o l/L质粒转染组、1 0 0m o l/L质粒转染组的H B X、p 6 2蛋白水平以及L C 3-/L C 3-比值均呈现依次上升结果(P0.0 1)。见图5。8452 0 2 3年 右江民族医学院学报 第4期注:A.H B s A g测定结果,B.H B e A g测定结果,C.HB VD NA载量测定结果,D、E.HB c A g测定结果。与0m o l/L对照组相比,*P0.0 1。图4 D C A对H e p G 2.2 1 5细胞对照组以及质粒转染组的H B V复制影响注:A.各项蛋白检测结果,B.HB X/-a c t i n比值结果,C.L C 3-/L C 3-比值结果,D.p 6 2/-a c t i n比值结果。与0m o l/L对照组相比,*P0.0 1。图5 D C A对H e p G 2.2 1 5细胞对照组以及质粒转染组的H B X蛋白及自噬水平的影响3 讨论D C A主要由肠道菌群的厌氧菌群对结合胆汁酸的7 脱羟基作用生成,目前D C A多注重于结肠癌的诱导促进以及肠道菌群的调节等研究,B E R N S T E I NC等1 8、KAWANOA等1 9、P A IR等2 0分别通过动物实验、流行病统计学、细胞实验表明脱氧胆酸可以诱导结肠癌的发生,并且D C A可以激活多种信号通路,比如N F-B、Wn t与MA P K通路,进而对结肠癌产生促进作用2 1-2 2。另一方面,D C A本身具有抗炎灭菌作用,在正常生理状态下可在肠道中可以抑制菌群的过度生长,并在肠道炎症中发挥着消炎效应,同时在胆汁酸的肠肝循环中调节胆汁酸池的含量,进而调节胆汁酸的合成2 3。D C A被重吸收进入肝脏时通常以结合的形式存在,从而增加其亲水性以降低细胞毒性作用,但是在高脂饮食、肝硬化、肝炎以及胆管炎等一系列疾病中,胆汁酸的代谢受到阻碍,从而增加了D C A的产生,并且降低了其与氨基酸结合的形式,导致了D C A含量增加且毒性作用扩散,进而对肝胆等器官产生影响2 4。自噬在正常生理状况下对机体起着清除有害物质、防止疾病发生的作用。在肝癌中,人体的自噬功能受损,导致肝癌的各种因素抑制自噬(如癌基因A k t的激活或肿瘤抑制基因P t e n或T s c1的缺失)、肝脏自噬不足(非酒精性脂肪性肝病)、肝脏自噬通路不完全(病毒性肝炎)2 5。前言中提到的目前慢性乙型肝炎中自噬与H B V起着相互促进的作用与本次实验结果结论一致。目前研究发现D C A同样可以促进与抑制自噬的发生发展,当细胞急性暴露在D C A环境中时,D C A可以通过促进B e c l i n-1途径来 促进自噬,但 在慢性D C A环境中细胞自噬进程则会明显降低,本次研究结9452 0 2 3年 右江民族医学院学报 第4期果则证明D C A促进了肝癌细胞的自噬。H B X蛋白是由H B V的X区基因所编码生成的蛋白质,这是一种跨调节蛋白,通过与其他蛋白质结合来影响病毒和宿主基因的表达2 6。H B X蛋白已被证实是一种多效性反式激活剂,可以调节病毒复制和许多细胞功能,包括细胞增殖、分化、转化、耐药性、D NA修复以及细胞自噬和凋亡2 7。WANG P等2 8表明H B X蛋白可以通过P I K 3 C A-AK T-MTO R途径以及在体外增强L C 3-的水平,导致内源性B e c l i n-1水平升高,从而促进自噬的发生发展,此外H B X蛋白还可以通过诱导线粒体外膜(OMM)上P I NK 1的表达触发P i n k 1/P a r k i n依赖性线粒体自噬诱导,这导致被H B V感染的细胞逃避一般细胞凋亡,从而促进选择性降解和预防凋亡细胞死亡,以进一步增强被感染细胞的存活和病毒持久性2 9。HUANGJL等3 0表明,H B X蛋白可以显著激活肝癌细胞中的MA P K信号传导途径,进而导致H B X诱导的B c l-2磷酸化和b e c l i n-1与B c l-2的解离,从而增强自噬体的形成;P A R K Y H等3 1指出,H B X蛋白诱导自噬并激活J NK信号传导过程,R O S-J NK信号传导的激活对于H B V诱导的不完全自噬很重要,而H B X蛋白在这些过程中起主要作用;Z HONGLM等3 2的研究证明抑制R O S-J NK信号传导可显著抑制H B V诱导的自噬体形成,这更加确立了H B X蛋白通过R O S-J NK信号途径促进自噬发生发展的立场。除此之外H B X蛋白还通过许多其他途径以影响自噬3 3-3 6。本次实验结果表明,H B X蛋白是H B V复制的核心蛋白,对于H B V的复制具有显著促进作用,同时也证实了H B X蛋白促进了肝癌细胞不完全自噬的进程这一结论,同时提示了D C A在慢性乙型肝炎中或许作用于H B X蛋白从而导致H B V复制以及细胞自噬活动的加强。高浓度的D C A具有一定的细胞毒性,同时也可以促进H B V复制以及肝癌细胞自噬。D C A可能通过促进H B X蛋白的合成来加强H B V的复制进而促进了不完全自噬的发生发展。现如今针对H B V治疗的手段主要是抗病毒治疗,即干扰素以及核苷(酸)类似物,但是干扰素的使用具有不同程度的不良反应,而核苷(酸)类似物无法清除H B V的闭合环状D NA,停药复发的情况屡见不鲜;本研究为D C A在H B V感染中所起的作用进行了一定程度的探索,同时提示或许可以通过增加D C A在肝胆中的转化从而减弱对H B V复制的影响,为H B V感染的治疗提供了一定的科学依据。参考文献:1 B I N G H,L IYL.T h er o l eo fb i l ea c i dm e t a b o l i s mi nt h eo c c u r r e n c ea n dd e v e l o p m e n to fNA F L DJ.F r o n t M o lB i o s c i,2 0 2 2,9:1 0 8 9 3 5 9.2 CH I AN GJ Y L,F E R R E L LJ M.B i l ea c i d m e t a b o l i s mi nl i v e rp a t h o b i o l o g yJ.G e n eE x p r,2 0 1 8,1 8(2):7 1-8 7.3 MA J E E DST,MA J E E D R,AN D R A B IKI.E x p a n d i n 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n da g i n gJ.B i o c h i m i e,2 0 2 2,1 9 5:1 0 0-1 1 3.9 WAN GFS,F ANJG,Z HAN GZ,e ta l.T h eg l o b a lb u r-d e no f l i v e rd i s e a s e:t h em a j o r i m p a c to fC h i n aJ.H e p a-t o l o g y,2 0 1 4,6 0(6):2 0 9 9-2 1 0 8.1 0 L I JH,L I UYH,WAN GZK,e t a l.S u b v e r s i o no f c e l l u-l a ra u t o p h a g ym a c h i n e r yb yh e p a t i t i sBv i r u s f o r v i r a l e n-v e l o p m e n tJ.JV i r o l,2 0 1 1,8 5(1 3):6 3 1 9-6 3 3 3.1 1 Z HAN G HT,CHE NGG,Z HAN GZY,e t a l.I n d u c t i o no f a u t o p h a g y i n h e p a t o c e l l u l a r c a r c i n o m a c e l l s b yS B 2 0 3 5 8 0r e q u i r e sa c t i v a t i o no fAMP Ka n dD A P Kb u tn o tp 3 8MA P KJ.A p o p t o s i s,2 0 1 2,1 7(4):3 2 5-3 3 4.1 2 Z A L C KVA RE,B E R I S S IH,M I Z R A CHYL,e t a l.D A P-k i n a s e-m e d i a t e dp h o s p h o r y l a t i o no nt h eB H 3d o m a i no fb e c l i n1p r o m o t e sd i s s o c i a t i o no fb e c l i n1f r o m B c l-X La n d i n d u c t i o no f a u t o 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