微小RNA-19a-3p对充血性心力衰竭模型大鼠心肌纤维化的影响及机制研究.pdf

2 0 2 3年9月第5 2卷第9期S e p.2 0 2 3V o l.5 2N o.9陕 西 医 学 杂 志S h a a n x iM e d i c a l J o u r n a l基金项目:湖北省自然科学基金资助项目(2 0 2 2 C F C 0 0 2)微小RNA-1 9 a-3 p对充血性心力衰竭模型大鼠心肌纤维化的影响及机制研究刘 鹏,陈 阵(武汉市中医医院心内科,湖北 武汉4 3 0 0 1 0)摘 要 目的:探讨微小R NA-1 9 a-3 p(m i R-1 9 a-3 p)对充血性心力衰竭(CH F)模型大鼠心肌纤维化的影响及机制。方法:将6 0只S D大鼠随机分为N C组、M o d e l组、N Ca g o m i r组(尾静脉注射N Ca g o m i r)、m i R-1 9 a-3 pa g o m i r组(尾静脉注射m i R-1 9 a-3 pa g o m i r)、m i R-1 9 a-3 pa g o m i r+腺苷酸活化蛋白激酶(AMP K)抑制剂C o m p o u n dC组(尾静脉注射m i R-1 9 a-3 pa g o m i r和2 5 0g/k gC o m p o u n dC),每组1 2只。N C组仅暴露腹主动脉而不结扎,其他组均构建CH F模型。给药结束后,比较各组大鼠血流动力学参数 左心室收缩压(L V S P)、左心室内压最大上升速率(+d p/d t m a x)和心脏功能指标 左心室舒张末期内径(L V E D D)、左心室收缩末期内径(L V E S D)、室间隔厚度(I V S)、左心室功能(L V E F)。M a s s o n染色检测心肌纤维化情况。W e s t e r nb l o t检测大鼠心肌组织型胶原蛋白(C o l l a g e n)、型胶原蛋白(C o l l a g e n)、转化生长因子-(T G F-)及通过调控AMP K/沉默信息调节因子1(S I R T 1)/过氧化物酶体增殖物激活受体辅激活因子1(P G C-1)通路相关蛋白表达。实时荧光定量聚合酶链反应(R T-q P C R)检测大鼠心肌组织m i R-1 9 a-3 p的相对表达量。结果:与N C组比较,M o d e l组大鼠心肌纤维化程度加重,L V S P、+d p/d t m a x、L V E F、m i R-1 9 a-3 p表 达 水 平 及p-AMP K/AMP K、S I R T 1、P G C-1 蛋 白 表 达 降 低,L V E S D、L V E D D、I V S及C o l l a g e n、C o l l a g e n、T G F-蛋白表达升高(均P0.0 5)。与M o d e l组、N Ca g o m i r组比 较,m i R-1 9 a-3 pa g o m i r组 大 鼠 心 肌 纤 维 化 程 度 改 善,L V S P、+d p/d t m a x、L V E F、m i R-1 9 a-3 p表 达 水 平 及p-AMP K/AMP K、S I R T 1、P G C-1 蛋白表达升高,L V E S D、L V E D D、I V S及C o l l a g e n、C o l l a g e n、T G F-蛋白表达降低(均P0.0 5)。与m i R-1 9 a-3 pa g o m i r组比较,m i R-1 9 a-3 pa g o m i r+C o m p o u n dC组大鼠心肌纤维化程度加重,L V S P、+d p/d t m a x、L V E F及p-AMP K/AMP K、S I R T 1、P G C-1 蛋白表达降低,L V E S D、L V E D D、I V S及C o l l a g e n、C o l l a g e n、T G F-蛋白表达升高(均P0.0 5)。结论:过表达m i R-1 9 a-3 p可能通过激活AMP K/S I R T 1/P G C-1 通路抑制CH F大鼠心肌纤维化。关键词 充血性心力衰竭;大鼠;微小R NA-1 9 a-3 p;腺苷酸活化蛋白激酶;沉默信息调节因子1;过氧化物酶体增殖物激活受体辅激活因子1;心肌纤维化中图分类号:R5 4 1.6 1 文献标志码:A D O I:1 0.3 9 6 9/j.i s s n.1 0 0 0-7 3 7 7.2 0 2 3.0 9.0 0 3E f f e c t a n dm e c h a n i s mo fm i c r o R N A-1 9 a-3 po nm y o c a r d i a l f i b r o s i si nr a t sw i t hc o n g e s t i v eh e a r t f a i l u r eL I UP e n g,CHE NZ h e n(D e p a r t m e n to fC a r d i o l o g y,Wu h a nH o s p i t a l o fT r a d i t i o n a lC h i n e s eM e d i c i n e,Wu h a n4 3 0 0 1 0,C h i n a)A B S T R A C T O b j e c t i v e:T oe x p l o r et h ee f f e c ta n dm e c h a n i s mo fm i c r o R NA-1 9 a-3 p(m i R-1 9 a-3 p)o nm y o c a r d i a lf i b r o s i s i nr a t sw i t hc o n g e s t i v eh e a r t f a i l u r e(CH F).M e t h o d s:S i x t yS Dr a t sw e r er a n d o m l yd i v i d e di n t oN Cg r o u p,M o d e l g r o u p,N Ca g o m i rg r o u p(t a i lv e i ni n j e c t i o no fN Ca g o m i r),m i R-1 9 a-3 pa g o m i rg r o u p(t a i lv e i ni n j e c t i o no fm i R-1 9 a-3 pa g o m i r),m i R-1 9 a-3 pa g o m i r+C o m p o u n dC(AMP Ki n h i b i t o r)g r o u p(t a i l v e i ni n j e c t i o no fm i R-1 9 a-3 pa g o m i ra n d2 5 0g/k gC o m p o u n dC),w i t h1 2r a t s i ne a c hg r o u p.I nt h eN Cg r o u p,o n l y t h ea b d o m i n a l a o r t aw a se x-p o s e dw i t h o u t l i g a t i o n,a n dt h eCH F m o d e lw a sc o n s t r u c t e di nt h ef o r mo fa b d o m i n a la o r t i cs t e n o s i si nt h eo t h e rg r o u p s.A f t e r t h ea d m i n i s t r a t i o n,t h eh e m o d y n a m i cp a r a m e t e r sL V S Pa n d+d p/d t m a x)a n dc a r d i a c f u n c t i o n i n d e x e s(L V E D D,L V E S D,I V Sa n dL V E F)w e r ec o m p a r e d i ne a c hg r o u p.M a s s o ns t a i n i n gw a su s e dt od e t e c tm y o c a r d i a l f i-b r o s i s.W e s t e r nb l o tw a su s e dt od e t e c t t h ee x p r e s s i o no fC o l l a g e n,C o l l a g e n,T G F-a n dAMP K/S I R T 1/P G C-1 p a t h w a yr e l a t e dp r o t e i n s i nr a tm y o c a r d i a l t i s s u e.R T-q P C Rw a su s e d t od e t e c tm i R-1 9 a-3 pe x p r e s s i o n i nr a tm y o-c a r d i a l t i s s u e.R e s u l t s:C o m p a r e dw i t ht h eN Cg r o u p,t h ed e g r e eo fm y o c a r d i a l f i b r o s i s i nt h eM o d e l g r o u p i n c r e a s e d,t h eL V S P,+d p/d t m a x,L V E F,t h e e x p r e s s i o n l e v e l o fm i R-1 9 a-3 p,a n d t h ep r o t e i ne x p r e s s i o n so fp-AMP K/AMP K,S I R T 1a n dP G C-1 w e r es i g n i f i c a n t l yr e d u c e d,t h eL V E D D,L V E S D,I V S,a n dC o l l a g e n,C o l l a g e n,a n dT G F-p r o t e i ne x p r e s s i o n sw e r es i g n i f i c a n t l y i n c r e a s e d(a l lP0.0 5).C o m p a r e dw i t ht h eM o d e lg r o u pa n dt h eN Ca g o m i r5211陕 西 医 学 杂 志S h a a n x iM e d i c a l J o u r n a l2 0 2 3年9月第5 2卷第9期S e p.2 0 2 3V o l.5 2N o.9g r o u p,t h ed e g r e eo fm y o c a r d i a l f i b r o s i si nt h em i R-1 9 a-3 pa g o m i rg r o u pw a sw e a k e n e d,t h eL V S P,+d p/d t m a x,L V E F,t h e e x p r e s s i o n l e v e l o fm i R-1 9 a-3 p,a n d t h ep r o t e i ne x p r e s s i o n so f p-AMP K/AMP K,S I R T 1a n dP G C-1 w e r es i g n i f i c a n t l y i n c r e a s e d,t h eL V E S D,L V E D D,I V S,a n dt h ep r o t e i ne x p r e s s i o n so fC o l l a g e n,C o l l a g e na n dT G F-w e r es i g n i f i c a n t l yr e d u c e d(a l lP0.0 5).C o m p a r e dw i t ht h em i R-1 9 a-3 pa g o m i rg r o u p,t h ed e g r e eo fm y o c a r d i a l f i-b r o s i s i nt h em i R-1 9 a-3 pa g o m i r+C o m p o u n dCg r o u pw a se n h a n c e d,t h eL V S P,+d p/d t m a x,L V E F,a n dt h ep r o t e i ne x p r e s s i o n so fp-AMP K/AMP K,S I R T 1a n dP G C-1 w e r es i g n i f i c a n t l yr e d u c e d,t h eL V E S D,L V E D D,I V S,a n dt h ep r o t e i ne x p r e s s i o n so fC o l l a g e n,C o l l a g e na n dT G F-w e r e s i g n i f i c a n t l y i n c r e a s e d(a l lP0.0 5).C o n c l u s i o n:O v e r e x p r e s s i o no fm i R-1 9 a-3 pm a y i n h i b i tm y o c a r d i a l f i b r o s i s i nCHFr a t sb ya c t i v a t i n gAMP K/S I R T 1/P G C-1 p a t h w a y.K E Y WO R D S C o n g e s t i v eh e a r t f a i l u r e;R a t s;m i R-1 9 a-3 p;A d e n o s i n em o n o p h o s p h a t e-a c t i v a t e dp r o t e i nk i n a s e;S i-l e n c i n g i n f o r m a t i o nr e g u l a t o r1;P e r o x i s o m ep r o l i f e r a t o r-a c t i v a t e dr e c e p t o r-c o a c t i v a t o r1;M y o c a r d i a l f i b r o s i s 充血性心力衰竭(C o n g e s t i v eh e a r t f a i l u r e,CH F)指由于心室充盈或泵血功能障碍,导致心排血量无法满足机体代谢需要的综合征1。尽管CH F在诊断方面取得了进展,但其发病率和病死率仍然较高2。因此,探究CH F发生的分子机制对于CH F的治疗具有重要意义。许多微小R NA(m i c r o R NA,m i R)被认为是诊断和治疗疾病的生物标志物和可 能的 治疗 靶点3。m i R-1 9 a-3 p位于人1 4号染色体,是长度约8 2b p的非编码R NA4。研究5报道,上调m i R-1 9 a-3 p水平可减轻心力衰竭中心肌细胞的肥大。另外,心肌纤维化在心力衰竭的发生、发展中发挥重要的作用6。目前,关于m i R-1 9 a-3 p对CH F大鼠心肌纤维化的影响鲜有报道。因此,本研究通过构建CH F大鼠模型,探讨m i R-1 9 a-3 p对CH F大鼠心肌纤维化的影响及作用机制。1 材料与方法1.1 实验动物 S P F级雄性S D大鼠6 0只,体重1 8 0 2 0 0g,购自广州锐格生物公司,生产许可证号:S C X K(粤)2 0 2 1-0 0 5 9。所有大鼠喂养于有温控、1 2h明暗循环的环境中,自由饮水和进食。本研究动物实验符合3 R原则,获得本院动物伦理委员会批准。1.2 主要试剂 m i R-1 9 a-3 p激动剂(m i R-1 9 a-3 pa g-o m i r,货号:2 0 2 2 1 2 0 5)及其阴性对照(N Ca g o m i r,货号:2 0 2 2 1 2 0 8)均购自广州锐博生物技术有限公司;腺苷酸活化蛋白激酶(AMP K)抑制剂C o m p o u n dC(批号:S 7 8 4 0)购自MC E公司;兔源一抗沉默信息调节因子1(S I R T 1,货 号:K 0 0 0 3 1 9 P)、AMP K(货 号:K 1 0 6 7 0 7 P)、三磷酸甘油醛脱氢酶(GA P DH,货号:K 2 0 6 3 9 0 M)及辣根过氧化物酶(HR P)标记的山羊抗兔二抗(货号:S E 1 3 4)、M a s s o n三色染色试剂盒(货号:G 1 3 4 0)、2S Y B RG r e e nP C R M a s t e r m i x(货号:S R 1 1 1 0)购自北京索莱宝科技有限公司;型胶原蛋白(C o l l a g e n,货号:a b 3 4 7 1 0)、C o l l a g e n(货号:a b 7 7 7 8)、转化生长因子-(T G F-,货号:a b 3 1 0 1 3)、过氧化物酶体增殖物激活受体辅激活因子1(P G C-1,货号:a b 1 9 1 8 3 8)、p-AMP K(货号:a b 2 3 8 7 5)购自美国A b c a m公司;P r i m eS c r i p tTMR T M a s t e rM i x(货号:R R 0 3 6 A-1)购自日本T AKA R A公司。1.3 实验方法1.3.1 CH F模型构建:麻醉大鼠后,在剑突下腹部正中线处分离腹主动脉,将7号注射器针头放于腹主动脉上,与腹主动脉平行,用0号手术线结扎腹主动脉和针 头 后 将 针 头 抽 出,构 建 腹 主 动 脉 狭 窄 来 诱 发CH F7。建模4周后,行心脏彩超检测左心室射血分数(L V E F),若L V E F4 5%则表示造模成功8。1.3.2 实验分组与处理:将大鼠分为 对照组(N C组)、模型组(M o d e l组)、N Ca g o m i r组、m i R-1 9 a-3 pa g o m i r组、m i R-1 9 a-3 pa g o m i r+C o m p o u n dC组,每组1 2只。其中,N C组仅暴露腹主动脉不结扎,其他组均构建CH F模型(各组大鼠均造模成功);N Ca g-o m i r组和m i R-1 9 a-3 pa g o m i r组分别通过尾静脉注射N Ca g o m i r和m i R-1 9 a-3 pa g o m i r;m i R-1 9 a-3 pa g-o m i r+C o m p o u n dC组除需尾静脉注射m i R-1 9 a-3 pa g o m i r外,还需注射2 5 0g/k gC o m p o u n dC9,每3天注射1次,持续1 5d。1 5d后检测大鼠血流动力学参数及心脏功能指标。然后处死大鼠,收集心肌组织,一部分固定于4%多聚甲醛中,另一部分冻存于-8 0冰箱中(每部分包含6只大鼠心肌组织)。1.3.3 血流动力学参数检测:末次给药禁食1 2h后,用2.5%异氟醚麻醉大鼠,通过右颈动脉穿过主动脉瓣插入微压计尖端导管,采用P o w e rL a b数据采集系统观察并记录左心室收缩压(L V S P)、左心室内压最大上升速率(+d p/d t m a x)。1.3.4 心脏功能指标检测:麻醉大鼠后,使用超声波和2 1MH z探头在左心室长轴乳头肌水平处检测心室舒张 末 期 内 径(L V E D D)、左 心 室 收 缩 末 期 内 径(L V E S D)、室间隔厚度(I V S)和L V E F。1.3.5 M a s s o n染色检测心肌纤维化:用1 0 0m g/k g62112 0 2 3年9月第5 2卷第9期S e p.2 0 2 3V o l.5 2N o.9陕 西 医 学 杂 志S h a a n x iM e d i c a l J o u r n a l戊巴比妥钠处死大鼠,磷酸盐缓冲液(P B S)灌注后取出心脏,采用M a s s o n三色染色试剂盒检测厚5m的心肌组织切片的纤维化程度,用光学显微镜观察大鼠心肌纤维化情况。1.3.6 W e s t e r nb l o t检测蛋白表达:用R I P A裂解缓冲液裂解并提取心肌组织总蛋白,B C A法进行蛋白质定量后,取5 0g蛋白质电泳,转移到P V D F膜上,5%脱脂牛奶封闭1h,在4 下加入一抗C o l l a g e n(12 0 0 0稀释)、C o l l a g e n(11 0 0 0稀释)、T G F-(11 0 0 0稀 释)、AMP K(11 0 0 0稀 释)、S I R T 1(12 0 0 0稀 释)、P G C-1(12 0 0 0稀 释)、p-AMP K(12 0 0 0稀释)、GA P DH(12 0 0 0稀释),孵育过夜后与二抗(12 0 0 0稀释)共同孵育1h。加入E C L试剂后观察蛋白显色情况,通过I m a g eJ软件分析蛋白灰度值。1.3.7 实时荧光定量聚合酶链反应(R T-q P C R)检测m i R-1 9 a-3 p表达:用T R I z o l试剂提取心肌组织匀浆总R NA,采用P r i m eS c r i p tTMR T M a s t e rM i x将R N A反转录为c D N A,用2 S Y B RG r e e nP C RM a s t e r m i x进行P C R反 应。m i R-1 9 a-3 p正 向 引 物 序 列 为5-C AAT C C T C T C AG G C T C AG T C C-3,反向引物序列为5-T AT G C T T G T T C T C G T C T C T G T G T C-3;以U 6为 内 参,其 正 向 引 物 序 列 为5-C T C G C T T C G-G C A C C A C A-3,反 向 引 物 序 列 为5-AA C G G T-T C A C G GAT T T G C G T-3。m i R-1 9 a-3 p的相对表达量采用2-C t法计算。1.4 统计学方法 采用G r a p hP a dP r i s m5.0统计学软件分析数据,计量资料以(xs)表示,多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用S NK-q检验,P0.0 5为差异有统计学意义。2 结 果2.1 各组大鼠血流动力学参数比较 见表1。与N C组比较,M o d e l组大鼠L V S P、+d p/d t m a x降低(均P0.0 5)。与M o d e l组 和N C a g o m i r组 比 较,m i R-1 9 a-3 pa g o m i r组大鼠L V S P、+d p/d t m a x升高(均P 0.0 5)。与m i R-1 9 a-3 p a g o m i r组比较,m i R-1 9 a-3 pa g o m i r+C o m p o u n dC组大鼠L V S P、+d p/d t m a x降低(均P0.0 5)。表表11 各组大鼠血流动力学参数比较(xs)组 别nL V S P(mmH g)+d p/d t m a x(mmH g/s)N C组1 21 5 8.2 41 2.2 36 5 4 3.2 23 5.5 8M o d e l组1 21 0 1.2 47.9 6*3 2 3 5.5 91 8.8 7*N Ca g o m i r组1 21 0 3.3 68.2 23 2 4 6.6 31 9.2 5m i R-1 9 a-3 pa g o m i r组1 21 3 1.3 21 1.0 7#5 7 8 5.3 43 1.3 2#m i R-1 9 a-3 pa g o m i r+C o m p o u n dC组1 21 1 2.2 89.3 34 5 1 2.5 42 9.5 7 注:与N C组比较,*P0.0 5;与M o d e l组比较,#P0.0 5;与N Ca g o m i r组比较,P0.0 5;与m i R-1 9 a-3 pa g o m i r组比较,P0.0 52.2 各组大鼠心脏功能指标比较 见表2。与N C组比较,M o d e l组大鼠L V E S D、L V E D D、I V S升高,L V E F降低(均P0.0 5)。与M o d e l组和N Ca g o m i r组比较,m i R-1 9 a-3 pa g o m i r组大鼠L V E S D、L V E D D、I V S降低,L V E F升高(均P0.0 5)。与m i R-1 9 a-3 pa g o m i r组比较,m i R-1 9 a-3 pa g o m i r+C o m p o u n dC组大鼠L V E S D、L V E D D、I V S升高,L V E F降低(均P0.0 5)。表表22 各组大鼠心脏功能指标比较(xs)组 别nL V E S D(mm)L V E D D(mm)I V S(mm)L V E F(%)N C组1 22.3 50.1 14.9 20.3 41.0 10.0 97 0.2 85.1 2M o d e l组1 25.2 20.2 7*9.0 20.4 2*1.6 20.1 4*4 2.3 52.8 7*N Ca g o m i r组1 25.1 80.2 59.0 60.3 81.6 50.1 34 3.0 22.6 8m i R-1 9 a-3 pa g o m i r组1 23.2 80.2 3#6.3 60.2 9#1.2 80.1 1#6 2.2 44.5 6#m i R-1 9 a-3 pa g o m i r+C o m p o u n dC组1 24.4 20.2 68.2 30.4 11.5 10.1 25 1.0 54.3 3 注:与N C组比较,*P0.0 5;与M o d e l组比较,#P0.0 5;与N Ca g o m i r组比较,P0.0 5;与m i R-1 9 a-3 pa g o m i r组比较,P0.0 52.3 各组大鼠心肌M a s s o n染色结果 见图1。经M a s s o n染色后,胶原纤维呈蓝色,心肌细胞呈红色。与N C组比较,M o d e l组心肌纤维化程度加重。与M o d e l组和N Ca g o m i r组比较,m i R-1 9 a-3 pa g o m i r组7211陕 西 医 学 杂 志S h a a n x iM e d i c a l J o u r n a l2 0 2 3年9月第5 2卷第9期S e p.2 0 2 3V o l.5 2N o.9心肌纤维化程度减轻。与m i R-1 9 a-3 pa g o m i r组比较,m i R-1 9 a-3 pa g o m i r+C o m p o u n dC组心肌纤维化程度加重。注:A为N C组;B为M o d e l组;C为N Ca g o m i r组;D为m i R-1 9 a-3 pa g o m i r组;E为m i R-1 9 a-3 pa g o m i r+C o m p o u n dC组图1 各组大鼠心肌M a s s o n染色结果(4 0 0)2.4 各组大鼠心肌组织C o l l a g e n、C o l l a g e n 和T G F-蛋白表达比较 见表3。与N C组比较,M o d e l组C o l l a g e n、C o l l a g e n 和T G F-蛋白表达升高(均P0.0 5)。与M o d e l组、N Ca g o m i r组 比 较,m i R-1 9 a-3 pa g o m i r组C o l l a g e n、C o l l a g e n 和T G F-蛋白表达降低(均P0.0 5)。与m i R-1 9 a-3 pa g o m i r组比较,m i R-1 9 a-3 pa g o m i r+C o m p o u n dC组C o l l a g e n、C o l l a g e n和T G F-蛋白表达升高(均P0.0 5)。表表33 各组大鼠心肌组织C o l l a g e n、C o l l a g e n和T G F-蛋白表达比较(xs)组 别nC o l l a g e n/GA P DHC o l l a g e n/G A P DHT G F-/GA P DHN C组60.4 10.0 20.2 50.0 10.3 20.0 2M o d e l组61.2 30.0 8*1.0 30.0 8*0.9 50.0 7*N Ca g o m i r组61.1 90.0 91.0 50.0 90.9 70.0 8m i R-1 9 a-3 pa g o m i r组60.6 20.0 4#0.4 70.0 3#0.5 00.0 3#m i R-1 9 a-3 pa g o m i r+C o m p o u n dC组60.9 50.0 80.7 30.0 60.8 30.0 7 注:与N C组比较,*P0.0 5;与M o d e l组比较,#P0.0 5;与N Ca g o m i r组比较,P0.0 5;与m i R-1 9 a-3 pa g o m i r组比较,P0.0 52.5 各 组 大 鼠 心 肌 组 织m i R-1 9 a-3 p和AMP K/S I R T 1/P G C-1 通路相关蛋白表达比较 见表4。与N C组 相 比,M o d e l组m i R-1 9 a-3 p表 达 水 平 及p-AMP K/AMP K、S I R T 1、P G C-1 蛋白表达降低(均P0.0 5)。与M o d e l组 和N C a g o m i r组 比 较,m i R-1 9 a-3 pa g o m i r组m i R-1 9 a-3 p表 达 水 平 以 及p-AMP K/AMP K、S I R T 1、P G C-1 蛋白表达升高(均P0.0 5),p-AMP K/AMP K、S I R T 1、P G C-1 蛋白表达降低(均P0.0 5)。表表44 各组大鼠心肌组织m i R-1 9 a-3 p和AMP K/S I R T 1/P G C-1 通路相关蛋白表达比较(xs)组 别nm i R-1 9 a-3 pp-AMP K/AMP K S I R T 1/G A P DH P G C-1/G A P DHN C组61.0 00.0 01.1 20.1 00.9 50.0 80.8 10.0 6M o d e l组60.3 30.0 2*0.5 20.0 4*0.4 10.0 3*0.2 30.0 1*N Ca g o m i r组60.3 50.0 10.5 10.0 30.4 30.0 40.2 50.0 2m i R-1 9 a-3 pa g o m i r组61.3 30.1 1#0.9 50.0 8#0.8 20.0 6#0.6 40.0 5#m i R-1 9 a-3 pa g o m i r+C o m p o u n dC组61.3 70.1 30.7 30.0 50.6 50.0 50.4 90.0 3 注:与N C组比较,*P0.0 5;与M o d e l组比较,#P0.0 5;与N Ca g o m i r组比较,P0.0 5;与m i R-1 9 a-3 pa g o m i r组比较,P0.0 53 讨 论CH F是由结构性或功能性心脏病引起的复杂综合征,可使心室射血或充血功能障碍1 0-1 1。出现CH F前会发生左心室重构,其特征是心肌纤维化形成,包括C o l l a g e n、C o l l a g e n和T G F-增加1 2-1 4。心肌纤维化是CH F进展的主要驱动因素,过度纤维化会引发大面积的梗死瘢痕,导致心脏血流动力学受损及心脏功能障碍1 5。本研究通过构建CH F大鼠模型,经M a s s o n染色后发现,与N C组比较,M o d e l组大鼠心肌纤维化程度加 重,促 纤 维 相 关 指 标C o l l a g e n、82112 0 2 3年9月第5 2卷第9期S e p.2 0 2 3V o l.5 2N o.9陕 西 医 学 杂 志S h a a n x iM e d i c a l J o u r n a lC o l l a g e n和T G F-蛋白表达显著升高,血流动力学参数L V S P、+d p/d t m a x显著降低,心脏功能相关指标L V E S D、L V E D D、I V S显著升高,L V E F显著降低,提示CH F大鼠存在心肌纤维化、血流动力学受损以及心脏功能障碍。m i R NA是 天 然 存 在 的 小 非 编 码R NA。有 研究1 6-1 7证明,m i R NA在心力衰竭中失调。研究1 8发现,m i R-1 9 a-3 p在心力衰竭患者的血浆中低表达,过表达m i R-1 9 a-3 p可降低T G F-1信号诱导的人心脏成纤维细胞纤维化。而关于m i R-1 9 a-3 p对CH F大鼠心肌纤维化影响的相关研究较少。本研究结果显示,m i R-1 9 a-3 p在CH F大鼠心肌组织中低表达,过表达m i R-1 9 a-3 p后CH F大鼠心肌纤维化程度减轻,C o l l a-g e n、C o l l a g e n 和T G F-蛋 白 表 达 显 著 降 低,L V E D D、I V S显著降低,L V E F显著升高,表明过表达m i R-1 9 a-3 p可改善CH F大鼠心肌纤维化,减轻血流动力学受损及心脏功能障碍。提示m i R-1 9 a-3 p可能成为治疗CH F的潜在有效靶点。众所周知,AMP K和S I R T 1在肌纤维类型转换和肌肉能量代谢中发挥重要作用1 9-2 0。AMP K是维持细胞能量稳态的能量传感器,激活的AMP K会增加细胞内烟酰胺腺嘌呤二核苷酸水平,进而激活S I R T 1并最终催化P G C-1 脱乙酰化2 1。研究2 2发现,白藜芦醇通过激活AMP K/S I R T 1/P G C-1 通路促进肌纤维类型从快肌纤维类型转换为慢肌纤维。丹七片可激活AMP K/S I R T 1/P G C-1 信号通路,改善缺血性心脏病大鼠的心脏功能,防止心肌损伤2 3-2 4。本研究结果显示,与N C组比较,M o d e l组p-AMP K/AMP K、S I R T 1、P G C-1 蛋 白 表 达 显 著 降 低,提 示AMP K/S I R T 1/P G C-1 通路可能参与了CH F大鼠心肌纤维化过程。与M o d e l组、N Ca g o m i r组比较,m i R-1 9 a-3 pa g o m i r组p-AMP K/AMP K、S I R T 1、P G C-1 蛋白表达显著升高,推测过表达m i R-1 9 a-3 p可能通过激活AMP K/S I R T 1/P G C-1 通路抑制CH F大鼠心肌纤维化。为了验证该推测,本研究在过表达m i R-1 9 a-3 p的基础上采用AMP K抑制剂C o m p o u n dC