糖尿病性心肌病小鼠心肌线粒体circRNA表达谱与功能富集分析.pdf

第 卷第期年月西 安 交 通 大 学 学 报(医 学 版)J o u r n a l o fX ia nJ i a o t o ngU n i v e r s i ty(M e d i c a l S c i e n c e s)V o l N o S ep 本刊网址:h t t p:/y x x b x j t u e d u c n微信公众号:西安交通大学学报医学版基础研究糖尿病性心肌病小鼠心肌线粒体c i r c R N A表达谱与功能富集分析王毅,尤红俊,韩稳琦,刁佳宇(陕西省人民医院心内二科,陕西西安 )摘要:目的探索糖尿病性心肌病(d i a b e t i cc a r d i o m y o p a t h y,D CM)小鼠心肌线粒体c i r c R NA的差异表达情况及其功能分析.方法以 周龄的d b/d b小鼠构建D CM小鼠模型,C B L/K s J小鼠作为对照.提取两组小鼠心肌组织R NA,高通量测序筛选两组差异表达的线粒体c i r c R NA,使用R T q P C R对差异表达显著的前 个c i r c R NA验证测序结果,并对差异表达c i r c R NA靶基因作功能富集分析,使用m i R NA靶标预测软件对c i r c R NA m i R NA共表达网络分析.结果与对照组比较,D CM组小鼠心肌中 个差异表达的线粒体c i r c R NA,其中高表达 个、低表达 个.差异表达c i r c R NA在 组 织中 的表 达变 化 与测 序结 果趋 势 一致.GO与K E G G富集 分 析 显 示,差 异 表 达 的c i r c R NA靶基因主要富集在c GMP/P KG、胰高血糖素等通路,与线粒体能量代谢、心肌肥大相关.c i r c R NA m i R NA共表达网络分析发现,表达上调最显著的c h r M:与m i R p、m i R a p、m i R b p有关联,表达下调最显著的c h r M:与m i R b p、m i R b p、m i R p有关联.结论D CM小鼠心肌线粒体存在差异表达的c i r c R NA,且可能与相应m i R NA相互作用,通过调节能量代谢、凋亡等通路影响心肌纤维化、心肌细胞肥大,从而参与D CM的发病.关键词:糖尿病性心肌病;线粒体;c i r c R NA中图分类号:R 文献标志码:AD O I:/j d y x b 收稿日期:修回日期:基金项目:陕西省人民医院科技人才支持计划项目(B J )S u p p o r t e db yT e c h n o l o g yT a l e n tS u p p o r tP r o g r a mo fS h a a n x iP r o v i n c i a lP e o p l esH o s p i t a l(B J )通信作者:刁佳宇E m a i l:d i a o j i a y u c o m网络出版地址:h t t p s:/k n s c n k i n e t/k c m s/d e t a i l/R h t m l()A n a l y s i so f c i r c R N Ae x p r e s s i o np r o f i l ea n df u n c t i o n a l e n r i c h m e n t o fm y o c a r d i a lm i t o c h o n d r i a i nm i c ew i t hd i a b e t i cc a r d i o m y o p a t h yWANGY i,YOU H o n g j u n,HAN W e n q i,D I AOJ i a y u(T h eS e c o n dC a r d i o v a s c u l a rM e d i c i n eD e p a r t m e n to fS h a a n x iP r o v i n c i a lP e o p l esH o s p i t a l,X ia n ,C h i n a)A B S T R A C T:O b j e c t i v eT oe xpl o r et h ed i f f e r e n t i a le xpr e s s i o n a n df u n c t i o n a la n a lys i so fc i r c RNA f r o mmyo c a r d i a lm i t o c h o n d r i ai n d i a b e t e sc a r d i o myopa t hy(D CM)m i c e M e t h o d sT h e D CM m i c e m o d e l w a se s t a b l i s h e di n w e e k o l dd b/d bm i c e,a n dC B L/K s Jm i c ew e r eu s e da sc o n t r o l s RNA w a se x t r a c t e df r o mt h emyo c a r d i u m o ft w ogr o upso f m i c e,h igh t h r o ughpu ts equ e n c i ngw a su s e dt os c r e e n m i t o c h o n d r i a lc i r c RNAd i f f e r e n t i a l lye xpr e s s e di nt h et w ogr o ups,R T qP C R w a su s e dt ov e r i fyt h es equ e n c i ngr e s u l t so ft h ef i r s t c i r c RNA sw i t hs ign i f i c a n td i f f e r e n t i a le xpr e s s i o n,a n df u n c t i o n a le n r i c h m e n ta n a lys i s w a spe r f o r m e d o nt h ed i f f e r e n t i a l lye xpr e s s e dc i r c RNAt a rge tge n e s,a n d m i RNAt a rge tpr e d i c t i o ns o f t w a r e w a su s e dt oa n a lyz et h ec i r c RNA m i RNAc o e xpr e s s i o nn e t w o r kR e s u l t s T h e r ew e r e m i t o c h o n d r i a l c i r c RNA sd i f f e r e n t i a l lye xpr e s s e di nt h emyo c a r d i u mo fD CM m i c e,i n c l u d i ng h igh lye xpr e s s e da n d l o we xpr e s s e d T h ee xpr e s s i o npa t t e r no fd i f f e r e n t i a l lye xpr e s s e dc i r c RNA s i nt i s s u e sw a sc o n s i s t e n tw i t ht h o s eo f s equ e n c i ngr e s u l t s T h ee n r i c h m e n ta n a lys i so fGOa n dK E GGs h o w e dt h a tt h ed i f f e r e n t i a l lye xpr e s s e dc i r c RNAt a rge tge n e sw e r em a i n lye n r i c h e di nc GMP/P KG,gl u c ago npa t h w ays,w h i c h w e r er e l a t e dt o m i t o c h o n d r i a le n e rg ym e t a b o l i s m a n dc a r d i a c hy pe r t r ophyc i r c RNA m i RNAc o e xpr e s s i o na n a lys i s f o u n dt h a t t h em o s t s ign i f i c a n t lyup r egu l a t e dc i r c R N A,c h r M:,w a sa s s o c i a t e dw i t hm i R p,m i R a p,a n dm i R b p,a n d t h em o s t s ign i f i c a n t lyd o w n r egu l a t e dc i r c RNA,西 安 交 通 大 学 学 报(医 学 版)第 卷本刊网址:h t t p:/y x x b x j t u e d u c n微信公众号:西安交通大学学报医学版c h r M:,w a sa s s o c i a t e dw i t hm i R b p,m i R b p,a n dm i R pC o n c l u s i o n C o mpa r e dt ot h ec o n t r o lm i c e,t h e r ei sd i f f e r e n t i a le xpr e s s i o no fc i r c RNA si n myo c a r d i a lm i t o c h o n d r i ao fD CM m i c e T h ed i f f e r e n t i a l lye xpr e s s e dc i r c RNA sm ayi n t e r a c tw i t ht h ec o r r e spo n d i ngm i RNAt oa f f e c tmyo c a r d i a lf i b r o s i sa n dhy pe r t r ophyt h r o ughr egu l a t i o no fe n e rg ym e t a b o l i s m,apopt o s i sa n do t h e rpa t h w ays,t h u spa r t i c ipa t i ngi nt h epa t h oge n e s i so fD CMK E Y WO R D S:d i a b e t i cc a r d i o myopa t hy(D CM);m i t o c h o n d r i o n;c i r c RNA细胞的生物学活动受到多种基因共同调控,其中c i r c R NA是一种内源性非编码R NA,由线性R NA以非经典反向剪接方式而形成,呈封闭环状结构,因此,比线性R NA更稳定,且不易被降解 .近年来,越来越多的研究表明,c i r c R NA充当竞争性内源R NA(c o m p e t i n g e n d o g e n o u s R NA,c e R NA)与m i R NA结合,在细胞中起到m i R NA海绵作用,解除m i R NA对其靶基因的抑制作用,上调靶基因的表达,从而参与多种生理、病理过程,包括肌肉的发育、脑病、肿瘤等 .在糖尿病患者的外周血中也发现c i r c R NA的异常表达,而且异常表达的c i r c R NA可能参与了糖尿病患者的炎症反应过程.糖 尿 病 性 心 肌 病(d i a b e t i cc a r d i o m y o p a t h y,D CM)是糖尿病患者最常见的心血管并发症之一,以心肌细胞过度凋亡、心肌纤维化、心肌细胞肥大为主要病理特点.线粒体是真核细胞内一种重要的细胞器,线粒体不仅是细胞能量代谢的工厂,也参与调节细胞凋亡、氧化应激、钙稳态维持等多种生物学功能.本课题组前期研究发现,线粒体损伤是D CM发病的中心环节,改善线粒体功能有望成为D CM的防治靶点 .线粒体基因组是独立于细胞核染色体外的又一基因组,能够自主复制,是一个含有 k b的环状基因组,编码多肽、核糖体核糖核酸以及转运核糖核酸.目前,来源于线粒体的c i r c R NA已被确定 ,在肌肉、肝脏等线粒体富集的组织中,线粒体c i r c R NA已展现出相应治疗的潜力.有研究发现,过表达线粒体c i r c R NAS C A R可抑制肝脏成纤维细胞的活化并抑制相应的炎症反应.但尚不清楚有关线粒体c i r c R NA是否参与D CM的发病及其机制.本研究采用二代测序技术检测D CM小鼠线粒 体c i r c R NA的表达,筛选出D CM发病相关的线粒体c i r c R NA进一步分析,探讨D CM发病的分子机制,为寻找防治D CM的靶点提供科学依据.材料与方法实验动物及分组所有实验动物购于西安交通大学医学部实验动物中心,动物实验过程符合西安交通大学动物实验委员会制定的动物伦理学标准.实验动物分为D C M组和对照组.周龄的雄性d b/d b小鼠为D C M组,与其对照的C B L/K s J小鼠为对照组,每组只小鼠.D CM小鼠模型的验证用小动物彩色多普勒超声诊断仪(P h i l i p s,荷兰)进行超声心动图检查,取左心室长轴切面与短轴切面测量M型曲线,测量左室收缩末期直径、左室舒张末期直径,连续测量个心动周期的指标,并计算平均值.HE染色:小鼠以 m L/L水合氯醛麻醉后断颈处死,取出心脏,取心底部至心尖部连线中段的心肌组织,常规制成m厚石蜡切片,苏木素伊红染色后脱水、透明、封片.光学显微镜(O l y m p u s,日本)下观察染色效果,镜下拍照,每张切片选取个视野.R N A文库制备与测序利用T r i z o l法分别提取各组小鼠心肌总R NA,并对R NA进行浓度、纯度与完整性质控,质检合格可用于文库制 备.总R NA用r R NA去 除 试 剂 盒(N E B N e x t,美国)去除r R NA后,用T r u S e qS t r a n d e dT o t a lR NA L i b r a r yP r e p试剂盒(I l l u m i n a,美国)构建R NA文库,再用A n g i l e n t 分析系统(A n g i l e n t,美国)检测文库大小和浓度并对文库进行质控.将 p m o l/L文库变性为单链D NA分子,在I l l u m i n a f l o w c e l l(I l l u m i n a,美国)上捕获,原位扩增为簇,并在I l l u m i n aH i S e q(I l l u n i n aH i S e q ,美国)测序平台上采用双端模式进行 个循环测序.差异表达线粒体c i r c R N A的筛选使用C u t a d a p t软件(v)去除接头及低质量r e a d s,获得高质量r e a d s.将高质量r e a d s比对到参考基因组上,再进行c i r c R NA检测和鉴定.并使用c i r c B a s e数据库 和C i r c T r a i t s数 据 库 对 所 鉴 定 的c i r c R NA进行注释,筛选出线粒体来源的c i r c R NA.最后用E d g e R软件(v )分析两组小鼠心肌差异表达c i r c R NA,分别用分层聚类分析法和火山图滤过法鉴定有差异表达的c i r c R NA,以差异倍数和P 作为差异有统计学意义.差异表达c i r c R N A的功能富集分析与m i R N A共网络分析利用GO数 据 库(h t t p:/www g e n e o n t o l o g y 期王毅,尤红俊,韩稳琦,等糖尿病性心肌病小鼠心肌线粒体c i r c R NA表达谱与功能富集分析本刊网址:h t t p:/y x x b x j t u e d u c n微信公众号:西安交通大学学报医学版o r g)对差异表达的c i r c R NA进行功能富集分析,包括生 物 学 过 程(b i o l o g i c a lp r o c e s s,B P)、细 胞 组 分(c e l l u l a rc o m p o n e n t,C C)与 分 子 功 能(m o l e c u l a rf u n c t i o n,MF)共个 方 面.利 用K E G G数 据 库(h t t p s:/wwwk e g g j p/k e g g/p a t h w a y h t m l)对差异表达的c i r c R NA进行通路富集分析,分析主要参与的信号通路和相关生物学功能.使用m i R a n d a和T a r g e t S c a n两种m i R NA靶标预测软件对c i r c R NA m i R NA相互作用进行预测.差异表达c i r c R N A的验证根据前期高通量测序结果,依据组间差异显著、组内差异小,并且同源性高的原则选取差异表达的c i r c R NA,利用R T q P C R法对其进行验证.T r i z o l法分别提取两组小鼠心肌总R NA,使用P r i m e S c r i p t反转录试剂盒(T a k a r a,日本)将R NA进行反转录为c D NA,再使用S Y B RP C R试剂盒(T a k a r a,日本)进行R T q P C R检测.以GA P DH作为内参基因,采用 C t法计算差异c i r c R NA的相对表达.R T q P C R反应条件为:预变性 s,变性 s,退火 s,循环 次.R T q P C R引物由上海生工生物公司设计与合成.引物序列见表.表R T q P C R检测c i r c R N A的引物T a b c i r c R NAw i t hs i g n i f i c a n td i f f e r e n t i a l e x p r e s s i o na n dc o r r e s p o n d i n gp r i m e r s基因上游引物序列()下游引物序列()c h r M:A G C C C A C G GA T G T G G T AAA GC T C T C G G G C AA T G G T C T T G Tc h r M:G C C UGUAUGAUU C UGU C AAA CGUUUG A C A GAAU C AUA C A G G Cc h r M:A G G C C G G TA G C T G AG T A T G T CT G C C T G C T T C A C C A C C T T C Tc h r M:A G G G G AG A G C G G G T AA G AG AG GA C AG G A C T G G C G G AA C Ac h r M:G C A C C GU C AAUG C C UA C AA GAU C UUGUA G G C AUUGA C G GUG Cc h r M:A T A T C G C T G C G C T G G T C G T CA G G A T G G C G T G AG G GA GA G Cc h r M:G GUG AUGUU C GU C A C C UAUG AU C AUA G GUGA C G AA C AU C A C CG A P DHC G T AG C A G G AAA T C A G C A T CG C AG T A T C C AG A G G AAA G G T G统计学分析使用S P S S 软件进行统计学分析.符合正态分布的计量资料以均数标准差表示,组间比较采用独立样本t检验.以P 为差异有统计学意义.结果D CM小鼠的验证HE染色结果可见 周龄d b/d b小鼠的心肌部分肌原纤维溶解、断裂,心肌细胞排列紊乱,细胞肥大;心脏超声心动图结果显示,出现了左室扩张(图,P).以上结果证实,周龄时d b/d b小鼠为成功构建的D CM小鼠模型.两组小鼠差异表达的线粒体c i r c R N A的筛选D CM组与对照组小鼠个心肌样本中,检测到的线粒体c i r c R NA共 个,根据c i r c R NA序列来源分析,来源于e x o n占,i n t e r g e n占 ,a n t i s e n s e占,i n t r o n占.将对照组和D C M组小鼠心肌的线粒体c i r c R N A进行分 层聚类分析 与火 山 图 滤 过 分 析,共 筛 选 出 个差异表达的c i r c R NA,其中高表达 个,低表达 个(图).差异表达显著的前 个c i r c R NA相关信息见表.差异表达线粒体c i r c R N A的G O富集分析GO分析结果显示,差异表达下调的线粒体c i r c R NA与线粒体能量代谢、心肌组织的发育有关,并与多种酶活性有关,包括组蛋白乙酰转移酶、N 乙酰转移酶、肌动蛋白依赖性AT P酶;差异表达上调的线粒体c i r c R NA与能量代谢、离子结合、细胞骨架蛋白结合等有关(图).C o n t r o l:对照组;D CM:糖尿病性心肌病组;L V E D D:左室舒张末期直径;L V E S D:左室收缩末期直径.与对照组比较,P .图D CM小鼠功能学(A)及心脏结构(B)改变F i g C h a n g e so f c a r d i a c f u n c t i o n(A)a n ds t r u c t u r e(B)i nD CM m i c e西 安 交 通 大 学 学 报(医 学 版)第 卷本刊网址:h t t p:/y x x b x j t u e d u c n微信公众号:西安交通大学学报医学版A:c i r c R NA分层聚类分析结果,红色、绿色分别为心肌高、低表达的线粒体c i r c R NA;B:c i r c R NA的火山图结果,绿线左上方和右上方的红点分为心肌高、低表达的线粒体c i r c R NA.图D CM小鼠心肌的差异表达线粒体c i r c R N A高通量测序分析结果F i g R e s u l t so fh i g h t h r o u g h p u t s e q u e n c i n go fm i t o c h o n d r i a l c i r c R NAd i f f e r e n t i a l l ye x p r e s s e d i nt h eD CM m i c e表同源性分析筛选出差异表达的前 个c i r c R N AT a b T h e t o p d i f f e r e n t i a l l ye x p r e s s e dc i r c R NA ss c r e e n e do u tb yh o m o l o g ya n a l y s i s差异表达c i r c R NAI Dc i r c R NA类型P值差异倍数上调c h r M:e x o n c h r M:e x o n c h r M:e x o n c h r M:i n t e r g e n c h r M:e x o n c h r M:e x o n c h r M:e x o n c h r M:e x o n 下调c h r M:e x o n c h r M:e x o n c h r M:e x o n c h r M:e x o n c h r M:i n t e r g e n c h r M:e x o n c h r M:i n t e r g e n 期王毅,尤红俊,韩稳琦,等糖尿病性心肌病小鼠心肌线粒体c i r c R NA表达谱与功能富集分析本刊网址:h t t p:/y x x b x j t u e d u c n微信公众号:西安交通大学学报医学版B P:生物学过程(b i o l o g i c a lp r o c e s s);C C:细胞组分(c e l l u l a r c o m p o n e n t);MF:分子功能(m o l e c u l a r f u n c t i o n).图D CM小鼠心肌差异表达下调(AC)和上调(DF)的线粒体c i r c R N A的G O富集分析结果F i g G Oe n r i c h m e n t a n a l y s i so fd o w n e x p r e s s e d(AC)a n du p e x p r e s e d(DF)m i t o c h o n d r i a l c i r c R NAi nD CM m i c e差异表达的线粒体c i r c R N A的K E G G富集分析K E G G分析显示(图),差异表达的线粒体c i r c R NA靶基因主要富集于环磷酸鸟苷酸/蛋白激酶G(c y c l i cg u a n o s i n em o n o p h o s p h a t e/p r o t e i nk i n a s eG,c GMP/P K G)、胰高血糖素、磷脂酰肌醇信号通路,参与心肌收缩、心肌肥大的过程.图D CM小鼠差异表达下调(A)和上调(B)的线粒体c i r c R N A的K E G G富集分析F i g K E G Ge n r i c h m e n t a n a l y s i so fd o w n e x p r e s e d(A)a n du p e x p r e s e d(B)m i t o c h o n d r i a l c i r c R NAi nD CM m i c e差异表达c i r c R N A的验证为验证测序数据的可靠性,对差异表达的前 个c i r c R NA进行R T q P C R检测.个c i r c R NA表达变化趋势与测序结果一致,其中表达上调的是c h r M:、c h r M:、c h r M:、c h r M:、c h r M:,表达下调的是c h r M:与c h r M:(图).说明测序结果可靠,差异表达的c i r c R NA可用于后续进一步的研究分析.差异表达c i r c R N A m i R N A共表达网络分析使用m i R NA靶标预测软件预测与D CM组差异表达的线粒体c i r c R NA结合的m i R NA.c i r c R NA m i R NA共表达网络分析结果显示,与表达上调最显著的c h r M:相 互 作 用 的m i R NA为mm u m i R p、mm u m i R a p、mm u m i R b p.与表达下调最显著的c h r M:相互作用 的m i R NA为mm u m i R b p、mm u m i R b p、mm u m i R p(图).西 安 交 通 大 学 学 报(医 学 版)第 卷本刊网址:h t t p:/y x x b x j t u e d u c n微信公众号:西安交通大学学报医学版D CM组:糖尿病性心肌病组.与对照组比较,P.图差异表达的线粒体c i r c R N A的R T q P C R验证结果F i g R T q P C Rv e r i f i c a t i o nr e s u l t so fd i f f e r e n t i a l l ye x p r e s s e dm i t o c h o n d r i a l c i r c R NA图差异表达c i r c R N A m i R N A共表达网络分析F i g D i f f e r e n t i a l l ye x p r e s s e dc i r c R NA m i R NAr e g u l a t o r yn e t w o r k讨论虽然线粒体基因组数量不大,但线粒体c i r c R NA在所有c i r c R NA中相对含量较高.与线粒体编码的mR NA不同,线粒体c i r c R NA也存在于线粒体外,提示线粒体c i r c R NA对细胞生物功能的调节作用不仅局限于线粒体这一细胞器,而是可能参与调节细胞的整体功能.本研究通过高通量测序分析发现,D CM小鼠心肌组织中 个差异表达的线粒体c i r c R NA,其中表达上调 个、下调 个,初步证实了D CM发病过程中存在线粒体c i r c R NA的差异表达,并通过R T q P C R验证了测序结果的一致性.为进一步分析差异表达的线粒体c i r c R NA的功能与相关通路,进行了GO功能富集分析与K E G G分析.GO功 能 富 集 分 析 结 果 显 示,差 异 表 达 的c i r c R NA与线粒体能量代谢、心肌组织发育以及蛋白乙酰化 有 关.K E G G富 集 分 析 显 示,差 异 表 达 的c i r c R NA靶基因主要富集在c GMP/P K G信号通路上,参与了心肌收缩、心肌肥大的过程.研究发现c GMP/P K G通 路 参 与 了 心 肌 的 保 护 作 用.增 加c GMP浓度,提高P K G活性,可使多个肥大级联反应失活,从而抑制心肌细胞肥大、心肌纤维化,对心肌肥厚和重构的负 性调节起到 关键作用.这提示,D CM小鼠差异表达的线粒体c i r c R NA可能与心肌重构有关.通过c i r c R NA m i R NA共表达网络分析发现,表达上调最显著的线粒体c i r c R N A,c h r M:与m i R p、m i R p有关联.m i R p靶向负向调控组织蛋白酶S(c a t h e p s i nS,C T S S)的表达,并参与人成骨细胞分化与凋亡.过表达C T S S可抑制m i R p对人成骨细胞抗凋亡、促增殖分化的作用.A k t/mTO R通路是m i R a p的靶基因.P K/A k t/mTO R信号通路是细胞重要的生存通路,A k t被激活后,能够刺激NO S的生成,同时抑制B a x、C a s p a s e等多种促凋亡蛋白,从而抑制细胞凋亡.P K/A k t通路还可通过调节下游核因子 B影响心肌纤维化.在D CM动物模型中,恢期王毅,尤红俊,韩稳琦,等糖尿病性心肌病小鼠心肌线粒体c i r c R NA表达谱与功能富集分析本刊网址:h t t p:/y x x b x j t u e d u c n微信公众号:西安交通大学学报医学版复P K/A k t通路活性可抑制心肌氧化应激损伤,减少心肌细胞凋亡,从而改善心功能 .m i R a p可抑制心肌细胞自噬,降低AT P酶活性,造成细胞能量代谢紊乱.抑制大鼠m i R a p的表达可阻断血管紧张素诱导的心肌纤维化,减少心肌成纤维细胞纤维连接蛋白、型胶原和 肌动蛋白的生成,抑制成纤维细胞的增殖和迁移.G S K 是m i R b p的 靶 基 因,m i R b p抑 制 剂 可 通 过 激 活G S K ,抑制其下游的促纤维化效应物S m a d,从而起到抗 心 肌 纤 维 化 的 作 用.因 此,c h r M:可能通过靶基因m i R p和m i R p介导调控心肌细胞能量代谢、凋亡,从而参与D CM心肌肥大、纤维化的过程.另外,表 达 下 调 最 显 著 的 线 粒 体c i r c R NA,c h r M:可 能 通 过 靶 基 因m i R p、m i R p调控下游通路的表达,影响心肌纤维化、心肌肥大,从而参与D CM的发病.m i R b在心肌肥厚患者外周血以及肾上腺素干预的心肌细胞中表达升高,同时P K G表达降低.而抑制心肌细胞中m i R b表达,P K G表达逆转,肌球蛋白重 链、肌动蛋白和心钠素等心肌肥厚相关基因表达下调.抑制m i R b还可增加T G F 转基因小鼠S e m a A/L I MK/p c o f i l i n的表达,并通过减少肌动蛋白重塑,使心房纤维化和心房颤动易感性显著降低.富含m i R p的M 小胶质外泌体可抑制炎症小体A I M 的活性,从而抑制神经元的凋亡,最终促进脊髓损伤小鼠行为功能的恢复.此外,m i R p可抑制靶基因J UN的表达,同时抑制血管紧张素诱导的心肌细胞肥大.综上所述,本研究通过基因测序与生物信息学分析发现了与D CM发病相关的线粒体c i r c R NA,通过c i r c R NA m i R NA共表达网络分析,推测异常表达的线粒体c i r c R NA如c h r M:、c h r M:可能通过c e R NA机制与靶标m i R NA s相互作用,通过能量代谢、凋亡等通路影响心肌纤维化、心肌细胞肥大,从而参与D CM的发病.参考文献:L IX,YANG L,CH E N LL T h eb i oge n e s i s,f u n c t i o n s,a n dc h a l l e nge so fc i r c u l a rRNA sJ M o lC e l l,():S A L ZMANJ C i r c u l a rRNAe xpr e s s i o n:I t spo t e n t i a l r egu l a t i o na n df u n c t i o nJ T r e n d sG e n e t,():OUYANGHJ,CH E NXL,WANGZJ,e t a l C i r c u l a rRNA sa r ea b u n d a n t a n ddyn a m i c a l lye xpr e s s e dd u r i nge m b ryo n i cm u s c l ed e v e l opm e n t i nc h i c k e n sJ DNAR e s,():P I WE C KA M,G L A Z ARP,H E RNAND E Z M I RANDAL R,e t a l L o s so fam a mm a l i a nc i r c u l a rRNAl o c u sc a u s e sm i RNAd e r egu l a t i o na n da f f e c t sb r a i nf u n c t i o nJ S c i e n c e,():e a a m ZHANGHD,J I ANGLH,S UND W,e t a l C i r c RNA:An o v e l ty peo fb i o m a r k e rf o rc a n c e rJ B r e a s tC a n c e r,():ZHAOZZ,L IXJ,J I ANDD,e t a l H s a_c i r c_ i npe r iph e r a l b l o o dc a nb eu s e da s ad i agn o s t i cb i o m a r k e ro fpr e d i a b e t e sa n dty ped i a b e t e sm e l l i t u sJ A c t aD i