DB6101T158-2020种鸡场戊型肝炎（HEV）净化技术规范.pdf

ICS 65.020.30 CCS B 43 DB6101 西安市地方标准 DB 6101/T 1582020 种鸡场戊型肝炎（HEV）净化技术规范 2020-11-12 发布 2020-12-12 实施 西安市市场监督管理局 发 布 DB6101/T 1582020 I 目 次 前 言.II 1 范围.1 2 规范性引用文件.1 3 术语和定义.1 4 检测要求.1 4.1 出壳雏鸡胎粪的检测与淘汰.1 4.2 育雏后期的检测与淘汰.2 4.3 开产前的检测与淘汰.2 4.4 留种前的检测与处理.2 5 饲养管理.3 5.1 饲养方式.3 5.2 出雏管理.3 5.3 卫生消毒.3 5.4 无害化处理.3 6 净化标准.3 6.1 病原学检测.3 6.2 血清学检测.3 附录 A（规范性）场群内个体监测抽样数量.4 DB6101/T 1582020 II 前 言 本文件按照GB/T 1.1-2020标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。本文件由西安市市场监督管理局提出。本文件由西安市农业农村局归口。本文件起草单位：西安市动物疫病预防控制中心、西北农林科技大学、西安秦岭野生动物园、西安瑞尔康农牧有限公司、咸阳康大农牧业有限公司、西安市长安区万缘养殖专业合作社。本文件主要起草人：张靖飞、张园、赵钦、冯鹏、孙亚妮、闵育娜、王新、石龙飞、邵俊峰、吴耀丽、王向阳、冯莲英、肖养红、聂娉舒。本文件由西安市动物疫病预防控制中心负责解释。本文件为首次发布。联系信息如下：单位：西安市动物疫病预防控制中心。地址：西安市长安南路138号。邮编：710061 联系方式：029-85490058DB6101/T 1582020 1 种鸡场戊型肝炎（HEV）净化技术规范 1 范围 本文件规定了种鸡场戊型肝炎(HEV)净化技术的术语和定义、检测、饲养管理、净化标准等要求。本文件适用于种鸡场戊型肝炎(HEV)净化。2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB 13078 饲料卫生标准 GB/T 14926.52 实验动物 酶联免疫吸附实验 GB/T 36195 畜禽粪便无害化处理技术规范 NY/T 388 畜禽场环境质量标准 NY/T 1167 畜禽场环境质量及卫生控制规范 NY 5027 无公害食品畜禽饮用水水质 NY/T 5038 无公害食品家禽养殖生产管理规范 NY/T 5339 无公害食品畜禽饲养兽医防疫准则 病死及病害动物无害化处理技术规范 农医发201725号 3 术语和定义 本文件没有界定的术语和定义。4 检测要求 4.1 出壳雏鸡胎粪的检测与淘汰 4.1.1 样品的收集 出壳前，将每只种鸡的种蛋置于同一出壳袋中。在灭菌的1.5mL离心管中每管事先放入0.5mL灭菌的磷酸盐缓冲液（PBS，0.01mol/mL，pH 7.4），将离心管对准鸡肛门处轻轻按压雏鸡腹部将胎粪挤入管内。4.1.2 样品的处理与检测 将装有胎粪的离心管在涡旋震荡仪上充分震荡混匀，采用TRIzol法提取粪便样品中的总 RNA。在 RT-nPCR扩增过程中使用 Superscript II 反转录酶，以5 L cDNA产物作为第 1 轮 PCR 扩增的模板。两次 PCR 均使用 Transtaq High Fidelity DNA 聚合酶，PCR 终产物用1%的琼脂糖凝胶电泳检测。4.1.3 检测后处理 DB6101/T 1582020 2 当有一只雏鸡胎粪检测为禽戊型肝炎病毒阳性则其对应母鸡与后代均视为禽戊型肝炎病毒阳性，阳性鸡不再做为种鸡，应无害化处理，阴性鸡立即运送至育雏舍中饲养。4.1.4 操作要求 对每一只母鸡所产雏鸡采集完胎粪后，要进行彻底洗手或者更换一次性手套后方可采集下一只母鸡所产雏鸡的胎粪。检测为阴性的雏鸡应在最短的时间内运送至育雏舍内，同一母鸡所产雏鸡仍在同一运输箱内运输。4.2 育雏后期的检测与淘汰 4.2.1 鸡群血清抗体检测 在育雏结束前10d 左右，对鸡只逐一无菌采集抗凝血，按照GB/T 14926.50要求，应用一种以重组截短禽HEV ORF2 蛋白为包被抗原的间接ELISA检测血清中的抗-禽HEV IgG 抗体，若抗体阳性率大于10%，宜同时选取鸡群阳性个体鸡粪便进行RT-nPCR检测，若RT-nPCR检测结果为阳性，淘汰阳性鸡。4.2.2 检测后处理 ELISA检测结果为阳性鸡不再作为种鸡，应无害化处理，对检测结果为阴性的选留后备鸡应维持小群饲养或单笼饲养。4.2.3 育雏期间操作要求 将同一母鸡所产雏鸡置于同一笼中饲养，不同笼之间以一次性纸板进行隔离。疫苗免疫和采血应使用一次性注射器。4.3 开产前的检测与淘汰 4.3.1 母鸡的检测 开产前2周左右，每栋鸡舍通过统计学计算选取一定数量的鸡只，采样数量见附录A，采集粪便，对其进行RT-nPCR检测，若检测结果为阳性，则判定该母鸡为禽戊型肝炎病毒阳性鸡。4.3.2 公鸡的检测 每栋鸡舍通过统计学计算选取一定数量的公鸡，采样数量见附录A，采集粪便，对其进行RT-nPCR检测，若检测结果为阳性，则判定该公鸡为禽戊型肝炎病毒阳性鸡。4.3.3 检测后的处理 检测结果为阳性鸡不再列为育种选育个体，应淘汰并做无害化处理，对检测结果为阴性的选留后备鸡应维持单笼饲养。4.4 留种前的检测与处理 4.4.1 母鸡的检测 检测方法参见4.1.2。4.4.2 公鸡的检测 检测方法参见4.1.2。DB6101/T 1582020 3 4.4.3 检测后的处理 引进种鸡时，应要求出具禽戊型肝炎净化证明和其他相关的检疫合格证或按照NY/T5339的要求进行。RT-nPCR 检测结果为阳性鸡不再列为育种选育个体，应淘汰做无害化处理，对检测结果为阴性的选留后备鸡应维持单笼饲养。种鸡引入后至少隔离饲养 60d，并经病原学检测确认为阴性，同时按照本场免疫程序进行常规免疫后方可调入鸡场。5 饲养管理 5.1 饲养方式 实行全进全出的饲养方式。对于原种鸡场,在育雏和育成鸡执行单家系饲养管理,产蛋鸡采取单笼饲养,执行终身跟踪制度。5.2 出雏管理 按照同只母鸡后代的全同胞进行装袋落盘。出雏执行严格隔离，品系之间、家系之间不交叉。5.3 卫生消毒 应符合中华人民共和国兽药典（2015年版）的规定，选择广谱、高效、杀菌作用强、刺激性低、对人和鸡安全的产品。消毒剂应定期轮换使用，以提高杀菌效力。对场区环境、人员、用具、鸡舍及种蛋的消毒按照相关要求进行。并且每天对孵化室进行清扫，并喷雾消毒，保持清洁。入孵前，对孵化器、入孵盘进行清洗、喷雾消毒，再用甲醛熏蒸30min。出雏后，清除出雏器中的污物、死胚、死雏、蛋壳，并对出雏器、出雏盘进行清洗和喷雾消毒，再用甲醛熏蒸30min。5.4 无害化处理 对病死鸡、蛋壳和鸡粪等和孵化场内的废弃物应按病死及病害动物无害化处理技术规范（农医发201725号）的要求进行无害化处理。6 净化标准 6.1 病原学检测 原种场全部为阴性，祖代场和父母代场阳性率低于1%。6.2 血清学检测 原种场全部为阴性，祖代场和父母代场阳性率不能高于10%。DB6101/T 1582020 4 附 录 A（规范性附录）场群内个体监测抽样数量 表A.1给出了场群内个体检测抽样数量。表A.1 场群内个体监测抽样数量 抽样数量（只）可接受误差 场/群存栏数（只）5%6%7%8%9%10%50 37 33 30 26 24 21 100 59 49 42 36 30 26 150 72 59 48 40 34 29 200 82 65 53 43 36 30 250 90 70 56 45 37 31 300 95 73 58 46 38 32 350 100 76 59 47 39 32 400 103 78 60 48 39 32 450 106 80 61 49 39 33 500 109 81 62 49 40 33 550 111 82 63 50 40 33 600 113 83 64 50 40 33 650 115 84 64 50 41 33 700 116 85 65 51 41 33 750 117 86 65 51 41 34 800 118 86 65 51 41 34 850 119 87 66 51 41 34 900 120 87 66 51 41 34 950 121 88 66 52 41 34 1000 122 88 66 52 41 34 1100 123 89 67 52 42 34 1200 125 89 67 52 42 34 1300 125 90 67 52 42 34 1400 126 90 68 53 42 34 1500 127 91 68 53 42 34 1600 128 91 68 53 42 34 1700 128 91 68 53 42 34 1800 129 92 68 53 42 34 1900 129 92 69 53 42 34 2000 130 92 69 53 42 34 DB6101/T 1582020 5 注：按照预期检测结果合格率90%，95%置信水平，不同可接受误差条件下、不同规模抽样数量。B _