资料09 确证化学结构或者组 份的试验资料及文献资料.doc

注册分类：化学药品6类 资料项目编号：9

申请生产研究资料
甘露醇
确证化学结构或者组份的试验资料
及文献资料

研究机构(盖章)：兵器工业非金属材料理化检测中心
研究机构地址：济南市天桥区田家庄东路3号
研究机构联系电话：
研究负责人（签字）：
试验者姓名：尤瑜升、华兰、冀克俭、吴立军、邓卫华等
试验时间：2005年02月1日-2005年03月31日
原始资料保存地点：山东***药业有限公司品质管理部
联系人：栾少华
　　　联系电话：

山东***药业有限公司
资料9、确证化学结构或者组份的试验资料及文献资料
一、 甘露醇的化学结构式、分子式、分子量
HO H
H OH
OH
H OH
HO H
HO
化学结构式：

分子式：C6H14O6
分子量：182.17

二、甘露醇和对照品的来源、批号
供试品： 山东***药业有限公司 批号：200502001
被仿品：河北华旭药业有限责任公司 批号：0501023
三、 样品的精制方法
将甘露醇粗品溶解后加入结晶机中，降温至16-18℃，经过离心分离后，将甘露醇一级精制品再次溶解后，转移到三口烧瓶中，加入活性炭，脱色30-40分钟，脱色后的料液转移到结晶机中，降温至16-18℃，经过离心分离后，微波干燥得甘露醇。
四、 样品的含量
按照《中国药典》2005年版 二部第72页中方法，滴定含量法测定样品的含量。取本品约0.2g，精密称定，置250ml量瓶中, 加水使溶解并稀释至刻度, 摇匀；精密量取 10ml，置碘量瓶中，精密加入高碘酸钠溶液50ml，置水浴上加热15分钟，放冷，加碘化钾试液10ml，密塞，放置5分钟，用硫代硫酸钠滴定液滴定，至近终点时，加淀粉指示液1ml，继续滴定至蓝色消失，并将滴定的结果用空白试验校正。每1ml硫代硫酸钠滴定液相当于0.9109mg的C6H14O6。含C6H14O66 ：供试品100.02%；被仿品99.87%。
五、样品的旋光度
称取硼砂6.4g于50ml容量瓶中，准确加入相当于干物质5g的试液，振摇，在50～60℃的水浴中温热至硼砂完全溶解，冷却至室温后，用水稀释至刻度，摇匀，放置2h，过滤。旋光仪开启电源约5min，钠光灯发光正常，将蒸馏水加入2dm旋光测定管中，调至零点，再用样品冲洗旋光测定管两次，将待测液充满旋光测定管，将盖旋紧，气泡旋至膨胀圈上方，放入旋光仪内，测定α。
旋光度：供试品+23.5°；被仿品+23.7°。
六、结构确证试验
1有机元素分析
仪器：Perkin—Elmer PE2400元素分析仪；测量元素为C、H。
甘露醇样品和对照品的C、H元素百分含量与理论值相符合。

表1-1甘露醇样品和对照品的C、H元素百分含量
元 素
样品
对照品
理论值
1
2
1
2
C
H
39.63
7.81
39.66
7.71
39.61
7.70
39.58
7.76
39.56
7.75

2紫外吸收光谱（UV）
仪器：Perkin-Elmer Lambda 900紫外-可见-近红外光光度计
试剂：水、甲醇、0.1mol/L HCl、0.1mol/L NaOH。
2.1紫外吸收光谱图
甘露醇样品及对照品在水、0.1mol/L HCl溶液，0.1mol/L NaOH溶液和甲醇中的紫外吸收光谱图分别见图2-1、2-2、2-3、2-4、2-5、2-6、2-7、2-8，两者的UV谱基本一致UV谱显示，样品及对照品在近紫外区（200～400nm）未见UV吸收峰，表明该样品分子结构中不含有共轭结构，与甘露醇结构相符。
3红外吸收光谱
仪器：NICOLET Magna 750 FT-IR
校正和检定：按中国药典2000年版二部对仪器进行校正，符合规定。
制样方法：KBr压片。
3.1红外光谱图
甘露醇样品及对照品的IR谱图见图3-1、3-2，两者的IR谱基本一致。
3.2各吸收峰归属
甘露醇样品的IR谱各吸收峰归属见表3-1。
表3-1 甘露醇样品的IR谱各吸收峰归属
吸收峰（cm-1）
振动类型
基团
3403、3286
2985、2969、2950、2910
1486、1459
1419、703、603
1081、1020
VO-H
VC-H
δC-H
δO-H
VC-O
OH
CH2，CH
CH2，CH
OH
C-OH
3.3红外光谱解析
⑴3403cm-1、3286cm-1为醇羟基的O-H伸缩振动吸收，1419cm-1、703cm-1、630cm-1为醇羟基的O-H面内和面外变形振动吸收，1081cm-1、1020cm-1为醇羟基的C-OH伸缩振动吸收，说明结构中含有醇羟基。
⑵2985cm-1、2969cm-1、2950cm-1、2910cm-1为亚甲基CH的伸缩振动吸收，1486cm-1、1459cm-1为亚甲基和次甲基CH的变形振动吸收，说明结构中含有亚甲基和次甲基。
⑶该样品的红外光谱图特征与目标化合物的化学结构相符合。
4核磁共振谱
仪器：Varian INOVA-300核磁共振波谱仪
溶剂：DMSO-d6
内标：δTMS0
4.11H核磁共振谱（1H-NMR）
4.1.11H核磁共振谱图
甘露醇样品和对照品的1H谱分别见图4-1、图4-2，两者的1H谱基本一致。甘露醇样品的重水交换谱见图4-3、1H-1H相关谱（COSY）谱见图4-4。
4.1.2测定数据
测定数据见表4-1
4　 5　 6 　6’ 　5’ 4’
OH OH OH OH OH OH

CH2 CH CH CH CH CH2
1 2 3 3’ 2’ 1’

表4-1 甘露醇样品在DMSO-d6中的1H-NMR数据
序号
化学位移
δ(ppm)
多重性
质子数
COSY
δ(ppm)
5，5’
4，4’
6，6’
1b，1’b
3，3’
2，2’
1a，1’a
4.47
4.40
4.20
3.62
3.55
3.46
3.39
d
t
d
m
t
m
m
2
2
2
2
2
2
2
3.46
3.39，3.62
3.55
3.39，4.40
4.20
4.47
3.62，4.40
4.2.113C核磁共振谱图
甘露醇样品和对照品的13C-NMR谱分别见图4-5、图4-6，两者的13C-NMR谱基本一致。甘露醇样品的DEPT谱见图4-7、13C-1H相关谱（HMQC见图4-8、远程13C-1H相关谱（HMBC）见图4-9。
4.2.2测定数据
测定数据见表4-2
4　 5　 6 　6’ 　5’ 4’
OH OH OH OH OH OH

CH2 CH CH CH CH CH2
1 2 3 3’ 2’ 1’

表4-2 甘露醇样品在DMS0-d6中的13C-NMR数据
序号
化学位移
δ(ppm)
多重性
HMQC
δ(ppm)
HMBC
δ(ppm)
2，2’
3，3’
1，1’
71.10
69.45
63.66
CH
CH
CH2
3.46
3.55
3.39，3.62
3.39，3.55，4.20，4.40，4.47
4.20，4.47
3.55，4.40，4.47
4.3谱图解析
4.3.1 1H-NMR谱图解析
根据COSY谱及重水交换谱，结合HMQC谱、HMBC谱和DEPT谱，可对甘露醇样品的1H谱进行归属：
⑴1H谱显示有6组氢，由低场到高场氢的积分比例分别为2：2：2：2：2：4，与甘露醇的结构相符。
⑵δ4.47处氢为一组二重峰，质子数为2；COSY谱显示，该处氢与δ3.46氢相关；经重水交换后该峰消失，应为活泼氢；归属为5和5’位活泼羟基氢。
⑶δ4.40处氢为一组三重峰，质子数为2；COSY谱显示，该处氢与δ3.39、δ3.62氢相关；经重水交换后该峰消失，应为活泼氢；归属为4和4’位活泼羟基氢。
⑷δ4.20处氢为一组二重峰，质子数为2；COSY谱显示，该处氢与δ3.55氢相关；经重水交换后该峰消失，应为活泼氢；归属为6和6’位活泼羟基氢。
⑸δ3.39、δ3.62处氢分别的一组多重峰；COSY谱显示，这两种组氢相关，且都与δ4.40氢4和4’相关；HMQC和DEPT谱显示，这两组氢与同一亚甲基碳相关；分别归属为1和1’位亚甲基上的两种个氢1a、1b和1’b 。
⑹δ3.55处的一组三重峰，质子数为2；COSY谱显示，该处氢与δ4.20氢6和6’相关；归属为3和3’位次甲基氢。
⑺δ3.46处的一组多重峰，质子数为2；COSY谱显示，该处氢与δ4.47氢5和5’氢相关；归属为2和2’位次甲基氢。
4.3.2 13C-NMR谱图解析
甘露醇分子结构中有6个碳，其中1和1’位亚甲基碳、2和2’、3和3’位次甲基碳为对称碳；而本品的13C显示有3组碳峰，这与甘露醇分子结构相符。根据DEPT谱、HMQC谱及HMBC谱，可对甘露醇样品的13C谱解析如下：
⑴DEPT谱显示无伯碳峰存在，这与甘露醇分子结构相符。
⑵DEPT谱显示有1级仲碳峰存在，与甘露醇分子结构相符。δ63.66的仲碳峰，在HMQC谱中与δ3.39、δ3.62氢1和1’相关，归属为1和1’位亚甲基碳；HMBC谱显示，该碳峰与δ3.55氢3和3’ 、δ4.40氢4和4’、δ4.47氢5和5’远程相关，证实归属正确。
⑶DEPT谱显示有2组叔碳峰存在，与甘露醇分子结构相符。其中δ69.45的叔碳峰，在HMQC谱中与δ3.55氢3和3’相关，归属为3和3’位次甲基碳；HMBC谱显示，该碳峰与δ4.20氢6和6’、δ4.47氢5和5’远程相关，证实归属正确。
⑷71.10的次碳峰，在HMQC谱中与δ3.46氢2和2’相关，归属为2和2’位次甲基碳；HMBC谱显示，该碳峰与δ3.39氢1a和1a’、δ3.62氢1b和1b’δ4.20氢6和6’ δ4.40氢4和4’、δ4.47氢5和5’远程相关，证实归属正确。
⑸DEPT谱显示本品的13C谱中无季碳峰存在，这与甘露醇分子结构相符。
5质谱（MS）
仪器：VG-QUATTRO质谱仪
条件：EI；能量：70eV
5.1质谱图
甘露醇样品和对照品的EI质谱图见图5-1、图5-2，两者的MS谱基本一致。质谱测得本品的分子离子峰M+1 ，其质荷比m/z为183，与甘露醇的分子量（分子式C6H14O6，分子量182）一致，与甘露醇样品的结构相符。
5.2断裂途径
OH
OH
OH
OH
OH
HO
M+1 m/e 183

+
+
OH
OH
HO
m/e 103
m/e 91
OH
HO
OH
+
HO
OH
+
m/e 85
OH
OH
HO
OH
+
m/e 133
OH
OH
+
m/e 73
OH
OH
+
OH
OH
HO
m/e 165
OH
OH
+
m/e 61
HO
OH
OH
OH
OH
m/e 164
·
+

6 X射线衍射
仪器：PANalytical X’Pert Pro粉末X射线衍射仪
条件：Cu Ka，40 kV，35mA
甘露醇样品和对照品的X射线衍射（XRD）谱图见图6-1、图6-2，两者的XRD谱基本一致。X射线衍射谱图显示，甘露醇样品及对照品均为结晶品。
7热分析
仪器：TA STD Q600 DSC-TG热分析系统。
条件：升温速率10℃/min，测量温度范围30～500℃，氮气气氛，流量40mL/min。
7.1热分析谱图
甘露醇样品和对照品的热重分析（TG）曲线分别见图7-1、图7-2，差示扫描量热（DSC）曲线分别见图7-3、图7-4，两者的热分析谱基本一致。
7.2测定结果
TG曲线显示，在30～250℃区域，甘露醇样品和对照品的TG曲线均为稳定直线，表明它们的热稳定性优异；当温度高于260℃后，甘露醇样品及对照品均发生快速分解。
从甘露醇样品的DSC曲线可看出，在大约167.4℃的吸热峰应为样品的结晶溶融温度，与对照品的结晶熔融温度（167.4℃）相同。
8综合解析
⑴元素分析结果表明甘露醇样品及对照品的组成与C6H14O6相符，测量不确定度在允许范围内。
⑵紫外吸收光谱表明，样品及对照品在近紫外区（200～400nm）未见UV吸收峰，表明该样品分子结构中不含有共轭结构，与甘露醇结构相符。
⑶红外光谱显示，本品结构中存在醇羟基及亚甲基和次甲基团，这与甘露醇分子结构相符。
⑷1H谱显示有6组氢，由低场到高场氢的积分比例分别为2：2：2：2：2：4，与甘露醇的结构相符。
⑸甘露醇分子结构中有6个碳，其中1和1’位亚甲基碳、2和2’、3和3’位次甲基碳为对称碳；而本品的13C谱显示有3组碳峰，这与甘露醇分子结构相符。DEPT谱显示本品的13C谱中不含有伯碳峰和季碳峰、含有1组仲碳峰和2组叔组碳峰，这与甘露醇分子结构相符。
⑹质谱测得本品的分子离子峰M+1，其质荷比m/z为183，与甘露醇的分子量（分子式C6H14O6，分子量182）一致，与甘露醇样品的结构相符。
⑺将甘露醇样品同时进行紫外光谱、红外光谱、核磁共振波谱、质谱分析、X射线衍射分析及热分析，结果显示样品的结构与甘露醇结构相符。

委 托 协 议
甲方：山东***药业有限公司
乙方：兵器工业非金属材料理化检测中心

甲方委托乙方就甘露醇进行结构确证试验并达成以下协议。
甲方提供足够数量的样品，乙方提供以下项目检测试验：
元素分析；
紫外光谱分析；
红外光谱分析；
核磁共振分析；
质谱分析；
X射线衍射分析；
差热及热重分析。
乙方向甲方提供以上内容完整的图谱及实验数据。乙方对甲方的试验内容及数据应严格保密，未经甲方书面同意不得向第三方透露。
本协议有效期为二00五年二月一日至二00五年三月三十一日。

甲方：山东***药业有限公司 乙方：兵器工业非金属材料理化
检测中心

签字盖章： 签字盖章：
年 月 日 年 月 日

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