除菌过滤工艺验证策略.doc

滤材、过滤器选型
除菌过滤工艺验证策略与再验证
再验证
经过验证被用于特定除菌过滤工艺的除菌过滤器，在工艺条件发生改变或者过滤器制造方面发生改变是，需要进行再验证。包括但不限于下列情况，需要考虑进行再验证：
l 单位面积的流速高于已验证的参数
l 过滤压差超过被验证参数
l 暴露时间超过被验证的时间
l 过滤面积不变的情况下提高过滤量
l 过滤温度改变
l 产品配方改变，包括浓度、pH或电导率
l 过滤器的灭菌程序改变
l 改变过滤器的制造商，或者过滤器的生产者改变了过滤膜的配方以及过滤器的其它结构性材料
【实例分析】
A. 修改的方法
如前述，如果在工艺条件下挑战微生物不能存活或者生存力受到影响，在用产品预处理过滤器后，采用修改的方法进行测试。下面给出一些方法修改的例子，实际应用时，可采用一种或几种进行组合测试。
应当认识到，如果有良好的科学解释，其它方式的方法修改也可能是适合的。
（1）减少暴露时间
有些情况下，挑战微生物不一定在整个工艺时间下都能在产品中存活。在挑战实验预处理阶段接近尾声的时候直接用足够浓度（见前文实施指导“D. 培养基维护和挑战微生物制备”）的挑战微生物接种产品。有一点是很重要的，将一个0.45微米阳性对照过滤器与测试过滤器平行运行，以确证微生物的尺寸和存活。
另一个办法是将挑战微生物在静态状态下置于挑战流体中。将挑战微生物以工艺温度暴露在产品中，并在模拟工艺条件下用产品循环对过滤器进行预处理后，就可在最差条件（压差和流速）下挑战过滤器了。挑战时间应被缩减，以确保在实际暴露、挑战和回收期间挑战微生物存活。0.45微米阳性对照过滤器与测试过滤器平行运行，以确认微生物的存活。
（2）修改测试方法的参数
在挑战有杀菌能力的产品时，测试方法参数修改是有用的，因为这种方法可以只改变一个工艺变量，例如温度。使用这种方式以维持产品和细菌的相互反应。这种方法不能解决所有可能的工艺/产品/挑战微生物的交互反应，但是可以实现标准挑战微生物的运用。在实际工艺条件下使用产品对过滤器进行预处理后，工艺中的杀菌部分如温度被修改了，细菌挑战可以进行了。应使用足够浓度的细菌挑战微生物直接接种产品。（见前文实施指导“D. 培养基维护和挑战微生物制备”）
（3）修改测试产品配方
另一种修改的方法在用产品预处理滤芯后，将产品的杀菌成分移除。这也许很容易，调节pH值至产品非杀菌的范围，去除或者稀释杀菌成分或使用替代流体。
经修改的配方应在实际产品工艺条件下使用足够浓度的挑战微生物直接接种（见前文实施指导“D.培养基维护和挑战微生物制备”）杀菌成分应被去除到不干扰挑战微生物的水平。
（4）使用有耐受性的自身微生物污染分离物
尽管可能在正常工艺条件下，某种产品对缺陷假单胞菌有杀灭能力，但其它微生物可能在相同条件下可以生存。另外一种对杀菌性产品进行细菌挑战的方法是使用“自身污染微生物”。自身污染微生物由分离自制造环境或产品制剂的细菌组成，被证实可在实际生产工艺条件下在产品制剂中存活。
自有的细菌在产品中应繁殖或保持均衡，以确保他们的生物形态和生理学特性在工艺分离物中有代表性。应使用最小的或最坏情况下的自身微生物。关于挑战微生物制备与使用的更多讨论请见前文实施指导 “D.培养基维护和挑战微生物制备”。
如果较小的微生物确认在产品中存在，那么这些微生物或某一合适的模式微生物可被用来挑战测试过滤器。例如使用在恶劣条件下生长的皮氏罗尔斯顿氏菌（Ralstonia pickettii）。通常，这些挑战是在缺陷假单胞菌挑战之外进行的。
B. 气体过滤器的液体微生物挑战试验
挑战微生物和挑战水平，与液体除菌级过滤器相同。但是，针对气体过滤器进行液体细菌挑战实验，需要注意以下几点：
l 挑战前完整性检测。可以使用的方法包括起泡点、扩散/前进流（压力保持/衰减）和水侵入。方法参见14.6.2完整性检测。
l 因为气体过滤器的疏水特性，在进行水基的微生物挑战前，需要用低表面张力的液体进行引导润湿（例如，25％体积比的叔丁醇水溶液或者60％异丙醇水溶液）。
l 挑战之前，去除醇溶液，以防止影响挑战试验。
l 挑战实验，同液体过滤器。参照前文实施指导。
l 挑战后完整性检测。 确证过滤器没有在挑战过程中损坏。此时，与挑战前不同，不再可以选用水侵入方法，或者直接用水进行其它检测。因为仍然存活或者不再存活的污染微生物都对过滤器的疏水性有影响，另外，任何仍然润湿的过滤器材质都可能影响实验结果。可以选择挑战前完整性实验所使用的溶液，进行起泡点或者扩散/前进流测试。
l 滤出液分析，同液体过滤器。参照前文实施指导。
l 结果判读。对除菌级的气体过滤器，尚没有统一的标准。但是，现在市场上获得的除菌级气体过滤器，有的已经可以达到液体除菌级过滤器的标准。即大于107/cm2有效过滤面积的挑战微生物截留（通常为B. diminuta）。
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