鞘氨醇激酶1（Sphk1）抑制剂在肝纤维化大鼠模型中的作用机制.pdf

目 的 探讨鞘氨醇激酶抑制剂在不同肝纤维化大鼠模型中的治疗作用。方 法 只 大鼠随机分为 组：正常组（只）、组（给予高脂乳剂，只）、组（诱导，只）、组（联合，只），经病理及实验室检查证实造模成功后，分别给予 抑制剂 ，同组别以生理盐水作为对照，分别在第、天取肝组织进行 染色，比较肝纤维化面积占比、透射电镜下观察自噬小体形成情况、检测肝纤维化及自噬相关标志物 表达水平。计量资料多组间比较采用单因素方差分析，进一步两两比较采用 检验。相关性分析采用 相关分析。结 果 与正常组（）相比，组（）和 组（）肝纤维化面积占比均升高（值均 ）。干预第 天可显著降低 组及 组纤维化病变面积（值均 ）。与正常组相比，组、组和 组的 表达水平均明显降低（值均 ），组的 平滑肌肌动蛋白、转化生长因子 、型胶原 表达水平均明显升高（值均 ），干预后各指标水平无明显变化（值均 ）。、的表达水平与肝纤维化病变面积均呈负相关（分别为 、，值均 ）；的表达水平与、的 表达均呈正相关（分别为 、，值均 ）。电镜示：组肝组织轻微水肿，细胞器丰富，轻度肿胀，以粗面内质网扩张为主。该视野可见 个自噬溶酶体结构。在 干预第 天后，未见典型自噬结构。组肝组织轻度水肿，结构不清晰，粗面内质网数量丰富，明显扩张，表面附着核糖体颗粒较少。该视野可见 个自噬溶酶体结构。在 干预第 天后，该视野未见典型自噬结构。结 论 对自噬有显著抑制作用，并同时伴有纤维化面积的减少。提示靶向，可影响到肝脏的自噬水平，并进而缓解两种肝纤维化模型的纤维化状态。关 键 词：肝纤维化；鞘氨醇激酶；自噬；模型，动物基 金 项 目：国家自然科学基金（），（，；，；，）：，（：）：（）（），临 床 肝 胆 病 杂 志 第卷 第期年月 ，（），（），（），；，；，（，），（），（），（），（），（，），（，），（），：；，：（）全 球 有亿 人 受 到 多 种 形 式 慢 性 肝 病 的 影响。肝 纤 维 化 被 认 为 是 肝 脏 结 构 恶 化 的 节 点。近年 来，由 于 肝 炎、非 酒 精 性 脂 肪 性 肝 炎 等 所 致 肝 硬 化的 发 病 率 及 其 相 关 病 死 率 急 剧 增 加。不 同 病 因 所致 肝 硬 化 潜 在 的 发 病 机 制 和 在 疾 病 进 展、治 疗 效 应 上的 差 别 是 未 知 的。迫 切 需 求 探 索 可 减 轻 肝 纤 维 化 的新 细 胞 与 分 子 途 径。鞘 氨 醇 激 酶（）蛋 白 是 一 个 激 酶 家 族，负 责 鞘氨 醇 的 磷 酸 化 和 鞘 氨 醇 磷 酸（）的 产 生，调 节不 同 的 生 物 事 件，如 细 胞 增 殖、凋 亡、迁 移 和 血 管 生成。是 一 种 具 有 广 泛 生 物 活 性 的 磷 脂 酶，由催 化 而 来。所 产 生 鞘 氨 醇 磷 脂，已被 证 明 可 调 节 肥 胖 人 类 和 小 鼠 的 肝 脏 脂 肪 含 量、脂 肪组 织 炎 症 及 胰 岛 素 抵 抗。有 报 道抑 制 剂可 调 节 巨 噬 细 胞 分 泌 肿 瘤 坏 死 因 子，可 改 善 小 鼠 暴发 性 肝 衰 竭。缺 乏 可 显 著 提 高 小 鼠 对 对 乙 酰氨 基 酚 诱 导 肝 损 伤 的 耐 受 能 力。在 高 饱 和脂 肪 喂 养 诱 导 的 小 鼠 非 酒 精 性 脂 肪 性 肝 炎 模 型 中 介导 肝 脏 炎 症，并 启 动 肝 细 胞 促 炎 信 号 传 导。可 保 护 肝 脏 免 受 胰 岛 素 抵 抗，研 究 还 表明，对 代 谢 功 能 障 碍 的 其 他 参 数，包 括 血 浆 游 离 脂 肪酸，没 有 保 护 作 用。相 反，另 有 研 究证 实，在非 酒 精 性 脂 肪 性 肝 病 肝 脏 缺 血 再 灌 注 损 伤（）的 小鼠 模 型 中 敲 低可 引 起 脂 毒 性 的 神 经 酰 胺 生 成增 加，加 重 肝 细 胞 氧 化 应 激，引 起 细 胞 凋 亡 与 坏 死，进而 加 重 肝 脏 损 伤。这 表 明 在 肥 胖 背 景 下，在 代 谢 异 常 中 的 作 用 是 多 样 化 的。新 近 研 究发 现，能 够 通 过 诱 导 自 噬 参 与 多 种 疾 病 的 发 生 发 展。在 四 氯 化 碳（）诱 导 的 小 鼠 肝 纤 维 化 模 型 中，检 测到 肝 组 织 中 的 微 管 相 关 蛋 白轻 链 表 达 增 加，王 燕，等鞘 氨 醇 激 酶（）抑 制 剂 在 肝 纤 维 化 大 鼠 模 型 中 的 作 用 机 制说 明 自 噬 水 平 在 肝 纤 维 化 中 明 显 增 加。饥 饿 状 态 下，激 活 自 噬，抑 制 了 细 胞 的 死 亡，保 证 了细 胞 存 活。在 本 研 究 中，设 计 了 肝 纤 维 化 和 脂 肪 肝 肝 纤 维 化两 种 大 鼠 模 型，两 者 造 模 时 间 均 为周。运 用抑 制 剂 干 预，比 较 两 种 不 同 纤 维 化 模 型 对抑 制 剂 反 应 是 否 相 同，探 讨在 不 同 病 因所 致 肝 纤 维 化 中 的 作 用 及 机 制。材 料 与 方 法 肝 组 织 与 动 物 大 鼠 购 自 新 疆 医 科 大 学 实 验动 物 中 心 实 验 动 物 生 产 许 可 证 号：（新），实 验 动 物 使 用 许 可 证 号：（新），雄 性，年 龄 周 龄，无 特 殊 病 原 级，平 均 体 质 量 。大 鼠 共只，随 机 分 为组：正 常 组、高 脂 乳 剂 组（，）、四 氯 化 碳 组（）、高 脂 乳 剂四 氯 化 碳 组（），其 中组只、组只、组只、组只。正 常 组 每 天 灌 胃 给 水每 周 三、日 皮 下 注 射 生 理盐 水；组 每 天 灌 胃 高 脂 乳 剂；组 每周 三、日 按 皮 下 注 射；组 每天 按 灌 胃 高 脂 乳 剂每 周 三、日 按 皮 下 注 射，连 续周。分 别 于 造 模 第、周各 组 处 死 指 定 数 量 大 鼠。造 模周 结 束 后 二 次 分组，各 组 分 别 给 予（抑 制 剂）及 生 理 盐水，按 照 剂 量 、浓 度 、体 积 腹 腔 注 射 及 等 体 积 生 理 盐 水。各组 分 别 于 注 射 后 第、天（、）处 死 动物，取 肝 组 织，部 分 置 于 戊 二 醛 中 固 定，进 行 电镜 观 察；部 分 肝 组 织 置 于多 聚 甲 醛 中 固 定，用 于 光镜 观 察、染 色。染 色常 规 烤 片 及 脱 蜡 处 理，酒 精 水 化 后 进行 染 色，苏 木 精 复 染，盐 酸 酒 精 分 化 后 置于 自 来 水 中 终 止 分 化。脱 水 后 伊 红 复 染：伊 红乙 醇 液 对 切 片 进 行 对 比 染 色，染 色 后 放 入乙 醇 中 清 洗，清 洗 掉 多 余 的 红 色 后 放 入 无 水 乙 醇 中 浸泡。二 甲 苯、各 进 行 透 明。中 性 树胶 封 片。染 色 多 聚 甲 醛 中 固 定 的 组 织标 本 经 修 剪、脱 水、包 埋、切 片、染 色、封 片，最 后 镜 检合 格 的 样 片。使 用全 景 切 片 扫 描 仪 将组 织 切 片 上 机 扫 描 成 像，形 成 文 件 夹，该 文 件 夹 包 含了 组 织 切 片 上 所 有 的 组 织 信 息。文 件 夹 用 软 件 打 开 后 可 以 倍 任 意 倍 数 放 大 后 进 行观 察。使 用 分 析 软 件 中 模 块 分 别 定 量 每 张切 片 的 目 的 区 域，测 量 出 组 织 面 积、阳 性 面 积 并 得 出阳 性 面 积 占 比。透 射 电 镜 下 观 察 自 噬 体新 鲜 组 织 确 定 取 材 部位，组 织 体 积 一 般 不 超 过 ，迅 速 投入 电 镜 固 定 液 固 定 。磷 酸 缓冲 液漂 洗次，每 次。后 固 定：锇 酸 磷 酸 缓 冲 液室 温（）固 定。磷 酸 缓 冲 液漂 洗次，每 次。脱 水：组 织 依 次 入 酒 精 丙 酮 丙 酮 上 行 脱水，每 次。渗 透：丙 酮?包 埋 剂，；丙 酮 包 埋 剂，渗 透 过 夜；纯包 埋 剂 ，将 纯包 埋 剂 倒 入 包 埋 板，将 样 品 插 入 包 埋板 后 烤 箱 过 夜。包 埋：烤 箱 聚 合。切片：超 薄 切 片 机 切 片 超 薄 切 片。染 色：铀铅 双 染 色（醋 酸 铀 饱 和 酒 精 溶 液，枸 橼 酸 铅，各 染色），切 片 室 温 干 燥 过 夜。透 射 电 子 显 微 镜 下观 察，采 集 图 像 分 析。检 测表 达 水 平采 用 （）（）和 特 异 性 引 物 进 行 扩 增，扩 增 条 件 如 下：预 变 性 ，变 性 ，退 火 延 伸 ，扩 增个，熔 解 曲 线 采 集 ，。采 用方 法 测 定 基 因 相 对 表 达 量，并 针对进 行 归 一 化 处 理，引 物 序 列 见 表。实 验 试 剂高 脂 乳 剂（猪 油、胆 固醇、丙 基 硫 氧 嘧 啶、吐 温 、猪 胆 酸 盐、加 蒸 馏 水 至 ）、胆 固 醇（批号：，上 海 蓝 季 生 物 科 技 发 展 有 限 公 司）、丙 基硫 氧 嘧 啶（批 号：，上 海 蓝 季 生 物 科 技 发 展 有限 公 司）、吐 温（批 号：，天 津 市 北 联 精 细 化 学品 开 发 有 限 公 司）、橄 榄 油 批 号：，嘉 里粮 油（天 津）有 限 公 司 、中 性 福 尔 马 林 固 定 液（批 号：，安 徽 雷 根 生 物 技 术 有 限 公司）、戊 二 醛 固 定 液（批 号：，安 徽 雷 根 生物 技 术 有 限 公 司），（，批 号：，美 国公 司）、临 床 肝 胆 病 杂 志 第卷 第期年月 ，表各 基 因引 物 序 列 引 物 名 称引 物 序 列产 物 长 度（）注：，型 胶 原；，纤 维 连 接 蛋 白；，转 化生 长 因 子。（批 号：，北 京 索 莱 宝 科 技 有 限 公 司）。荧 光定 量实 验 试 剂：（批 号：，）；（批 号：，）统 计 学 方 法采 用 软 件 对 数 据 进行 分 析。计 量 资 料 以 表 示，多 组 间 比 较 采 用 单 因素 方 差 分 析，进 一 步 两 两 比 较 采 用检 验。相 关 性分 析 采 用相 关 分 析。为 差 异 有 统计 学 意 义。结 果 各 组 动 物 造 模 后 肝 组 织 病 理 学 观 察图显示，正 常 组 肝 细 胞 索 排 列 有 序，肝 细 胞 未 见 变 性、坏死，肝 窦 未 见 淤 血。组 可 见 明 显 肝 细 胞 空 泡 变 性（）。组 可 见 肝 细 胞 空 泡 变 性（），间 质 结 缔 组 织 增 生，炎 症 细 胞 浸 润，符 合 肝 纤 维 化 表现；组 肝 细 胞 空 泡 变 性，假 小 叶 形 成，间 质炎 症 细 胞 浸 润，符 合 肝 硬 化 表 现。各 组 动 物 第、天 给 予 对 肝 纤 维化 面 积 占 比 的 影 响两 种 肝 纤 维 化 模 型 组 肝 纤 维 化面 积（组：，组：）均 较 正 常 组（）升 高（值 均）；各 组 经 干 预 第天，组（）、组（）肝 纤 维 化 面 积均 有 改 善（值 均 ）；在 干 预 第天 时 各 组 肝纤 维 化 面 积 较 第天 略 有 升 高，与 各 自 模 型 组 相 比差 异 无 统 计 学 意 义（值 均 ）。组 的 肝 纤维 化 面 积 在 干 预 前 后 无 明 显 变 化（值 均 ）（图）。如 图所 示，正 常 组 肝 组 织 经染 色，未 见 明显 的 胶 原 纤 维 增 生。组 肝 组 织 脂 肪 变 性 明 显，大量 的 肝 细 胞 胞 质 内 可 见 数 量 不 等 的 圆 形 空 泡。组、组 肝 小 叶 结 构 破 坏，广 泛 胶 原 纤 维 明 显增 生，染 色 呈 蓝 色；增 生 的 胶 原 纤 维 将 肝 细 胞 分 割 包 绕成 大 小 不 等 的 圆 形 或 椭 圆 形 的 肝 细 胞 团，广 泛 可 见 假 小叶 形 成；肝 组 织 脂 肪 变 性 明 显，大 量 的 肝 细 胞 胞 质 内 可见 数 量 不 等、体 积 大 小 不 一 的 圆 形 空 泡。组 给 予 干 预 第天，肝 小 叶 结 构 破坏，广 泛 胶 原 纤 维 明 显 增 生；增 生 的 胶 原 纤 维 将 肝 细胞 分 割 包 绕 成 大 小 不 等 的 圆 形 或 椭 圆 形 的 肝 细 胞 团，广 泛 可 见 假 小 叶 形 成。干 预 第天，可 见 几 处 胶 原 纤图各 组 动 物 造 模 后 肝 脏 病 理染 色（）（）王 燕，等鞘 氨 醇 激 酶（）抑 制 剂 在 肝 纤 维 化 大 鼠 模 型 中 的 作 用 机 制维 轻 度 增 生；较 多 的 血 管 之 间 胶 原 纤 维 相 互 延 伸、连接，形 成 纤 维 桥 接；肝 组 织 脂 肪 变 性 明 显，大 量 的 肝 细胞 胞 质 内 可 见 数 量 不 等、体 积 大 小 不 一 的 圆 形 空 泡。干 预 第天，组 织 边 缘 局 部 可 见 胶 原 纤 维 增 生；肝 组织 脂 肪 变 性 明 显，大 量 的 肝 细 胞 胞 质 内 可 见 数 量 不等、体 积 大 小 不 一 的 圆 形 空 泡，相 较 于 第天，肝 脏 病理 可 见 明 显 改 善。组 干 预 第天，肝 小 叶 结 构 破 坏，广 泛 胶 原 纤 维 明 显 增 生；增 生 的 胶 原 纤 维 将 肝 细 胞分 割 包 绕 成 大 小 不 等 的 圆 形 或 椭 圆 形 的 肝 细 胞 团，广 泛 可 见 假 小 叶 形 成；肝 组 织 脂 肪 变 性 明 显，大 量的 肝 细 胞 胞 质 内 可 见 数 量 不 等、体 积 大 小 不 一 的圆 形 空 泡。干 预 第、天，肝 脏 病 理 未 见 明 显改 善。图各 组 予 干 预 不 同 时 间 点 纤 维 化 面 积 比 较 注：，给 予 生 理 盐 水；黑 色 箭 头，圆 形 空 泡；蓝 色 箭 头，纤 维 桥 接；绿 色 箭 头，假 小 叶。图 抑 制 剂 对 各 组 动 物 肝 纤 维 化 程 度 的 影 响（染 色，）（，）临 床 肝 胆 病 杂 志 第卷 第期年月 ，对及 肝 纤 维 化 相 关 基 因 表 达的 影 响 结 果 显 示，与 正 常 组 相 比，组、组 和 组 的表 达 水 平均 明 显 降 低（值 均 ）。经 干 预天后，组 与组表 达 水 平 仍 低 于 正 常 组（值 均）。与 正 常 组 相 比，组平 滑 肌肌 动 蛋 白（）表 达 水 平 升 高（），干 预后 其 表 达 水 平 仍 高 于 正 常 组（）。表 达 水 平 随 着 纤 维 化 程 度 加 重 而 逐 步 增 高，其 中 组 表 达 水 平 最 高，与 正 常 组 相 比 差 异 有统 计 学 意 义（）。干 预 前 后 表 达 水 平无 明 显 变 化（）。表 达 水 平 随 着 纤 维化 程 度 加 重 而 逐 步 增 高，组、组 与 正常 组 相 比 差 异 均 有 统 计 学 意 义（值 均 ），干预 前 后 其 表 达 水 平 无 明 显 变 化。表 达 水 平 随 着纤 维 化 程 度 加 重 而 逐 步 增 高（值 均 ），经 干 预 后，个 纤 维 化 组 表 达 水 平 仍 低 于 正 常组（）（图）。图 及 纤 维 化 标 志 物 相 关 基 因 表 达 自 噬 相 关 基 因 表 达 与 肝 纤 维 化 面 积 的 相 关 性 分析如 图所 示，、的 表 达 与阳 性 面 积 均 呈 负 相 关（值 均 ）。的表 达 与面 积 无 相 关 性（）。表达 水 平 与、的表 达均 呈 正 相 关（值 均）。图自 噬 相 关 基 因 表 达 与面 积 及表 达 量相 关 性 抑 制 剂 对 纤 维 化 肝 组 织 自 噬 结 构的 影 响电 镜 下 观 察 正 常 组 可 见 少 量 脂 滴 微 自 噬 结 构，未 见 典 型 自 噬 结 构。组 脂 滴 局 部 分 布，少 量 轻 度融 合，脂 滴 微 自 噬 结 构 少 量 可 见。初 级 溶 酶 体 局 部 分布，未 见 典 型 自 噬 结 构。正 常 组 与组 给 予 后 无 明 显 变 化（视 野 无 或 可 见个 自 噬 溶 酶 体）。组 肝 组 织 轻 微 水 肿，膜 完 整、结 构 清 晰，胞 内 基 质 电 子 密度 均 匀，细 胞 器 丰 富，均 匀 分 布，轻 度 肿 胀，以 粗 面 内 质网 扩 张 为 主。该 视 野 可 见个 自 噬 溶 酶 体 结 构。在 给王 燕，等鞘 氨 醇 激 酶（）抑 制 剂 在 肝 纤 维 化 大 鼠 模 型 中 的 作 用 机 制予 第天 后，未 见 典 型 自 噬 结 构。组 肝 组 织 轻 度 水 肿，膜 完 整、结 构 不 清 晰，粗 面 内 质 网数 量 丰 富，明 显 扩 张，表 面 附 着 核 糖 体 颗 粒 较 少。脂滴 数 量 较 少，局 部 融 合、体 积 增 大。该 视 野 可 见个自 噬 溶 酶 体 结 构。在 给 予 第天 后，该 视 野未 见 典 型 自 噬 结 构（图）。讨 论已 有 证 据 表 明，信 号 在 小 鼠 肺 纤 维 化的 病 理 生 物 学 过 程 中 具 有 重 要 作 用，但 其 在 肝 纤维 化 中 的 具 体 分 子 机 制 尚 不 清 楚，阻 断的 活 化是 否 对 肝 纤 维 化 具 有 保 护 作 用。在 本 研 究 中，使 用 两种 肝 纤 维 化 模 型 来 评 估抑 制 剂 的 保 护 作 用。分 别 用和 高 脂 乳 剂 联 合造 模，在 暴 露 于 两种 不 同 的 造 模 方 式 后，的 抑 制 作 用 显 著 地 减 少了 肝 纤 维 化。但 这 种 对 肝 纤 维 化 的 保 护 作 用，随 着 肝纤 维 化 病 变 程 度 的 加 重，不 再 显 现。靶 向 药 物 的 设 计 和 开 发 已 成 为 国 内 外 的研 究 热 点。基 于在 炎 性 免 疫 相 关 疾 病 和 肿 瘤病 理 中 的 过 度 表 达，大 多 数 研 究 集 中 在选 择 性抑 制 剂 的 开 发 上。是 目 前 应 用 最 广 泛 的抑 制 剂，参 与 不 同 的 细 胞 功 能 以 改 善 疾 病。既往 一 些 研 究 中，表 明 可 以 减 少 肺 上 皮细 胞 线 粒 体损 伤、募 集 单 核 细 胞、降 低 活 性 氧 的产 生，以 改 善 肺 纤 维 化 和 肺 损 伤。对 乳 腺 癌 和 炎 症 性肠 病，包 括 胃 肠 道 肿 瘤 的 研 究 表 明，减少 肿 瘤 微 环 境 中 各 种 免 疫 抑 制 因 子 的 表 达，以 克 服 对免 疫 检 查 点 抑 制 剂 的 耐 药 性。本 研 究 中，造 模周 结 束 后 肝 脏 病 理 结 果 显 示造 模 成 功，脂 肪 肝 肝 纤 维 化 模 型 的 纤 维 化 程 度 明 显 重于组，达 到 肝 硬 化 病 理 标 准。第周 二 次 分 组后 各 疾 病 阶 段 分 别 给 予 生 理 盐 水 或 ，共 干 预天。干 预 第天 时，组、组 纤 维 化面 积 均 较 模 型 组 有 改 善。在 干 预 第天 时，组 纤 维化 面 积 较 第天 升 高，与 模 型 组 相 比 无 差 异。染 色 显 示，对组 病 理 改 善 程 度 更 佳。组 由 于 纤 维 化 程 度 更 重，在 干 预 前 后 病 理未 见 明 显 差 异（图），提 示 在 肝 纤 维 化 早 期有 一 定 治 疗 作 用，但 随 着 疾 病 程 度 加 重，治 疗效 力 逐 渐 减 弱。运 用 同 时 检 测 第、天及 、等 纤 维 化 相 关 标 志 物的 表 达 水 平，模 型 组 中随 着 纤 维 化 程 度 加 重，表 达 水 平 逐 步 降 低；、等 表 达 水 平 随着 纤 维 化 程 度 加 重，表 达 水 平 逐 步 升 高，干 预 后，上 述指 标 未 发 生 显 著 变 化。表 明 在 肝 纤 维 化、肝 硬 化 进 程中，由主 导 的 信 号 处 于 抑 制 状 态。有 研 究表 明，的 活 力 和 肝 血 窦 的 微 循 环 状态 密 切 相 关，其 活 力 增 强 时，肝 窦 微 循 环 明 显 改 善。其 主 要 产 物可 不 同 程 度 保 护 血 管 内 皮 细 胞、改 善微 循 环、减 少 白 细 胞 的 黏 附 以 及 抑 制 炎 症 诱 导 的 血 管通 透 性 增 加 等 病 理 学 改 变。年 开 展 的 一 项 研究表 明，脂 肪 细 胞 特 异 性 缺 失导 致 糖 耐 量增 加、脂 肪 细 胞 肥 大 和 脂 解 受 损，这 意 味 着在脂 肪 细 胞 功 能 和 维 持 器 官 整 体 代 谢 稳 态 中 具 有 特 定的 作 用。此 外，在 不 同 类 型 的 细 胞 中，可 能 发挥 截 然 相 反 的 作 用。在 小 鼠 成 纤 维 细 胞、上 皮 细 胞 中特 异 性 敲 除基 因，小 鼠 的 肺 纤 维 化 程 度 明 显 缓解，胶 原 沉 积 量 明 显 降 低，纤 维 化 相 关 指 标、图电 镜 下 观 察 对 各 组 的 影 响（）（）临 床 肝 胆 病 杂 志 第卷 第期年月 ，等 蛋 白 水 平 明 显 降 低。表 明 成 纤 维 细 胞 中 特 异 性 敲 除基 因 能 够 缓 解 肺 纤 维 化 进 程。在 上 皮 细 胞 中 特异 性 敲 除基 因，发 现 上 皮 细 胞 中基 因 缺失 后，小 鼠 的 肺 纤 维 化 程 度 减 轻，胶 原 沉 积 也 明 显 减 少。肺 泡 灌 洗 液 中 蛋 白 含 量 以 及 细 胞 数 量 也 明 显 减 少。纤维 化 相 关 指 标、表 达 水 平均 下 降。而 在 肺 内 皮 细 胞 中则 表 现 为 具 有 抗 炎和 抗 纤 维 化 的 作 用。这 也 表 明 信 号 在纤 维 化 形 成 中 可 能 具 有 双 重 作 用，在 上 述细 胞 类 型 中 的 不 同 作 用 机 制 尚 不 清 楚。鉴 于 既 往 文 献 对 自 噬 与 脂 肪 性 肝 病 及 纤维 化 关 系 相 关 性 的 探 讨，本 研 究 还 检 测 了种 疾 病 模型 中 自 噬 标 志 物 及 自 噬 小 体，发 现与、的 表 达 均 呈 正 相 关，且、的 表 达 与 肝 纤 维 化 面 积 呈 负 相 关。提 示可 能 调 控 细 胞 自 噬，并 影 响 了 肝 纤 维 化 的状 态。具 体 作 用 机 制 尚 需 功 能 验 证 实 验。蛋 白 是自 噬 的 主 要 参 与 者，构 成 最 重 要 的 分 子 平 台。是 自 噬 体 膜 上 的 标 志 性 蛋 白，这 些 蛋 白 正 确 连 接可 形 成 一 种 称 作 自 噬 体 的 细 胞 器。自 噬 体 可 像 垃 圾袋 一 样 移 除 有 毒 物 质。已 知对 脂 肪 细 胞 的 自 噬和 脂 肪 生 成 具 有 重 要 功 能。本 研 究 中，可 以 发 现随 着 肝 纤 维 化 程 度 的 加 重，表 达 水 平 逐 渐 降 低。与 之 变 化 趋 势 一 致。同 样，的 水 平 与 肝 纤维 化 面 积 呈 负 相 关。研 究表 明，基 因 敲 除 小鼠 血 清 脂 联 素 水 平 降 低，反 之，自 噬 活 跃 可 增 强循 环 中 具 有 生 物 活 性 脂 联 素 水 平，增 强 胰 岛 素 敏 感性，发 挥 非 降 解 作 用 调 节 代 谢 稳 态。等在年 时 即 发 现 自 噬 与 鞘 脂 代 谢 相 关，鞘 脂 从 头 合 成活 跃 可 诱 导 自 噬。同 时，自 噬 控 制 着 活 体 中 鞘 脂 的 水平，并 表 明 在 许 多 病 理 条 件 下，功 能 失 调 的 自 噬 可 能会 导 致 鞘 脂 稳 态 的 改 变。本 研 究 发 现 在 肝 纤 维 化 与脂 肪 肝 合 并 肝 纤 维 化 两 种 模 型 中，自 噬 活 动 均 明 显 加强，而 则 对 自 噬 有 显 著 抑 制 作 用。并 同 时 伴有 纤 维 化 面 积 的 减 少。提 示 靶 向可 影 响 到 肝脏 的 自 噬 水 平，并 进 而 缓 解 肝 纤 维 化 或 代 谢 相 关 脂 肪性 肝 病 合 并 肝 纤 维 化 的 状 态。同 时，本 研 究 提 示，无论 对 于 肝 纤 维 化 还 是 脂 肪 肝 合 并 肝 纤 维 化，在 疾 病 早期 阶 段，抑 制 剂 均 具 有 一 定 治 疗 作 用，而 如 果肝 纤 维 化 程 度 过 重，则 治 疗 效 应 减 弱，而 用 药 疗 程 的问 题 也 是 今 后 值 得 探 讨 的 一 个 方 向。伦 理 学 声 明：本 研 究 方 案 于年月日 经 由 新疆 医 科 大 学 实 验 动 物 伦 理 委 员 会 审 批，批 号：，符 合 实 验 室 动 物 管 理 与 使 用 准 则。利 益 冲 突 声 明：本 文 不 存 在 任 何 利 益 冲 突。作 者 贡 献 声 明：王 燕 负 责 课 题 设 计，资 料 分 析，撰 写 论文；马 丽 负 责 动 物 实 验；肖 雄、雷 冬 梅、赵 奉 茹、郭 力 源参 与 收 集 数 据，整 理 资 料；王 晓 忠 参 与 实 验 指 导。参 考 文 献：，：，（）：，：，（）：薛芮，范建高 代谢相关脂肪性肝病新定义的国际专家共识简介 临床肝胆病杂志，（）：，（）：，（）：，（）：，（）：，（）：，王 燕，等鞘 氨 醇 激 酶（）抑 制 剂 在 肝 纤 维 化 大 鼠 模 型 中 的 作 用 机 制 ，：，（）：，（）：，：，（）：，（）：，（）：，：，：，（）：金丽明，黄东胜，刘原兴，等 鞘氨醇激酶及 磷酸鞘氨醇信号参与大鼠肝窦微循环保护 中华实验外科杂志，（）：，（）：，（）：，（）：，（）：，（）：廖粤生，白莉莉 运动诱导细胞自噬在非酒精性脂肪性肝病防治中的作用 临床肝胆病杂志，（）：，（）：刘国菊，彭雷 自噬在肝纤维化中作用的研究进展 山东医药，（）：，（）：，（）：，（）：收 稿 日 期：；录 用 日 期：本 文 编 辑：王莹引 证 本 文：，（）：王燕，马丽，肖雄，等 鞘氨醇激酶（）抑制剂在肝纤维化大鼠模型中的作用机制 临床肝胆病杂志，（）：临 床 肝 胆 病 杂 志 第卷 第期年月 ，