植物组织培养试题-第6章.doc

第6章 《细胞培养》复习题及参考答案
一、填空：
1、一般平板培养要求细胞密度每毫升为1x103∽100x103 个。
★2、条件培养基是悬浮培养过一段时间组织或细胞的液体培养基。
★3、细胞悬浮培养主要应用于 植物有用物质的生产、诱发和筛选突变体、原生质体培养和细胞器分离、食品生产等。
4、由植物叶片分离单细胞的方法有机械法和酶解法。
★5、细胞悬浮培养方法：成批培养；连续培养
★6、连续培养的种类：(1)半连续培养；(2)连续培养
★7、连续培养的方法:（1）浊度恒定法;（2）化学恒定法
二、名词：
1、看护培养法(nurse culture)：是指用一块活跃生长的愈伤组织块来看护单个细胞，并使其生长和增殖的方法。
★2、平板培养法(plante culture)：是把单细胞悬浮液与融化的琼脂培养基均匀混合，平铺一薄层在培养基底上的培养方法。
★3、细胞悬浮培养（suspension culture）： 是指将单个游离细胞或小细胞团在液体培养基中进行培养增殖的技术。
4、初始植板密度（inital planting density）：单细胞固体平板培养时，细胞悬浮液接种到琼脂培养基上最初细胞密度。
5、临界密度(critical density)：单细胞培养时，初始植板密度低于某值培养细胞就不能进行分裂和发育成细胞团，则该值就是临界密度。（课件没有）
6、植物细胞培养（plant cell culture）：是指对植物器官或愈伤组织上分离出的单细胞（或小细胞团）进行离体培养，形成单细胞无性系或再生植株的技术。
7、条件培养基：曾悬浮培养过一段时间组织或细胞的液体培养基。
8、植板率：是指已形成细胞团的单细胞与接种总细胞数的百分数

三、问答题：
1、如何得到单细胞无性系？
在细胞培养中，常由分散性较好的愈伤组织或悬浮培养物来制备单细胞，也可以用机械法和酶解法从植物器官直接制备单细胞。
由分离的单细胞经看护培养法、微室培养法或平板培养法，即可得到单细胞无性系
★2、单细胞培养有哪些方法？各有何含义及特点
单细胞培养：看护培养；微室培养；平板培养
（1） 看护培养法：指用一块活跃生长的愈伤组织块来看护单个细胞，并使其生长和增殖的方法。
特点：优点：①简便易行。②效果好，易于成功。
缺点：①不能在显微镜下直接观察细胞的生长过程。
用途：诱导形成单细胞系。
（2）微室培养：即将细胞培养在很少量的培养基中。
特点：优点： 在培养过程中，可以连续进行显微观察一个细胞的生长、分裂和形成细胞团的全部过程
缺点：培养时间较短
用途:主要用来观察细胞生长、分裂、形成细胞团的过程。
（3）平板培养法：把单细胞悬浮液与融化的琼脂培养基均匀混合，平铺一薄层在培养基底上的培养方法。
特点：优点：①可以定点观察；②分离单细胞系容易；
缺点：培养细胞气体交换不畅。
用途:分离单细胞无性系，研究其生理、生化、遗传上的差异而设计的一种单细胞培养技术。广泛应用于细胞、原生质体及融合产物的培养。
（4）条件培养
★3、什么是植板率？小细胞团的计数方法有哪几种？
植板率是指已形成细胞团的单细胞与接种总细胞数的百分数。
小细胞团计数方法：①低倍显微镜直接计算；
②细胞团显影法
4、什么是细胞悬浮培养？简述成批培养和连续培养的的特点？
细胞悬浮培养：是使离体的植物细胞悬浮在液体培养基中进行的无菌培养。
（1）成批培养的特点：
①细胞生长在固定体积的培养基上，直至养分耗尽
②用搅拌的方法使细胞团和细胞均匀分布
③细胞数目呈现慢—快—慢—停止生长的变化，但必须更换新鲜培养基才能进行下一批培养
（2）连续培养的特点：
①由于不断加入新鲜培养基，保证了养分的充分供应，不会出现悬浮培养物发生营养不足的现象
②可在培养期间使细胞保持在对数生长期中。细胞增殖速度快
③适于大规模工业化生产
★5、影响单细胞培养的因子
ü 1、条件培养基：条件培养基可有利于单细胞的生长与分裂
ü 2、细胞密度(>临界密度)：临界密度：单细胞培养时，初始植板密度低于某值培养细胞就不能进行分裂和发育成细胞团，则该值就是临界密度。
初始植板密度应根据培养基的营养状况而改变，培养基越复杂则植板细胞的临界密度越低，反之则相反。一般要求每毫升在1000个细胞以上。
ü 3、生长激素：生长激素加1种细胞分裂素和几种氨基酸(如：丙氨酸、谷氨酸、半胱氨酸、谷氨酰胺)。临界密度只需25-30细胞/毫升。
ü 4、pH：偏酸。
ü 5、CO2：可诱导细胞分裂。
6、细胞悬浮培养主要应用
1）、 植物有用物质的生产：在植物组织培养研究中，发现培养细胞中含有各种特殊的代谢产物。
2）、诱发和筛选突变体：在细胞培养过程中会产生一些突变体，常采用不同培养基来进行选择，也就是把悬浮细胞培养于缺少某种营养物质或生长因子，或是添加某种抑制剂的培养基里，使突变细胞和正常细胞区别开来
3）、原生质体培养和细胞分离：利用细胞悬浮培养方法，对细胞原生质进行分离，在适宜的培养基上进行培养，使之生成完整植株，或对原生体的生理特性进行观察、研究。
4）、食品生产：通过对许多食用植物培养组织的细胞团生产的研究。
7、平板培养的基本技术
· （1）单细胞悬浮液的制备
· (2)悬浮细胞密度的调制
· （3）琼脂培养基配制:0.7 % 琼脂条件培养基。
· （4）平板制作
· （5) 培养