胶体金技术简介.ppt

.,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,胶体金技术简介,周军,BioDot中国,1,.,胶体金技术的起源,1971年,Faulk 和Taytor在做免疫金电镜实验时引入,胶体金：是一种,分散相颗粒在,1100nm,之间的,分散体系,，外观透明不浑浊，在普通显微镜下看不见；颜色为,红色,指示剂,胶体金复合物（conjugate）:与抗体连接,2,.,胶体金技术的发展,80年代：第一代产品，免疫渗滤法(Flow Through),90年代：第二代产品，免疫层析法（Lateral Flow）,女性妊娠,HCG,21世纪：快速诊断方法适应市场需要，胶体金技术进入快速发展期，成为IVD的热点（,传染病、毒品、食品安全、畜牧兽医,等领域）,3,.,两种技术的比较,4,.,免疫层析法技术优势:简单/现场/快速,1.打开包装取出试纸条,2.直接插入待测样品中,3.目测读出结果（3-10分钟内）,5,.,免疫层析法与常规诊断方法比较,优点,缺点,快速：全部检测过程仅需 3-10分钟,简便：不需其它任何仪器设备，操作简单，无需专业人员，携带方便，可随时随地进行。适合基层单位粗筛使用,廉价：单个测试条成本极低,可单人份检测：对标本既能成批检测，又可单份检测，可立刻拿到结果，不必等待,稳定性好：金标试剂稳定，可长期室温保存,检测标本种类多：既可用于测血清/血浆/全血，又可用于测尿或唾液,或处理后的组织等固体样品,定量问题,灵敏度问题（ng级）,固体样品处理,6,.,免疫层析法应用领域,类别,应用领域,检测的物质,人类医学,各级医院,血站,CDC,防疫站,诊断中心；家庭自检；商检系统；边检口岸；公安系统.,女性妊娠（hCG,LH等),传染病（乙肝五项、艾滋,、梅毒、流感等）,肿瘤标志物（AFP、粪便血红蛋白等）,心梗系列(肌钙蛋白、肌红蛋白、肌酸激酶）,毒品（吗啡,K粉,摇头丸,冰毒等）,农牧业,畜牧兽医站,商检系统,边检口岸,农牧类院系和研究所,传染病（禽流感、兽瘟疫等）,病毒（烟草花叶病毒、犬细小病毒等）,环境,环保监测部门,研究机构,有害物质超标,食品安全,食品安全检测中心,各监管部门,农兽药残留（磺胺类、瘦肉精等）、大肠杆菌、黄曲霉素,7,.,免疫层析法试纸条结构,测试线（,T,线）,质控线（,C,线）,胶体金垫,吸水滤纸,样品垫,NC,膜（硝酸纤维素膜）,层析方向,PVC底板,8,.,免疫层析法,原理视频,9,.,免疫层析法检测原理分类介绍（双抗体夹心法）,（以大分子HCG检测为例）,10,.,免疫层析法检测原理分类介绍（竞争法）,（以小分子吗啡检测为例）,11,.,免疫层析法检测原理分类介绍（间接法，标记proteinA）,（以HIV抗体检测为例）,12,.,免疫层析法检测原理分类介绍（双抗原夹心法，标记抗原）,同上，测抗体,13,.,技术流程,Assembled Cards,Test strips,cut,FINAL PRODUCT,Processes,Reagents,Materials,Desiccant,Adhesive Cards,Top Laminate,Absorbent,Pad,Membrane,Conjugate,Pad,Sample,Pad,Pouch,Housing,Packaging,Capture,Reagents,Detector,Reagent,Salts+,14,.,平台准备与技术分项,材料准备:样品垫、胶体金垫、NC膜、吸水纸,试剂准备:免疫试剂如抗原抗体等生物活性原料；生化试剂如氯金酸、柠檬酸三纳、氯化纳、Tween20、BSA等,仪器准备：常规仪器pH计、加热平台、冷冻离心机等；专用仪器喷膜仪、切条机等,胶体金标记技术,NC膜与溶液喷点,胶体金垫与溶液喷点,干燥方法,15,.,抗体 Antibody,来源差异:鼠抗,兔抗和羊抗,种类差异:单抗,多抗,腹水的处理:饱和硫酸铵沉淀法,特异性:亲和层析柱,溶解液:不含盐,例如PB,抗原抗体生物原料,优质的原料是优质产品的保证,抗原 Antigen,天然抗原,重组抗原,合成抗原,偶联抗原物质:BSA,OVA等,16,.,胶体金标记技术,容器清洁或硅化处理,胶体金颗粒制备(负电),颜色与颗粒的关系.,最佳标记颗粒大小40nm,.,蛋白质最适用量测定:盐析法,17,.,NC膜与溶液喷点-NC膜,NC膜的性能,NC膜的选择,爬速对灵敏度的影响,底衬的作用,不同膜厂家的产品差异(Pall/Whatman/Millipore/Sartorius),18,.,NC膜与溶液喷点-溶液喷点,CT线溶液前处理:,1.过滤,0.2um孔径滤膜,2.离心1万转10分钟,喷点过程,头尾去除,喷点中的报废标志,CT线喷点工艺(BJQ3000喷头)与接触划线(FL1000喷头)工艺比较,19,.,胶体金垫与溶液喷点,胶体金垫,1.材料选择,2.糖的作用,3.缓冲溶液的作用,喷点法与浸泡法的比较(AJQ3000喷头),1.释放快慢,2.液体量不同，干燥快慢，边缘效应,3.生产方便性,20,.,样品垫,材料选择,各成分的作用,1.缓冲溶液的作用(PH),2.盐的作用,3.大分子蛋白BSAPVP,4.表面活性剂 Tween-20,TritonX-100,21,.,吸水纸,吸水效率,进口与国产纸的差异,22,.,粘性底板,原理作用,供应商的选择,对,NC,膜的影响,23,.,干燥方法,干燥方法的比较,1.冷冻干燥法 2.烘箱 3.烘房,温湿度的控制,1.温度对蛋白的影响,2.湿度的控制办法,24,.,溶液体系分析,各环节缓冲溶液的选择与统一,盐的作用,表面活性剂的作用,糖的作用,大分子蛋白的作用,其他作用物质,25,.,注意事项,试剂原料耗材的批号控制，确保来源可靠有保障,设置关键控制点，确保流程无差错,仪器定期维护校准,研发时即考虑一定生产量的工艺问题，避免上量后不匹配,均一性，稳定性,26,.,胶体金技术在中国的发展-回顾,1995年：国内基本空白，没有研发，1-2家生产单位仅是大包装分切,1997年：杭州艾康起步，依靠美国技术转让快速发展为国内第一品牌，2007年因专利纠纷被Inverness收购,1998年：美国BioDot公司第一台RR3000仪器进入中国，国内单位开始少量研发与生产,1999年：基因公司代理BioDot，开始大力推广胶体金技术,2000年：“第一届胶体金技术培训班”在北京生物制品研究所成功举办,2008年：BioDot中国办事处成立，全权负责中国区市场/销售/售后,2010年：星星之火已经燎原-国内已有约150多家单位从事胶体金技术的研发与生产，HCG产品全球市场的70-80%在中国生产,27,.,RR3000-中国第一台BioDot仪器(1998年),28,.,胶体金技术在中国的发展-机遇,中国具有行业优势：前端大量的生物学人才+科研，后端廉价的劳动力+生产,OTC、家庭自检市场保持稳定需求,食品安全、畜牧兽医、生物反恐、流行性传染病等领域需要现场快速检测，会有较快增长,临床医疗市场将向全自动仪器与简约化快速化检测这两级发展，基层社区服务中心、中西部地区对快速检测产品会有一定的需求,29,.,胶体金技术在中国的发展-挑战,关键材料NC膜均为进口,优质的上游原料（抗原抗体）依赖进口，仅少部分实现国产化，但质量不稳定,稳定的生产仪器及关键配件，大部分进口,专利：基本被国外公司垄断,30,.,胶体金技术发展展望(一),标记物的发展:乳胶微粒、荧光微粒(Merck)、顺磁微粒、量子点,31,.,胶体金技术发展展望(二),检测仪的发展：胶体金定量仪（ESE）、荧光定量仪(ESE，Biosite)；磁微粒检测仪（Magna Biosciences）,32,.,胶体金技术发展展望(三),新材料的使用：Whatman Fusion 5,材料不吸附或极低吸附蛋白,材料“四和一”，节约了60%的组装劳动力,检测线和质控线上的包被试剂，需先与乳胶微粒共价，或pH4时直接包被,Conjugate复合物需定量喷点,灵敏度比NC膜稍高，检测时间大大缩短（从5-10分钟缩短到1分钟）,33,.,胶体金技术发展展望(四),新层析模式：,Amic 4 Castchip,34,.,谢谢,!,联系方式:,周军 BioDot中国,手机:[phone],电邮:,james.zhou,内部交流，版权所有,35,.,