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总花色苷含量测定
总花色苷含量测定—分光光度法
1、综合国内外资料，主要有以下几种计算吸光值A 的方法［1］：
（1) 当叶绿素是该样品中主要存在的干扰色素时，需消除叶绿素吸收含量的影响;此时，计算公式为： A = (Amax — A620） - 0。1（A650 - A620)
（2） 含有其它干扰物质时花色苷总量的测定:
a) 直接法:在新鲜的植物提取物中,因为很少含有在花色苷的最大吸收区发生吸收的干扰物质，花色苷总量可以直接由可见区最大吸收波长处的吸光度来测定。
计算公式为： A = Amax
　 直接法吸收光谱测定：用××分光光度计于250 - 800nm 下全波长扫描，得到花色苷在0.1 % 盐酸—80 ％ 乙醇中的可见光区最大吸收波长，在此最大波长下测定各样品的吸光值A 。
b) pH 示差法：在加工或储藏过程中，会产生褐色降解物,这些降解物和花色苷具有相同的能量吸收范围。这类花色苷总量的测定，通常用pH示差法[8］ 。
计算公式为： A = （Amax - A700) pH1.0 — （Amax — A700) pH4。5
　 pH 示差法吸收光谱测定:先确定合适的稀释因子,使样品在λmax下的吸光度在分光光度计的线性范围内；然后制备两个样品稀释液,其中一个用氯化钾缓冲液(0。025M，pH1。0) 稀释，另一个用醋酸钠缓冲液(0.4M，pH4.5） 稀释,将稀释液平衡15min 后，用蒸馏水做空白,分别测定两种样品稀释液在λmax和700nm处的吸光值A。
2、花色苷总含量的测定［2]：通过波长扫描，确定××花色苷在可见区的最大吸收波长为λmax。利用花色苷的结构特性，当pH为1.0时在λmax处有最大吸收峰，而当pH为4.5时,花色苷转变为无色查尔酮形式,在λmax处无吸收峰，用示差法计算溶液中总花色苷含量。
计算公式为: C (mg/ g) = (A0 — A1） ×V ×n ×M / （ε×m ）
式中： A0 、A1 —分别为pH1。0、pH4。5时花色苷在λmax处的吸光值
V -提取液总体积（mL ）
n —稀释倍数
M —cy—3-glu （矢车菊— 3—葡萄糖苷)的相对分子质量（449。4）
ε-cy-3-glu的消光系数( 29600)
m —样品质量( g)

3、花色苷含量TAcy的计算公式为（以天竺葵色素-3—葡萄糖苷计）［3］ :
TAcy （mg/ hg） =(A ×433 ×10 ×V）÷(22 400 ×m）×100
　　 A = （OD500nm — OD700nm) pH1.0 - （OD500nm -OD700nm) pH4.5
式中: V — 提取液的总体积（mL)
m — 取样量(g）
22 400 -天竺葵色素-3—葡萄糖苷的摩尔消光系数
433 — 天竺葵色素—3-葡萄糖苷的摩尔分子量。
4、花色苷含量测定[4]
样品处理： 将各品种的干燥样品粉碎（40目）后,准确称取0。5 g用10 mL 65％的酸性乙醇提取24 h，提取3次，然后将3次提取液混合抽滤,真空旋转挥发回收乙醇，用蒸馏水定容到100 mL，摇匀，静止备用。
测定方法:含量测定用pH示差法，按照下面公式计算,测定3 次取其平均值。
C(mg/L ) = （OD ×M ×DF ×1000）/ α×1
式中： OD 为吸光度， DF为稀释倍数,M 为分子量，α=26900。

花色苷[5]:将提取液稀释合适倍数，用1cm 比色杯测其吸光值，参照Fuleki［6]的计算方法转换成总花色苷浓度，公式如下：
C/（mg/mL）=（A×MW × DF × 1000）/（ε×1)
式中:A为吸光值；MW 为分子量（以矢车菊素-3-葡萄糖苷为标准[7]，449。4)；
DF为稀释倍数;ε为消光系数，26900 L.cm—1。mg-1。

参考文献
[1］ 霍琳琳，苏平，吕英华， 分光光度法测定桑葚总花色苷含量的研究［J］. 酿酒, 2005 年7月，第32卷第4期.
［2] 李颖畅,孟宪军，张琦，于娜，蓝莓果主要物质含量及处理方式对其花色苷的影响［J]。 食品工业科技， Vol. 29， N o. 05， 2008。
［3］ 盛小娜,王璋， 不同预处理方式对速冻草莓花色苷含量的影响［J]. 冷饮与速冻食品工业， 2006年12月第12 卷第4期.
［4] 王振江，肖更生，廖森泰等,不同品种桑椹的抗氧化作用与其花色苷含量的相关性研究[J]。 蚕业科学，　2006，32(3)。
[5] 吕英华，苏平,那宇，李辉, 桑椹色素体外抗氧化能力研究[J］. 浙江大学学报（农业与生命科学版） 33(1）：102～107,200
［6] Fuleki T, Francis F J． Quantitative methods for anthocyanins． 1． Extraction and determine-ation of total anthocyanin in cranberries．D]．Food Sei．，1968。33:72-78
[7] Suh H J，Noh D 0，Kang C S，eta1．Thermal kinetics of color degradation of mulberry fruit extract D]．Nahrung Food．2003．47（2)：132-135
［8］ Ronald E1Wrolstad ， Steven J1Schwartz ， M Giusti1Handbook of Food Analytical Chemistry Water , Proteins , Enzymes ， lipids , and Carbohy2 drates[M］1Wiley US ，20051