胭脂红检验标准操作规程.doc

胭脂红检验操作规程
起草人

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年　月　日
执行日期
2012年10月01日
审核人

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年　月　日
颁发部门
质保部
批准人

日　期
年　月　日
分　发
部　门
质保部（）份　 质检部（）份
生产部（）份 物资部（）份
设备部（）份　 采供部（）份
销售部（）份　 行政部（）份
财务部（）份
变更记载：
修订号
执行日期
00
2012年10月01日
01

02

1. 目的：规范胭脂红检验操作，保证胭脂红的质量。
2. 适用范围：本公司所购进的药用辅料胭脂红。
3. 责任者：质检人员。
4. 正文：
【取样依据】取样操作规程（SOP-QA-00-005）。
【标准依据】GB4480.1-2001。
【性状】本品应为红色～深红色粉末或颗粒。
【鉴别】
1.
1.1 原理：本品易溶于水，性状为红色，溶解后，溶液显红色。
1.2 仪器与设备：分析天平、烧杯。
1.3 试剂与溶液：水。
1.4 方法：称取0.1g试样，溶于100ml水中，呈红色澄清溶液。
2.
2.1 原理：本品易溶于水，也易溶于硫酸溶液，颜色加深，呈紫红色，再加水还原为带黄光的红色。
2.1 仪器与设备：量筒、试管、滴管。
2.2 试剂与溶液：硫酸（1+100）、水。
2.3 方法：取鉴别（1）项下红色澄清溶液40ml，加入硫酸溶液10ml后，该溶液呈紫红色，取此液2～3滴，加入5ml水中，呈现带黄光的红色溶液。
3.
3.1 原理：本品具有共轭双键,在乙酸铵溶液中,在508nm±2nm 的波长处有最大吸光度。
3.2 仪器与设备：分光光度计
3.3 试剂与溶液：乙酸铵（1.5g/L）。
3.4 方法：称取0.1g试样，溶于乙酸铵溶液100ml中，取此溶液1ml加乙酸铵溶液至100ml，按ChP2010版（二部）《紫外-可见分光光度法》（附录Ⅳ A）测定，该溶液最大吸收波长应为508nm±2nm。
【检查】
干燥减量
1．原理：规定的条件下，将供试品干燥至恒重后，从减失的重量（主要是指水份，结晶水，亦包括其它挥发性物质）和取样量计算供试品的干燥失重的百分率
2．仪器与设备：称量瓶、恒温箱、分析天平、干燥器。
3．方法：取2g样品，在135±2℃恒温箱中烘至恒重。按ChP2010版（二部）《干燥失重测定法》（附录Ⅷ L）操作。
4．计算公式：干燥失重%=×100%
式中 W1为供试品的重量(g)
W2为称量瓶恒重的重量(g)
W3为(称量瓶+供试品)恒重的重量(g)。
5．限度：≤10.0%。
氯化物
1．原理：本品经活性炭吸附处理后，加入过量硝酸银滴定液与氯离子作用，剩余的硝酸银用硫氰酸铵滴定液回滴，同时作空白校正。
2．仪器与设备：锥形瓶、滴定管、刻度吸管。
3．试剂与溶液：活性炭、硝酸溶液（1→2））、硝酸银溶液（0.1mol/L）、硝基苯、硫酸铁铵试液（取硫酸铁铵14g，溶于水100ml,加硝酸10ml，贮于棕色瓶中）、硫氰酸铵标准滴定液（0.1mol/L）。
4．试验溶液的配制：取本品2g，精确至0.001g，加水200ml，搅拌均匀，放置30分钟（其间不停搅动），用干燥滤纸过滤，如滤液有色，则加2g活性炭不时搅动下放置1小时，再用干燥滤纸过滤，如仍有色则更换活性炭重新操作。
5．方法：取3.2.4．项下的试验溶液50ml，置于500ml锥形瓶中，加硝酸溶液2ml和硝酸银溶液10ml（氯化物多时要多加些）及硝基苯5ml，剧烈摇动到氯化银凝结，加入硫酸铁铵试液1ml，用硫氰酸铵标准滴定液（0.1mol/L）滴定至溶液呈砖红色即为终点，并保持1分钟，同时做空白试验。
6．计算公式：
式中：V为滴定样品消耗用硫氰酸铵标准滴定液的体积；（ml）；
V0为滴定空白溶液消耗用硫氰酸铵标准滴定液的体积；（ml）
C为硫氰酸铵标准滴定液的浓度；（mol/L）
M为样品的质量；（g）
0.0584为每1.00ml硫氰酸铵标准滴定液（0.1mol/L）相当的氯化钠质量；（g）
7．限度：本品含氯化物（以NaCl计）及硫酸盐（以Na2SO4计）总量≤8.0%。
8．允许差：二次平均测定结果之差不大于0.3%，取其算术平均值作为测定结果。
硫酸盐
1．原理：硫酸盐在盐酸酸性溶液中与氯化钡定量作用生成硫酸钡沉淀，反应式：Ba2++SO42-→BaSO4↓
2．仪器与设备：锥形瓶、滴管、滴定管、日光灯。
3．试剂与溶液：酚酞指示液、氢氧化钠溶液（0.2g/L）、盐酸溶液（1→100）、乙醇（95%）、四羟基苯醌二钠-氯化钾混合指示剂（1：1）、氯化钡标准滴定液（0.1mol/L）、玫瑰红酸钠指示液。
4．方法：吸取3.2.4．试验溶液25ml，置于250ml锥形瓶中，加酚酞指示液1滴，滴加氢氧化钠溶液（0.2g/L）然后滴加盐酸溶液（1+99）到粉红色消失，再加乙醇30ml和四羟基苯醌二钠-氯化钾混合指示剂0.4g，摇匀，溶解后不断摇动下以氯化钡标准滴定液（0.1mol/L）滴定到溶液呈玫瑰红色为终点。在滴定时要用灯光从侧面照射仔细观察，另取玫瑰红酸钠指示液（玫瑰红酸钠0.1g,溶于10ml水中，现配现用）作液外指示作比较，同时以相同方法作空白实验。
5．计算公式：
式中：V为滴定样品消耗用氯化钡标准滴定液的体积，ml；
V0为滴定空白溶液消耗用氯化钡标准滴定液的体积，ml；
C为氯化钡标准滴定液的浓度，mol/L；
m为样品的质量，g；
0.071为每1ml氯化钡标准滴定液（0.1mol/L）相当的以克表示的硫酸钠质量，g
3.3.6．限度：本品含氯化物（以NaCl计）及硫酸盐（以Na2SO4计）总量≤8.0%。
3.3.7．允许差：二次平均测定结果之差不大于0.1%，取其算术平均值作为测定结果。

3.4．副染料的含量测定
3.4.1．原理：根据纸层析法，将副染料与其它部分成份分开，再根据萃取原理，将副染料与剩余部分成份分开；副染料具有共轭双键，在丙酮与碳酸氢钠溶液中，在特定的波长处有最大吸收。
3.4.2．仪器与设备：分光光度计、层析滤纸、层析缸、微量进样器。
3.4.3．试剂与溶液：无水乙醇、正丁醇、丙酮溶液（1→2）、碳酸氢钠溶液（4g/L）、氮水（4→100）。
3.4.4．方法
3.4.4.1．试样的测定
3.4.4.1.1．试样滤纸的配制：称取本品1g，精确至0.01g，置于烧杯中，加入适量水溶解后，移入100ml容量瓶中，稀释至刻度，摇匀，用微量进样器吸取100μl，均匀点在离滤纸（1号中速，150mm×250mm）底边25mm的一条直线上，成一直线，使其溶液在滤纸上的宽度不超过5mm，长度为130mm，用吹风机吹干，将滤纸放入溶剂已饱和的层析缸中展开，滤纸底边浸入展开剂液面下10mm，待展开剂前沿上升至150mm或直到副染料分离满意为止，取出层析滤纸，用冷风机吹干。
3.4.4.1.2．试样空白滤纸的配制：同时用空白滤纸在相同的条件下展开（该空白滤纸必须和试验溶液展开用的滤纸在同一张600mm×600mm的滤纸上相邻的部位裁取）。
3.4.4.1.3．测定：将各个副染料和在空白滤纸上与各副染料相对应的部位的滤纸，按同样大小剪下，并剪成约5mm×15mm的细条，分别置于50ml的纳氏比色管中，准确加入丙酮溶液5ml，摇动3 min～5 min后，再准确加入碳酸氢钠溶液20ml充分摇动，将萃取液分别在3号玻璃砂芯漏斗中自然过滤，滤液必须澄清，无悬浮物，按ChP2010版（二部）《紫外-可见分光光度法》（附录Ⅳ A）操作，以丙酮溶液5ml和碳酸氢钠溶液20ml混合液作参比液，在各自副染料的最大吸收波长处，用50mm比色皿，在分光光度计上测定吸光度。
3.4.4.2．标准样的测定
3.4.4.2.1．标准样测定：准确吸取上述l%试样溶液2 ml，移入100ml容量瓶中，稀释至刻度，摇匀。用微量进样器吸取100μl均匀地点在离滤纸底边25mm的一条基线上，用冷风吹干，将滤纸放入层析缸中展开，待展开剂前沿线仅上升40mm，取出后吹干，剪下所有染料部分，萃取按3.4.4.1.3．操作，用10mm比色皿在最大吸收波长处测吸光度。
3.4.4.2.2．标准空白的配制及测定：用空白滤纸，在相同条件下展开，按3.4.4.2.1．同方法操作后测萃取液的吸光度。
3.4.5．计算公式： X＝[(A1-b1)……(An-bn)/5]/( AS - bS)×2×S
式中：A1…An：各副染料取液以50mm光径长度计算的吸光度；
b1…bn：各副染料对照空白萃取液以50mm光径长度计算的吸光式度；
AS：标准萃取液以10mm光径长度计算的吸光度；
bS：标准对照空白萃取液以10mm光径长度计算的吸光度；
5：折算成以10mm光径长度计算的比数；
2：以1%试样溶液作基准的标准萃取液的参比浓度；（%）
S：试料的总含量；（%）
3.4.6．限度：本品含副染料量应为：≤3.0%。
3.4.7．允许差：二次平行测定结果之差不大于0.2%，取其算术平均值作为测定结果。
3.5．砷盐
3.5.1．原理：利用金属锌与酸作用生成新生态的氢，与供试中微量砷盐反应生成具有挥发性的砷化氢，遇溴化汞试纸产生黄色至棕色的砷斑，与一定量标准砷溶液的生成的砷斑比较，判断供试品中盐的含量。
3.5.2．仪器与设备：圆底烧瓶、天平、刻度吸管、电炉、锥形瓶、砷斑装置
3.5.3．试剂与溶液：硝酸、硫酸溶液（1→2）、硝酸-高氯酸混合液（3：1）、碘化钾、氯化亚锡溶液（取400g氯化亚锡用盐酸溶解并稀释至1000ml）、砷标准溶液（含As0.001mg/mL）、乙酸铅棉花、溴化汞试纸。
3.5.4．方法
3.5.4.1．样品砷斑的制备：称取试样1g，精确至0.01g，置于圆底烧瓶中，加硝酸1.5ml和硫酸溶液5ml，用小火加热赶出二氧化氮气体，待溶液变成棕色，停止加热，放冷后加入硝酸-高氯酸混合液5ml，强火加热直至溶液呈透明无色或微黄色，如仍不透明，放冷后再补加硝酸-高氯酸混合液5ml，继续加热至溶液澄清无色或微黄色并产生白烟，停止加热，放冷后加水5ml加热至沸，除去残余的硝酸-高氯酸(必要时可再加水煮沸一次)，继续加热至发生白烟，保持10min，放冷后移入100ml锥形瓶中，用水30ml分次冼涤烧瓶，洗液一并倒入锥形瓶中，加盐酸4ml及氯化亚锡溶液5滴，摇匀，放置10分钟，加无砷金属锌粒2g，迅速将装有乙酸铅棉花及溴化汞试纸的玻璃管装上，在25～30℃暗处放置1小时，观察溴化汞试纸所显斑点颜色。
3.5.4.2．标准砷斑的制备：同时按3.5.4.1．方法做一空白试验，作为空白试验液，并在空白试液加入砷标准溶液1ml后，与样品砷斑的制备同时同样处理，即得。
3.5.4.3．结果：样品砷斑颜色不得深于标准砷斑颜色。
3.5.5．限量：≤0.0001%。
3.6．重金属
3.6.1．原理：供试品中的重金属与硫化钠溶液在实验条件下所显的颜色，与一定量的标准铅溶液在同样条件下所显的颜色比较，检查供试品中重金属的限量。
反应式：Pb2++S2-→PbS↓
3.6.2．仪器与设备：天平、纳氏比色管、坩埚、高温炉。
3.6.3．试剂与溶液：硫酸、盐酸液（1→4）、乙酸溶液（1→4）、氨水（1→3）、硫化钠溶液（100g/L）、酚酞试液、铅标准溶液（含Pb0.01mg/mL）。
3.6.4．方法
3.6.4.1．样品溶液的配制：称取胭脂红试样2.5g，精确至0.01g，置于用白金制的坩埚中，加少量硫酸润湿，缓慢灼烧，尽量在低温下使之几乎全部灰化，再加硫酸1ml，逐渐加热至硫酸蒸气不再发生，放入电炉中，在450℃～550℃灼烧至灰化，然后放冷，加盐酸3ml，摇匀，再加水7ml摇匀，用定量分析滤纸过滤，用盐酸溶液5ml及水5ml洗涤滤纸上残留物，洗液和滤液合并，加水配至50ml。再量取此溶液20ml，放入纳氏比色管中，加酚酞试液1滴，滴加氨水溶液至溶液呈红色，再加乙酸溶液2ml，必要时过滤，用水洗滤纸，加水配至50ml，作为样品溶液。
3.6.4.2．空白溶液的制备：按3.6.4.1．方法不加试样配制成空白溶液。
3.6.4.3．标准溶液的制备：量取空白溶液20 ml，放入纳氏比色管中，加铅标准溶液液1ml及酚酞试液1滴，其余同3.6.4.1．处理，作为标准溶液。
3.6.4.4．显色：在样品溶液与标准溶液中分别加硫化钠溶液2滴，摇匀，放置5分钟后，观察二者颜色。
3.6.5．限度：样品溶液颜色不得深于标准溶液颜色（≤0.001%）。
3.7．水不溶物
3.7.1．原理：根据溶解度的差异，滤过除去易溶性物质，再根据干燥后的残余量计其百分含量。
3.7.2．仪器与设备：天平、烧杯、4号砂芯坩埚。
3.7.3．试剂与溶液：水
3.7.4．方法：称取3g试样，精确至0.01g，置于500 ml烧杯中，加入50～60℃水250 ml使之溶解，用已在135℃±2℃烘至恒重的4号砂芯坩埚过滤，并用热水充分洗涤到洗涤液无色，在135℃±2℃恒温烘箱中烘至恒重。
3.7.5．计算公式：X=M2/M1 ×100%
式中：M2为干燥后水不溶物的质量（g）
M1为试料的质量（g）
3.7.6．限度：≤0.20%。
4．【含量测定】
4.1．原理：在碱性介质中，试样中偶氮基被三氯化钛定量还原分解，根据三氯化钛滴定液的消耗量，计算染料的百分含量。
4.2．仪器与设备：分析天平、量筒、容量瓶、移液管、锥形瓶、电炉、
4.3．试剂与溶液：柠檬酸三钠、二氧化碳、三氯化钛标准滴定液（0.1mol/L）。
4.4．方法：取本品5g，精确至0.0002g，溶于100ml新沸并冷却至室温的蒸馏水中，移入500ml容量瓶中，稀释至刻度，摇匀，准确吸取50ml，置与500ml锥形瓶中，加入柠檬酸三钠15g，水150ml，按图装好仪器，在液面下通入二氧化碳气流的同时，加热至沸腾，并用三氯化钛标准滴定液（0.1mol/L）滴定至无色为终点。(三氯化钛滴定液（0.1mol/L）的配制方法见附录)。

1锥形瓶（500ml） 2棕色滴定管（50ml） 3包黑纸的下口玻璃瓶 4盛10%碳酸铵和10%硫酸亚铁等量混合液的容器（5000ml） 5活塞 6空瓶 7装有水的洗气瓶
4.5 计算 X=(V×c×0.1579)/[m×0.1×(50/500)]×100
式中：X为胭脂红的质量百分数；
V为滴定时消耗的三氯化钛标准滴定液的体积；（ml）；
C为三氯化钛标准滴定液的；（mol/L）
m为试样的质量；（g）
0.1579为每1ml三氯化钛标准滴定液0.1mol/L相当的以克表示的胭脂红的质量；（g）
4.6．限度：本品含量应为：≥85%。
4.7．允许差：二次平均测定结果之差不大于1.0%，取其算术平均值作为测定结果。

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