马氏珠母贝CD-MPR基因序列特征及其在耐低温品系的选择分析.pdf

54卷南 方 农 业 学 报 1224马氏珠母贝CD-MPR基因序列特征及其在耐低温品系的选择分析韩书雅1，钟如卓1，伍灵君1，宋欣霖1，赖卓欣1，2，郑哲1，2，王庆恒1，2*（1广东海洋大学水产学院，广东湛江524088；2广东省珍珠科技创新中心/广东省海水养殖生物育种工程实验室/广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室，广东湛江524088）摘要：【目的】明确马氏珠母贝（Pinctada fucata martensii）阳离子依赖性甘露糖-6-磷酸受体（CD-MPR）基因（PmCD-MPR）多态性与其低温耐受能力的相关性，为马氏珠母贝耐低温品系的选育提供理论依据。【方法】采用RACE克隆PmCD-MPR基因序列全长，并运用实时荧光定量PCR检测PmCD-MPR基因在马氏珠母贝各组织及低温胁迫下的表达模式；基于马氏珠母贝耐低温选育系（R群体）和北部湾野生群体（W群体）的全基因组重测序数据筛选出PmCD-MPR基因外显子区的SNP位点，并通过遗传多态性分析、单倍型分析及频率计算获取与马氏珠母贝低温胁迫过程相关的SNP位点。【结果】PmCD-MPR基因序列全长902 bp，其开放阅读框（ORF）为792 bp，共编码263个氨基酸残基；PmCD-MPR基因编码蛋白分子量为30.22 kD，理论等电点（pI）为5.79，属于亲水性蛋白，在第18263位氨基酸处含有1个典型的甘露糖-6-磷酸受体（Man-6-P_recep）结构域。CD-MPR氨基酸序列在N端的相似性较低，在C端的相似性较高；基于CD-MPR氨基酸相似性构建的系统发育进化树显示，马氏珠母贝与长牡蛎、加利福尼亚海兔等软体动物聚为一支，与经典的动物学分类相吻合。PmCD-MPR基因在马氏珠母贝肝胰腺的相对表达量最高，显著高于在性腺、闭壳肌和外套膜中的相对表达量（P0.05，下同）；低温胁迫组马氏珠母贝鳃组织中的PmCD-MPR基因相对表达量随着胁迫时间的延长整体上呈先上升后下降的变化趋势。从PmCD-MPR基因外显子区筛选获得34个SNPs位点，且这34个SNPs位点构成5个单倍块和15种单倍型，其中GCC、TG、CCCTCT等3种单倍型在R群体中的分布频率显著高于W群体，即与马氏珠母贝耐低温性状显著相关。【结论】PmCD-MPR基因参与马氏珠母贝的低温响应过程，与耐低温性状显著相关的基因型及单倍型可作为马氏珠母贝耐低温品系辅助育种的候选分子标记。关键词：马氏珠母贝；PmCD-MPR基因；低温耐受；SNP位点；选择分析中图分类号：S968.316.1文献标志码：A文章编号：2095-1191（2023）04-1224-11收稿日期：2022-07-06基金项目：广东省自然科学基金项目（2020A151501691）；广东省现代农业产业技术体系（贝藻类产业创新团队）建设专项（2020KJ146）；广东省普通高校重点领域专项（2020ZDZX1045）通讯作者：王庆恒（1977-），https:/orcid.org/0000-0001-9148-6613，教授，主要从事海洋无脊椎动物增养殖与海水珍珠培育研究工作，E-mail：第一作者：韩书雅（1997-），https:/orcid.org/0000-0002-0668-4058，研究方向为珍珠培育与加工，E-mail：南方农业学报Journal of Southern Agriculture2023，54（4）：1224-1234ISSN 2095-1191；CODEN NNXAABhttp:/DOI：10.3969/j.issn.2095-1191.2023.04.027Sequence characteristics of CD-MPR gene in Pinctada fucatamartensii and its selection analysis in low-temperatureresistant strainsHAN Shu-ya1，ZHONG Ru-zhuo1，WU Ling-jun1，SONG Xin-lin1，LAI Zhuo-xin1，2，ZHENG Zhe1，2，WANG Qing-heng1，2*（1Fisheries College，Guangdong Ocean University，Zhanjiang，Guangdong 524088，China；2Guangdong Science andInnovation Center for Pearl Culture/Guangdong Provincial Engineering Laboratory for Mariculture Organism Breeding/Guangdong Provincial Key Lab of Pathogenic Biology and Epidemiology forAquatic EconomicAnimals，Zhanjiang，Guangdong 524088，China）Abstract：【Objective】To clarify the correlation between the polymorphism of cation-dependent mannose-6-phos-phate receptor（CD-MPR）gene（PmCD-MPR）and the low temperature tolerance of Pinctada fucata martensii，and toprovide theoretical basis for the breeding of low temperature resistant strains of P.fucata martensii.【Method】The full-4期12250引言【研究意义】马氏珠母贝（Pinctada fucata mar-tensii）是重要的海水养殖贝类及生产珍珠的主要母贝，属于低等无脊椎变温动物，自身调节体温的能力较弱，其体温一般与所处环境温度相同（Kim et al.，2009；许友卿等，2010）。马氏珠母贝的最适生长温度为2328，对低温的耐受能力较弱，水温降至68 超过21 h即导致大批量死亡（Deng et al.，2009）。目前，马氏珠母贝在我国已广泛养殖，主要分布在广西、广东和台湾海峡南部的沿海一带（邹杰等，2021），而耐低温品系的发现为马氏珠母贝在我国其他地方开展人工养殖提供了可能性。因此，筛选出与耐低温性状显著相关的基因型及其单倍型，对揭示马氏珠母贝低温适应过程中的作用机制及其生物学功能具有重要意义，同时可作为选择育种的候选分子标记以加速马氏珠母贝抗寒性的遗传改良。【前人研究进展】凝集素（Lectin）作为一种糖结合蛋白，普遍存在于动植物体内，具有与细胞膜表面糖基特异性结合的特点，可作为免疫因子协助机体抵御病害（陈政强等，2007），已发现的动物凝集素主要有C型、P型、L型、M型和S型等（张可诒，2018）。阳离子依赖性甘露糖-6-磷酸受体（Cation-dependentmannose-6-phosphate receptor，CD-MPR）是P型凝集素家族的成员之一（Bhamidimarri et al.，2018），能与携带有6-磷酸甘露糖残基（M6P）的蛋白特异性结合，促使反面高尔基网合成的溶酶体酶进入溶酶体，即在溶酶体的形成过程中发挥关键作用（张可诒，2018）。已有研究表明，低温能增强溶酶体膜的通透性（Rauen et al.，2006），而有助于CD-MPR参与携带有M6P信号的溶酶体运输至溶酶体内。Wang等（2018）研究表明，溶酶体介导的适度自噬和免疫增强有助于提高马氏珠母贝在低温环境下的存活率。尤扬和张晓云（2021）对低温胁迫下桂花万点金（Os-manthus fragrans Wandian Jin）叶肉细胞溶酶体超微结构变化进行观察，结果显示低温胁迫下溶酶体数量增加，推测溶酶体作为细胞内的消化场所也可为处于低温胁迫下的细胞提供营养物质，降低机体抵御低温造成的损伤。在水产动物中，CD-MPR基因的研究主要涉及斑马鱼（Danio rerio）胚胎发育过程中的表达模式及其在日本囊对虾（Marsupenaeusjaponicus）抗菌免疫中的作用（Nolan et al.，2006；Zhang et al.，2018），而有关CD-MPR在马氏珠母贝中的作用机制尚未明确。【本研究切入点】自2014年以来，本课题组通过组学分析深入挖掘出一些与耐低温相关的候选基因（Wang et al.，2018；赖卓欣，2020；Lai et al.，2021），但这些基因的序列结构特征length sequence of PmCD-MPR gene was cloned by rapid-amplification of cDNA ends（RACE），and real-time fluores-cence quantitative PCR was used to detect the expression pattern of PmCD-MPR gene in various tissues of P.fucatamartensii and under low temperature stress；based on the whole genome resequencing data of P.fucata martensii lowtemperature resistant line（R group）and Beibu Gulf wild population（W group），we screened for the single nucleotidepolymorphism（SNP）loci in exon regions of the PmCD-MPR gene，and obtained the SNP loci related to the low tempera-ture stress process of P.fucata martensii through the analysis of genetic polymorphisms，haplotypes，and the frequencycalculations.【Result】The PmCD-MPR gene sequence was 902 bp in length，with an open reading frame（ORF）of 792 bp，encoding a total of 263 amino acid residues；the molecular weight of the protein encoded by the PmCD-MPR gene was30.22 kD，and the theoretical isoelectric point（pI）was 5.79，which belonged to the hydrophilic proteins，and it con-tained a typical mannose-6-phosphate receptor（Man-6-P_recep）structural domain at amino acids 18-263.CD-MPR aminoacid sequences were less similar at the N-terminal end and more similar at the C-terminal end；the phylogenetic tree con-structed on the basis of CD-MPR amino acid similarity showed that P.fucata martensii was clustered with mollusks suchas Crassostrea gigas and Aplysia californica，which was in line with the classical zoogeographic classification.The rela-tive expression of PmCD-MPR gene was the highest in the hepatopancreas and significantly higher than that in thegonads，adductor muscle and mantle（P0.05，the same below）；the relative expression of PmCD-MPR gene in the gilltissues of P.fucata martensii in the low temperature stress group showed a tendency to increase first and then decreasewith the prolongation of the stress time.A total of 34 SNPs were screened from the exon region of PmCD-MPR gene，andthese 34 SNPs constituted 5 haplotype blocks and 15 haplotypes.Among them，the distribution frequency of GCC，TGand CCCTCT haplotypes in R population was significantly higher than that in W population，which was significantlycorrelated with the low temperature tolerance of P.fucata martensii.【Conclusion】The PmCD-MPR gene is involved in thelow temperature response process of P.fucata martensii，and the genotypes and haplotypes that are significantly associatedwith low temperature tolerance traits can be used as candidate molecular markers for assisted breeding of low temperaturetolerant lines of P.fucata martensii.Key words：Pinctada fucata martensii；PmCD-MPR gene；low temperature tolerance；SNPlocus；selection analysisFoundation items：Guangdong Natural Science Foundation（2020A151501691）；Guangdong Modern AgriculturalIndustrial Technology System（Shellfish Industry Innovation Team）Construction Project（2020KJ146）；Special Projecton KeyAreas of Guangdong Colleges and Universities（2020ZDZX1045）韩书雅等：马氏珠母贝CD-MPR基因序列特征及其在耐低温品系的选择分析54卷南 方 农 业 学 报 1226及其与表型性状的关联分析鲜见报道。【拟解决的关键问题】克隆马氏珠母贝CD-MPR基因（PmCD-MPR9）序列全长及分析低温胁迫下的时序表达模式，基于马氏珠母贝耐低温选育系（Low tempera-ture resistant line，R）和北部湾野生群体（Beibu Gulfwild population，W）的全基因组重测序数据筛选出PmCD-MPR基因外显子区的SNP位点，并通过遗传多态性分析、单倍型分析及频率计算获取与马氏珠母贝温度胁迫过程相关的SNP位点，旨在明确PmCD-MPR基因多态性与其低温耐受能力的相关性，为马氏珠母贝耐低温品系的培育提供理论依据。1材料与方法1.1试验材料供试马氏珠母贝取自广东省雷州市后洪村海区，选取活力较强、鳞片旺盛、规格一致的2龄成贝，贝壳长69.233.80 mm。将马氏珠母贝表面冲洗干净，运回实验室22 暂养48 h后用于试验。随机采集8只马氏珠母贝的闭壳肌（A）、性腺（GO）、鳃（GI）、外套膜（M）和肝胰腺（HE）等组织样品，液氮速冻后置于-80 冰箱保存备用。另取300只马氏珠母贝随机分成3组，其中，2个低温胁迫组水温分别设为12和17，对照组水温为22。各处理组的马氏珠母贝分别置于300 L养殖桶中养殖，每天投喂等量的单胞藻并微充气，日换水量为50%。分别在低温胁迫后第6、24、72和120 h等4个时间点每处理随机取8只马氏珠母贝，剪取其鳃组织液氮速冻后-80 保存备用。1.2PmCD-MPR基因克隆及组织表达分析利用Primer Premier 5.0设计扩增引物（表1），总RNA提取、cDNA第一链合成及RACE克隆参考刘雅（2018）的方法。实时荧光定量PCR检测以-actin为内参基因，采用2-Ct法换算PmCD-MPR基因在马氏珠母贝各组织及3个温度4个时间点的相对表达量，以SPSS 26.0进行单因素方差分析（One-way ANOVA）。1.3PmCD-MPR蛋白生物信息学分析采 用 DNAMAN、ORF Finder、Pfam、ExPASy-ProtParam、SignalP 5.1、TMHMM Server 2.0、NCBICOBALT、Phyre2、SoftBerry-Psite及MEGA X分别对PmCD-MPR基因进行氨基酸序列推导、开放阅读框（ORF）搜索、保守结构域预测、编码蛋白理化性质分析、信号肽预测、跨膜结构预测、多序列比对、三级结构预测、功能位点分布预测及系统发育进化树构建。1.4PmCD-MPR基因SNP位点筛选基于本课题组前期研究获得的R群体和W群体全基因组重测序数据库（赖卓欣，2020）筛选Pm-CD-MPR基因外显子SNP位点，采用Haploview 4.2计算LD系数（D）和相关系数（R2），运用PopGen32统计分析遗传参数、SNP位点多态信息含量（PIC）及进行连锁不平衡分析，并以SPSS 26.0对SNP位点进行2检验（陈琨等，2022）。2结果与分析2.1PmCD-MPR基因序列及其编码蛋白理化性质分析结果PmCD-MPR基因序列全长902 bp，其中，5端非编码区（5-UTR）仅39 bp，3端非编码区（3-UTR）较5-UTR长32 bp，ORF为792 bp，共编码263个氨基酸残基（图1）。PmCD-MPR基因编码蛋白分子量为30.22 kD，分子式为C1332H2111N371O405S13，其中带负电荷残基数（Asp+Glu）38个、带正电荷残基数（Arg+Lys）32个，理论等电点（pI）为5.79，脂溶指数为93.40，平均亲水性为-0.298，属于亲水性蛋白。TMHMM预测结果显示，PmCD-MPR蛋白具有1个跨膜结构，其跨膜区域位于第176198位氨基酸，在第18263位氨基酸处含有1个典型的甘露糖-6-磷酸受体（Man-6-引物名称 PrimerCD-MPR-D-3-outerCD-MPR-D-3-innerCD-MPR-D-5-innerCD-MPR-D-5-outerNUPUPM-longUPm-shortM13-FM13-RqRT-PCR-RqRT-PCR-F-actin-F-actin-R序列 Sequence5-TAGGGGAAGAAGTTGTTCGTGT-35-TTACGAATTTTGGCAGGACTTTGG-35-AAGGATGTGGCGGTCGTACAAGTAAACG-35-AAGGCGTTGGTGACGATCA-35-AAGCAGTGGTATCAACGCAGAGT-35-CTAATACGACTCACTATAGGGCAAGCAGTGGTATCAACGCAGAGT-35-CTAATACGACTCACTATAGGGC-35-CGCCAGGGTTTTCCCAGTCACGAC-35-AGCGGATAACAATTTCACACAGGA-35-TGAGGCGAATCTCTGACTGG-35-TTTACTGTCCCAAACGCCTG-35-CGGTACCACCATGTTCTCAG-35-GACCGGATTCATCGTATTCC-3用途 Purpose5-RACE3-RACERACE克隆菌落PCR实时荧光定量PCR内参基因表 1扩增引物序列信息Table 1Amplified primer sequences information4期1227P_recep）结构域（图2）。蛋白二级结构预测结果显示：-螺旋占24.53%，延伸链占24.53%，-转角占4.91%，无规则卷曲占46.04%。氨基酸功能位点预测结果显示，PmCD-MPR氨基酸序列上有2个N-糖基化位点、1个cAMP和cGMP依赖性蛋白激酶磷酸化位点、6个蛋白激酶C磷酸化位点、4个酪蛋白激酶磷酸化位点、3个酪氨酸激酶磷酸化位点、1个N-肉豆蔻酰化位点、1个酰胺化位点及7个微体C端靶向信号（图1）。2.2CD-MPR氨基酸多序列比对分析结果将马氏珠母贝、长牡蛎（Crassostrea gigas）、厚壳贻贝（Mytilus coruscus）、虾夷扇贝（Mizuhopectenyessoensis）、绿叶海蜗牛（Elysia chlorotica）、加利福尼亚海兔（Aplysia californica）、海星（Asterias ru-bens）、尼罗罗非鱼（Oreochromis niloticus）、尼加拉瓜湖始丽鱼（Archocentrus centrarchus）、条纹狼鲈（Morone saxatilis）、非洲爪蟾（Xenopus laevis）、中华蟾蜍（Bufo gargarizans）、美国短吻鳄（Alligator mis-sissippiensis）、家燕（Hirundo rustica）、南攀雀（An-thoscopus minutus）和大苇莺（Acrocephalus arundi-naceus）等16个物种的CD-MPR氨基酸序列进行比对分析，结果（图3）显示CD-MPR氨基酸序列在N端的相似性较低，而在C端的相似性较高，变异程度小。2.3PmCD-MPR蛋白三级结构预测结果利用Phyre2预测马氏珠母贝、长牡蛎、尼罗罗非鱼和家燕的CD-MPR蛋白三级结构，结果显示不同物种的CD-MPR蛋白三级结构十分相似（图4），暗示着CD-MPR蛋白三级结构具有较高的保守性。2.4CD-MPR氨基酸系统发育进化树构建及Motif分析结果基于CD-MPR氨基酸序列相似性，采用最大似然法（Maximum likelihood，ML）构建系统发育进化图 1PmCD-MPR基因核苷酸序列及其推导氨基酸序列分析结果Fig.1Nucleotide sequence of PmCD-MPR gene and its deduced amino acid sequence analysis results5-UTR和3-UTR以小写字母表示；ORF及推导氨基酸序列以大写字母表示；起始密码子（ATG）和终止密码子（TGA）以加粗大写字母表示；Man-6-P_recep结构域以单下划线表示；cAMP和cGMP依赖性蛋白激酶磷酸化位点以橙色表示；蛋白激酶C磷酸化位点以灰色阴影表示；酪蛋白激酶II磷酸化位点以单点式下划线表示；N-肉豆蔻酰化位点以青绿色阴影表示；微体C端靶向信号以蓝色表示5-UTR and 3-UTR were indicated with small letters；ORF and the deduced amino acid sequences were indicated with uppercase letters；start codon（ATG）and stop codon（TGA）were indicated with bold uppercase letters；Man-6-P_recep domains were indicated with single underscore；cAMPand cGMP dependent protein kinase phosphorylation sites were indicated with orange；protein kinase C phosphorylation site were indicated with grayshadow；casein kinase phosphorylation sites were indicated with single-point underscore；N-myristoylation sites were indicated with greenshadow；C-terminal targeting signal of the microsome were indicated with blue图 2PmCD-MPR蛋白的TMHMM预测结果Fig.2TMHMM prediction of CD-MPR protein501001502002501.21.00.80.60.40.20.0概率 ProbabilityTransmembraneinsideoutside位置 Position树，发现16个物种可分为软体动物、棘皮动物和脊椎动物三大分支（图5），其中，马氏珠母贝与长牡蛎、加利福尼亚海兔等软体动物聚为一支，棘皮动物单独聚为一支，脊椎动物分支则包括鸟类、爬行类、两栖类和鱼类，与经典的动物学分类相吻合。Motif分析结果显示，16个物种均预测到Motif2Motif6，而Motif1只存在于脊椎动物CD-MPR氨基酸序列的N端（图5），进一步证实CD-MPR蛋白N端的保守性较低。韩书雅等：马氏珠母贝CD-MPR基因序列特征及其在耐低温品系的选择分析54卷南 方 农 业 学 报 12282.5PmCD-MPR基因组织表达特性及低温胁迫下的表达差异通过实时荧光定量PCR检测PmCD-MPR基因在马氏珠母贝闭壳肌（A）、性腺（GO）、鳃（GI）、外套膜（M）和肝胰腺（HE）等组织中的表达情况，结果（图6）显示，PmCD-MPR基因在肝胰腺中高表达，其次是性腺，二者差异显著（P0.05，下同）。为探讨PmCD-MPR基因对低温胁迫的响应，以实时荧光定量PCR检测PmCD-MPR基因在3个温度4个时间点的表达模式，结果（图7）表明，在低温胁迫下PmCD-MPR基因的相对表达量随着胁迫时间的延长整体上呈先上升后下降的变化趋势。在12 超低温胁迫下，PmCD-MPR基因相对表达量在低温胁迫后第24 h达最高值，与对照组间存在显著差异；在17 低温胁迫下，PmCD-MPR基因相对表达量在各时间点均显著高于对照组，且在低温胁迫后第72 h达最高值。图 3CD-MPR氨基酸多序列比对分析结果Fig.3Multiple sequence alignment of CD-MPR amino acid红色表示保守性强；蓝色表示保守性次之；灰色表示保守性较弱Red indicated the strongest conservation；blue was the second and grey was the weakest图 4马氏珠母贝（A）、长牡蛎（B）、尼罗罗非鱼（C）和家燕（D）CD-MPR蛋白三级结构的比较Fig.4The spatial structure of CD-MPR protein in P.fucata martensii（A），C.gigas（B），O.niloticus（C）and H.rustica（D）ABCD图 5CD-MPR氨基酸序列的系统发育进化树及Motif分析结果Fig.5Phylogenetic tree of CD-MPR amino acid sequence and results of Motif analysis系统发育进化树 Phylogenetic treeMotif 分析 Motif analysis4期12292.6PmCD-MPR基因SNP位点遗传多态性分析结果基于R群体和W群体的全基因组重测序数据库，在PmCD-MPR基因外显子区共检测到34个SNPs位点。34个SNPs位点的PIC范围为0.01630.3749，平均为0.2432，其中低度多态性（PIC0.25）位点8个、中度多态性（0.25PIC0.50）位点26个；观测杂合度（Ho）范围为0.01670.6333，平均值为0.2869；期望杂合度（He）范围为0.01670.5041，平均值为0.2478；有效等位基因数（Ne）范围为1.03391.9994，平均值为1.5882（表2）。PmCD-MPR基因外显子34个SNPs位点的连锁不平衡分析结果显示：位点完全连锁不平衡（D=1.0，R2=1.0）、位点强连锁不平衡（0.8D 1.0，0.3R21.0）和位点弱连锁不平衡（D0.8，R20.3）分别为7对、57对和245对（图8）。2.7PmCD-MPR基因SNP位点与耐低温关联分析结果34个SNPs位点中，在W群体和R群体间差异极显著的位点有4个（P0.01），其中位点g.21353631的CC基因型在R群体和W群体中的频率分别为86.7%和26.7%（表3），频率差异最明显；仅在R群体中检测到的基因型有7个，分别是位点g.21350231的AC基因型、位点g.21350822和g.21353070的TT基因型、位点g.21351386的AG基因型、位点g.21353044和g.21353601的CT基因型及位点g.21353577的CC基因型。利用Haploview 4.2对筛选到的34个SNPs位点进行连锁不平衡分析，结果显示34个SNPs位点构成5个单倍块（Block1Block5）和15种单倍型，其中GCC、TG、CCCTCT单倍型与马氏珠母贝耐低温性状显著相关（表4）。3讨论CD-MPR为跨膜糖蛋白，其N端在膜外、C端在膜内。本研究发现，PmCD-MPR蛋白具有1个跨膜结构，其跨膜区域为第176198位氨基酸，且在第18263位氨基酸处含有1个典型的Man-6-P_recep结构域，与Zhang等（2018）的研究结果一致，也说明Man-6-P_recep结构域在进化过程中相对较保守。在二价阳离子存在的情况下，Man-6-P_recep结构域能与溶酶体酶的磷酸甘露糖残基特异性结合，产生的受体配体复合物可被转运到酸性前溶酶体区室，低pH介导受体配体复合物解离，而参与溶酶体的形成（Ghosh et al.，2003）。本研究通过对比马氏珠母贝和长牡蛎等16个物种的CD-MPR氨基酸序列得知，CD-MPR氨基酸序列在N端的相似性较低，但在C端的相似性较高，变异程度小。基于CD-MPR氨基酸相似性构建的系统发育进化树也显示，16个物种可分为软体动物、棘皮动物和脊椎动物三大支，其中马氏珠母贝与长牡蛎、加利福尼亚海兔等软体动物聚为一支，与经典的动物学分类相吻合。CD-MPR作为一类非免疫来源的多价糖结合蛋白，具有广泛的组织表达特性，但其表达量存在差异。Zhang等（2018）研究发现日本囊对虾CD-MPR基因主要在心脏、肠道及鳃组织中表达，在肝胰腺和胃中的表达量相对较低。但本研究发现PmCD-MPR基因在马氏珠母贝肝胰腺的相对表达量最高，在闭图 6PmCD-MPR基因在马氏珠母贝不同组织中的表达情况Fig.6PmCD-MPR gene expression profiles in different tissuesof P.fucata martensiiGI：鳃；GO：性腺；A：闭壳肌；M：外套膜；HE：肝胰腺。图柱上不同小写字母表示差异显著（P0.05）GI：Gill；GO：Gonads；A：Adductor muscle；M：Mantle；HE：Hepa-topancreas.Different lowercase letters on the bar represented signifi-cant difference（P0.05）图 7低温胁迫下马氏珠母贝鳃组织中的PmCD-MPR基因时序表达情况Fig.7Temporal expression of PmCD-MPR gene in the gills ofP.fucata martensii under low temperature stress同一低温胁迫时间点不同小写字母表示不同处理组间差异显著（P0.05）Different letters indicated significant difference between different ex-perimentalgroupsatthesamelowtemperaturestresstimepoint（P0.05表示SNP位点均处于Hardy-Weinberg平衡状态In Hardy-Weinberg equilibrium 2test，PHWE0.05 indicated that SNP loci were in Hardy-Weinberg equilibrium编号 Number12345678910111213141516171819202122232425262728293031323334SNP位点 SNP locusg.21350231g.21350274g.21350302g.21350769g.21350792g.21350800g.21350807g.21350819g.21350822g.21350846g.21350855g.21351332g.21351358g.21351374g.21351386g.21351389g.21351404g.21351425g.21351431g.21351437g.21351440g.21351443g.21353044g.21353052g.21353054g.21353061g.21353070g.21353094g.21353097g.21353556g.21353577g.21353595g.21353601g.21353631Ho0.03330.61670.56670.55000.45000.58330.56670.03330.43330.56670.55000.21670.08330.45000.13330.31670.43330.50000.50000.48330.48330.48330.20000.41670.41670.38330.30000.38330.38330.55000.48330.46670.05000.3833He0.03310.50070.49020.50410.41670.48730.45880.03310.37820.48400.48050.19480.08050.38640.12550.26880.42350.43640.43640.43010.43010.43010.18150.40210.40210.31250.32270.31250.31250.45360.40210.40950.04920.3696Ne1.03391.98621.94591.99941.70411.93501.83491.03391.600