滤纸法酶活测定过程及数据.doc

滤纸法酶活测定
1． 接种，根据不同的菌种配所需的培养基，本实验中C24,M1,MM01,BJJ,MQM为PDA培养基，F8,FN6,FN7.FN10,FN11,FN12,FN*,C10为LB培养基。在无菌条件下将其接种于以灭菌的液体培养基里，每个菌种做三个重复。
2． 培养，将其放置于相同环境摇菌培养，适宜温度为28℃左右，边培养边观察生长情况。
3． 离心，取对数期的培养液，培养液经3500r/min离心10min，分别取上清液0.5ml加入两组试管，一组为实验组，一组为对照组，并分别加0.5ml缓冲液，将实验组预热到50℃，将对照组沸水浴灭活5min,用水冷却，再将其放入50℃水浴锅。再向实验组和对照组分别加入1×6cm新华滤纸一条50℃水浴保温1h取出，水浴灭活5min，用3mlDNS显色后稀释3倍。
4． 测OD值，首先以水为空白对照，分别测上述实验组和对照组的OD值，再以上述灭活酶液（即对照组）为对照测其对应的实验组的OD值，记录数据，求三个重复测得的平均值，即为最终所需OD值，数据记录如下：

菌种
重复
以水为对照
以灭活酶液为对照
平均值

FN7
细菌
实验1
0.074
0.021

0.015
对照1
0.063

实验2
0.054
0.010
对照2
0.050

实验3
0.067
0.015
对照3
0.059

FN*
细菌
实验1
0.063
0.002

0.003
对照1
0.060

实验2
0.050
0.012
对照2
0.036

实验3
0.056
0.003
对照3
0.052

FN12
酵母菌
实验1
0.069
0.002

0.010
对照1
0.052

实验2
0.078
0.010
对照2
0.066

实验3
0.072
0.011
对照3
0.060

F8
细菌
实验1
0.137
0.040

0.038
对照1
0.133

实验2
0.178
0.031
对照2
0.152

实验3
0.152
0.043
对照3
0.147

FN11
细菌
实验1
0.183
0.002

0.043
对照1
0.143

实验2
0.128
0.051
对照2
0.102

实验3
0.180
0.034
对照3
0.162

FN6
酵母菌
实验1
0.241
0.018

0.044
对照1
0.147

实验2
0.441
0.036
对照2
0.276

实验3
0.340
0.052
对照3
0.198

FN10
细菌
实验1
0.421
0.221

0.013
对照1
0.143

实验2
0.177
0.008
对照2
0.130

实验3
0.198
0.017
对照3
0.121

C24
放线菌
实验1
0.447
0.203

0.169
对照1
0.220

实验2
0.368
0.162
对照2
0.271

实验3
0.372
0.143
对照3
0.253

C10
细菌
实验1
0.179
0.018

0.063
对照1
0.120

实验2
0.222
0.071
对照2
0.116

实验3
0.221
0.054
对照3
0.131

BJJ
霉菌
实验1
0.813
0.176

0.164
对照1
0.630

实验2
0.541
0.105
对照2
0.455

实验3
0.754
0.211
对照3
0.512

M1
霉菌
实验1
2.866
0.554

0533
对照1
2.404

实验2
2.913
0.774
对照2
2.505

实验3
2.851
0.511
对照3
2.501

MQM
霉菌
实验1
2.723
0.501

0.491
对照1
2.351

实验2
2.693
0.482
对照2
2.242

实验3
2.803
0.489
对照3
2.435

MM01
霉菌
实验1
2.406
0.308

0.431
对照1
2.012

实验2
2.852
0.528
对照2
2.366

实验3
2.690
0.458
对照3
2.201

注：红色标注为实验误较大的数据，算平均值时未将其排除。