基于科研成果转化的超分辨显微成像教学实验设计.pdf

基于科研成果转化的超分辨显微成像教学实验设计黄幼萍袁陈小钢渊福建江夏学院 电子与信息科学学院袁福建 福州 350108冤摘要院为培养创新应用型工程人才袁融合专业基础知识与教师科研成果袁利用 MATLAB GUI 强大的计算和人机交互功能构建 STED 超分辨显微成像仿真实验平台遥 通过 GUI 界面可以方便地进行各项参数设置和可视化入射光像差和偏振态对超分辨效果的影响袁 具有良好的可操作性和交互性遥 借助该仿真实验摆脱了实验仪器尧场地等束缚袁解决了实验装置复杂尧设备昂贵等问题袁为实验教学提供了一种可视化手段袁同时还实现了基础理论与前沿技术的融会贯通袁使学生充分认识和掌握高新技术袁为拔尖创新人才提供了重要的培养途径遥关键词院科研成果曰教学实验曰STED 超分辨显微成像曰MATLAB GUI曰创新能力中图分类号院G642文献标志码院A文章编号院1008-4657(2023)04-0077-08收稿日期院2023-02-13基金项目院福建省自然科学基金项目渊2020J05063冤曰福建江夏学院校级科研人才培育项目渊JXZ2021009冤曰福建江夏学院校级教改项目渊J2022B008冤作者简介院黄幼萍渊1991-冤袁女袁福建泉州人袁福建江夏学院实验师袁硕士袁主要研究方向院实验教学与管理尧光学成像研究与设计袁电子邮箱院遥通讯作者院陈小钢渊1990-冤袁男袁福建泉州人袁福建江夏学院讲师袁博士袁主要研究方向院高灵敏光学传感和高分辨光学成像袁电子邮箱院遥0引言科技创新是促进人类社会发展的重要推手袁而创新型人才则是科技创新的引领者遥高校是培养创新型人才的重要基地袁在新工科建设背景下袁如何培养具备科学意识尧创新理念和实践能力的高素质工程应用型人才袁以适应光电企业的发展袁成了各个高校光电专业教学改革探索的首要任务遥 实验教学是培养工程应用型人才的有效途径袁而传统的光学实验教学大多以测量类和验证性为主袁内容相对陈旧袁与前沿科技脱轨袁不利于激发学生的科研创新潜能和综合能力遥将教学与科研紧密融合不仅可以丰富教学内容袁而且对锻炼学生的科研能力和创新能力具有显著的指导意义袁是教学改革中的重要举措咱1-3暂遥 为此袁许多高校鼓励教师立足于科研实践袁将教师科研成果融入到本科实验教学中遥光学显微镜是一种精密光学仪器袁具有无损尧快速成像的特点袁在生物学尧医学尧材料学等领域具有重要的应用价值咱4暂遥 由于光学衍射极限的存在袁显微镜的成像分辨率被限制在 200nm 左右渊约为可见光波长的一半冤袁因此无法看清小于衍射极限的物体袁如病毒遥 超分辨显微技术因可以突破衍射极限袁成为了目前光学研究的前沿科技和最新领域咱5-7暂遥然而目前超分辨显微镜系统复杂尧造价昂贵袁动辄成百上千万袁并不是普通院校所能负担得起的遥因此袁不能在本科教育中开展超分辨显微技术实物实验袁严重限制了普通本科院校光电专业学生接触光学前沿技术的机会遥利用虚拟仿真实验袁 能够对难以用实际实验操作或无法进行拆分展示内部结构的光学仪器进行仿真袁从而脱离实际实验仪器的束缚袁丰富光学教学手段袁搭建适合线上学习的实验教学平台袁实现更好的教学效果咱8-9暂遥 本实验通过结合教师科研成果袁利用 MATLAB GUI 构建虚拟受激辐射淬灭渊Stimulated第 38 卷第 4 期灾燥造.38 晕燥.4荆楚理工学院学报Journal of Jingchu University of Technology圆园圆3 年 8 月Aug.圆园圆377Emission Depletion,STED冤超分辨显微成像实验仿真袁研究入射光像差尧偏振态等相关参数对 STED 超分辨显微成像的影响袁通过可视化其原理和实验结果袁有利于学生对前沿显微技术概念的建立袁实现基础理论与前沿技术的融会贯通袁使学生充分理解和掌握高新科技手段袁以前沿科技促进学生创新思维和能力的培养遥 此外袁 将超分辨技术纳入光电专业虚拟实验建设还可为后续开展线上课程提供实验技术支持袁丰富了光电课程教学手段袁进一步促进线上线下教学的有机融合遥1受激辐射淬灭渊STED冤超分辨显微成像技术原理由于光的本质是电磁波袁当以点光源经过显微系统后会发生衍射现象袁从而形成一个弥散的图案袁即艾里斑遥 若两个经过光学系统成像后形成的衍射光斑靠得很近时袁则会出现不能被分辨的情况遥 1873年袁Abbe 等建立了光学衍射与系统分辨率之间的关系袁即院滓=姿2NA渊1冤式中袁姿 为入射光的波长袁NA=nsin兹 为显微物镜的数值孔径遥 从公式渊1冤可知袁入射光波长和物镜的数值孔径决定了显微镜的分辨率遥因此对于光学显微系统来说袁可以通过增大数值孔径的方法来提高分辨率袁如院固态浸没透镜(SIL)技术尧4Pi 显微技术等遥这些方法本质上是提高系统的截止频率袁但由于材料的限制袁对分辨率的提升较为有限袁不能真正突破光学衍射极限遥提高光学系统分辨率的另一个方法就是压缩系统点扩展函数袁使衍射形成的弥散斑尽量的小袁该领域典型技术代表就是受激辐射淬灭超分辨显微技术渊STED冤遥 1994 年袁HellSW 等咱10暂考虑到衍射极限的限制主要是由于聚焦的光斑尺寸不能无穷小造成袁 理论上袁 如果能缩小激光光斑就可以实现超分辨成像遥其基本思想是袁在一个正常激发光点扩展函数的基础上袁用另一个环形光去擦除激发光的外围袁从而使得激发光斑的点扩散函数变小袁其设想实验装置如图 1渊a冤所示遥 根据自发辐射和受激辐射产生的光波长不同渊如图 1渊b冤所示冤袁Hell 用位相板产生环状的激光光斑并套在激发光斑外袁使激发光外围的荧光分子发生受激辐射而非自发辐射袁再用二向色镜区分受激辐射跟自发辐射波长袁从而只剩下环形光斑中心的荧光袁其强度分布如图 1渊c冤所示遥图 1 STED 原理及其系统示意图由于这一方法所产生的点扩展函数不再受到衍射极限的限制袁而仅仅取决于环形光强度遥 基于此袁阿贝衍射极限分辨率可改写为院78滓=姿2NA1+IdeMAX/Is摇姨渊2冤式中袁Is是饱和受激辐射的激光强度袁IdeMAX是 STED 环形光的最大强度遥 理论上袁 随着 Ide强度的增加袁STED 技术的分辨率可以无限缩小遥2基于 MATLAB GUI 的 STED 超分辨显微成像技术仿真设计MATLAB 是美国 Mathworks 推出的一款功能强大的数值仿真软件袁它具有数值分析尧矩阵运算尧图形处理尧仿真建模等功能遥 对比于 C 语言和 Python 等编程软件袁利用 MATLAB 软件进行光学实验的仿真袁只需要用数学公式表达和建模袁省去了大量繁琐的编程过程袁使学生有更多的时间和精力去探究科学问题本身遥 此外袁基于 MATLAB 丰富的作图能力和 GUI渊图形用户界面冤技术袁能够轻松数据可视化袁有助于学生化抽象思维为形象思维遥 基于此袁利用 MATLAB 进行受激辐射淬灭超分辨显微成像技术仿真袁不仅能够摆脱实验设备昂贵和系统复杂性的限制袁而且效果比实验更形象直观袁进一步增强了学生的感性认识和创造性遥2.1激发光和 STED 光的数学表征如图 1渊a冤所示袁典型 STED 超分辨显微成像系统中采用两束激光激发遥 其中一束为正常的激发光束袁一般采用脉冲或者连续激光遥 另一束由激发光经过一个 0-2仔 的螺旋相位板生成一个具有野甜甜圈冶结构的环形光斑袁称为 STED 光束遥 最后袁激发光束和 STED 光束利用一个二向色镜耦合成一束光袁并经过高数值孔径渊NA冤的显微物镜聚焦在成像平面上遥在典型 STED 显微系统中袁激发光束在入射平面一般满足典型高斯光束分布袁即院E0渊酌袁兹冤=A0exp渊-酌2sin2兹sin2琢冤渊3冤其中袁A0为入射光振幅系数遥酌 取决于系统入瞳与光束束腰半径的比值袁为了充分利用激光功率袁理论上光束束腰应填满入瞳袁 即 酌=1遥 琢 为物镜的最大半孔径角 渊兹max=琢冤袁 而最大半孔径角满足 NA=nsin兹max遥 高斯光束经高 NA 物镜聚焦后的电场矢量分布E渊r2,渍2,z2冤可以由矢量 Debye 衍射理论得到袁即咱11暂院Eex渊r2,渍2,z2冤=ExEyEz蓘 蓡=-iC蘩琢0蘩2仔0E0cos兹摇姨A渊兹袁渍冤P渊兹袁渍冤伊 exp渊ikn渊z2cos兹+r2sin兹cos渊渍-渍2冤冤冤sin兹d兹d渍渊4冤其中袁C为系统常数袁由显微物镜和入射光波长决定遥 k为波矢常数渊k=2仔/姿冤袁n为聚焦空间的介质折射率遥渊r2,渍2,z2冤为聚焦点处的柱坐标参数遥A渊兹袁渍冤代表系统的初级像差函数袁五种初级像差函数表达式如表1所示咱12暂遥表 1 像差系数的函数表达式表像差系数球差场曲畸变像散彗差A1渊兹袁渍冤exp咱ikAs渊sin兹sin琢冤4暂exp咱ikAcu渊sin兹sin琢冤2暂exp咱ikAd渊sin兹sin琢冤cos渍暂exp咱ikAa渊sin兹sin琢冤2cos渍2暂exp咱ikA肄渊sin兹sin琢冤3cos渍暂P渊兹袁渍冤代表入射光的偏振分布函数袁可以表示为院P渊兹袁渍冤=1+渊cos兹-1冤cos2渍渊cos兹-1冤cos渍sin渍渊cos兹-1冤cos渍sin渍1+渊cos兹-1冤sin2渍-sin兹cos渍-sin兹sin渍杉删山山山山山山山山山山煽闪衫衫衫衫衫衫衫衫衫衫PxPy蓘 蓡渊5冤其中袁偏振态咱Px袁Py暂以琼斯矩阵表示袁具体函数表达式如表2所示遥79表 2 偏振的琼斯矩阵函数表达式表偏振系数X 线偏Y 线偏右旋圆偏左旋圆偏X 向椭偏Y 向椭偏径向偏振角向偏振PxPy蓘 蓡10蓘 蓡01蓘 蓡12摇姨1i蓘 蓡12摇姨i1蓘 蓡15摇姨2i蓘 蓡15摇姨-i2蓘 蓡cos渍sin渍蓘蓡sin渍-cos渍蓘蓡对于 STED 光束袁由于在光路中插入了一个 0-2仔 螺旋相位板袁因此其聚焦点的光场分布为院Ede渊r2,渍2,z2冤=Eex渊r2,渍2,z2冤 窑 exp渊i渍冤渊6冤其中袁exp渊i渍冤表示由螺旋相位板引入的相位延迟袁渍 取值在 0 和 2仔 之间遥最终袁焦点处的强度分布则为院I渊r2,渍2,z2冤=|E渊r2,渍2,z2冤|2渊7冤通过激发光与 STED 光束调制后的荧光强度表达式为院Iflu=Iex 窑11+Ide/Is渊8冤式中袁Is为荧光饱和强度遥 STED 系统的分辨率则由公式渊2冤表示遥2.2GUI 界面设计GUI 全称为图形用户界面袁是一种高效便捷的人机交互方式遥 在 MATLAB 中袁将数值分析尧矩阵计算尧建模和仿真等功能集成在一个 GUI 界面中袁方便用户进行操作袁很大程度上摆脱了传统非交互式程序设计语言的编辑模式遥 基于 GUI 操作界面袁用户可以跳过繁冗的代码编辑和繁杂的数学运算袁实现计算结果和编程的可视化袁有利于操作和观察遥具体设计思路包括院仿真界面包括展示图片按钮袁运行时可以在 GUI 界面内打开图片袁从而实现对系统原理和光路图的展示遥 通过在 GUI 界面插入按钮组件作为显示开关袁执行回调函数袁回调函数中采用 uigetfile+im鄄read+imshow 组合袁进行文件夹选择袁读取和显示图片遥仿真界面上使用文本文字给出参数名称袁同时设计可编辑文本框作为参数变量输入口袁通过相关按钮组件进行启动执行回调程序袁输入框参数作为回调函数中变量袁注意全局变量和局部变量的运用遥根据激发光和 STED 光定义式编写回调函数袁利用 MATLAB 强大的数据处理和绘图能力袁给出不同参数下的模场分布图遥3仿真结果3.1理想状态下 STED 超分辨成像技术基于 MATLAB GUI 界面袁能够快速尧便捷的获得和可视化不同参数下的仿真结果遥首先袁通过点击 GUI 界面的原理和光路展示按钮袁系统将给出关于 STED 超分辨显微镜技术的文字原理介绍和图 1 所示光路图袁有助于理解超分辨显微技术的原理与光路遥其次袁通过在仿真界面设置不同的 NA 值尧折射率 n尧入射光波长尧强度尧荧光饱和强度等参数袁以及通过选择激发光和 STED 光的不同偏振态和像差系数袁 能够进一步探究不同参数对超分辨成像的影响遥 例如袁将参数设置为院NA=1.4袁n=1.5袁姿ex=635 nm袁姿de=760 nm袁入射光强度 Iex=1mW/cm2袁Ide=10 mW/cm2袁荧光饱和强度 IS=1mW/cm2袁激发光偏振态选择 X 线偏振袁STED 光选择右旋圆偏振袁假设系统为理想成像袁此时像差系数为 1袁即无像差遥 设置完参数后点击界面的光强图按钮袁仿真系统将计算出激发光尧STED 光和超分辨荧光在 XY 平面的光强分布图袁效果如图 2 所示遥 图 2渊a冤为激发光的光强分布图袁拟合其半高全宽为 248.7 nm袁超过衍射极限渊200 nm冤遥图 2(b)为通过螺旋相位板生成的 STED 光强分布图袁由图可知其中心光强为零袁分布呈环形对称遥将激发光与环形光耦合在一起时袁最终将获得如图2渊c冤所示的调制后的荧光光强分布遥此时袁调制后光斑的半高全宽为 141.8 nm袁突破了衍射极限限制袁如图 2渊d冤所示遥80图 2 XY 平面上的光强分布图3.2像差对于 STED 超分辨显微技术的影响在此基础上袁通过选择不同的参数袁可进一步探究 STED 超分辨技术的影响因素袁如探究像差和入射光偏振对 STED 光的影响遥 作为 STED 技术中最为重要的调制光袁STED 光的形状和强度分布决定了系统分辨率袁因此探究其影响因数具有重要的研究意义遥 理论上袁STED 光应该具有完美的环形野甜甜圈冶结构袁其中心强度为 0袁且其强度越大系统分辨率越高遥 但在实际成像过程中袁由于光学系统往往存在像差袁因此 STED 光的形状和光强分布将会受到影响遥在仿真系统中袁通过在 GUI 仿真界面上袁选择不同像差系数袁对 STED 光强分布进行计算袁其结果如图 3 所示遥图 3 不同像差影响下的 STED 光强分布图对比于理想成像下的 STED 光强分布可以看出袁球差和场曲不会改变 STED 光环形结构特征袁但会使光环的直径变大同时降低了其最大光强袁如图 3渊b冤和渊c冤所示遥 畸变不会改变 STED 光的环形结构特征和光强分布袁但是会使整个光环位置发生平移袁这样会影响成像时与激发光的对准耦合袁如图 4(d)所81示遥 此外袁彗差和像散同时改变了 STED 光的环形对称分布和强度分布袁会对 STED 光产生严重影响袁进而影响系统的成像分辨率极限袁如图 3渊e冤和渊f冤所示遥从仿真结果来看袁常见的五种初级像差都会对 STED 光成像产生影响袁特别是彗差和像散袁因此在实际实验中应该尽量避免各类像差的产生袁如对光路搭建过程中的等高共轴调节尧成像视场控制等遥3.3入射光偏振态对 STED 超分辨显微技术的影响像差对 STED 光会产生影响外袁入射光的偏振态也是影响 STED 光形状和强度分布的重要因素遥 在虚拟仿真实验平台界面上通过设置不同的入射光偏振参数袁可以进一步探究偏振态的影响遥不同偏振态的 STED 光强分布如图 4 所示遥图 4 不同偏振态的 STED 光强分布图从图 4 的仿真结果可以看出袁 右旋圆偏振光经过 0-2仔 相位板产生的 STED 光的环形结构和光强分布最完美袁如图 4渊c冤所示遥X 线偏和 Y 线偏产生的环形光会有两个比较亮的旁瓣袁方向分别沿着 X 方向和 Y 方向袁如图 4渊a冤和渊b冤所示遥 以 X 和 Y 方向为长轴的椭圆偏振可以产生比线偏振更好的圈斑袁但其强度分布不均匀袁如图 4渊e冤和渊f冤所示遥当输入光束采用左旋圆偏振时袁其聚焦后的光斑中心强度不为0袁这样会对激发光中心光强也进行抑制袁因此不适合用于超分辨成像袁如图 4渊d冤所示遥 当输入光束采用径向偏振或角向偏振时袁 其聚焦后的光斑不再具有环形甜甜圈结构袁 而是成为一个类似高斯光斑聚焦点袁如图 4渊g冤和渊h冤所示遥通过仿真分析袁可以得到如下结论院左旋圆偏振尧径向偏振和角向偏振并不适合用于产生 STED 光束袁而右旋圆偏光为最佳入射光偏振态袁为实验研究提供了重要的理论支撑遥3.4 STED 超分辨显微成像效果最后袁通过点击 GUI 界面的成像按钮袁系统将给出徕卡公司通过共聚焦显微镜与 STED 超分辨显微镜得到的多色共标记的复杂细胞骨架网络和转运囊泡的显微图像袁如图 5 所示咱13暂遥图 5 共聚焦和 STED 的细胞骨架成像对比图渊图片来源于 Leica 官网冤82常见细胞骨架包括微管尧微丝尧中间纤维等袁其尺寸在 200 nm 以内袁采用一般光学显微镜无法观测到细胞骨架的细节结构遥从图 5 可以看出共聚焦显微技术的分辨率较差袁无法分辨细微细胞骨架网络和转运囊泡袁而 STED 显微镜能获得超越衍射极限的分辨率袁能清楚分辨出细胞骨架网络和转运囊泡遥 通过显示成像图像的对比袁能够更直观和深入的了解超分辨技术的成像效果遥4结束语本实验通过融入教师科研成果袁帮助学生接触和充分了解前沿技术袁培养了学生的创新意识袁开拓学生的创新思维遥 利用 MATLAB GUI 设计了 STED 虚拟仿真实验平台袁借助该虚拟仿真实验平台袁学生能够学习和掌握 STED 超分辨技术原理和特点遥 此外袁通过设置不同仿真参数袁比较和分析不同条件下的输出结果袁使学生更加深入地理解各项参数对超分辨成像技术影响渊如像差和偏振对 STED 环形光的影响冤遥在此基础上袁引导学生进行更深入的科学研究与探索袁将理论尧仿真与实践结合在一起袁进一步培养学生的科学研究兴趣和创新能力遥 该仿真系统界面具有简洁易懂尧操作方便尧计算结果图形化和可视化的特点袁将其应用于光电专业前沿技术的辅助教学袁不仅可提高教学质量袁同时为后续开展线上课程提供实验技术支持袁丰富了光电课程教学内容和手段袁有效促进线上线下教学的有机融合遥参考文献院咱1暂 周静袁刘全菊袁张青.新工科背景下实践教学模式的改革与构建咱J暂.实验技术与管理袁2018袁35渊3冤院165-168.咱2暂 周一恒袁严家明袁吴新忠袁等.融合科研成果的综合创新实验教学探讨咱J暂.实验技术与管理袁2020袁37渊11冤院230-234.咱3暂 白蓝袁刘媛.基于科研成果的综合性创新实验教学设计咱J暂.实验室研究与探索袁2019袁38渊11冤院179-182.咱4暂 李焱袁龚旗煌.从光学显微镜到光学野显纳镜冶咱J暂.物理与工程袁2015袁25渊2冤院31-36.咱5暂 李明.超分辨显微袁至极至美:2014 年诺贝尔化学奖述评咱J暂.物理袁2014袁43渊12冤院813-816.咱6暂 任煜轩袁于洋袁王艳.超高分辨率显微镜推进纳米生物学研究咱J暂.生命科学袁2014袁26渊12冤院1255-1265.咱7暂 胡春光袁查日东袁凌秋雨袁等.超分辨显微技术在活细胞中的应用与发展咱J暂.红外与激光工程袁2017袁46渊11冤院25-35.咱8暂 何文森袁杨华军袁蔡杨伟男袁等.光学设计仿真教学与实践教学互补性研究咱J暂.实验室研究与探索袁2017袁36渊7冤院164-167.咱9暂 张登玉袁陈列尊袁黄顺袁等.物理专业光电类课程虚拟仿真实验教学体系的构建咱J暂.教育教学论坛袁2015渊47冤院245-246.咱10暂 Hell S W袁Wichmann J.Breaking the diffraction resolution limit by stimulated emission:stimulated-emission-depletion fluo鄄rescence microscopy咱J暂.Optics Letters 1994袁19渊11冤院780-782.咱11暂 Xie Hao袁Liu Yujia,Jin Dayong,et al.Analytical description of high-aperture STED resolution with 02仔 vortex phase mod鄄ulation咱J暂.Journal of the Optical Society of America A袁2013袁30渊8冤院1640-1645.咱12暂 Deng Suhui袁Liu Li,Cheng Ya袁et al.Effects of primary aberrations on the fluorescence depletion patterns of STED mi鄄croscopy咱J暂.Optics Express袁2010袁18渊2冤院1657-1666.咱13暂 Leica.徕卡显微镜系统咱Z/OL暂.咱2022-11-9暂.https:/www.leica- Performance Evaluation of Cross-borderE-commerce Listed EnterprisesWU Ganglong渊College of Commerce,Liming Vocational University,Quanzhou 362000,China冤Abstract院Taking a sample of 63 listed cross-border e-commerce enterprises,a comprehensive performance evaluation systemfor listed cross-border e-commerce enterprises was constructed and evaluated.The study found that,due to factors such as the epi鄄demic and the international trade environment,the overall performance level of listed cross-border e-commerce enterprises in Chi鄄na is still low,the performance level of enterprises in the industry is very uneven and widely disparate,and the performance level ofdifferent types of enterprises is also very uneven.Cross-border e-commerce listed enterprises are mainly concentrated in Chinassoutheastern coastal provinces,especially in the economically developed regions of the Yangtze River Delta and the Pearl RiverDelta,but the Yangtze River Delta is better developed than the Pearl River Delta.In addition,the overall performance scores of en鄄terprises on different factors in different regions likewise show large differences.Based on this conclusion,recommendations weregiven that listed enterprises should actively transform into cross-border e-commerce service enterprises,listed enterprises in theGuangdong region should continue to accelerate the upgrading and transformation of their industrial structure,strengthen the intro鄄duction and training of cross-border e-commerce talents in the PRD and improve the market supervision mechanism.Key words院enterprises performance曰cross-border e-commerce曰listed enterprises曰factor analysis咱责任编辑院郑笔耕暂Experiment Design of Super-resolution MicroscopicImaging Technique Based on Scientific ResearchHUANG Youping，CHEN Xiaogang渊Department of Electronic Information Science,Fujian Jiangxia University,Fuzhou 350108,China冤Abstract院In order to cultivate innovative and practical engineering talents,a stimulated emission depletion(STED)super-resolution microscopy simulation experiment platform is proposed with MATLAB GUI by integrating of professional knowledge andresearch results.A parameter study was carried out to investigate the influence of the incident light aberration and polarization stateon the super-resolution imaging.Through the GUI interface,it is easy to set parameters and visualize simulation results with goodoperability and interactivity.The simulation experiment can provide a visualization method for experimental teaching without theconstraints of sites and complicated and expensive instruments.Besides,it realizes the integration of basic theory and cutting-edgetechnology,enables students to fully understand and master high technology,and provides an important way for the cultivation oftop-notch innovative talents.Key words院scientific research achievement曰simulation experiment曰STED super-resolution microscopy imaging曰MATLABGUI曰innovation capability咱责任编辑院许立群暂渊上接第 50 页冤84