生物实验室常用试剂的配制省名师优质课获奖课件市赛课一等奖课件.ppt

单击此处编辑母版文本样式,本幻灯片资料仅供参考，不能作为科学依据，如有不当之处，请参考专业资料。谢谢,生物试验室惯用试剂配制,一、检验酸碱性试剂,1.,酚酞,试液 取,0.1,酚酞，溶解在,100mL6090%,乙醇溶液里，装在试剂瓶内密闭保留。酚酞试液在碱性溶液中呈红色。,2.,麝香草酚酞,(,百里酚酞,),试液 把,0.1g,白色麝香草酚酞溶解在,100mL90%,乙醇里制得。当,pH,值由,9.410.6,时，颜色为无色至蓝色。,3.,溴甲酚紫,指示剂 将,0.1g,溴甲酚溶于,9.25mL,0.02mol/L,氢氧化钠溶液中，加蒸馏水稀释至,250mL,制得。当,pH,值由,6.26.8,时，颜色由淡黄色变为淡紫色，变色点在,pH6.7,。,二、定性判定一些物质试剂,1.,判定葡萄糖试剂,(1),班氏,(,Benedict,),试剂,a.,在,600mL,蒸馏水中溶解,173g,柠檬酸钠和,100g,无水碳酸钠，冷却后稀释到,850mL,。,第1页,b.,在,100mL,热蒸馏水中溶解,17.4g,无水硫酸铜。冷却后稀释到,150mL,。把硫酸铜溶液缓缓倒入柠檬酸钠碳酸钠溶液中，边加边搅拌，如产生沉淀。要过滤，班氏试剂配制后能长久使用。如存放较久而产生沉淀时，可取上层清液使用，无须重配。,(2),裴林,氏,(,Fehlings Solution,),试剂,a.,取,35g,硫酸铜溶解在,400mL,蒸馏水里，加蒸馏水到,500mL,。,b.,取,85g,氢氧化钾,(,或,70g,氢氧化钠,),和,175g,酒石酸钾钠，溶解在,400mL,蒸馏水里，加水馏水到,500mL,。,上述两种溶液耍分别保留，使用时再等量地混和并搅拌。如溶液里有葡萄糖，加等量裴林试剂，煮沸，会产生红色氧化亚铜沉淀。,2.,判定淀粉用,碘液,取,2g,碘化钾，溶解在,10mL,蒸馏水中，再加,1g,碘，待溶解后用蒸馏水稀释到,300mL,。即成碘液。溶液在光亮处轻易变成氢碘酸，须保留在棕色玻瓶里。因为,I,2,，不易溶于水，当加入,KI,后可大大增加,I,2,溶解度。,第2页,3.,判定蛋白质用,双缩脲,试剂 分别配制,10%,氢氧化钠溶液和,1%,硫酸铜溶液，待用。在,3,毫升待测液中加入,1mL10%,氢氧化钠溶液和,1,滴,1%,硫酸铜溶液。假如有蛋白质，会出现紫色反应。,4.,判定脂肪试剂,苏丹,IV,溶液配制：取,0.2g,苏丹,IV,，放入无水乙醇中，加热，使它充分溶解，成为饱和乙醇溶液。过滤后倒迸试剂瓶内密闭保留备用。,苏丹,溶液配制：,0.1g,苏丹,粉末加入,95%,乙醇,100mL,待全部溶解后便可使用。,5.,判定,DNA,二苯胺,试剂,A,液,:1.5g,二苯胺溶于,1OOmL,冰醋酸中，再加,1.5mL,浓硫酸用棕色瓶保留,B,液,:,体积分数为,0.2%,乙醛溶液。,试验前，将,0.1mL,B,液加入到,10mL,A,液中，现配现用。,6.,判定二氧化碳试剂,(1),石灰水,取饱和石灰水澄清液，密闭瓶内备用。,(2),氢氧化钡,(Ba,(,OH,),2,),在蒸馏水中加氧化钡。氢氧化钡碰到二氧化碳，也会生成碳酸钡白色沉淀，使溶液浑浊。,第3页,(3),溴代麝香草酚蓝,溶液 取,0.1,溴代麝香草酚蓝，溶解在,100mL,蒸馏水里，滴入少许,0.1%,氢氧化钾溶液，使它成为碱性溶液而呈蓝色。本溶液,pH,值改变范围是,6.0(,黄,),至,7.6(,蓝,),。待测物中如有二氧化碳，会形成碳酸而使溶液变成黄色。,三、分离液,1.,用于分离肌纤维试剂,(1),马克凯郎,(,MaecalIum,),氏液 也叫硝酸甘油溶液，取,1,份浓硝酸、,2,份甘油、,2,份水混合制得。适于分离横纹肌和心肌组织。,(2)30%,氢氧化钾,溶液或,30%,氢氧化钠,溶液 肌肉小块浸泡时间,0.5,一,1,小时。,2.,用于分离神经细胞试剂,(1),甲醛生理盐水,溶液 称取,58.44g,氯化钠，用蒸馏水溶解，再稀释到,1000mL,加入,2g40%,甲醛溶液，可得甲醛生理盐水溶液。这种溶液也是很好上皮细胞分离液，既分离快速，又能保护纤细上皮细胞纤毛。在上述溶液里，分离小肠和气管上皮组织需,2,小时，口腔和皮肤上皮组织需,3,天。,第4页,(2),硼酸生理盐水,溶液 在,0.75%,生埋盐水中加入硼酸，使成为饱和溶液。可用来分离脊髓灰质或脑灰质部位神经组织。,3.,用于分离神经纤维试剂,硝酸银溶液,:,取,0.5G,硝酸银，溶解在,100mL,水中即成。,4.,用于分离植物根尖细胞试剂,(1),盐酸乙醇溶液,在,1,份,95%,乙醇中渐渐加入,1,份浓盐酸，即成盐酸乙醇溶液。密闭保留。,(2)4%,盐酸溶液。,5.,用于细胞质壁分离试剂,(1)30%,蔗糖液,；,(2)5%,氯化钠,溶液；,(3)5%,硝酸钾,溶液；,(4)24%,尿素溶液；,(5)1mol/L,氯化钙,溶液。,四、染色剂 有些动植物组织和大多数细胞及细胞器是无色透明，必须经染色剂染色，才能在显微镜下观察清楚，惯用染色剂制法和适用范围见,122,表。,第5页,五、干燥剂,干燥剂对游离水往往含有化学结合作用，物理吸附作用或两种作用兼有。选取干燥剂应注意其本身和被干燥物质有没有化学作用，以免引发被干燥物质破坏或吸收。惯用干燥有,:,1,、,氧化钙,(cao),白色固体，碱性氧化物，可干燥氧、氨、氨、胺等气体，不可用来干燥酸性气体，如二氧化碳、氯化氢、硫化氢。,2,、,碱石灰,白色固体，呈碱性。它由氧化钙粉末加入氢氧化钠溶液，经充分混和后置铁皿中于,200,250,下干燥而成。能够干燥氨、胺等气体。惯用于防止水或二氧化碳进入反应系统装置中。,3,、,硅胶,半透明，内表面很大多孔性固体，对水有强烈吸附作用。可干燥氧、氮、氨、胺等气体。惯用于干燥器中。含有钴盐硅胶，叫变色硅胶，干燥时呈蓝色，吸水后呈粉红色。硅胶吸附水后能够在,120,烘干再用。,其它干燥剂还有,五氧化二磷、氯化钙、硫酸钙、氧化铝、氧化钡、硫酸镁、硫酸钠、碳酸钾和高氯酸镁,等。,第6页,六、生理盐水,1.,各类动物试验惯用生理盐水 两栖类生理盐水是,0.65%,氯化钠溶液,;,鸟类是,0.75%,;,哺乳类和人是,0.9%,。,2.,任氏,(Ringers),生理盐水 先把,6.5g,氯化钠、,0.14g,氯化钾、,0.2g,碳酸氢钠和,0.01g,磷酸二氢钠分别溶解在少许蒸馏水中，混和后用蒸馏水稀释到,980mL,。取,0.12g,氯化钙溶解在,20mL,蒸馏水中，把氯化钙溶液逐滴加入到上述溶液中，边滴边搅拌，以免产生不溶性磷酸钙沉淀。惯用于变温动物，如两栖类。,3.,乐氏,(,Lockes),生理盐水 先把,9g,氯化钠、,0.42g,氯化钾、,0.10.3g,碳酸氢钠分别用少许蒸馏水溶解，混和后加蒸馏水到,980mL,。再取,0.24g,氯化钙溶解在,20mL,蒸馏水中，逐滴加入上述溶液中，惯用于恒温动物，如哺乳类。,七、固定液和保留液 固定液能把有生命材料快速杀死，并尽可能保持它原有形态和结构，含有防腐和保留和作用。,1.,甲醛也叫,福尔马林,液,(Fomalin),，固定材料惯用,5%,甲醛溶液，保留生物标本惯用,4,一,5%,，消毒惯用,3%,。市售是,40%,甲醛溶液，加,7,、,9,、,12,倍水分别稀释成,5%,、,4%,、,3%,甲醛,第7页,溶液。甲醛溶液无色透明，有刺激性气味，味灼烈，是良好动、植物材料固定液，有强烈杀菌能力，穿透力大,(,仅次于乙酸,),，防腐性强，固定速度快，效果好。缺点是固定后可使材料少许膨胀，有浓度过高，能使材料发硬发脆，所以对于精细解剖标本，最好用甲醛与甘油、乙醇、石炭酸等混和使用。,2.,乙醇,(C,2,H,5,OH),有强烈杀菌作用，渗透力较大，但固定效果不及甲醛溶液。可使蛋白质凝固，并有较强脱水作用，所以，单纯用乙醇固定材料会产生硬化和收缩，而使体积变小。对含水量多材料，固定应从低浓度开始，逐步转入高浓度。从经济和效果来考虑，乙醇宜与甲醛等固定液混和使用。惯用乙醇固定液或保留液浓度都是,70%,左右。,3.,乙酸,带有刺激味无色液体，纯乙酸在,16.7,以下凝固，故名冰乙酸。乙酸固定液惯用浓度是,0.30.5%,。乙酸能凝固细胞核内蛋白质,(,核蛋白,),，对染色质或染色体固定，染色很好。用乙酸溶液固定材料，可使细胞膨胀和预防收缩，组织也不会硬化。它常跟乙醇、甲醛、铬酸等易引发硬变收缩液体组成混合固定液，效果很好。,第8页,4,、,乙酸乙醇,溶液 由冰乙酸,1,份与纯乙醇,3,份混和而成，适合用于动、植物组织和细胞核内,DNA,测定。动物组织固定需,1.5,3,小时后，即移入纯乙醇中,15,分钟，再透明。根尖固定需,15,分钟，花药固定需,1,小时。,八、脱水剂 材料中含有水分，就会降低透明度。脱水剂有利于材料透明，也有利于材料永久保留。脱水剂种类很多、如,乙醇、丙酮、甘油、正丁醇,和,叔丁醇,等。中学生物试验最惯用乙醇，而甘油则惯用于菌类和藻类等。在用乙醇脱水时，为了防止材料萎缩、僵硬，应从低到高使用不一样浓度，逐步脱水，有时还用无水乙醇脱水。普通组织,(,除神经组织，柔软组织外,),可从,70%,乙醇开始经,80%,、,95%,、,100%,乙醇，使它逐步脱水。对一些柔软组织如胚胎组织、低等无脊椎动物组织，要从,50%,或,30%,或,20%,乙醇开始，不然组织收缩较严重。,九、透明剂 材料经脱水后，须经透明剂透明，方能浸蜡包埋或在树胶中封藏。其目标在于使组织中乙醇或丙酮被透明剂所替换，使石蜡能很顺利进进入组织和增强组织折光系数，便于显微镜观察，并能和封藏剂混和进行封藏。透明剂种,第9页,类很多，惯用有,二甲苯、甲苯、苯、氯仿,和,香柏油,。如二甲苯是应用最广廉价透明剂。易溶于乙醇又能溶解石蜡，能与封减剂树胶混和，但不能和水混合，透明力强，作用较快。用二甲苯透明时，先经纯乙醇和二甲苯等量混合浸,12h,，以置换材料中乙醇，冉置于纯二甲苯中透明，全部时间不宜超出,3h,。如是染色后制片，在二甲苯中经过,510min,即可透明。,十、封藏剂 材料经脱水，透明或染色后，须经封藏才能长久保留。,1.,加拿大树胶,半透明固体树脂，溶于二甲苯或苯里，用以封片透明度很好，干后坚硬牢靠，可长久保留。,2.,甘油,暂时封片惯用封藏剂，材料先用,10%,甘油浸润数日，待水分蒸发，浓缩成纯甘油时，再加盖玻片。,3.,松香,取纯松香将其磨碎，放入烧杯内，置于,80,100,处加热,1,2h,后，待松香熔解时其中挥发性杂质和气泡外逸，加入约为松香重量二分之一二甲苯，搅拌均匀即成松香封藏剂，本品原料易得，效果与加拿大树胶相同。缺点是材料不纯或调制不好时，易发生结晶和褪色。,第10页,十一、消毒剂 优良消毒剂应含有杀菌力强、性质稳定，易于溶解和穿透力大特征，另外还要求对人和动物组织毒性低，对器具衣服没有腐蚀性，且价格低廉。,1.,乙醇,它可使蛋白质脱水和变性，故有消毒和防腐作用。,70%,乙醇杀菌力最强，可在,35mim,内杀死细菌。且对人毒性小，适合用于皮肤及器械等消毒。,95100%,乙醇能引发菌体表层蛋白质凝固，形成保护层，使乙醇分子不易继续透入，杀菌能力反而减弱。,2.,碘酒,它是碘和碘化钾乙醇溶液，有稀碘酒和浓碘酒两种。市售是,2%,稀碘酒，在,10min,内能杀死细菌及芽抱，可用于消毒皮肤，但对皮肤刺激性很大，故用后应以,70%,乙醇拭净。浓碘酒多用于手术后创面消毒。自配碘酒时，可取,5g,碘化钾和,7g,碘溶解在,5mL,蒸馏水中，再加无水乙醇到,1OOmL,。,3.,高锰酸钾,强氧化剂，碰到有机物即放出新生态氧而使有机物氧化，其杀菌作用强于过氧化氢。高浓度时有刺激及腐蚀作用；,0.1%,水溶液可作创口或粘膜洗涤剂，使皮肤消毒,;25%,水溶液能在,24h,内杀死细菌芽孢。本液在空气中易分解，失去氧,第11页,化能力，要现配现用。,4.,甲醛,溶液 它惯用来杀灭细菌、病毒。通常以,2,5%,溶液消毒器具。本品又可作试验室熏蒸消毒。,5.,漂白粉,本品含有效氯为,25,30%,，有强杀菌力，能消毒、防腐、防臭和溶解坏死组织，但作用时间短。,十二、麻醉剂 它可分挥发性,(,如乙醚,),和非挥发性,(,如氨基甲酸乙酷,),两类。前者作用时间短麻醉深度轻易掌握，动物麻醉后也轻易清醒；后者作用时间比较长，使用方法简单，但麻醉后清醒较慢，不大轻易掌握麻醉深浅程度。在中学生物试验申，使用较多是乙醚和氨基甲酸乙酷两种。,1.,乙醚,无色液体，味灼烈，有强挥发性和易燃性。乙醚能使中枢神经系统发生暂时性机能麻痹。乙醚吸入法是最惯用麻醉方法。,2.,氨基甲酸乙脂,它是无色柱状结晶或白色颗粒粉末，其水溶液是比较温和麻醉药，安全度大，多数试验动物都可使用，更适合用于小动物。,第12页,作为麻醉剂，氨基甲酸乙脂常配成,20%,水溶液注射入动物体内。剂量是，狗、猫、兔直肠灌注,1.5g,g,体重，皮下静脉或腹腔注射,0.751g/Kg,体重。蛙类,2g/Kg,体重，由背部淋巴囊注射。作静脉注射时必须溶在生理盐水,(,哺乳类用,8.59.0%),中，配成,10%,溶液，每,Kg,体重注射,10mL,。,十三、防腐剂 防腐剂多用于剥制标本，现将其中防腐剂分述以下,:,如最简单无毒防腐剂是用硼酸粉,130g,、明矾粉,60g,和樟脑粉,60g,，三种粉末混和后撤在动物皮内，效果普通，但使用安全。,十四、密封剂 它惯用来封标本瓶口。,1,石蜡,取石蜡,(,熔点,52)1,份,+,松香,1,份,+,甘油数滴，溶化后趁热使用。,2,赛潞咯,取赛潞咯，如碎、废乒乓球剪碎后，浸入在乙醚、丙酮或氯仿等有机溶剂中加盖后静置二三天，等溶化成糊状时，涂在瓶口和瓶塞外面，形成不透气薄膜。,第13页,十五、培养液和培养基,1,植物无土栽培完全培养液配方：,(1),配方一,:,称取硝酸钙,0.812g,、硝酸钾,0.506g,、磷酸二氢钾,0.136g,、硫酸镁,0.120g,、酒石酸铁,0.005g,，把这些盐类溶解在少许水里，稀释到,1000mL,。,(2),配方二,:,称取,1g,硝酸钙、,0.25g,磷酸二氢钾、,0.25g,硫酸镁和,0.25g,硝酸钾。把这些盐类先分别用少许水溶解，然后混和在一起用水稀释到,1000mL,最终加,1,滴,1,氯化铁溶液。,2,配制缺氮、缺磷和缺钾不完全营养液：,(1),缺氮培养液：硫酸钙,052g,、磷酸二氢钾,025g,、硫酸镁,025g,、氯化钾,008g,、氯化铁微量。,(2),缺磷培养液：硫酸钙,05g,、硝酸铵,016g,、硝酸镁,025g,、硝酸钾,020g,、氯化铁微量。,(3),缺钾培养液：硫酸钙,034g,、硝酸铵,024g,、硫酸镁,0.25g,、磷酸氢钙,0.17g,、氯化铁微量。,以上,3,种不完全营养液都用水稀释到,1000mL,。,第14页,2,土壤浸出液 把肥沃土壤放在等量清水申，用玻璃棒充分搅拌后静置，使土壤沉淀，取上清液用滤纸过滤即得。,3,牛肉膏蛋白胨培养基,(,用于细菌培养,),牛肉膏,3g,，蛋白胨,10g,，,NaCl5g,，琼脂,15g,，水,1000mL,，,PH7476,。,4,高氏,1,号培养基,(,放线菌培养,),可溶性淀粉,20g,，,kno,3,1g,，,NaCl0.5g,，,K,2,HP0,4,3H,2,O05g,，,MgS0,4,7H,2,O05g,，,FeS0,4,7H,2,O001,，水,1000mL,，,pH74,一,76,。配制时注意，可溶性淀粉要先用冷水调匀后再加入到以上培养基中。,5,马丁氏,(Martin),培养基,(,用于从土壤中分离真菌,)K,2,HPO,4,1g,，,MgS0,4,7H,2,O0.5g,，蛋白陈,5g,，葡萄糖,10g,，,1/30000,孟加拉红水溶液,100mL,，水,900mL,，自然,pH,，,121,湿热灭菌,30min,，待培养基融化后冷却至,5560,时加入链霉素,(,含量,30,g/mL),。,6,马铃薯培养基,(PDA)(,用于霉菌或酵母菌培养,),马铃薯,(,去皮,)200g,，蔗糖,(,或葡萄糖,)20g,，琼脂,1520g,水,1000mL,，,PH,值自然。配制万法以下,:,马铃薯去皮，切成小块，煮沸,30min,，然后用双层纱布过滤，取其滤液加糖及琼脂溶化后再补足水至,第15页,1000mL,。霉菌用蔗糖，酵母菌用葡萄糖。,7,乳酸菌培养基,(,用于乳酸发酵,),肉膏,5g,，酵母膏,5g,，蛋白胨,10g,，葡萄糖,10g,，乳糖,5g,，,NaCl5g,，水,1000mL,，,pH6.8,，,12l,湿热灭菌,20min,8,酒精发酵培养基,(,用于酒精发酵,),蔗糖,10g,，,MgSO,4,7H,2,O 05g,，,NH,4,NO,3,0.5g,，,20,豆芽汁,2mL,，,KH,2,PO,4,05g,，水,100mL,，自然,pH,。,9,无氮琼脂培养基,(,用于从土壤中分离自生固氮菌,),葡萄糖,(,或蔗糖,)10g,，磷酸氢二钾,02g,、氯化钠,02g,、硫酸镁,0.2g,、硫酸钾,02g,、碳酸钙,50g,，琼脂,20g,，蒸馏水,1000mL,10,花粉萌发培养基 蔗糖,10g,、硼酸,lmg,、琼脂,05g,、水,90mL,，放入烧杯中，在,100,水浴中溶化，冷却后加水至,100mL,备用。,第16页,