葛根素干预软骨氧化应激和Nrf2_HO-1通路改善PTOA大鼠软骨退变的机制.pdf

畜牧兽医学报 2 0 2 3,5 4(9):3 9 5 1-3 9 6 3A c t a V e t e r i n a r i a e t Z o o t e c h n i c a S i n i c ad o i:1 0.1 1 8 4 3/j.i s s n.0 3 6 6-6 9 6 4.2 0 2 3.0 9.0 3 3开放科学(资源服务)标识码(O S I D):葛根素干预软骨氧化应激和N r f 2/H O-1通路改善P T O A大鼠软骨退变的机制陈 鸿,阮红日,马天文,李亚楠,苗 雪,杨雯越,高 利,魏成威*(东北农业大学动物医学学院,黑龙江省动物疾病致病机制与比较医学重点实验室,哈尔滨 1 5 0 0 3 0)摘 要:旨在研究葛根素干预软骨氧化应激和N r f 2/HO-1通路改善创伤后骨关节炎(p o s t-t r a u m a t i c o s t e o a r t h r i-t i s,P TOA)大鼠软骨退变的作用机制,探究葛根素对骨关节炎的治疗作用。将4 0只雄性S p r a g u e-D a w l e y大鼠随机分为4组:对照组(n=8)、模型组(n=8)、塞来昔布组(n=8)和葛根素组(n=1 6)。葛根素组随机分为低剂量组(n=8)和高剂量组(n=8)。除对照组外,其余各组通过前十字韧带横断(a n t e r i o r c r u c i a t e l i g a m e n t t r a n s e c t i o n,A C L T)建立大鼠P T OA模型。低剂量组(5 0 m gk g-1)、高剂量组(1 0 0 m gk g-1)和塞来昔布组(2.8 6 m gk g-1)进行灌胃给药,对照组给予等量生理盐水,连续干预5周。每周进行关节肿胀程度、冷敏感反应和膝关节伸膝发声检测,评估大鼠关节肿胀和疼痛程度。给药结束后,收集各组大鼠膝关节和血清样本。对胫骨和股骨组织进行H E染色和改良的M a n k i n评分,以评估病理组织学变化。检测大鼠软骨中基质金属蛋白酶3(m a t r i x m e t a l l o p r o t e i n a s e 3,MMP 3)、基质金属蛋白酶1 3(MMP 1 3)和血小板反应蛋白解整合素金属肽酶4(A D AMT S 4)的水平以及血清中型胶原羧基末端肽(C T X-)和软骨寡聚基质蛋白(C OMP)的含量,以评估葛根素对大鼠骨关节炎软骨退变的改善作用。通过检测大鼠血清中抗氧化酶(S O D、G S H-P x和C A T)活力以及大鼠软骨中丙二醛(MD A)含量和N r f 2/HO-1通路水平,以评估葛根素对大鼠机体氧化损伤的保护作用。检测大鼠血清中白细胞介素-1(I L-1)、白细胞介素-6(I L-6)和肿瘤坏死因子(T N F-)水平,以评估葛根素对机体的抗炎作用。结果显示:与模型组比较,使用高剂量葛根素干预可以显著减轻大鼠关节肿胀程度和疼痛反应,改善关节软骨损伤程度,降低M a n k i n评分(P0.0 1),激活软骨中N r f 2/HO-1通路,抑制MD A、MMP 3、MMP 1 3和A D AMT S 4表达(P0.0 5),上调血清中抗氧化酶活力(P0.0 1),抑制炎症因子I L-1、I L-6和TN F-以及软骨代谢标志物C T X-和C OMP水平(P0.0 5)。综上,葛根素通过激活N r f 2/HO-1通路抑制氧化应激与炎症损伤改善P T OA大鼠软骨退变。关键词:葛根素;创伤后骨关节炎;软骨退变;氧化应激;N r f 2/HO-1通路中图分类号:S 8 5 7.1 6 文献标志码:A 文章编号:0 3 6 6-6 9 6 4(2 0 2 3)0 9-3 9 5 1-1 3收稿日期:2 0 2 3-0 3-0 1基金项目:黑龙江省自然科学基金项目(L H 2 0 2 3 C 0 2 5;YQ 2 0 2 3 C 0 1 5)作者简介:陈 鸿(1 9 9 8-),女,黑龙江佳木斯人,博士,主要从事动物运动系统疾病研究,E-m a i l:d n c h e n h o n g 9 0 91 6 3.c o m;阮红日(1 9 9 5-),男,黑龙江哈尔滨人,博士,主要从事动物运动系统疾病研究,E-m a i l:7 9 4 3 3 9 3 8 4q q.c o m,陈鸿和阮红日为同等贡献作者*通信作者:魏成威,主要从事动物疾病研究,E-m a i l:n e a u w e i w e i 1 2 6.c o mT h e M e c h a n i s m o f P u e r a r i n I m p r o v i n g C a r t i l a g e D e g e n e r a t i o n i n P T O A R a t s b y I n t e r f e r i n g w i t h O x i d a t i v e S t r e s s a n d N r f 2/H O-1 P a t h w a y o f C a r t i l a g eCHE N H o n g,RUAN H o n g r i,MA T i a n w e n,L I Y a n a n,M I AO X u e,YANG W e n y u e,GAO L i,WE I C h e n g w e i*(H e i l o n g j i a n g P r o v i n c i a l K e y L a b o r a t o r y o f P a t h o g e n e s i s a n d C o mp a r a t i v e M e d i c i n e o f A n i m a l D i s e a s e s,C o l l e g e o f V e t e r i n a r y M e d i c i n e,N o r t h e a s t A g r i c u l t u r a l U n i v e r s i t y,H a r b i n 1 5 0 0 3 0,C h i n a)A b s t r a c t:T h e a i m o f t h i s e x p e r i m e n t w a s t o i n v e s t i g a t e t h e m e c h a n i s m o f p u e r a r i n i n t h e i n t e r-畜 牧 兽 医 学 报5 4卷 v e n t i o n o f o x i d a t i v e s t r e s s o f c a r t i l a g e a n d t h e i m p r o v e m e n t o f N r f 2/HO-1 p a t h w a y o n c a r t i l a g e d e g e n e r a t i o n i n r a t s w i t h p o s t-t r a u m a t i c o s t e o a r t h r i t i s(P TOA),a n d t o e x p l o r e t h e t h e r a p e u t i c e f f e c t o f p u e r a r i n o n o s t e o a r t h r i t i s.F o r t y m a l e S p r a g u e-D a w l e y r a t s w e r e r a n d o m l y d i v i d e d i n t o f o u r g r o u p s:c o n t r o l g r o u p(n=8),m o d e l g r o u p(n=8),c e l e c o x i b g r o u p(n=8)a n d p u e r a r i n g r o u p(n=1 6).P u e r a r i n g r o u p w a s d i v i d e d i n t o l o w d o s e g r o u p(n=8)a n d h i g h d o s e g r o u p(n=8).T h e P TOA m o d e l w a s e s t a b l i s h e d b y a n t e r i o r c r u c i a t e l i g a m e n t t r a n s e c t i o n(A C L T)i n a l l g r o u p s e x c e p t t h e c o n t r o l g r o u p.L o w-d o s e g r o u p(5 0 m gk g-1),h i g h-d o s e g r o u p(1 0 0 m gk g-1)a n d c e l e c o x i b g r o u p(2.8 6 m gk g-1)w e r e a d m i n i s t e r e d b y g a v a g e,a n d t h e c o n t r o l g r o u p w a s g i v e n e q u a l a m o u n t o f s a l i n e f o r 5 w e e k s.T h e d e g r e e o f j o i n t s w e l l i n g,c o l d s e n s i t i v i t y r e s p o n s e a n d k n e e e x t e n s i o n v o c a l i z a t i o n t e s t s w e r e p e r f o r m e d w e e k l y t o a s s e s s t h e d e g r e e o f j o i n t s w e l l i n g a n d p a i n i n r a t s.A f t e r t h e a d m i n i s t r a t i o n,k n e e j o i n t a n d s e r u m s a m p l e s o f r a t s i n e a c h g r o u p w e r e c o l l e c t e d.T h e t i b i a l a n d f e m o r a l t i s s u e s w e r e s u b j e c t e d t o HE s t a i n i n g a n d a m o d i f i e d M a n-k i n s c o r e t o a s s e s s h i s t o p a t h o l o g i c a l c h a n g e s.T h e h i s t o p a t h o l o g i c a l c h a n g e s w e r e e v a l u a t e d u s i n g t h e M a n k i n m e t h o d.T h e l e v e l s o f MMP 3,MMP 1 3 a n d A D AMT S 4 i n r a t c a r t i l a g e,a s w e l l a s t h e l e v e l s o f C T X-a n d C OMP i n s e r u m w e r e m e a s u r e d t o e v a l u a t e t h e i m p r o v e m e n t o f p u e r a r i n o n c a r t i l a g e d e g e n e r a t i o n i n r a t s w i t h o s t e o a r t h r i t i s.T o e v a l u a t e t h e p r o t e c t i v e e f f e c t o f p u e r a r i n o n o x i d a t i v e d a m a g e i n r a t s,t h e a c t i v i t y o f a n t i o x i d a n t e n z y m e s(S O D,G S H-P x,a n d C AT)i n r a t s e r u m,t h e c o n t e n t o f MD A a n d t h e l e v e l o f N r f 2/HO-1 p a t h w a y i n r a t c a r t i l a g e w e r e m e a s-u r e d.D e t e c t i o n o f I L-1,I L-6 a n d T N F-i n r a t s e r u m t o e v a l u a t e t h e a n t i-i n f l a mm a t o r y e f f e c t o f p u e r a r i n o n t h e b o d y.T h e r e s u l t s s h o w e d t h a t,c o m p a r e d w i t h t h e m o d e l g r o u p,t h e h i g h d o s e g r o u p i n t e r v e n t i o n c o u l d s i g n i f i c a n t l y r e d u c e t h e d e g r e e o f j o i n t s w e l l i n g a n d p a i n r e s p o n s e i n r a t s,i m p r o v e t h e d e g r e e o f a r t i c u l a r c a r t i l a g e i n j u r y,r e d u c e t h e M a n k i n s c o r e(P0.0 1),a c t i-v a t e t h e N r f 2/HO-1 p a t h w a y i n c a r t i l a g e t i s s u e,i n h i b i t t h e e x p r e s s i o n o f MD A,MMP 3,MMP 1 3,a n d A D AMT S 4(P0.0 5),u p r e g u l a t e t h e a c t i v i t y o f a n t i o x i d a n t e n z y m e s i n s e r u m(P0.0 1),a n d i n h i b i t t h e i n f l a mm a t o r y f a c t o r I L-1,I L-6 a n d T N F-a n d t h e l e v e l s o f c a r t i l a g e m e t a b o l i c m a r k e r s C T X-a n d C OMP i n s e r u m(P0.0 5).I n s u mm a r y,p u e r a r i n i m p r o v e s c a r t i l a g e d e g e n e r a t i o n i n P TOA r a t s b y a c t i v a t i n g t h e N r f 2/HO-1 p a t h w a y t o i n h i b i t o x i d a t i v e s t r e s s a n d i n f l a mm a t o r y d a m a g e.K e y w o r d s:p u e r a r i n;p o s t-t r a u m a t i c o s t e o a r t h r i t i s;c a r t i l a g e d e g e n e r a t i o n;o x i d a t i v e s t r e s s;N r f 2/HO-1 p a t h w a y*C o r r e s p o n d i n g a u t h o r:WE I C h e n g w e i,E-m a i l:n e a u w e i w e i 1 2 6.c o m 骨关节炎是兽医临床中常见的退行性骨关节病,该病的主要特征是软骨退变导致的关节稳态失衡1,临床表现为疼痛、关节畸形和活动受限等症状2。正常的衰老、性别、遗传的生理现象以及肥胖、代谢障碍、饲养管理不规范和外伤等多因素可驱使其发生,有时单因素存在,但常见的骨关节炎是由多种因素联合导致的结果3。目前,兽医临床上骨关节炎常使用非甾体类抗炎药治疗,但仅能减轻疼痛并不能逆转疾病,并且副作用多4。因此,筛选有效、安全高效的骨关节炎防治药物尤为重要。机体氧化应激是骨关节炎软骨中活性氧(r e a c-t i v e o x y g e n s p e c i e s,R O S)过量积累的结果,能够导致软骨细胞稳态失衡,诱导炎症和软骨细胞凋亡的发生5。将 软骨细胞暴 露于过氧化 氢(h y d r o g e n p e r o x i d e,H2O2)、甲萘醌和3-吗啉基苯胺等促氧化剂可上调其炎症因子和趋化因子水平6,这表明氧化应激能够诱导软骨细胞的炎症反应。核转录因子E 2相关因子2(n u c l e a r t r a n s c r i p t i o n f a c t o r E 2 r e-l a t e d f a c t o r 2,N r f 2)是一种负责调控细胞氧化还原平衡的核转录因子。正常状态下,N r f 2保持低转录水平,而在氧化应激条件下,活化的N r f 2会与抗氧化元件结合,调控抗氧化酶血红素氧合酶1(h e m e 2593 9期陈 鸿等:葛根素干预软骨氧化应激和N r f 2/HO-1通路改善P T OA大鼠软骨退变的机制o x y g e n a s e 1,HO-1)、丙 二 醛(m a l o n d i a l d e h y d e,MD A)表达及多种抗氧化酶的活性,发挥抗氧化作用,从而提高机体抗氧化应激的防御能力7。研究发现,使用曲古抑菌素A靶向激活N r f 2/HO-1信号通路能够有效抑制I L-1诱导的软骨细胞外基质(e x t r a c e l l u l a r m a t r i x,E CM)代谢标志物基质金属蛋白酶3(m a t r i x m e t a l l o p r o t e i n a s e 3,MMP 3)、基质 金 属 蛋 白 酶1 3(m a t r i x m e t a l l o p r o t e i n a s e 1 3,MMP 1 3)和血小板反应蛋白解整合素金属肽酶4(a d i s i n t e g r i n a n d m e t a l l o p r o t e i n a s e w i t h t h r o m-b o s p o n d i n 4,A D AMT S 4)的表达8。促炎细胞因子在骨关节炎的发病机制中起核心作用,可以诱导软骨E CM降解并增加I I型胶原酶的表达,促进软骨细胞凋亡9。近期研究发现,激活N r f 2能够靶向抑制N F-B通路防止L P S诱导软骨细胞中I L-1和I L-6的上调1 0。因此,基于N r f 2/HO-1通路对于解析骨关节炎致病机制及开发临床骨关节炎靶点药物具有潜在价值。葛根素是从葛根的根部分离的一种异黄酮,其药用价值得益于其广泛的药理学特性,包括抗炎、抗氧化、抗肿瘤、缓解疼痛和免疫调节等1 1。目前发现葛根素对骨关节炎软骨退变具有改善作用,但具体机 制 尚 不 明 确。研 究 认 为 葛 根 素 能 够 激 活AMP K通路,通过促进骨关节炎大鼠软骨细胞的线粒体生物发生减轻线粒体功能障碍1 2。在碘乙酸诱导的小鼠骨关节炎模型中,使用葛根素干预可抑制受累关节单核细胞聚集并降低C-C趋化因子配体2的表达1 3。然而,葛根素对创伤后骨关节炎(p o s t-t r a u m a t i c o s t e o a r t h r i t i s,P TOA)大鼠的软骨氧化损伤作用和具体分子机制尚未可知。因此,本试验通过前十字韧带切断(a n t e r i o r c r u c i a t e l i g a-m e n t t r a n s e c t i o n,A C L T)方法建立大鼠P TOA模型,以N r f 2/HO-1通路为切入点,拟探究葛根素改善P TOA大鼠骨关节炎软骨退变的作用机制,为葛根素治疗骨关节炎的机制提供新思路,为药物研发和临床应用提供理论依据。1 材料与方法1.1 主要试剂葛根素(纯度9 9%)购自美国S i g m a公司;塞来昔布购自美国辉瑞制药有限公司;异氟烷购自北京友诚盛达生物科技有限公司;MD A、S O D、G S H-P x和C AT测定试剂盒均购自武汉亚科因生物技术有 限 公 司;大 鼠I L-1、I L-6、T N F-、C T X-和C OMP的E L I S A试剂盒均购自上海酶联生物科技有限公司。B C A试剂盒、R I P A裂解 液和高敏型E C L化学发光检测试剂盒均购自上海碧云天生物技术有限公司。GA P DH和A D AMT S 4抗体购自武汉爱博泰克生物科技有限公司,N r f 2和HO-1抗体购自英国A b c a m公司,MMP 3和MMP 1 3抗体购自江苏亲科生物研究中心有限公司。总R NA提取试 剂 盒 购 自 北 京 天 根 生 化 科 技 有 限 公 司。C h a mQ U n i v e r s a l S Y B R q P C R M a s t e r M i x试剂盒购自南京诺唯赞生物科技股份有限公司。1.2 主要仪器倒置光学显微镜(L e i c a,德国);E p o c h多功能酶标仪(B i o T e k,美国);超微量分光光度计(T h e r-m o,美国);电泳仪(B i o-R a d,美国);全自动化学发光/荧光图像分析系统(T a n n o n,中国);罗氏4 8 0实时荧光定量P C R仪(R o c h e,德国)。1.3 实验动物及分组雄性S p r a g u e-D a w l e y大鼠4 0只(体重2 0 02 2 0 g),购自哈尔滨医科大学第二附属医院动物实验中心。所有动物均饲养在温度适宜,通风良好的环境中。本研究所用实验动物和试验设计均遵循东北农业大学动物实验伦理审查相关规定。将4 0只S p r a g u e-D a w l e y大鼠随机分为4组:对照组(n=8)、模型组(n=8)、塞来昔布组(n=8)和葛根素组(n=1 6)。葛根素组随机分为低剂量组(n=8)和高剂量组(n=8)。1.4 大鼠P T O A模型建立和药物干预适应性饲养7 d后,采用A C L T方法建立大鼠P TOA模型。使用异氟烷吸入麻醉。大鼠右后肢剃毛,碘伏消毒,7 5%酒精脱碘。于大鼠右膝内侧做2 c m切口,分离皮下组织,剪开关节囊后髌骨移位,屈曲膝关节,使用手术刀切断前十字韧带。进行抽屉试验确保前十字韧带完全切断,生理盐水冲洗关节腔,可吸收缝线闭合关节囊和皮肤,碘伏消毒后放回笼中不限制其活动。建立模型1 2 h后所有大鼠正常进食和饮水。对照组只切开关节囊后缝合进行假手术。手术建模后,葛根素组的大鼠每日灌胃葛根素(低剂量组按5 0 m gk g-1、高剂量组按1 0 0 m gk g-1),葛根素的干预剂量参考先前的研究1 4,每天同一时间灌胃,连续干预5周。对照组和模型组大鼠给予等量生理盐水,塞来昔布组大鼠灌服2.8 6 m gk g-1塞3593畜 牧 兽 医 学 报5 4卷 来昔布1 5。给药结束后,所有大鼠实施安乐死。1.5 大鼠关节肿胀和疼痛行为学检测在手术建模之前,各组大鼠进行右膝关节肿胀程度和疼痛行为学检测,记录为第0周。然后在建模后的第1、2、3、4和5周各检测一次,共计6次。1.5.1 关节肿胀程度检测 根据A b o-Z a l a m等1 6的方法,使用电子游标卡尺测量每组大鼠的膝关节宽度(单位:c m),计算与第0周的差值代表大鼠膝关节的肿胀程度。1.5.2 冷敏感反应检测 根据K a t r i等1 7的方法,将大鼠放在金属网地板安静1 5 m i n后,从金属网下方将丙酮涂抹在大鼠右后爪中部,观察各组大鼠2 0 s内的行为变化并评分。评分标准:0=无反应;1=快速回缩右后爪或迅速拍打,反应时间1 0 s。每只大鼠重复操作3次,每次间隔1 0 m i n,记录3次评分总和。1.5.3 膝关节伸膝发声检测 根据前人的方法1 8。同一助手固定大鼠右侧大腿,使膝关节处于静息状态(自然微屈),握住踝关节,使膝关节伸展(在膝关节运动的生理范围内进行),关节伸展引起大鼠“吱吱声”反应行为记1分,无反应记0分。连续5次,记录伸展期间大鼠的发声总分。1.6 大鼠膝关节病理改变及M a n k i n评分将各组大鼠胫骨和股骨样本固定于4%多聚甲醛固定液中,对样本进行脱钙、包埋、制作石蜡切片,进行HE染色。HE染色结束后,通过显微镜捕获图像,并通过改良的M a n k i n分级系统1 9进行病理组织学评估。1.7 微板法检测大鼠氧化应激标志物取大鼠右膝关节软骨组织,加入R I P A后用超声破碎仪进行裂解,4下1 3 0 0 0 g离心1 0 m i n,过滤并取上清。严格按照试剂盒说明书,对软骨组织中MD A含量进行检测。采集大鼠血液,室温1 0 0 0 g离心2 0 m i n,取上清液。按照试剂盒说明书,对血清中氧化应激指标超氧化物岐化酶(s u p e r o x i d e d i s-m u t a s e,S O D)、谷胱甘肽过氧化物酶(g l u t a t h i o n e p e r o x i d a s e,G S H-P x)和 过 氧 化 氢 酶(c a t a l a s e,C AT)活性进 行检测,使用 多功能酶标 仪 测 定 吸光值。1.8 E L I S A法检测大鼠血清中软骨代谢标志物和炎症标志物 严格按照试剂盒说明书,使用E L I S A法对软骨代谢标志物I I型胶原羧基末端肽(C-t e r m i n a l t y p e I I c o l l a g e n t e l o p e p t i d e,C T X-I I)和软骨寡聚基质蛋白(C a r t i l a g e o l i g o m e r i c m a t r i x p r o t e i n,C OMP)以及炎症因子I L-1、I L-6和T N F-含量进行检测,使用多功能酶标仪测定吸光值。1.9 q R T-P C R检测软骨中N r f2和H O-1 m R N A变化 使用T r i z o l试剂提取软骨组织总R NA。使用N a n o d r o p 2 0 0 0型超微量紫外分光光度计检测各组R NA浓度及纯度。按照反转录试剂盒说明书获取样 品c D NA模 板,以C h a mQ U n i v e r s a l S Y B R q P C R M a s t e r M i x试剂进行荧光定量P C R,检测软骨组织N r f2和HO-1 mR NA的表达。引物序列如表1,其中,G A P DH为内参基因。2 0 L反应体系:2C h a mQ U n i v e r s a l S Y B R q P C R M a s t e r M i x 1 0 L,上、下游引物各0.4 L,c D NA 2 L,补充无R NA酶水至2 0 L。P C R反应条件:预变性9 5 3 0 s;循环反应9 5 1 0 s和6 0 3 0 s,共4 0个循环。使用2-C t法计算各基因相对表达水平。表1 q R T-P C R检测的引物序列T a b l e 1 T h e p r i m e r s e q u e n c e s u s e d i n q P C R a s s a y基因 G e n e引物序列(5 3)P r i m e r s e q u e n c e上游引物 F o r w a r d p r i m e r下游引物 R e v e r s e p r i m e rN r f2T C A C A C G AG A T G AG C T TA G G G C AAT A C A G T T C T G G G C G G C G A C T T TA THO-1C C C AAAA C T G G C C T G T AAAAC G T G G T C A G T C AA C A T G G A TG A PDHG A T G C C C C C A T G T T T G T G A TG G C A T G G A C T G T G G T C A T G AG1.1 0 W e s t e r n b l o t检测软骨中N r f 2/H O-1通路及E CM代谢标志物的表达 取大鼠右膝关节软骨组织,加入1 m L P B S匀浆化。使用R I P A裂解液从软骨组织中提取总蛋白。使用B C A试剂盒测定蛋白质浓度后,使用8%1 2%S D S-P AG E凝胶分离相同数量的蛋白质。将4593 9期陈 鸿等:葛根素干预软骨氧化应激和N r f 2/HO-1通路改善P T OA大鼠软骨退变的机制蛋白质条带转移到P V D F膜上。用5%脱脂牛奶封闭1.5 h后,4下与一抗孵育过夜,比例如下:N r f 2(1 1 5 0 0)、HO-1(1 1 0 0 0)、MMP 3(1 1 0 0 0)、MMP 1 3(1 1 0 0 0)、A D AMT S 4(1 1 0 0 0)和GA P-DH(1 2 0 0 0)。二抗室温孵育1 h后,使用高敏型E C L化学发光试剂在T a n n o n自动凝胶图像分析系统获得蛋白印迹条带。使用I m a g e J软件分析蛋白质灰度值。1.1 1 统计学分析本试验所有数据结果使用S P S S 1 9.0软件进行统计分析,数据结果均采用“x-s”表示,使用单因素方 差 分 析(ANOVA)进 行 组 间 比 较,并 进 行T u k e y检验。P0.0 5为差异显著,P0.0 1为差异极显著。2 结 果2.1 葛根素对P T O A大鼠关节肿胀和疼痛的影响2.1.1 葛根素缓解P TOA大鼠关节肿胀 葛根素干预后,大鼠膝关节关节肿胀程度检测结果如表2所示,术后的5周内,模型组大鼠关节宽度差逐渐增加,与对照组相比变化极显著(P0.0 1),关节肿胀严重。塞来昔布组和葛根素高剂量给药组从给药第3周至给药结束,关节宽度差与模型组相比呈显著下降趋势(P0.0 5);葛根素低剂量组给药第5周关节 宽 度 差 与 模 型 组 相 比 出 现 极 显 著 减 少(P0.0 1)。表2 葛根素干预后P T O A大鼠关节肿胀程度检测结果(x-s)T a b l e 2 D e t e c t i o n r e s u l t s o f j o i n t s w e l l i n g d e g r e e o f P T O A r a t s a f t e r p u e r a r i n i n t e r v e n t i o n(x-s)c m手术周次S u r g e r y w e e k对照组C o n t r o l g r o u p模型组M o d e l g r o u p塞来昔布组C e l e c o x i b g r o u p低剂量组L o w d o s e g r o u p高剂量组H i g h d o s e g r o u p00000010.1 7 00.0 2 4#0.4 1 60.0 4 80.4 7 20.0 5 60.4 6 10.0 4 80.4 6 90.0 3 820.2 5 60.0 2 7#0.7 8 40.0 6 80.7 3 80.0 5 70.7 4 40.0 7 60.7 2 90.0 4 930.2 7 60.0 2 7#0.9 9 40.0 8 60.8 8 90.0 1 9#0.9 5 40.0 4 80.8 9 90.0 3 4#40.2 9 70.0 3 1#1.0 3 40.1 1 40.8 5 30.0 6 1#0.9 5 30.0 3 50.8 6 30.0 2 8#50.3 1 60.0 3 1#1.0 6 30.1 0 20.7 5 40.0 5 8#0.8 7 30.0 7 2#0.6 8 00.0 5 0#以大鼠关节宽度差作为评价指标。与模型组比较,#.P0.0 5,#.P0.0 1;下表同D i a m e t e r d i f f e r e n c e o f r a t j i o n t i s t a k e n a s e v a l u a t i o n i n d e x.C o m p a r e d w i t h M o d e l g r o u p;#.P0.0 5,#.P0.0 1;T h e s a m e a s b e l o w2.1.2 葛根素缓解P TOA大鼠疼痛症状 葛根素干预后,大鼠冷敏感反应结果如表3所示,术后的5周内,与对照组相比,模型组大鼠冷敏感反应评分极显著增加(P0.0 1)。塞来昔布组和葛根素高剂量给药组从给药第2周至给药结束,冷敏感反应评分与模型组相比呈极显著下降趋势(P0.0 1)。表3 葛根素干预后P T O A大鼠冷敏感反应评分检测结果(x-s)T a b l e 3 D e t e c t i o n r e s u l t s o f c o l d s e n s i t i v i t y s c o r e o f P T O A r a t s a f t e r p u e r a r i n i n t e r v e n t i o n(x-s)手术周次S u r g e r y w e e k对照组C o n t r o l g r o u p模型组M o d e l g r o u p塞来昔布组C e l e c o x i b g r o u p低剂量组L o w d o s e g r o u p高剂量组H i g h d o s e g r o u p00.4 0 00.5 4 80.4 0 00.5 4 80.2 0 00.4 4 70.2 0 00.4 4 7010.4 0 00.5 4 8#1 0.0 0 01.0 0 01 0.6 0 01.3 4 21 0.4 0 01.1 4 09.6 0 01.1 4 020.2 0 00.4 4 7#9.8 0 00.8 3 77.4 0 00.8 9 4#8.4 0 01.1 4 06.8 0 00.8 3 7#30.4 0 00.5 4 8#9.6 0 01.1 4 06.6 0 00.8 9 4#7.8 0 00.8 3 7#5.6 0 00.8 9 4#40.2 0 00.4