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,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,本资料仅供参考，不能作为科学依据。谢谢。本资料仅供参考，不能作为科学依据。本资料仅供参考，不能作为科学依据。谢谢。本资料仅供参考，不能作为科学依据。,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,本资料仅供参考，不能作为科学依据。谢谢。本资料仅供参考，不能作为科学依据。本资料仅供参考，不能作为科学依据。谢谢。本资料仅供参考，不能作为科学依据。,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,本资料仅供参考，不能作为科学依据。谢谢。本资料仅供参考，不能作为科学依据。本资料仅供参考，不能作为科学依据。谢谢。本资料仅供参考，不能作为科学依据。,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,本资料仅供参考，不能作为科学依据。谢谢。本资料仅供参考，不能作为科学依据。本资料仅供参考，不能作为科学依据。谢谢。本资料仅供参考，不能作为科学依据。,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,本资料仅供参考，不能作为科学依据。谢谢。本资料仅供参考，不能作为科学依据。本资料仅供参考，不能作为科学依据。谢谢。本资料仅供参考，不能作为科学依据。,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,本资料仅供参考，不能作为科学依据。谢谢。本资料仅供参考，不能作为科学依据。本资料仅供参考，不能作为科学依据。谢谢。本资料仅供参考，不能作为科学依据。,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,本资料仅供参考，不能作为科学依据。谢谢。本资料仅供参考，不能作为科学依据。本资料仅供参考，不能作为科学依据。谢谢。本资料仅供参考，不能作为科学依据。,生物检定法,1/29,*,生物检定法定义：,p103,生物检定属生物法分析，是利用药品对生物体（整体动物、离体组织、微生物等）作用以测定其效价或生物活性一个方法。它以药品药理作用为基础，统计学为工具，选取特定试验设计，在一定条件下比较供试品和相当标准品所产生特定反应，经过等反应剂量间百分比计算，从而测得供试品中活性成份效价。,2/29,因为生物差异存在，生物检定结果误差较大，重现性比较差，需要控制条件较多,测定费时、计算繁琐。所以，生物检定主要用于无适当理化方法进行检定药品，补充理化检验不足。因为科学技术发展，一些品种生物检定可能被理化检验代替，而一些新药生物检定方法又在不停建立。,3/29,生物检定包含,整体,和,离体,测定,整体测定：,直接反应药品对生物综合作用，但需要动物、,需用供试品量多，耗时长、精密度和灵敏度较差。,离体测定：,个体差异小，试验时间较短，精密度和敏度较高，能在一定程度上保留药理作用特征，尤其适合用于微量激素测定，缺点是不一定能反应供试品在整体作用。,4/29,一、生物检定应用范围,1,药品效价测定,对一些理化方法不能测定含量或理化测定不能反应临床生物活性药品，可用生物检定来控制药品质量。,比如洋地黄、胰岛素、肝素、绒促性素、缩官素等生物测定法，以,及各种抗生素微生物测定法。,有些天然药品、生物制品往往因结构复杂，而且往往又是由结构类似、百分比不定各种成份组成，极难用理化方法反应其生物活性；另一些药品，尤其是一些激素类药品，其结构相近相近，而生物活性不一样；还有些药品虽可用理化方法测定含量，但含量完全不能反应效价。所以这些药品质量控制都离不开生物检定。,5/29,2.,体内微量生理活性物质测定,一些神经介质、激素等微量生理活性物质，因为其很强生理活性，在体内浓度很低，加上体液中各种物质干扰，极难用理化方法测定，而不少活性物质生物判定法因为灵敏度高，专一性强，对供试品稍作处理即可直接测定。,6/29,3.,中药质量控制,中药成份复杂，大部分中药有效成份还未搞清，难以用理化方法加以控制，一部分中药可用一些以其疗效为基础生物测定方法来控制其质量。,7/29,4,、一些有害杂质程度检验,如农药残留、热原质、抗生素及生化制剂中降压物质程度检验等。,8/29,标准品,生物检定法，普通需要应用标准品，以降低因为生物差异造成试验误差，使在不一样试验室中检定同一药品时，即使试验条件或影响原因不尽相同，但因为同时作用于标准品和供式品，在比检定中这些影响原因能够相互抵消，它们之间反应强度百分比保持不变这么就大大提升了生物检定可靠性和精密度。,药典所采取标准品：,为参考国际标准品制备标准品，由中国药品与生物制品检定所发放，单位效价相当于国际单位效价。标准品有均匀、稳定而持久性质，应存放于除去氧气干燥器中，低温处避光贮放。,9/29,效价检定基本内容,（一）生物反应是生物检定基础,被测物特有生物学作用都可作为生物法分析基础，比如生长素含有促进生长、蛋白质同化、脂肪动员作用，可致糖尿、血酮，影响盐类代谢，已据之设计出各种生长素生物学定量法（见书上表,5-1,）。,10/29,（二）剂量与反应关系,生物检定是利用药品不一样剂量引发生物体反应程度改变以进行药品效价测定，要计算效价，首先要研究剂量与反应之间关系。,在生物检定中，剂量与反应间普通都是曲线关系，可经过各种坐标转换方法，使剂量与反应间呈直线关系，即数学表示式为简单直线方程：,y=a+bx,，最便于处理和应用。生物反应基本上可分为以下两种类型，即质反应和量反应。,11/29,*1,质反应,当一定剂量药品注入动物体内后，观察某一反应或反应某一特定程度出现是否比如死或不死，惊厥或不惊厥，只有出现与不出现两种情况，故不能用量来表示个体反应程度，只能用一组动物中出现正（或负）反应百分率来表示，如死亡率、惊厥率，这类称质反应。,12/29,在质反应中，将动物分组，分别给以不一样剂量，经过调整剂量，使最大剂量组靠近但,不全部产生阳性反应，最小剂量组靠近但不全部产生阴性反应，则各组阳性反应动物百分率随剂量增加而递升，剂量与反应率之间关系是一条长尾“肩斜”形曲线，如,将剂量转换为对数，反应率转换为适当函数后则呈直线关系，常见转换方法有概率单位,logit,、角度等。,13/29,*2,量反应,药品对生物体所引发反应伴随药品剂量增加产生量变能够测量者，称为量反应比如血压改变值，血糖浓度、组织器官重量增减，抑菌圈直径大小等。时反应虽有一些特殊性，但基本上仍可属于量反应，它是观察某一反应或反应某种程度出现所需时间，比如血液凝结时间、动物生存时间等。,14/29,（三）对比检定,生物检定目标是将供试品（,T,）和已知效价标准品,(S),进行效力对比，依据它们反应程度，求供试品效力相当于标准品效力倍数，再从中计算出供试品效价，所以它属于对比检定。,15/29,胰岛素生物检定法,胰岛素是从哺乳动物胰,8,胰岛口细胞中提取一个蛋白类激素，为六方系结晶，相对分子量,6000,，易溶于,80%,乙醇和酸性水溶液，在,pH2.5,酸性溶液中比较稳定。,*,胰岛素主要药理作用,是降低血糖，大剂量注入可引发惊厥、休克甚至死亡。,16/29,胰岛素生物检定法,-,详细方法,本品效价测定采取生物检定法，基于其有降低血糖作用而采取小鼠血糖法、小鼠惊厥法、家兔血糖法。长期有效制剂延效作用只能用血糖法。,17/29,肝素生物检定法,肝素系由健康牛、猪、羊等食用动物肺、肝、肠粘膜中提取有延长凝血时间作用粘多糖类物质，为白色或淡黄色无晶形粉末，有吸湿性，在水中易溶。本品相对分子质量及抗凝血效价随动物种属和脏器起源不一样而有差异，相对分子质量为,6000-0,，由肝肺提出肝素，每,mg,不得低于,110U,，由肠粘膜提出肝素，每,mg,不得低于,140U,。*,*,本品在中性及微碱性中较稳定。,18/29,肝素生物检定法,-,详细方法,肝素生物检定法是依据对数剂量与血凝时间对数呈线性关系而设计，惯用有兔全血法，硫酸钠兔全血法，另外还有使用牛、羊血法测定肝素效价方法。,19/29,抗生素微生物检定法,因为抗生素多为结构复杂多组分物质，异构体多，且不稳定，轻易产生降解杂质故各国药典均以微生物检定法为主要含量测定法。因为抗生素药品医疗作用主要是它抗菌活力，而微生物检定法正是以抗生素抗菌活力为指标来衡量抗生素效价一个方法。其测定原理与临床要求相一致，能直接反应抗生素医疗价值，所以一直是各国药典所采取主要测定方法。,20/29,微生物检定法测定抗生素效价,，普通可分为：,稀释法,比浊法,琼脂扩散法,以,琼脂扩散法应用最为广泛，为当前国际上测定抗生素效价通用方法。,21/29,*琼脂扩散法,-,管碟法原理,琼脂扩散法，亦称管碟法。系利用抗生素在琼脂培养基内扩散作用，采取量反应平行线原理设计，比较标准品与供试品二者对接种试验菌产生抑菌圈大小，以测定供试品效价一个方法。,22/29,将不锈钢小管安置在摊布特定试验菌琼脂培养基平板上，当小管内加入抗生素溶液后，抗生素分子就随溶剂向培养基内呈球形扩散。同时将培养基平板置培养箱中培养，试验菌就开始繁殖。抗生素分子在琼脂培养基中浓度，随离开小管距离增大而降低。当抗生素分子扩散到,T,时间，这时琼脂培养基中抗生素浓度恰高于该抗生素对试验菌最低 抑菌浓度，试验菌繁殖被抑制而展现出透明抑菌圈。在抑菌圈边缘处，琼脂培养基,中所含抗生素浓度即为该抗生素对试验菌最低抑菌浓度。将已知效价抗生素标准溶液与未知效价供试品溶液在一样试验条件下进行培养，比较二者抑菌圈大小。,23/29,因为同质抗生素对特定试验菌所得两条剂量反应曲线为平行直线，故可依据此原理，设计一剂量法、二剂量法及三剂量法（,中国药典,只收载了二剂量法和三剂量法）等，从而能够较准确地对比出供试品效价。,24/29,*影响效价测定原因,1,试验菌种,2,培养基,3,双碟制备,4,双碟培养温度和时间,25/29,生物制品效力检定,生物制品效力,，从试验室检定来讲，一是指制品中有效成份含量水平，二是指制制品在机体中建立自动免疫或被动免疫后所引发抗感染作用能力。,对于诊疗用具，其效力则表现在诊疗试验特异性和敏感性。制品质量，主要是从效力上表达出来。无效制品，不但没有使用价值，而且可能给防疫、治疗或诊疗工作带来贻误疫情或病情严重后果。所以，必须十分重视制品效力检定，有制品必要时还要进行人体效果观察。,26/29,效力检定方法有两大类：一是体外测定法；二是机体内试验法。,依据各类制品不一样性质，又有各种不一样检测方法。大致能够分以下几类。,27/29,一、动物保护力试验,将制品对动物进行自动（或被动）免疫后，用活菌、活毒或毒素攻击，从而判定制品保护力水平。,二活菌数和活病毒数滴定,P136,三、类毒素和抗毒素生物测定,四、血清学试验,五、其它有效力测定试验,28/29,Thank you,29/29,
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