含三嗪结构的联苯类化合物的设计合成、PD-1_PD-L1抑制活性筛选以及分子对接研究.pdf

文章Aug.20232023年8 月Journal of Liaocheng University(Nat.Sci.)Vol.36No.4第3 6 卷第4期聊城大学学报（自然科学版）编号1672-6634(2023)04-0082-11DOI10.19728/j.issn1672-6634.202302001含三嗪结构的联苯类化合物的设计合成、PD-1/PD-L1抑制活性筛选以及分子对接研究黄坤，马俊杰（华侨大学医学院，福建泉州36 2 0 0 0）摘要基于联苯类PD-1/PD-L1小分子抑制剂的作用模型，运用生物电子等排原理，设计并合成得到了24个含三嗪结构的联苯类小分子化合物，其结构经HRMS和iH-NMR确证。采用均相时间分辨荧光法(HTRF)，对目标化合物进行了体外PD-1/PD-L1抑制活性筛选，结果表明，化合物6 a、6 b、6 d、6 k 和6 m在1mol/L浓度下表现出较好的抑制活性，抑制率均大于50%，其中，化合物6 a抑制活性最强，抑制率为6 3.8 3%，同时，根据抑制活性结果初步分析了构效关系。最后，为了指导下一步的结构优化工作，对6 a开展了分子对接工作，阐明了6 a与PD-L1蛋白的作用方式。关键词肿瘤免疫;PD-1/PD-L1；设计；活性筛选；分子对接中图分类号R979.1文献标识码A开放科学（资源服务）标识码（OSID）Design,Synthesis,PD-1/PD-L1 Inhibitory ActivityScreening and Molecular Docking Study of BiphenylCompounds Bearing Triazine StructureHUANG Kun,MA Junjie(School of Medicine,Huaqiao University,Quanzhou 362000,China)AbstractBased on the structure of biphenyl PD-1/PD-L1 small molecule inhibitors,24 biphenyl smallmolecule compounds bearing triazine structure were designed and synthesized based on the bioisostere prin-ciple,and their structures were confirmed by HRMS and H-NMR.Using homogeneous time-resolvedfluorescence(HTRF)method,the inhibitory activities of target compounds against PD-/PD-L1 interactionin vitro were screened,and the results showed that compounds 6a,6b,6d,6k and 6m exhibited good in-hibitory activities with inhibition rates greater than 5o%,among them,compound 6a displayed the stron-gest inhibitory activity with the inhibition rate of 63.83%.To guide the further structural optimization,molecular docking of 6a was carried out to clarify the binding interaction with PD-Ll protein.Keywordstumor immunity;PD-1/PD-Ll;design;activity screening;molecular docking收稿日期：2 0 2 3-0 2-2 2基金项目：国家自然科学基金项目（8 16 0 2 97 0）；福建省自然科学基金面上项目（2 0 2 1J01309）资助通讯作者：马俊杰，男，彝族，博士，副教授，研究方向：靶向药物设计，E-mail：ma j u n j i e 36 12 h q u.e d u.c n。83黄坤，等：含嗪结构的联本类化合物的设计、PD-1/PD-L1抑制活性筛选以及分子对接研究第4期1引言从免疫的角度分析，肿瘤的失控生长和过度增殖是由于肿瘤细胞可以通过多种机制逃避机体免疫系统的查杀而引起的1。近年来，针对免疫检查点共抑制信号通路设计开发抑制剂，特异性激活自身T细胞的免疫应答，在肿瘤免疫治疗领域已经取得了重大突破2-4。其中,PD-1/PD-L1作为免疫检查点共抑制信号通路中的重要靶点，对重新激活肿瘤免疫系统扮演着至关重要的作用。设计开发PD-1/PD-L1抑制剂，抑制PD-1与PD-L1结合，抑制免疫逃逸，也已成为肿瘤免疫治疗领域的研究热点5.6 。目前,PD-1/PD-L1抑制剂，主要分为两类，一类为抗体药物门，如Opdivo、K e y t r u d a 和Tecentriq等。另一类为小分子抑制剂8 ，此类药物的研究要晚于抗体药物，大部分处于临床前/临床研究阶段，典型且活性显著的是百时美施贵宝(BMS)公司公开的一系列联苯类小分子PD-1/PD-L1抑制剂9-11，见图1。研究表明，此类化合物能够特异性的诱导PD-L1蛋白二聚化，进而阻断PD-1与PD-L1结合12 。通过分析此类抑制剂与PD-L1蛋白的作用模型发现13-15，分子中2-甲基联苯结构(图1，紫色部分)是此类抑制剂的核心药效团，该结构可以伸入到PD-L1蛋白疏水口袋中，分别与两条PD-L1蛋白产生重要的疏水作用，如T型的元-元作用，元-烷基作用等。分子中部的芳基或杂芳基（图1,绿色部分）可与一条PD-L1蛋白链上的Tyr56形成平行的元-元堆积作用。同时，还可以在芳环上引人不同的取代基，提供额外的元一元作用和氢键作用，从而增强抑制活性，如比较典型的为间氰基苄基等；分子末端为亲水性柔性链（图1,蓝色部分），伸向了二聚化PD-L1蛋白的溶剂区，位于结合口袋的开口处，对取代基的大小没有过多限制，允许有较大的变化，链上广泛分布着的氢键供体和受体基团，一方面与PD-L1蛋白形成丰富的氢键结合作用，另一方面，调节化合物的亲水性。BMS-37BMS-202ICso=6-100nmol/LICso=18nmol/LLinkerRHydrogenbondedgroupCoregroupAryl/heteroarylgroupOHCOOHOHOHCIBMS-1001BMS-1166IC5o=2.2nmol/LICso=1.4 nmol/L图1联苯类小分子抑制剂及其药效团模型在本文中，参考以上的构效关系，为了保证与PD-L1蛋白疏水口袋形成重要的疏水作用，作者保留了结构中2-甲基联苯核心结构。其次，采用生物电子等排原理，将结构中部的芳基替换为1，3，5-三嗪基团。然后，为了进一步增强化合物的抑制活性，在三嗪结构上引入氰基苄基，并考察不同位置取代的氰基对抑制活性的影响。最后，在分子末端引人不同的小分子胺基团，一方面改善化合物的亲水性，另一方面与PD-L1蛋白形成多种氢键作用，增强与靶蛋白的结合力。基于以上思想，作者设计了一系列含三嗪结构的联苯类小分子化合物，见图2。84聊城大学报（自然科学版）LinkerHydrogen bonded groupRibioisostereRKHCoregroupAryl/heteroarylgroupTargetcompounds图2日标化合物的设计2结果与讨论2.1化学合成目标化合物的合成如方案1所示，以市售的3-溴-2-甲基苯甲酸为原料，在硫酸催化下，与甲醇进行甲酯化得到中间1。中间体1经四氢铝锂还原后得到中间体2。中间体2 再分别与取代的苯硼酸酯（a或b）发生C-C偶联反应得到中间体3a和3b。接着，3a和3b分别与三聚氯氰发生亲核取代反应得到中间体4a和4b。然后，4a和4b分别与不同位置取代的氰基苄醇经亲核取代反应得到中间体5a-5f。最后，5a-5f再分别与不同的小分子胺经亲核取代反应制得目标化合物6 a6 x。目标化合物的结构经 H-NMR和HRMS确证，具体数据见后文实验部分。OBa orbivi23a-3bV14a-4b5a-5f6a-6xoraAI方案1目标化合物的合成路线。试剂和条件：(i）H SO，M e O H，6 5，2 4h；（i）Li A I H 4，T H F，0，2 h;(ili)N2,a or b,Cs2COs,PdCl2(dppf),Dioxane,80,12 h;(iv)D C M,D I PEA,2,4,6-Trichloro-1,3,5-triazine,-1o,2 h;(v)C y a n o b e n z y l a lc o h o l,NaH,THF,-10,1o h;(v i)a m in e,D M F,r t,1 h.2.2PD-1/PD-L1体外抑制活性评价和分析采用均相时间分辨荧光法（HTRF），以BMS-37为阳性对照药，评价了目标化合物在1mol/L浓度下对PD-1/PD-L1信号通路的体外抑制活性。实验结果见表1。如表1所示，与阳性对照药BMS-37相比，部分化合物在1mol/L的浓度下均表现出一定的抑制活性，化合物6 a、6 b、6 d、6 k 和6 m表现出较好的抑制活性，抑制率均大于50%，其中化合物6 a抑制活性最强，抑制率为6 3.8 3%。进一步分析发现，3位氰基（-CN)取代的目标化合物（6 a6 g）的抑制活性要普遍强于4位氰基（6 h6 n）或2 位氰基取代的化合物（6 o6 t），抑制活性顺序为3-位氰基 4-位氰基 2-位氰基。黄坤，等：含第4期三嗪结构的联苯类化合、PD-1/PD-L1抑制活性筛选以及分子对接研究V85通过分析R1上取代基对活性的影响发现，R1上上取代基的改变并没有表现出明显的构效关系。表1目标化合物6 a-6t的体外PD-1/PD-L1抑制活性NH6a-6t抑制率(%)抑制率(%)化合物R1-CN化合物R1-CN(1 mol/L)(1 mol/L)6a3-CN63.831.996k4-CN51.053.296b3-CN61.40 13.97614-CN32.624.24H6c3-CN48.305.026m4-CN58.062.65H.OH6d3-CN55.657.066n4-CNNDH6e3-CN47.5010.78602-CN10HH6f3-CN39.642.036p2-CN10HHOH6g3-CN43.605.876q2-CN10HH6h4-CN32.850.726rH2-CN10H6i4-CNND6s2-CN20.810.51HH6j4-CN42.582.446t2-CN10HHBMS-3796.180.26注:BMS-37:positive control drug;ND:not determined。基于表1中化合物活性的分析，我们初步确定了3-位氰基取代的苄醇为最适基团后，作者在保留3-位氰基苄基的基础上，在联苯结构的苯基末端并合了乙二醇基，设计合成得到了化合物6 u6 x，并测试了化合物在1mol/L浓度下对PD-1/PD-L1体外抑制活性，结果如表2 所示。虽然6 u6 x 还保持有一定的PD-1/PD-L1抑制活性，但与化合物6 a6 d 相比，抑制活性均发生了一定程度的下降，说明乙二醇基并不适于引入到此系列的结构中。86聊城大学学报（自然科学版）表2目标化合物6 u-6x的体外PD-1/PD-L1抑制活性CN6u-6x抑制率(%)抑制率(%)化合物R1化合物R1(1 mol/L)(1 mol/L)6u43.281.966W44.392.55HH6v30.800.596x23.962.40HHBMS-3796.18 0.26注：BMS-37:positive control drug。2.3分子对接为了阐明化合物与PD-L1蛋白的作用方式，指导下一步的结构优化设计工作，作者采用计算机辅助药物设计软件AutoDock4.2.6和Pymol2.3.0开展了优选化合物6 a与PD-L1蛋白的分子对接工作，结果如图3所示，化合物6 a位于二聚化PD-L1蛋白的深疏水型孔道中，与BMS-37均作用于相同的结合位点。进一步分析发现，6 a结构中的末端苯基可与PD-L1蛋白的一条链上的Tyr56形成T型的元-元疏水作用，间氰基苄基和三嗪基分别与Tyr123和另一条链上的Tyr56形成元-元堆叠作用，并且，结构中的氰基可与Arg125形成氢键相互作用。值得说的是，分子结构中另一端的小分子胺基团并没有与PD-L1蛋白产生预想的多种氢键结合作用，而此部分氢键结合作用的丢失很有可能是该化合物没有表现出强效抑制活性的重要原因，同时也间接的解释了R1基团的变化没有表现出明显构效关系的原因，因此，对此部分进行进一步的结构优化，增加氢键结合作用，将是我们下一步研究工作的方向之一。TYR-56TYR-125iARG-125TYR-56234.7TYR-1233.05.94.004.0TYR-56图3化合物6 a与PD-L1(PDBID：5N2 D)的分子对接结果（grey：6 a）3结论本文参考联苯类PD-1/PD-L1小分子抑制剂作用模型，采用生物电子等排原理，设计合成得到了2 487黄坤，等：含嗪结构的联苯类化合、PD-1/PD-L1抑制活性筛选以及分子对接研究第4期含三嗪结构的联苯类小分子化合物，并对其进行了体外PD-1/PD-L1抑制活性筛选工作。结果发现化合物6a抑制活性最强，抑制率为6 3.8 3%，值得进一步研究。同时，通过构效关系分析发现，3-氰基取代苄醇基对抑制活性的贡献要大于4位氰基或2 位氰基，在联苯结构的苯基末端引人乙二醇基并不适宜于此系列结构，会导致活性的降低。最后，对6 a开展了分子对接研究，阐明了6 a与PD-L1蛋白的作用方式，为下一步的结构优化设计指明了方向。本研究对进一步设计含三嗪结构的强效PD-1/PD-L1小分子抑制剂具有一定的指导意义和参考价值。4实验部分4.1化学合成实验中所用的试剂及溶剂均为市售的分析纯，核磁共振氢谱采用BrukerARX-500（Br u k e r Bi o s c i e n c e，Billerica，M A，U SA)核磁共振仪测定；高分辨质谱采用AgilentAccurate-MassQ-TOF6530测定；柱色谱硅胶（2 0 0 30 0 目）为青岛海洋化工厂生产；除有特别注明外，所有试剂和溶剂均直接使用。4.1.13-溴-2-甲基苯甲酸甲酯（1)的合成。将3-溴-2-甲基苯甲酸(10 g，46.5m m o l)加人至10 0 mL无水甲醇中，室温下搅拌，加人2 mL浓硫酸，回流反应2 4h。T LC检测反应完毕后，冷却至室温，旋干溶剂，加水搅拌，析出固体。抽滤得淡黄色固体10.5g，收率98%。H-NMR（50 0 M H z，D M SO-d。）7.7 1（t，J=8 Hz,2H),7.10(d,J=8 Hz,1H),3.90(s,3H),2.63(s,3H).4.1.23-溴-2-甲基苄醇（2）的合成。将1(10 g，43.6 5m m o l)加人至50 mL无水四氢呋喃中，搅拌降温至0，分批缓慢加入四氢铝锂（1.2 7 g，33.58 m m o l)，加毕，0 反应2 h。T LC检测反应完毕后，将反应液滴加到冰水中，用稀盐酸调节pH至弱酸性，乙酸乙酯（150 mL3）萃取，无水NazSO4干燥有机层后，浓缩得棕色油状物8.6 g，收率98%。H-NMR(500MHz，D M SO-d 6）7.48(d，J=8.1H z，1H)，7.38(d，J=7.6 Hz,1H),7.11(t,J=7.8 Hz,1H),5.25(td,J=5.4,1.0 Hz,1H),4.52(d，,J=5.4 H z,2H),2.30(s,3H).4.1.33-芳基-2-甲基苯基甲醇（3a3b）的合成。氮气保护下，将2（5.1g，2 5.3m m o l)加人至40 mL1.4-二氧六环中，室温下搅拌，加人a或b（2 3m m o l）和Cs2CO：（2 2.5g，6 9m m o l），通氮气30 min后，加人PdCl（d p p f)（0.9g，1.1m m o l），8 0 反应12 h。T LC检测反应完毕后，静置冷却至室温，硅藻土抽滤，滤液浓缩后，加水搅拌，二氯甲烷（150 mL3）萃取，无Na2SO4干燥有机层后，浓缩得黑色固体粗品，采用石油醚/乙酸乙酯体系进行柱色谱分离得白色固体或淡黄色油状物3a3b。（3-1,1-联苯-2-甲基苯基）甲醇（3a），白色固体4.1g，收率7 8%。（3-（2，3-二氢苯并6 1,4 二嗯英-6-基）-2-甲基苯基）甲醇（3b），淡黄色油状物4.8 g,收率 7 3%。4.1.42,4-二氯-6-取代基-1,3,5-三嗪（4a4b）的制备。室温搅拌下，将三聚氯氰（1.8 g，10 m m o l)和DIPEA(1.8mL，10 m m o l)加人到10 mL二氯甲烷中,降温至-10,滴加3a或3b（5m m o l)的10 mL二氯甲烷溶液，滴毕，一10 反应2 h。T LC检测反应完毕后，旋干溶剂得黄色固体，粗品采用石油醚/乙酸乙酯体系进行柱色谱分离得黄色固体4a4b。2，4-二氯-6-（2-甲基-1,1-联苯-3-基）甲氧基)-1,3,5-三嗪（4a），黄色固体1.5g，收率8 7%。2，4-二氯-6-（3-（2,3-二氢苯并b1，4 二嗯英-6-基）-2-甲基苄基）氧基)-1,3,5-三嗪（4b)，黄色固体1.7 g，收率8 6%。4.1.5（4-氯-6-取代基）-1,3,5-三嗪-2-基）氧基）甲基）苄（5a5f）的制备。将不同位置取代的氰基苄醇（0.46 g，3.4m m o l)加人至10 mL无水四氢呋喃中，搅拌降温至0 加人氢化钠（0.16 g，3.7 m m o l)，搅拌10 min配成溶液A。另取干燥的四氢呋喃10 mL加人到10 0 mL反应瓶中，加入4a或4b（2.9m m o l），搅拌降温至一10。缓慢滴加溶液A，滴毕，-10 反应10 h。T LC检测反应完毕后，加水，二氯甲烷（150mLX3）萃取。无水NaSO4干燥有机层后，浓缩得白色固体5a5f。3-（4-氯-6-（2-甲基-1,1-联苯-3-基）甲氧基）-1,3,5-三嗪-2-基）氧基）甲基）芊腈（5a），黄色固体1.1g，收率8 6%。4-（4-氯-6-（2-甲基-1,1-联苯-3-基）甲氧基)-1,3,5-三嗪-2-基）氧基）甲基）苄腈（5b)，黄色固体1.2 g，收率8 9%。2-（4-氯-6-（2-甲基-1,1-联苯-3-基)甲氧基)-1,3,5-三嗪-2-基)氧基)甲基）苄腈（5c），黄色固体1.1g，收率8 5%。88聊城大学学报（自然科学版）3-（4-氯-6-（3-（2,3-二氢苯并6 1，4 二嗯英-6-基）-2-甲基苄基）氧基）-1,3,5-三嗪-2-基）氧基）甲基）苄腈（5d)，白色固体1.2 g，收率8 5%。4-（4-氯-6-（3-（2,3-二氢苯并6 1,4 二嗯英-6-基)-2-甲基苄基)氧基)-1,3,5-三嗪-2-基）氧基）甲基）腈（5e)，白色固体1.3g，收率8 8%。2-（4-氯-6-（3-(2,3-二氢苯并61,4 二嗯英-6-基)-2-甲基苄基）氧基）-1,3，5-三嗪-2-基）氧基）甲基）苄腈（5f)，白色固体1.1g，收率83%。4.1.6目标化合物（6 a6 x）的合成。温搅拌下，分别将5a-5f（0.2 3m m o l)和小分子胺（0.56 mmol)加人至2 mLDMF中，室温反应1h。反应完毕后，加入10 mL水搅拌，析出固体，抽滤得白色固体，粗品采用二氯甲烷/甲醇体系进行柱色谱分离得白色固体6 a6 x。3-（4-（2-（二甲基氨基)乙基)氨基）-6-（2-甲基-1,1-联苯-3-基）甲氧基)-1,3,5-三嗪-2-基）氧基）甲基）芊腈（6 a），白色固体，收率43%；HNMR（50 0 M H z，D M SO-d。）7.98 7.93（m，1H），7.91（s，1H),7.82(d,J=7.8 Hz,1H),7.78(d,J=7.8,1H),7.61(t,J=7.8 Hz,1H),7.487.43(m,2H)，7.42 7.3 6(m,2 H),7.3 2 7.2 9(m,2 H),7.2 8 7.2 4(m，1H),7.2 0(d,J=6.8 H z,1H),5.43(d,J=3.5 Hz,2H),5.39(d,J=4.5 Hz,2H),3.503.42(m,2H),2.672.59(m,2H),2.34(s,6H),2.18(d,J=2.3 Hz,3H).HRMS(ESI)for C2gH3oN.O2M+HJ+.Calcd:494.243 0,found:495.251 3。3-（4-（2-（二乙氨基）乙基)氨基）-6-（(2-甲基-1,1-联苯-3-基）甲氧基)-1,3,5-三嗪-2-基）氧基）甲基）苄腈（6 b），白色固体，收率44%；HRMS（ESI）f o r CH 34N.O,M+H J+.Ca l c d:52 2.2 7 43，f o u n d:523.282 5。3-（4-（3-（二甲基氨基)丙基)氨基）-6-（2-甲基-1,1-联苯-3-基）甲氧基）-1,3,5-三嗪-2-基）氧基）甲基）苄腈（6 c），白色固体，收率49%；HNMR（50 0 M H z，D M SO-d）8.0 7 8.0 2（m，1H)，7.91（s，1H),7.82(d,J=7.8 Hz,1H),7.78(d,J=7.8 Hz,1H),7.61(t,J=7.8 Hz,1H),7.477.43(m,2H),7.417.35(m,2 H),7.32 7.2 9(m,2 H),7.2 8 7.2 4(m,1H)，,7.19(d,J=7.5H z,1H),5.42(d,J=7.4 Hz,2H),5.38(d,J=6.4 Hz,2H),3.353.23(m，2 H),2.40 2.31(m,2 H)，2.2 0(s,6H),2.18(d,J=2.4 Hz,3H),1.721.6 1(m,2 H).H RM S(ESI)fo r C 3o H 32 N.O 2 M+H J+.C a lc d:508.2586,found:509.2671。3-（4-（3-（二乙氨基)丙基)氨基）-6-（2-甲基-1,1-联苯-3-基）甲氧基）-1,3,5-三嗪-2-基）氧基）甲基）芊腈（6 d)，白色固体，收率44%；HNMR（50 0 M H z，D M SO-d。）8.148.0 7（m，1H），7.91（s，1H),7.82(d,J=7.8 Hz,1H),7.78(d,J=7.9 Hz,1H),7.637.58(m,1H),7.47 7.44(m,2 H),7.427.36(m,2 H),7.32 7.2 8(m,2 H),7.2 8 7.2 5(m,1H),7.2 0(d,J=7.6 H z,1H),5.43(d,J=4.1 Hz,2H),5.38(d,J=7.0 Hz,2H),3.363.24(m,4H),2.942.6 4(m,4H),2.18(d,J=2.3 Hz,3H),1.861.6 8(m,2 H),1.18 0.9 3(m,6 H).H RM S(ESI)fo r C 32 H 36 N.O 2 M+H J+.C a lc d:536.2900,found:537.2993。叔丁基（2-（4-（3-氰基苄基）氧基)-6-（2-甲基-1,1-联苯-3-基）甲氧基)-1,3,5-三嗪-2-基）氨基）乙基)氨基甲酸酯（6 e)，白色固体，收率46%；HNMR（50 0 M H z，D M SO-d。）8.0 0 7.95（m，1H），7.91(d,J=12.0 Hz,1H),7.82(d,J=7.8 Hz,1H),7.78(d,J=9.2 Hz,1H),7.61(t,J=7.8 Hz,1H),7.487.43(m,2H),7.427.35(m,2H),7.337.29(m，2 H),7.2 8 7.2 4(m,1H),7.2 0(d,J=7.7Hz,1H),6.88(t,J=5.9 Hz,1H),5.44(d,J=3.7 Hz,2H),5.38(d,J=4.8 Hz,2H),3.333.27(m,2H),3.143.02(m,2H),2.19(d,J=2.3Hz,3H),1.36(d,J=4.9Hz,9H).HRMS(ESI)for C32H34 N.O4M+HJ+.Calcd:566.264 2,found:567.272 6。N-(2-（4-（3-氰基苄基)氧基）-6-（(2-甲基-1,1-联苯基-3-基)甲氧基)-1,3,5-三嗪-2-基)氨基）乙基）乙酰胺（6 f)，白色固体，收率47%；1HNMR(500MHz，D M SO-d。）8.0 2 7.98（m，1H)，7.94（t，J=6.0 Hz,1H),7.92(d,J=8.9 Hz,1H),7.82(d,J=7.8 Hz,1H),7.79(t,J=6.8 Hz,1H),7.61(t,J=7.8 Hz,1H),7.487.44(m,2 H)，7.437.36(m，2 H)，7.32 7.30(m,2 H)，7.2 7(t，J=7.7黄坤，等：含嗪结构的联术类化合台PD-1/PD-L1抑制活性筛选以及分子对接研究第4期89Hz,1H),7.20(d,J=7.5 Hz,1H),5.43(d,J=6.4 Hz,2H),5.38(d,J=6.2 Hz,2H),3.333.27(m,2H),3.233.12(m,2H),2.19(d,J=7.4 Hz,3H),1.79(d,J=5.7Hz,3H).HRMS(ESI)forC2.H2N.O:M+HJ+.Calcd:508.2223,found:509.230 4。3-（4-（(2-羟乙基）氨基)-6-（2-甲基-1,1-联苯-3-基）甲基氧基)-1,3,5-三嗪-2-基）氧基）甲基）腈(6g)，白色固体，收率：43%；HNMR(500MHz，D M SO-d。）7.957.92(m，1H)，7.91(s，1H)，7.8 2(d,J=7.7 Hz,1H),7.79(d,J=7.9 Hz,1H),7.61(t,J=7.7Hz,1H),7.487.44(m,2 H),7.427.37(m,2 H),7.32 7.30(m,2 H),7.2 7(t,J=7.6 H z,1H),7.2 0(d,J=7.5H z,1H),5.41(d,J=8.4 Hz,2H),5.38(d,J=8.3 Hz,2H),4.754.68(m,1H),3.543.45(m,2H),3.383.35(m,2H),2.18(d,J=6.2 Hz,3H);HRMS(ESI)for C2H2sN,O:M+HJ+.Calcd:467.195 7,found:468.2041.4-（4-（2-（二甲基氨基)乙基)氨基)-6-（2-甲基-1,1-联苯-3-基）甲氧基）-1,3,5-三嗪-2-基）氧基）甲基）芊睛（6 h），白色固体，收率44%；HNMR（50 0 M H z，D M SO-d。）7.92 7.8 7（m，1H），7.8 6（s，1H),7.85(s，1H),7.6 0(d d,J=8.1,3.5H z,2 H),7.48 7.43(m，2 H)，7.42 7.36(m，2 H)，7.337.2 8(m,2 H),7.2 7(t,J=7.6 H z,1H),7.2 0(d,J=7.5 H z,1H),5.49 5.35(m,4H),3.42 3.35(m,2H),2.402.2 9(m,2 H),2.18(d,J=2.4 H z,3 H),2.14(s,3 H),2.12(s,3 H);H RMS(ESI)for C2g H3o N.O2M+HJ+.Calcd:u494.243 0,found:495.250 8.4-（4-（2-（二乙氨基）乙基）氨基-6-（2-甲基-1,1-联苯-3-基）甲氧基）-1，3,5-三嗪-2-基）氧基）甲基）苄（6 i)，白色固体，收率44%；HNMR(500MHz，D M SO-d。）7.8 97.8 1（m，3H)，7.6 0（t，J=8.2 Hz,2H),7.487.42(m,2H),7.38(q,J=7.1 Hz,2H),7.337.28(m,2H),7.26(t,J=7.4Hz，1H)，7.19(d,J=7.4H z,1H),5.49 5.35(m，4H)，3.35 3.2 6(m,2 H)，2.512.39(m,6 H),2.17(s,3H),0.960.88(m,6H);HRMS(ESI)for Cs H34 N.O2M+HJ+.Calcd:522.274 3,found:523.2827.4-（4-（3-（二甲基氨基)丙基)氨基）-6-（2-甲基-1,1-联苯-3-基)甲氧基)-1,3,5-三嗪-2-基)氧基）甲基）苄腈（6 j)，白色固体，收率41%；HNMR（50 0 M H z，D M SO-d。）8.0 7 7.99（m，1H），7.8 5（d，J=8.0 Hz,2H),7.60(d,J=8.0 Hz,2H),7.487.42(m，,2 H),7.42 7.35(m,2 H),7.30(d,J=7.4 Hz,2H)，7.2 6(td，J=7.4,2.3 H z,1H),7.19(d,J=7.4H z,1H),5.47 5.3 6(m,4H),3.3 3 3.23(m,2H),2.262.19(m,2 H),2.18(d,J=5.1 H z,4H),2.11(s,6 H),1.6 7 1.53(m,2 H);HRMS(ESI)for C3oH32NO,M+HJ+.Calcd:508.258 7,found:509.267 0.4-（4-（3-（二乙氨基)丙基）氨基）-6-（2-甲基-1,1-联苯-3-基）甲氧基）-1,3,5-三嗪-2-基）氧基）甲基）腈（6 k），白色固体，收率43%；HNMR（50 0 M H z，D M SO-d。）8.10 8.0 1（m，1H)，7.8 5（d，J=8.1 Hz,2H),7.60(d,J=8.1 Hz,2H),7.497.43(m,2H),7.417.36(m,2 H),7.30(d,J=7.4 Hz,2H),7.26(t,J=7.6 Hz,1H),7.20(d,J=7.4 Hz,1H),5.495.35(m,4H),3.32 3.2 3(m,2H)，2.50 2.33(m,6 H),2.18(d,J=6.4 H z,3H),1.6 7 1.52(m,2 H),1.0 0 0.8 6(m,6 H);HRMS(ESI)for C32H3.N.O2M+HJ+.Calcd:536.290 0,found:537.299 2.叔丁基（2-（4-（4-氰基苄基）氧基）-6-（2-甲基-1,1-联苯-3-基）甲氧基)-1,3,5-三嗪-2-基)氨基）乙基）氨基甲酸酯（6 1)，白色固体，收率44%；HNMR（50 0 M H z，D M SO-d。）8.0 17.93（m，1H），7.8 6(d,J=8.2 Hz,2H),7.61(dd,J=14.1,7.9 Hz,2H),7.497.43(m,2 H),7.40(d t，,J=14.9,7.8Hz,2H),7.337.29(m,2H),7.27(t,J=7.6 Hz,1H),7.20(d,J=7.4 Hz,1H),6.916.8 4(m,1H)，5.45(d,J=16.2 H z,2 H),5.40(d,J=2 4.4H z,2 H),3.3 43.2 6(m,2 H),3.13 3.0 1(m,2H),2.18(d,J=10.4 Hz,3H),1.36(d,J=5.7 Hz,9H);HRMS(ESI)for C32H34NO4M+HJ+.Calcd:566.264 2,found:567.272 3.N-(2-（4-（4-氰基苄基)氧基)-6-（2-甲基-1,1-联苯-3-基甲氧基）-1，3,5-三嗪-2-基）氨基）乙基）乙酰胺（6 m),白色固体,收率50%;HNMR(500MHz，D M SO-d。）8.0 37.9 6(m，1H)，7.9 4（t，J=90聊城大学报（自然科学版）5.8 Hz,1H),7.86(d,J=8.0 Hz,2H),7.657.58(m，2 H),7.48 7.43(m,2 H),7.42 7.36(m,2H),7.337.29(m,2H),7.27(t,J=7.6Hz,1H),7.20(d,J=7.6 Hz,1H),5.515.34(m,4H),3.343.28(m,2H),3.243.12(m，2 H),2.18(d，,J=7.7 H z,3H),1.7 9(d,J=5.9 H z,3H);HRMS(ESI)for C2g H2s N.O:M+HJ+.Calcd:508.222 3,found:509.230 4。2-（4-（2-羟乙基)氨基）-6-（2-甲基-1,1-联苯基-3-基）甲氧基)-1,3,5-三嗪-2-基)氧基）甲基）苄腈(6n)，白色固体,收率43%;HNMR(500MHz，D M SO-d。）7.97 7.8 9(m，1H)，7.8 5(d，J=8.1H z,2H),7.657.57(m,2H),7.487.42(m,2 H),7.42 7.35(m,2 H),7.31(d，J=7.9 H z,2 H)，7.2 7(t,J=7.6 Hz,1H),7.20(d,J=7.6 Hz,1H),5.44(d,J=9.7 Hz,2H),5.40(d,J=16.6 Hz,2H),4.71(q，J=5.7 H z,1H),3.56 3.42(m，2 H),3.39 3.33(m，4H),2.18(d，J=6.9 H z，,3H);HRMS(ESI)for C27 H2s N,O:M+HJ+.Calcd:467.195 7,found:468.203 2。2-（4-（2-（二甲基氨基)乙基)氨基)-6-（2-甲基-1,1-联苯-3-基）甲氧基)-1,3,5-三嗪-2-基）氧基）甲基）苄腈（6 0)，白色固体，收率45%；HNMR（50 0 M H z，D M SO-d。）7.937.8 9（m，1H)，7.7 5（t，J=7.6 Hz,1H)，7.7 2 7.6 5(m，1H)，7.6 0 7.54(m，1H)，7.48 7.43(m，2 H)，7.437.35(m,2H),7.31(d,J=7.3 Hz,2H),7.27(t,J=7.6 Hz,1H),7.20(d,J=7.4 Hz,1H),5.51(d,J=22.2 Hz,2H),5.42(d,J=21.8 Hz,2H),3.453.36(m，2 H),2.432.33(m,2 H),2.18(d,J=2.6Hz,3H),2.16(d,J=5.2 Hz,6H);HRMS(ESI)for C2gH3oN.O2M+HJ+.Calcd:494.243 0,found:495.2509.2-（4-（2-（二乙氨基)乙基)氨基)-6-（2-甲基-1,1-联苯-3-基）甲氧基)-1,3,5-三嗪-2-基）氧基）甲基）腈（6 p），白色固体，收率45%；HNMR(500MHz，D M SO-d。）8.0 6（t，J=5.3H z，1H)，7.91(d，J=7.7Hz,1H),7.75(td,J=7.5,3.3 Hz,1H