红豆杉对糖尿病肾病模型大鼠PI3K_Akt信号通路的干预作用.pdf

基金项目:上海市普陀区中医临床重点专科建设项目(p t z y z k 2 1 0 9)作者简介:熊艳文(1 9 7 4-),女,副主任医师,研究方向:中医肾病临床研究,E-m a i l:x i o n g y a n w e n y e a h.n e t。本文引用:熊艳文,蔡 振,丁 阳,等.红豆杉对糖尿病肾病模型大鼠P I 3 K/A k t信号通路的干预作用J.新疆医科大学学报,2 0 2 3,4 6(8):9 9 7-1 0 0 2.d o i:1 0.3 9 6 9/j.i s s n.1 0 0 9-5 5 5 1.2 0 2 3.0 8.0 0 2红豆杉对糖尿病肾病模型大鼠P I 3 K/A k t信号通路的干预作用熊艳文1,蔡 振2,丁 阳1,周圆圆1(上海市利群医院1中医科,2泌尿外科,上海 2 0 0 3 3 3)摘要:目的 探讨红豆杉能否通过P I 3 K/A k t信号通路改善糖尿病肾病大鼠的肾功能,减轻肾部纤维化。方法 1 0 0只S D大鼠中随机选取2 0只作为对照组(行腹腔手术但不摘除右肾,注射6 0 m g/k g体重生理盐水);剩余8 0只S D大鼠建立糖尿病肾病模型,造模成功后随机分为模型组、厄贝沙坦组、红豆杉组、红豆杉+L Y 2 9 4 0 0 2组,各2 0只。检测各组大鼠血液和尿液样本各项指标;蛋白印迹法(W e s t e r n-B l o t)检测肾脏炎症损伤及P I 3 K/A k t信号通路相关蛋白;取各组大鼠肾脏组织,计算脏器指数;苏木素-伊红(HE)染色观察大鼠肾脏病理学改变情况;M a s s o n染色观察大鼠肾脏胶原纤维 情况。结 果 与对照 组比较,模型 组大鼠空腹 血糖(F P G)、2 4 h尿 蛋白(2 4 h UT P)、胆固醇(T C)、甘油三酯(T G)、低密度脂蛋白(L D L)、血肌酐(S c r)、尿素氮(B UN)水平及血管细胞黏附分子-1(V C AM-1)、纤溶酶原激活物抑制剂1(P A I-1)蛋白表达水平、脏器指数明显升高,空腹胰岛素(I N S)水平降低(P0.0 5);与模型组比较,厄贝沙坦组、红豆杉组、红豆杉+L Y 2 9 4 0 0 2组F P G、2 4 h UT P、T C、T G、L D L、S c r、B UN水平及V C AM-1和P A I-1蛋白表达水平、脏器指数明显降低,I N S水平升高(P0.0 5),其中红豆杉+L Y 2 9 4 0 0 2组改变最为明显(P0.0 5)。染色结果显示,与模型组比较,厄贝沙坦组、红豆杉组、红豆杉+L Y 2 9 4 0 0 2组大鼠的肾间质和肾小管病理改善明显,肾小体肿胀减轻明显,大鼠的肾小球和肾小管间质中蓝色胶原纤维明显减少,其中红豆杉+L Y 2 9 4 0 0 2组大鼠肾间质和肾小管病理改变、肾小体肿胀、肾脏纤维化改善情况最明显。与对照组比较,模型组大鼠肾组织中p-P I 3 K/P I 3 K、p-AK T/AK T、p-mTO R/mTO R的比值明显升高(P0.0 5);与模型组比较,厄贝沙坦组、红豆杉组、红豆杉+L Y 2 9 4 0 0 2组大鼠肾组织中p-P I 3 K/P I 3 K、p-AK T/AK T、p-mTO R/mTO R的比值明显降低(P0.0 5),其中红豆杉+L Y 2 9 4 0 0 2组最明显(P0.0 5)。结论 红豆杉可能通过抑制P I 3 K/A k t信号通路改善糖尿病肾病大鼠的肾功能,降低炎症反应,减轻肾部纤维化。关键词:糖尿病肾病;红豆杉;P I 3 K/A k t信号同步;纤维化;肾功能中图分类号:R 5 4 2.2 文献标识码:A 文章编号:1 0 0 9-5 5 5 1(2 0 2 3)0 8-0 9 9 7-0 6d o i:1 0.3 9 6 9/j.i s s n.1 0 0 9-5 5 5 1.2 0 2 3.0 8.0 0 2E f f e c t o f T a x u s c h i n e n s i s o n P I 3 K/A k t s i g n a l i n g p a t h w a y i n d i a b e t i c n e p h r o p a t h y m o d e l r a t sX I O N G Y a n w e n1,C A I Z h e n2,D I N G Y a n g1,Z H O U Y u a n y u a n1(1D e p a r t m e n t o f T r a d i t i o n a l C h i n e s e M e d i c i n e;2U r i n a r y S u r g e r y,S h a n g h a i L i q u n H o s p i t a l,S h a n g h a i 2 0 0 3 3 3,C h i n a)A b s t r a c t:O b j e c t i v e T o e x p l o r e w h e t h e r T a x u s c h i n e n s i s c a n i m p r o v e r e n a l f u n c t i o n a n d a l l e v i a t e r e n a l f i-b r o s i s i n d i a b e t e s r a t s t h r o u g h P I 3 K/A k t s i g n a l i n g p a t h w a y.M e t h o d s 2 0 o u t o f 1 0 0 S D r a t s w e r e r a n-d o m l y s e l e c t e d a s c o n t r o l g r o u p(a b d o m i n a l s u r g e r y w i t h o u t r i g h t k i d n e y r e m o v a l,i n j e c t i o n o f 6 0 m g/k g 第4 6卷 第8期新 疆 医 科 大 学 学 报V o l.4 6 N o.8 2 0 2 3年8月J o u r n a l o f X i n j i a n g M e d i c a l U n i v e r s i t yA u g.2 0 2 3 b o d y w e i g h t s a l i n e).T h e r e m a i n i n g 8 0 S D r a t s w e r e e s t a b l i s h e d d i a b e t i c n e p h r o p a t h y m o d e l.A f t e r s u c-c e s s f u l m o d e l i n g,t h e y w e r e r a n d o m l y d i v i d e d i n t o m o d e l g r o u p,I r b e s a r t a n g r o u p,T a x u s c h i n e n s i s g r o u p a n d T a x u s c h i n e n s i s+L Y 2 9 4 0 0 2 g r o u p,w i t h 2 0 r a t s i n e a c h g r o u p.B l o o d a n d u r i n e s a m p l e s w e r e c o l l e c t-e d a n d t e s t e d i n e a c h g r o u p.W e s t e r n-b l o t w a s u s e d t o d e t e c t r e n a l i n f l a mm a t o r y i n j u r y r e l a t e d p r o t e i n s a n d P I 3 K/A k t s i g n a l i n g p a t h w a y r e l a t e d p r o t e i n s.T h e k i d n e y t i s s u e o f t h e e a c h g r o u p w a s r e m o v e d a n d t h e k i d n e y i n d e x w a s c a l c u l a t e d.H e m a t o x y l i n e o s i n(HE)s t a i n i n g w a s u s e d t o o b s e r v e p a t h o l o g i c a l c h a n-g e s i n t h e k i d n e y s o f t h e r a t s,w h i l e M a s s o n s t a i n i n g w a s u s e d t o o b s e r v e t h e c o l l a g e n f i b e r s i n k i d n e y s o f t h e r a t s.R e s u l t s C o m p a r e d w i t h t h e c o n t r o l g r o u p,t h e l e v e l s o f F P G,2 4-h o u r UT P,T C,T G,L D L,S c r,B UN,V C AM-1 a n d P A I-1 p r o t e i n e x p r e s s i o n,o r g a n i n d e x w e r e i n c r e a s e d,w h i l e I N S l e v e l s d e-c r e a s e d i n t h e m o d e l g r o u p (P0.0 5).C o m p a r e d w i t h t h e m o d e l g r o u p,t h e l e v e l s o f F P G,2 4 h UT P,T C,T G,L D L,S c r,B UN,V C AM-1 a n d P A I-1 p r o t e i n e x p r e s s i o n,o r g a n i n d e x w e r e d e c r e a s e d,a n d I N S l e v e l i n c r e a s e d i n t h e I r b e s a r t a n g r o u p,T a x u s c h i n e n s i s g r o u p,a n d T a x u s c h i n e n s i s+L Y 2 9 4 0 0 2 g r o u p (P0.0 5),a n d T a x u s c h i n e n s i s+L Y 2 9 4 0 0 2 g r o u p w a s t h e m o s t s i g n i f i c a n t(P0.0 5).C o m p a r e d w i t h t h e m o d e l g r o u p,t h e p a t h o l o g i c a l c h a n g e s o f r e n a l i n t e r s t i t i u m a n d t u b u l e s o f t h e r a t s i n t h e I r b e s a r t a n g r o u p,T a x u s c h i n e n s i s g r o u p a n d T a x u s c h i n e n s i s+L Y 2 9 4 0 0 2 g r o u p w e r e s i g n i f i c a n t l y i m p r o v e d,t h e s w e l l i n g o f r e n a l c o r p u s c l e w a s s i g n i f i c a n t l y r e d u c e d,a n d t h e b l u e c o l l a g e n f i b e r s i n t h e g l o m e r u l u s a n d t u b u l o i n t e r s t i-t i u m o f t h e r a t s w e r e s i g n i f i c a n t l y r e d u c e d.I n t h e T a x u s c h i n e n s i s+L Y 2 9 4 0 0 2 g r o u p,t h e p a t h o l o g i c a l c h a n g e s o f r e n a l i n t e r s t i t i u m a n d t u b u l e s w e r e t h e m o s t o b v i o u s,t h e s w e l l i n g o f r e n a l c o r p u s c l e w a s t h e m o s t o b v i o u s,a n d t h e r e n a l f i b r o s i s w a s m o r e o b v i o u s.C o m p a r e d w i t h t h e c o n t r o l g r o u p,t h e r a t i o o f p-P I 3 K/P I 3 K,p-AK T/AK T a n d p-mTO R/mTO R i n t h e r e n a l t i s s u e o f t h e m o d e l g r o u p r a t s w e r e s i g n i f i-c a n t l y i n c r e a s e d(P0.0 5).C o m p a r e d w i t h t h e m o d e l g r o u p,t h e r a t i o s o f p-P I 3 K/P I 3 K,p-AK T/AK T,p-mTO R/mTO R i n k i d n e y t i s s u e o f t h e r a t s i n I r b e s a r t a n g r o u p,T a x u s c h i n e n s i s g r o u p a n d T a x u s c h i n e n s i s+L Y 2 9 4 0 0 2 g r o u p w e r e s i g n i f i c a n t l y l o w e r(P0.0 5),a n d T a x u s c h i n e n s i s+L Y 2 9 4 0 0 2 g r o u p w a s t h e m o s t s i g n i f i c a n t(P0.0 5).C o n c l u s i o n T a x u s m a y i m p r o v e r e n a l f u n c t i o n,r e d u c e i n f l a mm a t i o n a n d r e d u c e r e n a l f i b r o s i s i n r a t s w i t h d i a b e t i c n e p h r o p a t h y b y i n h i b i t i n g t h e P I 3 K/AK T s i g n a l i n g p a t h w a y.K e y w o r d s:d i a b e t i c n e p h r o p a t h y;t a x u s c h i n e n s i s;P I 3 K/A k t s i g n a l s y n c h r o n i z a t i o n;f i b r o s i s;r e n a l f u n c t i o n 糖尿病肾病是糖尿病主要的微血管并发症之一,是多基因参与的复杂疾病1,也是导致终末期肾病和患者死亡的主要原因,其早期诊断依据是肾小管损伤和足细胞,而肾小球的高滤过是引起近端小管功能障碍的主要影响因素之一2。有研究表明,肾小管中的补体C 3的激活,可介导免疫级联效应,导致肾脏炎症及肾部纤维化的病理改变3。说明免疫介导在糖尿病肾病中也发挥着重要作用。在发达国家,有2 0%以上的糖尿病患者在1 0年后会发展为糖尿病肾病,5 0%以上的糖尿病患者在2 0年后会发展为糖尿病肾病4,若病情未能有效控制,会发展为终末期肾病。在我国,约有5%的糖尿病肾病患者进展为终末期肾病5,严重影响患者的生活质量。因此,探讨糖尿病肾病的发展机制,寻找有效的治疗手段具有重要意义。红豆杉味甘、微苦,性平,入肺、胃、大肠经,具有解毒散积、活络止痛、利水消肿的功效6,具有降血糖、抗氧化和抗应变性等药理作用7。有研究报道,红豆杉具有抑制肝糖原分解和葡萄糖吸收、降低血脂、改善自由基代谢和保护胰岛细胞的作用8。P I 3 K/A k t作为一条经典的信号通路,具有调节糖原合成、糖代谢、细胞增殖、细胞死亡、蛋白合成等功能9。相关研究报道,P I 3 K/A k t信号通路参与糖尿病肾病的发展1 0。因此本研究旨在观察红豆杉对糖尿病肾病模型大鼠相关指标、肾脏的作用及对P I 3 K/A k t信号通路的影响,为红豆杉治疗糖尿病肾病提供实验依据。1 材料与方法1.1 实验动物 健康雄性S D大鼠1 0 0只,体重1 8 02 1 0 g,购自上海斯莱克实验动物有限公司 许可证号:S C X K(沪)2 0 2 2-0 0 0 4。动物饲养于恒温2 22 4,灯光昼夜交替照明(1 2 h/1 2 h),5只为一笼,保证适宜活动空间,自由饮用纯净水和进食普通标准饲料,适应性饲养2周。1.2 试剂与仪器 红豆杉(重庆赛诺生物药业股份有限公司);厄贝沙坦分散片(潍坊中狮制药有限公司);P I 3 K/A k t信号通路靶向抑制剂L Y 2 9 4 0 0 2、链脲佐菌素(S T Z)(美国S i g m a公司);B C A蛋白质定899 新 疆 医 科 大 学 学 报第4 6卷 量试剂盒(武汉博士德生物工程有限公司);血管细胞黏附分子-1(V C AM-1)、纤溶酶原激活物抑制剂1(P A I-1)(美国P r o t e i n t e c h G r o u p公司);磷脂酰肌醇3激酶(P I 3 K)、磷酸化P I 3 K(p-P I 3 K)、蛋白激酶B(AK T)、磷酸化AK T(p-AK T)、磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(p-mTO R)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTO R)一抗、羊抗鼠I g G二抗(美国C e l l S i g n a l i n g T e c h n o l o g y公司);血糖和胰岛素放免试剂盒(南京建成公司);R I P A裂解液(上海碧云天生物技术有限公司)。1.3 动物建模与分组 1 0 0只S D大鼠中随机选取2 0只作为对照组(行腹腔手术但不摘除右肾,注射6 0 m g/k g体重生理盐水);剩余8 0只S D大鼠适应性喂养1周后,水合氯醛腹腔注射麻醉,摘除右肾,1周后,腹腔注射6 0 m g/k g体重链脲佐菌素(S T Z),诱导 高 血 糖 症。7 2 h后,测 定 大 鼠 的 空 腹 血 糖(F P G),若空腹血糖1 6.7 mm o l/L即为造模成功。8 0只大鼠均造模成功,随机分为模型组、厄贝沙坦组、红豆杉组、红豆杉+L Y 2 9 4 0 0 2组,各2 0只。给药方法:(1)对照组给予1 0 m L/k g体重的生理盐水灌胃;(2)模型组给予1 0 m L/k g体重的生理盐水灌胃;(3)厄贝沙坦组给予1 7.5 m g/k g体重的厄贝沙坦灌胃;(4)红豆杉组给予3.2 6 m g/k g体重的红豆杉水煎剂灌胃;(5)红豆杉+L Y 2 9 4 0 0 2组给予3.2 6 m g/k g的红豆杉水煎剂灌胃的同时腹腔注射2.0 n gm L-1k g-1体重的L Y 2 9 4 0 0 2,连续给药8周。1.4 实验方法1.4.1 大鼠各项指标检测 药物干预8周后,收集尿液,3 5 0 0 r/m i n离心1 0 m i n,取上清,全自动生化仪测定各组大鼠2 4 h尿蛋白(2 4 h UT P)。1 0%水合氯醛腹腔注射麻醉,剖开腹腔,迅速抽取腹主动脉血,3 0 0 0 r/m i n离心1 0 m i n,取上清,采用血糖仪检测空腹血糖(F P G);E L I S A 试剂盒检测空腹胰岛素(I N S)水平;全自动生化分析仪检测胆固醇(T C)、甘油三酯(T G)、低密度脂蛋白(L D L)、血肌酐(S c r)及尿素氮(B UN)水平。1.4.2 肾脏炎症损伤相关蛋白、P I 3 K/A k t信号通路相关蛋白检测 取约3 0 m g大鼠肾脏组织,研钵研碎,R I P A裂解液裂解,提取肾组织蛋白,B C A试剂盒检测蛋白浓度,凝胶电泳分离总蛋白,转移至膜上。5%脱脂牛奶室温封闭1 h。应用V C AM-1(15 0 0稀释)、P A I-1(15 0 0稀释)、p-P I 3 K(11 0 0 0稀释)、P I 3 K(11 0 0 0稀释)、p-AK T(11 0 0 0稀释)、AK T(11 0 0 0稀释)、p-mTO R(11 0 0 0稀释)、mTO R(11 0 0 0稀释)一抗4孵育过夜。T B S T洗膜,加入辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠I g G(12 0 0稀释)二抗,室温孵育1 h,T B S T洗膜,增强化学发光法(E C L)显色、暗室内曝光及图像分析。1.4.3 脏器指数测定 每组取1 0只大鼠,迅速取双肾,分离膜组织,生理盐水清洗后吸干,称重记录肾脏重量,计算脏器指数。脏器指数=脏器重量(m g)/体重(g)1 0 0%。1.4.4 苏木素-伊红(H E)染色 每组取1 0只大鼠的肾脏组织,1 0%福尔马林固定,乙醇脱水,二甲苯透明,石蜡包埋,切片3 m。苏木精染色1 5 m i n,自来水返蓝,伊红染色2 m i n,酒精脱水,二甲苯透明,中性树胶封固,光镜观察大鼠肾脏病理学改变情况。1.4.5 M a s s o n染色 取大鼠肾脏组织,1 0%福尔马林固定,石蜡包埋,切片3 m,常规二甲苯脱蜡,系列酒精水化,苏木精染色1 m i n,冲洗液冲洗,丽春红酸性品红液染色3 0 s,冲洗液清洗,磷钼酸分色6 m i n,亮绿蓝染色5 m i n,2%冰醋酸2 m i n,乙醇脱水,二甲苯透明,树脂固定,光镜下观察大鼠肾脏纤维化程度。1.5 统计学处理 所有数据采用S P S S 2 3.0统计软件进行分析,计量资料符合正态分布的采用均数标准差(x-s)表示,组间两两比较采用t检验,多组间比较采用单因素方差分析,P0.0 5为差异有统计学意义。2 结果2.1 各组大鼠相关指标的比较 与对照组比较,模型组F P G、2 4 h UT P、T C、T G、L D L、S c r和B UN水平明显升高,I N S水平降低,差异有统计学意义(P0.0 5);与模型组比较,厄贝沙坦组、红豆杉组、红豆杉+L Y 2 9 4 0 0 2组F P G、2 4 h UT P、T C、T G、L D L、S c r和B UN水平明显降低,I N S水平升高,差异有 统 计 学 意 义(P 0.0 5),其 中 红 豆 杉+L Y 2 9 4 0 0 2组以上指标变化最明显,见表1。2.2 各组大鼠肾脏炎症损伤相关蛋白表达比较 与对照组比较,模型组V C AM-1和P A I-1蛋白表达明显升高,差异有统计学意义(P0.0 5);与模型组比较,厄贝沙坦组、红豆杉组、红豆杉+L Y 2 9 4 0 0 2组V C AM-1和P A I-1蛋白表达明显降低,差异有统计学意义(P0.0 5),其中红豆杉+L Y 2 9 4 0 0 2组中V C AM-1和P A I-1蛋 白 表 达 降 低 最 明 显(P0.0 5),见表2、图1。999 第8期 熊艳文,等:红豆杉对糖尿病肾病模型大鼠P I 3 K/A k t信号通路的干预作用表1 各组大鼠各项指标比较(x-s)组 别nF P G/(g/L)2 4 h UT P/(m g/2 4 h)I N S/(I U/m L)T C/(mm o l/L)T G/(mm o l/L)L D L/(mm o l/L)S c r/(m o l/L)B UN/(mm o l/L)对照组1 05.0 70.1 4 9.3 22.1 8 1 7.9 12.7 4 1.5 60.3 4 0.6 10.0 7 1.0 60.0 4 2 3.1 92.6 2 6.8 50.3 9 模型组1 03 2.1 93.4 7a5 0.3 63.2 4a1 0.0 61.9 8a9.1 30.7 1a3.2 60.2 7a4.0 90.3 1a5 4.7 82.9 8a2 1.5 20.7 3a厄贝沙坦组1 01 1.5 24.9 7b3 1.2 52.6 7b1 4.8 73.1 4b6.8 10.6 3b1.3 20.2 5b2.7 10.2 9b3 3.1 23.5 7b1 6.0 30.6 3b红豆杉组1 01 0.7 85.1 5b2 9.9 22.5 9b1 5.2 93.0 7b6.2 90.5 9b1.2 70.2 8b2.6 50.2 6b3 2.7 63.5 5b1 5.2 70.5 8b红豆杉+L Y 2 9 4 0 0 2组1 08.6 41.5 7b1 6.2 43.1 8b1 6.6 42.9 6b4.8 10.9 3b0.9 60.1 1b1.5 30.1 4b2 8.2 92.7 5b1 1.8 71.3 6b F1 1.9 7 32 2.8 7 91 6.5 7 21 9.1 4 78.9 4 61 1.7 4 31 9.5 8 21 2.2 8 4 P0.0 0 10.0 0 10.0 0 10.0 0 10.0 0 10.0 0 10.0 0 10.0 0 1 注:与对照组比较,aP0.0 5;与模型组比较,bP0.0 5。表2 各组大鼠肾脏炎症损伤相关蛋白表达比较(x-s)组 别nV C AM-1蛋白P A I-1蛋白对照组1 01.0 30.0 7 0.3 10.0 5 模型组1 03.2 60.4 6a2.7 50.3 9a厄贝沙坦组1 01.5 10.2 5b1.4 60.2 7b红豆杉组1 01.4 70.2 3b1.4 20.2 4b红豆杉+L Y 2 9 4 0 0 2组1 01.2 20.1 8b1.1 90.1 5b F1 7.6 2 31 3.4 8 2 P0.0 0 10.0 0 1 注:与对照组比较,aP0.0 5;与模型组比较,bP0.0 5。图1 各组大鼠肾脏炎症损伤相关蛋白表达2.3 各组大鼠脏器指数和肾脏病理学改变 与对照组脏器指数(6.2 50.3 7)比较,模型组大鼠脏器指数(1 5.2 13.4 6)明显升高,差异有统计学意义(P0.0 5);与模型组脏器指数比较,厄贝沙坦组(1 2.5 31.8 1)、红豆杉组(1 1.6 21.7 6)、红豆杉+L Y 2 9 4 0 0 2组(9.0 31.1 2)大鼠脏器指数明显降低,差异有统计学意义(P0.0 5),其中红豆杉+L Y 2 9 4 0 0 2组大鼠脏器指数降低最为明显。H E染色结果显示,对照组大鼠的肾小球和肾小管未见异常;模型组大鼠肾脏的病理组织结构紊乱,出现病理性损伤,肾小管间质水肿,肾小球系膜基质和系膜细胞中度增生,肾小体肿大,炎症因子浸润;经厄贝沙坦和红豆杉干预后,与模型组比较,厄贝沙坦组、红豆杉组、红豆杉+L Y 2 9 4 0 0 2组大鼠的肾间质和肾小管病理明显改善,肾小体肿胀明显减轻;其中红豆杉+L Y 2 9 4 0 0 2组大鼠的肾间质和肾小管病理改善最为明显,肾小体肿胀减轻最明显,见图2。2.4 各组大鼠肾脏胶原纤维的组织学变化 M a s-s o n染色结果显示,对照组大鼠肾脏组织中未观察到蓝色胶原纤维;模型组大鼠肾小球和肾小管间质中出现高密度的蓝色胶原纤维;经厄贝沙坦和红豆杉干预后,与模型组比较,厄贝沙坦组、红豆杉组、红豆杉+L Y 2 9 4 0 0 2组大鼠的肾小球和肾小管间质中蓝色胶原纤维明显减少;其中红豆杉+L Y 2 9 4 0 0 2组肾脏纤维化改善较为明显,见图3。图2 各组大鼠肾脏病理学改变情况图3 各组大鼠肾脏胶原纤维的组织学变化0001 新 疆 医 科 大 学 学 报第4 6卷 2.5 各组大鼠肾组织中P I 3 K/A k t信号通路相关蛋白表达的比较 与对照组比较,模型组大鼠肾组织中p-P I 3 K/P I 3 K、p-A K T/A K T、p-m T O R/m T O R的 比值明显升高,差异有统计学意义(P0.0 5);与模型组比较,厄贝沙坦组、红豆杉组、红豆杉+L Y 2 9 4 0 0 2组大鼠肾组织中p-P I 3 K/P I 3 K、p-AK T/AK T、p-m T O R/m T O R的比值明显降低,差异有统计学意义(P0.0 5),其中红豆杉+L Y 2 9 4 0 0 2组大鼠肾组织中p-P I 3 K/P I 3 K、p-A K T/A K T、p-m T O R/m T O R的比值降低最明显,见表3、图4。表3 各组大鼠肾组织中P I 3 K/A k t信号通路相关蛋白表达比较(x-s)组 别np-P I 3 K/P I 3 Kp-AK T/AKTp-mT O R/mT O R对照组1 00.9 90.1 1 1.0 10.0 6 0.9 70.0 9 模型组1 02.2 70.1 9a1.8 50.1 7a1.9 30.2 1a厄贝沙坦组1 01.2 80.1 4b1.3 10.1 5b1.4 20.1 8b红豆杉组1 01.2 50.1 9b1.2 90.2 1b1.3 80.1 5b红豆杉+L Y 2 9 4 0 0 2组1 01.1 30.1 4b1.1 50.1 8b1.2 10.1 2b F1 6.5 2 91 4.8 1 61 3.2 7 4 P0.0 0 10.0 0 10.0 0 1 注:与对照组比较,aP0.0 5;与模型组比较,bP0.0 5。图4 各组大鼠肾组织中P I 3 K/A k t信号通路相关蛋白表达3 讨论在糖尿病肾病早期,肾脏已经发生结构性病变,肾小球基底膜增厚,间质纤维化并伴有肾小管萎缩和动脉玻璃样变性1 0,晚期出现大量的淋巴细胞和巨噬细胞浸润,超微结构上存在内皮细胞开窗减少或丢失1 1。肾小球病变、肾小管萎缩及间质纤维化是肾脏预后的独立危险因素,肾小球和间质病变的严重程度与肾脏预后相关1 2。有研究表明,使用肾素-血管紧张素系统抑制剂可延迟糖尿病肾病进展,保护肾脏1 3,但使用肾素-血管紧张素系统抑制剂治疗时,应考虑对肾小球滤过率偏低或大幅下降患者带来的潜在风险,因此寻找有价值的治疗策略,对延缓糖尿病肾病的进展具有重要意义。红豆杉在 本草纲目 有记载,适用于治疗霍乱、伤寒和排毒,具有抗高血糖、抗惊厥、解热、抗氧化、抗炎和镇痛等多种生物学功能1 4。有研究表明,复方红豆杉胶囊在肺腺癌的治疗中具有显著疗效1 5,其联合化疗治疗内分泌耐药晚期乳腺癌效果也良好,可改善患者临床证候和生存质量1 6。基于此,本研究探讨红豆杉对糖尿病肾病 大鼠肾功能 的 改 善 作 用 以 及 对P I 3 K/A k t信号通路的影响,以便为中医药防治糖尿病肾病提供合理的实验依据。本研究结果显示,红豆杉、红豆杉+L Y 2 9 4 0 0 2可降低F P G、2 4 h UT P、T C、T G、L D L、S c r和B UN水平,提高I N S水平,且红豆杉+L Y 2 9 4 0 0 2效果最为明显。说明红豆杉在一定程度上保护肾脏免受糖尿病造成的损伤,改善血脂水平和肾功能。也有研究表明,红豆杉对糖尿病肾病大鼠肾功能有一定的保护作用1 7。糖尿病患者中P A I-1水平增高可以抑制 细 胞 外 基 质 降 解,导 致 肾 部 纤 维 化1 8。V C AM-1主要介导炎症细胞在肾间质积聚,致使局部炎症反应,调节基质的黏附、增殖和聚集,促进肾部纤维化1 9,说明V C AM-1和P A I-1在糖尿病肾病的炎症反应和肾部纤维化中起作用。本研究结果1001 第8期 熊艳文,等:红豆杉对糖尿病肾病模型大鼠P I 3 K/A k t信号通路的干预作用显示,红豆杉及红豆杉+L Y 2 9 4 0 0 2可降低V C AM-1和P A I-1蛋白表达,表明红豆杉在一定程度上可降低炎症反应。HE染色和M a s s o n染色观察结果显示,红豆杉及红豆杉+L Y 2 9 4 0 0 2可明显改善肾间质、肾小管病理和肾脏纤维化,减轻肾小体肿胀。提示红豆杉在一定程度上具有改善肾脏功能,保护肾脏组织,减轻肾部纤 维化的作用,且红豆杉+L Y 2 9 4 0 0 2的作用最为明显。P I 3 K/A k t信号通路参与糖尿病肾 病肾小球 内皮细 胞 增 殖 和 血 管 新生2 0。P I 3 K是激活该信号通路的关键物质,可激活下游的蛋白激酶B(A k t),会将该信号通路激活,足细胞会分泌大量的型胶原,使细胞外基质增多,基底膜增厚,导致肾小球硬化5。可见P I 3 K/A k t信号通路在糖尿病肾病中起重要作用。本研究结果表明,红豆杉、红豆杉+L Y 2 9 4 0 0 2可降低大鼠肾组织中p-P I 3 K/P I 3 K、p-AK T/AK T、p-mTO R/mTO R的比值,其中红豆杉+L Y 2 9 4 0 0 2降低作用最为明显。说明红豆杉对P I 3 K/A k t信号通路具有调控作用。综上所述,红豆杉可能通过抑制P I 3 K/A k t信号通路改善糖尿病肾病大鼠的肾功能,降低炎症反应,减轻 肾部纤维化,可为治疗糖 尿病肾病提 供依据。参考文献:1 R A I N A P,S I K K A R,G U P T A H,e t a l.A s s o c i a t i o n o f e N O S a n d MC P-1 g e n e t i c v a r i a n t s w i t h t y p e 2 d i a b e t e s a n d d i a b e t i c n e p h r o p a t h y s u s c e p t i b i l i t y:a c a s e-c o n t r o l a n d m e t a-a n a l y s i s s t u d yJ.B i o c h e m G e n e t,2 0 2 1,5 9(4):9 6 6-9 9 6.2 Z I A B L Y T S E V S V,C H E R N O B R Y T S E V O P,Z I A B L Y T S E V D S.T h e r s 1 8 0 0 6 2 9 p o l y m o r p h i s m o f t h e T N F g e n e i n t y p e 2 d i a