发酵棉籽粉替代鱼粉对卵形鲳鲹幼鱼生长、饲料利用性能及肠道菌群的影响.pdf

DOI:10.12131/20230036文章编号：2095 0780（2023）04 0126 13发酵棉籽粉替代鱼粉对卵形鲳鲹幼鱼生长、饲料利用性能及肠道菌群的影响吴光德1,2，兰鲲鹏1,2，陈 旭2,3，王 芸2，周传朋2，林黑着2，马振华2,3,4，王 珺2,41.上海海洋大学 水产与生命学院，上海 2013062.中国水产科学研究院南海水产研究所/农业农村部水产品加工重点实验室，广东 广州 5103003.中国水产科学研究院南海水产研究所热带水产研究开发中心，海南 三亚 5720184.海南省深远海渔业资源高效利用与加工重点实验室，海南 三亚 572018摘要：发酵棉籽粉是一种优质植物蛋白原料，具有替代饲料鱼粉的潜力。为评估发酵棉籽粉作为卵形鲳鲹(Trachinotusovatus)饲料蛋白源的适宜性及适宜替代水平，用发酵棉籽粉分别替代卵形鲳鲹幼鱼饲料中0%(对照组)、25%、50%、75%和100%的鱼粉(基础饲料中鱼粉质量分数为35%)，配制成5种实验饲料，饲喂幼鱼 初始体质量为(12.570.25)g7周，探究了发酵棉籽粉替代鱼粉对幼鱼存活、生长和饲料利用性能及肠道菌群组成的影响。结果显示，发酵棉籽粉替代组的存活、生长、饲料利用率以及蛋白质、脂肪沉积效率均低于鱼粉对照组，而25%和50%替代组与对照组无显著性差异(P0.05)。但当发酵棉籽粉替代75%100%鱼粉时，刺激了卵形鲳鲹肝脏的抗氧化系统，使总超氧化物歧化酶(T-SOD)和过氧化氢酶(CAT)活性高于对照组。此外肝脏HE染色切片显示其细胞空泡化现象加剧，100%替代组的血清总蛋白、白蛋白和球蛋白含量降低，肝脏合成蛋白能力可能下降。发酵棉籽粉高水平替代鱼粉会影响卵形鲳鲹的肠道菌群组成，表现为有益菌丰度下降、有害菌丰度上升，从而影响了肠道菌群功能。综合考虑生长性能和鱼体健康，建议卵形鲳鲹饲料中发酵棉籽粉替代鱼粉水平以25%为宜。关键词：卵形鲳鲹；发酵棉籽粉；生长；饲料利用；肠道菌群中图分类号：S 917.4文献标志码：A 开放科学（资源服务）标识码（OSID）：Effects of replacement of fish meal by fermented cottonseed meal ongrowth performance,feed utilization and intestinal bacteria community ofjuvenile golden pompano(Trachinotus ovatus)WU Guangde1,2,LAN Kunpeng1,2,CHEN Xu2,3,WANG Yun2,ZHOU Chuanpeng2,LIN Heizhao2,MA Zhenhua2,3,4,WANG Jun2,41.College of Fisheries and Life Science,Shanghai Ocean University,Shanghai 201306,China2.South China Sea Fisheries Research Institute,Chinese Academy of Fishery Sciences/Key Laboratory of Aquatic Product Processing,Ministry of Agriculture and Rural Affairs,Guangzhou 510300,China3.Tropical Aquaculture Research and Development Center,South China Sea Fisheries Research Institute,Chinese Academy of FisherySciences,Sanya 572018,China4.Key Laboratory of Efficient Utilization and Processing of Marine Fishery Resources of Hainan Province,Sanya 572018,China第 19 卷第 4 期南 方 水 产 科 学Vol.19，No.42023 年 8 月South China Fisheries ScienceAug.，2023收稿日期：2023-03-07；修回日期：2023-04-23基金项目：国家自然科学基金面上项目(32172984)；中国水产科学研究院中央级公益性科研院所基本科研业务费专项资金(2020TD55,2022XT0404)；中国水产科学研究院南海水产研究所中央级公益性科研院所基本科研业务费专项资金资助(2021SD09)作者简介：吴光德(1998)，男，硕士研究生，研究方向为鱼类营养与饲料。E-mail:通信作者：王珺(1979)，女，研究员，博士，研究方向为水产动物营养与饲料学。E-mail:Abstract:Fermented cottonseed meal(FCSM)is a high-quality plant protein ingredient with potential to replace fishmeal infeed.To evaluate the suitability of FCSM as a protein source in the diet of juvenile golden pompano(Trachinotus ovatus)and itsappropriate replacement level,we had fed the juveniles with initial body mass of(12.570.25)g for seven weeks by five diets toreplace 0%(Control group),25%,50%and 100%of fishmeal by FCSM,and the fish meal in reference diet was 35%.Then weinvestigated the effects of FCSM replacement of fishmeal on the survival,growth,feed utilization performance and intestinal mi-croflora of the juveniles.The results show that the survival,growth,feed efficiency,dietary protein and lipid deposition rateswere lower in FCSM treatments compared with those in reference diet,while the differences between 25%,50%replacementgroups and the reference diet were not significant(P0.05).However,the liver antioxidant system was stimulated,and the activi-ties of total superoxide dismutase(T-SOD)and catalase(CAT)in 75%100%replacement groups were higher than those in thecontrol group.In addition,the liver hematoxylin-eosin-stained sections show that the cellular vacuolation phenomenon was ag-gravated.The contents of total protein,albumin and globulin in serum in 100%replacement group were reduced,and the pro-tein synthesis capacity of liver might be impaired.High-level replacement of fish meal by FCSM affected the composition of in-testinal flora,with the abundance of beneficial bacteria decreasing and that of harmful bacteria increasing.Taking into accountboth growth performance and fish health,it is recommended to replace fish meal with 25%FCSM in the diet for T.ovatus.Keywords:Trachinotus ovatus;Fermented cottonseed meal;Growth;Feed utilization;Intestinal flora近几十年来世界水产养殖业不断发展，养殖产量逐年升高1，对饲料的需求量也随之增加。与陆生动物相比，水生动物对饲料蛋白质的需求量更高2，因此水产养殖业需要大量的蛋白原料。鱼粉是水产饲料中最重要的蛋白源，其氨基酸组成可满足大多数鱼类的营养需求。然而，随着全球渔业资源逐渐衰退3，鱼粉的价格不断升高，产量也难以长期满足水产动物饲料的需求。因此，寻求新型的饲料蛋白原料替代饲料中的鱼粉一直是水产养殖业亟待解决的问题4。棉籽粉作为植物蛋白质原料具有产量高、价格低的优点。2022 年世界棉花产量约 2 534 万吨(数据来源：美国农业部 www.usda.gov)，其副产物棉籽每年产量超过 1 000 万吨5。棉籽粉是棉籽经过一系列工序提取棉籽油后的副产物，其蛋白质含量高6，而价格仅为鱼粉的 1/3，如果能替代或部分替代养殖动物饲料中的鱼粉，则可以显著降低饲料价格，具有巨大的市场潜力。但棉籽粉中的游离棉酚、环丙烯脂肪酸、植酸和单宁等物质具有一定的营养拮抗作用，降低了饲料的适口性，限制了棉籽粉在饲料中的使用量。近年来，棉籽粉的发酵工艺取得了较大进展，使棉籽粉中蛋白溶出率以及益生菌、小分子肽和氨基酸等营养物质含量有所提升，促进了生物对棉籽粉的吸收利用7-8，为其替代饲料中的鱼粉、豆粕等蛋白质原料提供了可能。已有研究显示，发酵棉籽粉可以部分替代饲料中的鱼粉和豆粕等蛋白源，例如用发酵棉籽粉替代黑鲷(Acanthopagrus schlegelii)饲料中 8%的鱼粉对其生长速度和饲料利用率无显著性影响，但更高的替代水平则会导致鱼的生长速度下降9；以发酵棉籽粉替代凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)饲料中50%的鱼粉对其生长速度和饲料利用率无显著性影响，但随着替代水平的升高，对虾的各项指标均显著下降10。这些研究结果表明不同养殖动物对棉籽粉的耐受存在明显的种属差异性，在应用前必须对其适宜的添加量进行实验评估。卵形鲳鲹(Trachinotus ovatus)为暖水性鱼类，主要分布于东南亚和地中海的热带和亚热带地区11，具有肉质细嫩、抗逆性强和广盐性等特点12，是中国南方广泛养殖的鱼类。2021 年中国卵形鲳鲹养殖产量已达到 24.4 万吨13。目前已对卵形鲳鲹的营养需求如蛋白质14、氨基酸15、脂肪16-18、碳水化合物19、维生素20和矿物质21及各类添加剂22等开展了研究。作为肉食性鱼类，卵形鲳鲹对饲料蛋白质的需求量较高 42%(质量分数)23。探究发酵棉籽粉替代鱼粉，能增加卵形鲳鲹饲料蛋白源，确保蛋白源的多元化。目前关于发酵棉籽粉在卵形鲳鲹饲料中的应用效果和适宜用量的研究尚未见报道。本研究探讨发酵棉籽粉替代饲料中不同水平的鱼粉对卵形鲳鲹幼鱼存活、生长和饲料利用性能的影响，评估其适宜的替代量，并从营养沉积效率、血清生化指标、抗氧化能力、肠道菌群等角度深入分析发酵棉籽粉对卵形鲳鲹的影响机制，为发酵棉籽粉在卵形鲳鲹饲料中的应用提第 4 期吴光德等:发酵棉籽粉替代鱼粉对卵形鲳鲹幼鱼生长、饲料利用性能及肠道菌群的影响127供理论依据。1 材料与方法 1.1 实验设计与饲料配制本实验所用的发酵棉籽粉由新疆希普生物科技股份有限公司提供，主要原料的粗营养数据见表 1 表注。以发酵棉籽粉为饲料蛋白源分别替代饲料中 0%(对照组)、25%、50%、75%和 100%的鱼粉，配制 5 种实验饲料(表 1)。棉籽粉中的游离棉酚会与饲料中的赖氨酸和蛋氨酸相结合24-26，因此本研究参照 Wang 等6的方法在含发酵棉籽粉的饲料中补充了赖氨酸和蛋氨酸，以达到氨基酸平衡。所有饲料原料均经过粉碎机粉碎并过 60 目筛，将所有粉碎好的原料按饲料配方称量后混合均匀，卵磷脂充分溶解在鱼油中，手工将油脂微小颗粒搓散，各种原料用腰鼓式立式混合机(牧羊 SYTH0.1，中国)混合均匀。在搅拌期间逐渐加入饲料质量35%的蒸馏水形成团状，并用膨化机(VALVASL685，中国)挤压成直径 2.5 mm 的沉性颗粒饲料，在空调房吹干后用 20 冰箱保存备用。1.2 实验鱼与养殖管理实验在中国水产科学研究院南海水产研究所三亚热带水产研究开发中心进行，在海南省陵水县新村港用小网箱(长 100 cm宽 100 cm高 150 cm)进行养殖。实验用卵形鲳鲹幼鱼购自陵水德林诚信水产养殖有限公司育苗场，购买后先用商品饲料驯化 2 周以适应养殖环境。正式实验开始前幼鱼禁食 24 h，然后挑选健康幼鱼 600 尾 初始质量为(12.570.25)g 随机分配在 20 个网箱中，每个网箱养殖 30 尾，放入网箱前称量鱼的初始体质量。网箱随机分配给 5 个饲料处理组，每组 4 个重复(网箱)。每天 08:00 和 17:00 饱食投喂，记录每个网箱中鱼的摄食量、死亡数量和体质量，饲喂 7 周，每 2 周对网箱进行 1 次清洗，去除网衣上的附着生物。养殖水温 2832，溶解氧质量浓度大于 5.0mgL1，盐度 28.031.2，pH 7.48.0，氨氮质量浓度小于 0.05 mgL1。1.3 样品采集与处理养殖实验结束时禁食 24 h，然后用 50 mgL1丁香酚(成都艾科达化学试剂有限公司)进行麻醉。记录每个网箱中鱼的尾数和总质量，从每个网箱随机取 4 尾鱼称体质量，测量体长，解剖后内脏和肝脏分别称质量，计算肝体比、脏体比和肥满度；随机取 3 尾鱼于 20 保存，用于鱼体营养组成分析；随机取 6 尾鱼用 1 mL 注射器在尾静脉抽血，抽取后立即离心(转速 3 800 rmin1，15 min)，取上清液 80 保存，用于血清生化指标检测。然后，2 尾取中肠及肝脏，用体积分数为 4%的多聚甲醛溶液保存，用于组织病理切片制作与观察，2 尾取中肠和肝脏用于各类酶活性的检测，2 尾取中肠用于肠道菌群的检测，以上样品均用液氮速冻后转移到 80 低温冰箱保存。1.4 样品生化分析鱼体和饲料营养组成分析均采用 AOAC(Asso-ciation of Official Analytical Chemists,2000)的方法，其中：水分测定采用 105 烘干恒重法(24 h)；粗蛋白测定采用凯氏定氮法；粗脂肪测定采用索氏抽提法；灰分测定采用箱式电阻炉灼烧法。肝脏切片制作，组织经脱水浸蜡、包埋、切片后，分别用苏木素-伊红逐步染色，并脱水封片。血浆中的总蛋白(Total protein,TP)、白蛋白(Albumen,ALB)、球蛋白(Globulin,GLB)和尿素氮(Blood urea nitro-gen,BUN)委托广州新海医院检验中心采用贝克曼全自动生化分析仪(Hitachi 7180，日本)和迈克生物有限公司的试剂盒进行测定。用南京建成生物工程研究所生产的试剂盒和单功能光吸收酶标仪(VersaMax,Molecular Devices，美国)检测胃、肠道和肝脏总蛋白浓度，胃蛋白酶、胰蛋白酶、肠道-淀粉酶、肠道脂肪酶、总超氧化物歧化酶(T-SOD)、血清过氧化氢酶(CAT)活性和总抗氧化能力(T-AOC)。委托杭州明科生物技术有限公司对肠道菌群进行高通量测序分析，经过肠道菌群基因组 DNA 抽提、16S rRNA V4-V5 区 PCR 扩增、荧光定量、Il-lumina PE 文库构建、Illumina PE 测序等步骤得到949 940 个有效序列，对序列进行聚类分析、BLAST比对、物种分类信息获取等一系列处理后，再利用 Origin 2022 和 Graphpad prism 9.0 软件绘图，得到肠道菌群多样性等数据和图表。1.5 数据计算与统计分析1)成活率=实验结束时网箱中鱼的尾数/实验开始时网箱中鱼的尾数100%；2)体质量增长率=(实验结束时所有鱼的总质量实验开始时所有鱼的总质量)/实验开始时所有鱼的总质量 100%；128南 方 水 产 科 学第 19 卷表1 实验饲料组成及营养组成(干物质)Table 1 Formulation and proximate composition of reference and experimental diets(Dry mass)%原料 Ingredient发酵棉籽粉替代鱼粉比例 Proportion of FCSM replacement0%25%50%75%100%鱼粉 Fish meal35.0026.2517.508.750.00发酵棉籽粉 Fermented cottonseed meal0.0011.4722.9434.4145.00大豆浓缩蛋白 Soy protein Conc13.0013.0013.0013.0013.00鸡肉粉 Chicken meal5.005.005.005.005.00赖氨酸 L-Lysine0.000.210.420.630.85蛋氨酸 DL-methionine0.000.100.190.290.39高筋面粉 Gluten flour20.0020.0020.0020.0020.00诱食剂 Attractant0.300.300.300.300.30卵磷脂 Lecithin2.502.502.502.502.50鱼油 Fish oil6.006.507.007.508.00维生素和矿物质预混料Vitamin and mineral premix2.002.002.002.002.00氯化胆碱 Choline chloride0.500.500.500.500.50磷酸二氢钙 Ca(H2PO4)22.002.002.002.002.00维生素 Vitamin C0.500.500.500.500.50骨粉 Bone meal13.209.676.152.620营养成分分析(干基)Analyzed proximate composition(Dry basis)水分 Moisture9.50.28.30.110.40.111.00.19.90.1粗蛋白 Crude protein40.60.341.60.343.30.344.60.144.90.1粗脂肪 Crude lipid9.70.19.70.29.80.19.80.159.80.1粗纤维 Crude fiber0.331.622.914.205.39灰分 Ash21.40.118.10.214.20.110.90.18.60.1游离棉酚质量分数Free gossypol mass fraction/(mgkg1)029.9359.8589.78119.70注：水分 7.1%(质量分数，后同)、粗蛋白 68.0%、粗脂肪 8.0%、粗纤维 0.2%、灰分 16.4%；水分 7.2%、粗蛋白 59.7%、粗脂肪1.7%、粗纤维 11.4%、灰分 6.6%；水分 9.0%、粗蛋白 65.0%、粗脂肪 0.5%、粗纤维 0.1%、灰分 2.6%；水分 9.0%、粗蛋白65.0%、粗脂肪 5.0%、粗纤维 2.6%、灰分 12.1%；水分 9.7%、粗蛋白 16.4%、粗脂肪 1.0%、粗纤维 0.6%、灰分 1.5%；诱食剂为二甲基-丙酸噻亭(Dimethyl-propiothetin,DMPT)、甘氨酸、牛磺酸等比例混合；维生素和矿物质预混料物质质量分数(mgkg1)：维生素 A 乙酸酯 150 000 IU，维生素 D3 75 000 IU，dl-生育酚乙酸酯 2 500，亚硫酸氢烟酰胺甲萘醌 250，硝酸硫铵(维生素 B1)320，核黄素(维生素 B2)700，盐酸吡哆醇(维生素 B6)500，氰钴胺(维生素 B12)4，肌醇 4 000，L-抗坏血酸-2-磷酸酯 5 500，烟酰胺 3 800，D-泛酸钙 1 600，叶酸 80，D-生物素 4，铜(甘氨酸铜络合物)200，一水硫酸亚铁 1 800，硫酸锰 450，硫酸锌 5 500，碘酸钙 100，亚硒酸钠 15，硫酸钴 50，乙氧基喹啉 0300，二丁基羟基甲苯 0750。Note:Moisture 7.1%(Mass fraction,the same below),crude protein 68.0%,crude lipid 8.0%,crude fiber 0.2%,ash 16.4%;Moisture 7.2%,crude protein 59.7%,crude lipid 1.7%,crude fiber 11.4%,ash 6.6%;Moisture 9.0%,crude protein 65.0%,crude lipid 0.5%,crude fiber 0.1%,ash 2.6%;Moisture 9.0%,crude protein 65.0%,crude lipid 5.0%,crude fiber 2.6%,ash 12.1%;Moisture 9.7%,crude protein 16.4%,crudelipid 1.0%,crude fiber 0.6%,ash 1.5%;The palatability enhancer is a mixture of dimethyl-propionate,glycine and taurine;Composi-tion of vitamin and mineral premixa(mgkg1):Retinyl acetate 150 000 IU,Vitamin D3 75 000 IU,dl-tocopherol acetate 2 500 mg,Mena-dione nicotinamide bisulfite 250,Vitamin B1 320,Riboflavin(Vitamin B2)700,Vitamin B6 500,Vitamin B12 4,Inositol 4 000,Cholinesalicylate5 500,Nicotinamide 3 800,D-calcium pantothenate 1 600,Folic acid 80,D-biotin 4,Copper(Copperdiglycinate)200,Ferrous sulfate mono-hydrate 1 800,Manganese(II)sulfate monohydrate 450,Zinc(Zinc sulfate monohydrate)5 500,Iodine(calcium iodate)100,Selenium(Sodi-um selenite)15,Cobalt(Cobalt sulfate hydrate)50,Ethoxyquin 0300,Dibutylhydroxytoluene 0750.第 4 期吴光德等:发酵棉籽粉替代鱼粉对卵形鲳鲹幼鱼生长、饲料利用性能及肠道菌群的影响1293)摄食率=2总摄食干质量/(实验结束时所有鱼的总质量+实验开始时所有鱼的总质量)/养殖时间100%；4)饲料利用率=(实验结束时所有鱼的总质量实验开始时所有鱼的总质量)/总摄食干质量；5)蛋白沉积率=(实验结束时所有鱼的总质量实验结束时鱼体蛋白质质量分数实验开始时所有鱼的总质量实验开始时鱼体蛋白质质量分数)/(总摄食干质量饲料烘干时蛋白质质量分数)100%；6)脂质沉积率=(实验结束时所有鱼的总质量实验结束时鱼体脂质质量分数实验开始时所有鱼的总质量实验开始时鱼体脂质质量分数)/(总摄食干质量饲料烘干时脂质质量分数)100%；7)脏体比=内脏质量/鱼体质量100%；8)肝体比=肝脏质量/鱼体质量100%；9)肥满度=鱼体质量100/鱼体体长3；S=NObsn1(n1 1)2(n2+1)10)；H=NObsi=1niNlnniN11)；D=NObsi=1ni(ni 1)N(N 1)12)；式中：S 为 Chao1 指数；NObs为观测到的 OTU数目；n1为只含有 1 条序列的 OTU数目；n2为只含有 2 条序列的 OTU 数目；H 为 Shannon 指数；ni为第 i 个 OTU 所含的序列段数；N 为所有的序列段数；D 为 Simpson 指数。xsx数据采用单因素方差分析(ANOVA)，若差异显著(P0.05)，用 Tukeys 检验进行多重比较分析，所有数据在方差分析前先进行方差齐性检验。统计分析通过 IBM SPSS 26 软件进行，鱼粉的替代量与各因变量之间的线性或二项式关系用正交多项式分析，结果以“平均数标准误()”表示。所有测定指标均为 3 个重复(n=3)。2 结果 2.1 对存活、生长和饲料利用性能的影响卵形鲳鲹的成活率、体质量增长率、饲料利用率、蛋白沉积率和脂肪沉积率均随着饲料中发酵棉籽粉替代鱼粉水平的升高而降低(表 2)；0%对照组和 50%替代组的成活率显著高于 100%替代组(P0.05)；各组之间体质量增长率的差异未达到显著性水平；饲料利用率、蛋白沉积率和脂肪沉积率呈相似的变化趋势，均为对照组显著高于 100%替代组(P0.05)，其余各组之间差异不显著；成活率、饲料利用率、蛋白沉积率和脂肪沉积率均与替代水平呈显著的线性负相关性(P0.05)。2.2 对鱼体营养组成和形体指标的影响发酵棉籽粉替代饲料鱼粉对卵形鲳鲹幼鱼的营养成分(表 3)和形体指标(表 4)均具有显著性影响。鱼体水分质量分数与发酵棉籽粉替代水平呈显著正相关性(P0.05)，粗脂肪质量分数则与替代水平呈显著负相关(P0.05)。75%和 100%替代组的鱼体水分质量分数显著高于对照组(P0.05)，而其粗脂肪质量分数则显著低于对照组(P0.05)。100%替代组鱼体蛋白质质量分数最低，但与其他各组之间的差异未达到显著性水平。发酵棉籽粉替代组的肝体比均显著低于对照组(P0.05)。发酵棉籽粉替代鱼粉对脏体比和肥满度的影响不显著。2.3 对消化酶活性和抗氧化酶活性的影响替代组卵形鲳鲹的胃蛋白酶活性，以及肠道胰蛋白酶与-淀粉酶活性均低于对照组，但差异均未达到显著性水平(表 5)。肠道-淀粉酶和脂肪酶活性与替代水平分别存在显著的线性负相关和正相关关系(P0.05，图 3)。各处理组卵形鲳鲹肠道菌群在门水平和属水平的比例见图 4 和图 5。用发酵棉籽粉替代 75%100%鱼粉对卵形鲳鲹肠道菌群的群落结构产生了表2 不同发酵棉籽粉替代鱼粉水平下卵形鲳鲹幼鱼的存活、生长和饲料利用性能Table 2 Survival,growth and feed utilization of juvenile T.ovatus fed with reference and experimental dietscontaining different FCSM replacements指标Index发酵棉籽粉替代鱼粉水平 Replacement of fish meal by FCSM单因素方差分析ANOVA(PF)线性趋势Lineartrend(PF)二次趋势Quadratictrend(PF)0%(对照组Control)25%50%75%100%成活率 Survival/%85.005.09b80.006.94ab85.006.31b72.505.34ab63.332.72a0.0610.0100.210终末质量 FBW/g42.343.9240.782.6239.871.4939.143.8035.081.380.4870.0950.648体质量增长率 WGR/%239.831.9226.720.0217.610.2212.8129.4181.0712.70.4710.0870.692摄食率 FR/(%d1)3.150.033.270.103.210.043.290.083.310.140.6590.2030.856饲料利用率 FE0.640.06b0.590.07ab0.610.01ab0.540.06ab0.450.05a0.1160.0160.348蛋白沉积率 PR/%28.321.75b27.122.86ab26.211.64ab21.943.14ab17.171.78a0.0200.0020.225脂肪沉积率 LR/%76.799.80c67.044.14bc64.411.43bc48.734.11ab25.504.63a0.0000.0000.079注：同行不同上标字母表示差异显著(P0.05)，F 代表显著性概率。后表同此。Note:Values with different letters within the same row are significantly different(PF)线性趋势Lineartrend(PF)二次趋势Quadratictrend(PF)0%(对照组Control)25%50%75%100%水分质量分数Mass fraction of moisture/%65.930.67a66.370.32ab67.130.19ab68.300.54bc70.260.58c0.0000.0000.083粗蛋白质量分数Mass fraction of crudeprotein/%18.000.3518.430.2218.340.5518.250.3617.720.310.6730.5420.189粗脂肪质量分数Mass fraction of crude lipid/%10.310.53c9.720.25bc9.420.09bc8.480.35b6.570.25a0.0000.0000.017灰分质量分数Mass fraction of ash/%4.300.174.210.054.430.134.250.064.650.170.1620.0890.256表4 不同发酵棉籽粉替代鱼粉水平下卵形鲳鲹鱼体的形体指标Table 4 Physical indexes of juvenile T.ovatus fed with reference and experimental dietscontaining different FCSM replacements指标Index发酵棉籽粉替代鱼粉水平 Replacement of fish meal by FCSM单因素方差分析ANOVA(PF)线性趋势Linear trend(PF)二次趋势Quadratic trend(PF)0%(对照组 Control)25%50%75%100%肝体比 HIS/%1.390.13b0.910.05a1.020.05a1.140.08ab1.060.04a0.0020.0830.007脏体比 VSI/%6.340.166.210.145.800.416.310.166.440.190.3880.6860.124肥满度 CF/(gcm3)3.090.063.110.063.090.053.180.053.040.050.3950.8370.241第 4 期吴光德等:发酵棉籽粉替代鱼粉对卵形鲳鲹幼鱼生长、饲料利用性能及肠道菌群的影响131显著性影响。在门水平上，变形菌门、厚壁菌门、拟杆菌门和软壁菌门在肠道菌群中的比例较高(合计95%)。随着替代水平的提高，变形菌门的丰度增加，厚壁菌门和拟杆菌门的丰度减少。在属水平上，无色杆菌属(Achromobacter)、代尔夫特菌属(Delftia)、短波单胞菌属(Brevundimonas)、潘多拉菌属(Pandoraea)、未排位拟杆菌 S24-7(Bacteroi-dales S24-7 group_norank)和乳杆菌属(Lactobacil-lus)占肠道菌群的比例较高，当发酵棉籽粉替代水平达到或高于 75%时，无色杆菌属、代尔夫特菌属、短波单胞菌属、潘多拉菌属、支原体(Myco-plasma)、鞘氨醇单胞菌属(Sphingomonas)、Can-didatus Bacilloplasma 丰度增加，未排位拟杆菌 S24-7 和乳杆菌属丰度降低。肠道菌群功能预测结果如图 6 所示，与对照组相比，发酵棉籽粉替代全部鱼粉导致卵形鲳鲹代谢一级通路下很多二级通路，包括碳水化合物、氨基酸、辅助因子、维生素、脂代谢、聚糖(Glycan)的相对比例均低于对照组，表征肠道菌群对营养物质的吸收代谢能力变差。3 讨论 3.1 发酵棉籽粉替代鱼粉对卵形鲳鲹生长与饲料利用性能的影响本研究结果显示，用发酵棉籽粉替代饲料中25%50%的鱼粉对卵形鲳鲹幼鱼的成活率、体质100%25%0%50%75%图1 不同发酵棉籽粉替代鱼粉水平下卵形鲳鲹肝脏 HE 染色切片(400，红圈代表细胞质空泡化现象)Fig.1 Hematoxylin-eosin(HE)stained liver sections of juvenile T.ovatus fed with reference and experimental diets containingdifferent FCSM replacements(400,red circles represent cytoplasmic vacuolization)表5 不同发酵棉籽粉替代鱼粉水平下卵形鲳鲹的肠道消化酶活性和肝脏抗氧化酶活性Table 5 Digestive enzyme activities and hepatic antioxidant enzyme activities of juvenile T.ovatus fed with reference andexperimental diets containing different FCSM replacements指标Index发酵棉籽粉替代鱼粉水平 Replacement of fish meal by FCSM单因素方差分析ANOVA(PF)线性趋势Lineartrend(PF)二次趋势Quadratictrend(PF)0%(对照组 Control)25%50%75%100%胃蛋白酶活性Pepsin activity/(Umg1)71.736.9160.936.1562.174.1362.085.9458.184.950.5180.1330.637肠道胰蛋白酶活性Intestinal trypsin activity/(Umg1)2 119.7392.61 902.7619.7 1 606.1223.0 1 705.5390.6 1 482.0232.60.7000.1930.760肠道-淀粉酶活性Intestine-amylase activity/(Umg1)1.530.171.390.241.360.130.970.210.980.130.1230.0150.944肠道脂肪酶活性Intestinal lipase activity/(Ug1)1.400.06a1.730.08b1.600.02ab1.540.03ab1.730.11b0.0180.0260.536肝脏超氧化物歧化酶活性T-SOD of liver/(Umg1)444.8633.68432.6829