仿制药杂质检查方法建立研究方案与评价.pptx

Click to edit Master title style,Click to edit Master text styles,Second level,Third level,Fourth level,Fifth level,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,仿制药杂质检验方法建立和方法学研究与评价,1,仿制药杂质检查方法建立研究方案与评价,第1页,主要内容,一、概述,二、杂质检验方法建立,三、杂质检验方法学验证要求,四、杂质检验方法和方法验证常见问题分析,2,仿制药杂质检查方法建立研究方案与评价,第2页,一、概述,1、杂质检验方法和方法验证对仿制药主要意义,（1）安全性主要确保关注毒性杂质,（2）评价仿制药是否一致关键指标之一,仿制药与被仿制药质量一致,杂质种类和数量不高于被仿制药,（3）杂质研究基础,杂质检验方法不适当或方法学验证不完善，杂质检验不可靠，无法准确评价药品质量,3,仿制药杂质检查方法建立研究方案与评价,第3页,仿制药与被仿制药一致性要求,药学方面一致（含量、结构、杂质、其它检验项等）,杂质数量和种类低于被仿制药，不然需要分析杂质安全性并提供相关数据，必要时应进行相关安全性试验,建立杂质适宜杂质检验方法用于判断一致性,用语工艺优化、去除杂质、考查稳定性、控制药品质量,一、概述,4,仿制药杂质检查方法建立研究方案与评价,第4页,2、当前国内仿制药研究中杂质检验面临困难,杂质起源不清：被仿制药和仿制药杂质种类和数量不清，包含杂质产生和引入过程、降解路径,杂质甲醇方法缺乏针对性：不知控制何种杂质以及为何控制，缺乏安全性数据支持,杂质对照品制备困难（受限于工艺困难）：方法验证不充分,杂质检验结果难于评价：以及基础微弱，需要提升杂质研究水平，包含杂质检验方法和验证水平，以体改仿制药研制水平,一、概述,5,仿制药杂质检查方法建立研究方案与评价,第5页,例 盐酸曲美他嗪片,进口标准采取梯度洗脱，对3种已知杂质、单个未知杂质及总杂质分别进行控制,国内仿制采取等度洗脱，仅对未知杂质（单个杂质和/或总杂质进行控制）,国内同品种标准对相关物质要求：总杂质不得过1.0,一、概述,6,仿制药杂质检查方法建立研究方案与评价,第6页,3、主要技术指导标准和技术要求,化学药品杂质研究技术指导标准,已经有国家标准化学药品研究技术指导标准,过渡期品种集中审评（化学药品）技术要求,FDDA、ICH相关指导标准,Guidances for Industry,ANDAs:Impurities in Drugs Substances,Chemistry、Manufacturing、Controles Information,ANDAs:Impurities in Drugs Products,Q3A(R),Q3B(R),一、概述,7,仿制药杂质检查方法建立研究方案与评价,第7页,4、杂质范围,有机杂质包含工艺中引入杂质和降解产物，化学结构与活性成份分子式类似或具渊源关系，通常称相关物质,无机杂质产生无机物,残留溶剂生产过程中使用有机溶剂,起源工艺杂质、降解产物、从反应物及试剂中混入杂质（外源性杂质）等,结构杂质几何异构体、光学异构体、聚合物、其它甾体、其它氨基酸,一、概述,8,仿制药杂质检查方法建立研究方案与评价,第8页,二、杂质检验方法建立,目标,1、建立杂质检验方法是质控要求,包含详细分析操作方法，以及计算方法、程度要求,2、用语分析杂质谱,考查与被仿制药一致性，进而优化制备工艺及稳定性考查,9,仿制药杂质检查方法建立研究方案与评价,第9页,1、杂质检验方法建立前提,（1）被仿制药杂质谱怎样：,参考公开信息：质量标准、说明书、相关文件和专利,（2）本身杂质怎样？,理论综合分析（合成路线、反应条件、处方工艺、辅料等）、直接测试,用于未知杂质或未定性杂质“标识”方法,LC-MS/GC-MS或CE-MS法,HPLC峰保留时间对比法,其它方法,二、杂质检验方法建立,10,仿制药杂质检查方法建立研究方案与评价,第10页,2、仿制药杂质检验方法建立普通考虑点,（1）参考被仿制药方法：,A、被仿制药杂质检验方法和程度怎样？标准中控制了哪些杂质？,B、主要参考，为方法建立提供主要信息，全方面考查,C、不可简单套用,工艺或处方不一样，二者杂质谱可能不一样，被仿制药杂质加查方法可能不适,被仿制药标准较低，无杂质检验项或较为简单,被仿制药杂质检验方法无法取得,二、杂质检验方法建立,11,仿制药杂质检查方法建立研究方案与评价,第11页,2、仿制药杂质检验方法建立普通考虑点,（2）结合杂质理化特点：,依据杂质谱，考虑杂质结构、理化性质,比如：,阿司匹林比色法游离水杨酸（CP）,葡萄糖注射液UV法5-羟甲基糠醛（CP）,氨基酸原料药TLC法其它氨基酸（CP）,二、杂质检验方法建立,12,仿制药杂质检查方法建立研究方案与评价,第12页,2、仿制药杂质检验方法建立普通考虑点,（3）结合杂质毒性特点：,安全性控制需要,被仿制药和本身杂质毒性怎样？重视药理毒理及临床安全性研究结果作用,对于有些分子经过以下化学反应可能产生潜在遗传毒性作用,烷基化,交联,脱嘌呤,可参考遗传毒性库,遗传毒性杂质或含有可能引发遗传毒性结构杂质需要建立灵敏试验方法,EMEA遗传毒性杂质程度指导标准：毒理学担忧阈值（TLC)1.5mg/人/日,二、杂质检验方法建立,13,仿制药杂质检查方法建立研究方案与评价,第13页,2、仿制药杂质检验方法建立普通考虑点,（4）考虑不一样检验方法特点：,主要是灵敏度和专属性能否符合要求,痕量杂质和遗传毒性杂质严格控制，对方法要求较高,化学法TLC法HPLC法,HPLC/MS，HPLC/荧光,CE法可用于微量样品,GC适合用于挥发性杂质检验,二、杂质检验方法建立,14,仿制药杂质检查方法建立研究方案与评价,第14页,2、仿制药杂质检验方法建立普通考虑点,（5）注意各种方法联用：,由杂质多样性复杂性和方法不足所决定,单一方法不能满足多个杂质检测时，可采取两种以上方法互为补充，控制杂质,化学法色谱法光谱法生物检定法,同一方法采取不一样测试条件,如正相HPLC、反相HPLC、不一样流动相反相HPLC等,分离技术于检测伎俩联用，较为有效，如HPLC、GC、LC-MS、GC-MS、HPLC-PDA、CE 等,二、杂质检验方法建立,15,仿制药杂质检查方法建立研究方案与评价,第15页,2、仿制药杂质检验方法建立普通考虑点,（6）综合药学其它研究结果：,杂质检验与药品外观色泽、含量等项目间存在亲密联络，假如这些项目发生显著改变，而杂质基本不变时，应分析原因，关注杂质检验方法可行性。,二、杂质检验方法建立,16,仿制药杂质检查方法建立研究方案与评价,第16页,3、杂质检验常见方法介绍,HPLC法,考虑被仿制药色谱条件,考查同类物质质量标准中杂质检验方法,普通选择各种色谱条件：正相和反相,方法包含：固定相、流动相、洗脱方式、波长、测试样品处理、详细操作、计算方法,二、杂质检验方法建立,17,仿制药杂质检查方法建立研究方案与评价,第17页,3、杂质检验常见方法介绍,（1）固定相选择,依据特征研究药品特征选择适当填料柱子。惯用RP-HPLC，色谱柱多项选择C18柱、C8柱、苯基柱、氨基柱也有使用,C18柱时，流动相有机溶剂通常5,流动相pH值28,pH8，溶解硅胶载体，宜选取耐碱填充剂，包覆聚合物、高纯硅胶为载体并含有高表面覆盖度键合硅胶、非硅胶或有机-无机杂化填充剂,pH2，键合相水解脱落，宜选取耐酸性填充剂：有机-无机杂化填充剂、含有大致积侧链二异丙基或二异丁基取代C18键合硅胶等,二、杂质检验方法建立,18,仿制药杂质检查方法建立研究方案与评价,第18页,3、杂质检验常见方法介绍,（1）固定相选择,注意不一样品牌柱子在耐用性方面研究：,a、当杂质峰与主峰分离情况不十分完美,b、确定辅料峰相对保留时间（用于定位扣除辅料干扰）,c、确定特定杂质相对保留时间,d、确定相关物质出峰完成保留时间,当不一样品牌而引发以上各原因不固定时，应在标准中注明品牌,二、杂质检验方法建立,19,仿制药杂质检查方法建立研究方案与评价,第19页,3、杂质检验常见方法介绍,（2）流动相选择,尝试各种流动相,结合杂质性质,手性杂质,无紫外吸收杂质,普通杂质,（3）洗脱方式选择,等度洗脱,梯度洗脱,极性大化合物可能被掩盖，极性小化合物难以被洗 脱，甚至保留在柱上，可使用梯度洗脱法,二、杂质检验方法建立,20,仿制药杂质检查方法建立研究方案与评价,第20页,3、杂质检验常见方法介绍,（4）波长选择,选择标准是大部分主要杂质与主成份均在此波长下有吸收：二极管阵列法,无紫外吸收或检测波优点吸收相差较大各种化合物，有时在单一检测波优点不能检出,兼顾各杂质吸收情况：特定波长检测特定杂质,必要时，该用其它类型检测器,二、杂质检验方法建立,21,仿制药杂质检查方法建立研究方案与评价,第21页,3、杂质检验常见方法介绍,（5）样品处理和配制,预处理样品考虑,乳膏,提取可能造成杂质漏检和失真,衍生化处理造成杂质丢失,样品浓度影响,浓度高利于杂质检出，但防超载,低浓度样品杂质检验难题？,二、杂质检验方法建立,22,仿制药杂质检查方法建立研究方案与评价,第22页,3、杂质检验常见方法介绍,（6）杂质定量计算方法,杂质对照品法,：定量准确，已知杂质，需用杂质对照品,校正因子主成份本身对照法,：定量准确，已知杂质，无需长久提供杂质对照品,不加校正因子主成份本身对照法,：前提是假定杂质与主成份响应因子基本相同，有一定误差，可用于未知杂质，已知杂质对主成份响应因子在0.91.1之间,峰面积归一化法,：简便，因杂质与主成份响应因子不一样，线性范围不一样、仪器对他们积分精度及准确度不一样等原因，有一定不足,二、杂质检验方法建立,23,仿制药杂质检查方法建立研究方案与评价,第23页,当前定量方法中存在主要问题,杂质对照品法,：使用较少,主成份本身对照法,：较少采取校正因子计算（杂质无法进行归属或杂质对照品无法得到，校正因子无法计算）,常见是对未知杂质，不加校正因子主成份本身对照或面积归一化法（无法准确定量，无法有效检测杂质）,TLC法,设备和操作简便，一些特定杂质检验,灵敏度较差、定量不够准确，分离度欠佳，有时无法满足需要,仅限于程度检验（半定量），结合不一样原理检视技术能使各杂质斑点均可显示，填补HPLC不足。,需做好系统实用性试验,二、杂质检验方法建立,24,仿制药杂质检查方法建立研究方案与评价,第24页,定量方法,程度检验（半定量）,对照品比较法,：已知杂质，对照品,本身对照法：已知杂质、未知杂质、色调一致,检视技术：显色、荧光、本身颜色,LC-MS、GC-MS、GC-IR、CE-MS法,分离技术和判别技术联用，为解析化合物结构提供直接证据,有利于杂质谱分析和定性,二、杂质检验方法建立,25,仿制药杂质检查方法建立研究方案与评价,第25页,三、杂质检验方法学验证要求,方法验证目标,考查分析方法十分适合用于杂质检测和定量,方法验证中面临困难,杂质谱不清,杂质对照品无法获取,验证详细要求,26,仿制药杂质检查方法建立研究方案与评价,第26页,1、专属性,指在可能共存主分存在时，对被分析无物准确测定能力,分离度：专属性指标、杂质谱明确是基础,杂质可得最难物质分离对得分离试验、粗品中间体分离试验、辅料与杂质及主成份得分离试验,杂质不可得强制降解试验、与另一成熟方法比对,峰纯度二极管阵列、质谱；改变流动相百分比,方法不够专属时，应多个方法给予补充,三、杂质检验方法验证要求,27,仿制药杂质检查方法建立研究方案与评价,第27页,降解试验注意点,降解程度,当降解产物、中间体、副产物吸收波长不一样时处理,制剂降解破坏,消除辅料干扰，当无法避开辅料干扰时应对辅料进行定于给予扣除,三、杂质检验方法验证要求,28,仿制药杂质检查方法建立研究方案与评价,第28页,破坏性试验,酸降解：普通采取0.1mol/L1mol/L盐酸或硫酸,碱降解：普通采取0.1mol/L1mol/L氢氧化钠溶液,氧化降解采取适当过氧化氢溶液,必要时能够加热或提升浓度,对高温试验通常温度高于加速试验温度10，如50 、60,对于原料药有需要考虑水溶液或混悬液降解,考虑在不一样pH值条件下降解,光照试验可采取4500Lx,三、杂质检验方法验证要求,29,仿制药杂质检查方法建立研究方案与评价,第29页,存在主要问题,（1）主药完全降解，无法对降解产物进行检测,（2）因为选择降解条件强度不够，使药品未能降解，而误认为药品稳定,（3）不能选择适当测定方法测定降解产物，使主成份降解后测定回收量偏低,（4）未考虑破坏性试验时产生聚合物,三、杂质检验方法验证要求,30,仿制药杂质检查方法建立研究方案与评价,第30页,2、灵敏度,试样中能被检测（或定量）最低量,通惯用检测限及定量限表征，可依据直观评价、信噪比、响应值标准差和斜率取得。,应满足质控需要,信噪比方法,3、精密度,在要求测试条件下，同一个均匀样品经屡次取样测定所得结果之间靠近程度。,重复性、中间精密度、重现性,三、杂质检验方法验证要求,31,仿制药杂质检查方法建立研究方案与评价,第31页,4、准确度,测定结果与真实值或参考值靠近程度,已知杂质：回收率（依据精密度、专属性、线性）推断,未知杂质：与另一成熟方法比对、依据质量平衡原理结合含量等结果进行粗略判定，必要时研究几个不一样色谱条件甚至不一样测定原理方法进行比较选取,5、线性,在设计范围内，检测响应值与待测物质量之间成正百分比关系程度,三、杂质检验方法验证要求,32,仿制药杂质检查方法建立研究方案与评价,第32页,6、范围,检测方法能到达一定精密度、准确度和线性高、低浓度或量区间,范围应在要求程度20间或定量限至程度+20间，若含量测定和杂质检验同用一套色谱系统，则线性范围应为杂质程度-20至含量程度（上限）+20,7、耐用性,指测定条件有小变动时，测定结果不受影响承受程度,HPLC：流动相组成百分比及pH值、不一样厂家或批号色谱柱、柱效、柱温、流速等及被测溶液稳定性、样品提取次数和时间等,提议固定上述测定条件参数，如柱长、填料粒度、温度、流速，甚至品牌,三、杂质检验方法验证要求,33,仿制药杂质检查方法建立研究方案与评价,第33页,7、耐用性,TLC：适当改变展开剂百分比及pH值，考查耐用性。如对色谱条件苛刻时，要求最难分离物质对试验。,较轻易忽略,8、溶液稳定性考查,普通在常温、常光情况下进行，对同一份样品溶液进行长时间测定，以杂质量改变进行考查,光或温度引发应在标准中说明避光或试验温度,9、系统适用性,理论板数、柱拖尾因子、难分离物质正确分离、对照溶液重复进样偏差,不然，应对色谱系统作必要调整或更换色谱柱,三、杂质检验方法验证要求,34,仿制药杂质检查方法建立研究方案与评价,第34页,四、杂质检验方法和方法验证常见问题分析,1、简单套用被仿制药检验方法，未建立针对性方法,例：盐酸伪麻黄碱，分别采取人工合成与植物提取工艺，有机溶剂残留量、相关物质均不一样,2、方法学验证不充分,强制降解条件过于猛烈，无法判断主峰与降解产物分离情况,样品经降解、氧化破坏后主药被完全破坏，无法说明其降解物与主峰分离情况,调整降解条件猛烈程度,3、检验方法对杂质控制不全方面，尤其是对毒性杂质,35,仿制药杂质检查方法建立研究方案与评价,第35页,四、杂质检验方法和方法验证常见问题分析,提议质量确保策略,过程控制：控制合成原料纯度,终产品控制：检验终产品残留结构异构体,4、方法灵敏度不够,eg:相关物质检验法定量限未0.75ng，标准要求杂质程度不得过1.0，折算为0.5ng，表明此方法不能有效检测产品杂质，需重新建立有效杂质检测方法,36,仿制药杂质检查方法建立研究方案与评价,第36页,四、杂质检验方法和方法验证常见问题分析,5、方法缺乏互补性,eg,：（1）合成主要中间体在选定检测波优点物吸收，建立相关物质检测方法无法检测该物质,（2）建立该中间体适宜检测方法,6、积分时间不充分，不能有效检测杂质,氧化破坏试验中，主峰保留时间3倍处，仍有降解峰出现，色谱图统计至2倍，不能有效检测出相关物质,7、检测波长缺乏针对性,220nm附近吸收强度远高于278nm波优点,提供检测波长选择依据,37,仿制药杂质检查方法建立研究方案与评价,第37页,四、杂质检验方法和方法验证常见问题分析,8、供试液制备处理欠妥,eg,：（1）相关物质检验中供试验制备经过了碱化、萃取等复杂过程，是否会引发产品中相关物质改变而影响了检出结果,（2）供试液制备经过了固相萃取过程，测定结果可能难以如实反应产品中杂质情况,38,仿制药杂质检查方法建立研究方案与评价,第38页,五、几个问题讨论,1、复方制剂杂质研究,怎样进行研究？,主药稳定性,将不稳定主药降解产物和主药带进毒性杂质或含量较高杂质（尤其已知杂质）作为杂质研究检测主要内容，无法兼顾其它杂质时，首先确保这类杂质监控,制药之间相互作用，应作为复方制剂杂质研究重点,39,仿制药杂质检查方法建立研究方案与评价,第39页,五、几个问题讨论,杂质检测方法建立,参考各原料药杂质研究，并尽可能采取杂质对照品法,参考单方制剂杂质研究，难以实现杂质检测时，综合质量研究其它项目总体把握杂质控制,进行其中一个成份杂质检验,总杂质按其中一个成份峰面积进行本身对照法测定,总杂质按照两个成份平均峰面积进行本身对照法测定,按照出峰时间段对两个成份杂质分别进行本身对照法测定,关键是对杂质归属和确证,40,仿制药杂质检查方法建立研究方案与评价,第40页,五、几个问题讨论,2、多手性中心手性杂质检验,方法建立较为困难,结合中间过程控制杂质（质量研究源于设计）,计算方法,用响应异构体对照品外标法（或用对应异构体对照品定位采取归一化法）,用消旋体对照品外标法（或用对应消旋体对照品定位采取归一化法）,采取相对保留时间或以出峰次序定位归一化法,41,仿制药杂质检查方法建立研究方案与评价,第41页,六、小结,药品杂质是否被全方面准确地控制，直接关系到药品地质量可控与安全有效,杂质检验依赖于对杂质谱地基础研究,与被仿制药地杂质比较仍是一个难题,42,仿制药杂质检查方法建立研究方案与评价,第42页,