粪菌移植对脓毒症小鼠肠道T细胞免疫稳态和肠道炎症的作用.pdf

粪菌移植对脓毒症小鼠肠道 T 细胞免疫稳态和肠道炎症的作用徐嘉若1,2，关伟1,2，何婉雪3，徐建桥2，解立新21解放军医学院，北京100853；2解放军总医院呼吸与危重症医学部，北京100091；3首都医科大学宣武医院呼吸与危重症医学科，北京100053摘要：背景脓毒症是重症患者的主要死亡原因，目前缺乏有效的治疗手段，近年来粪菌移植(fecalmicrobiotatransplant-ation，FMT)治疗脓毒症受到越来越多关注。目的探讨粪菌移植治疗的免疫学机制，明确粪菌移植治疗对脓毒症小鼠肠道T 细胞免疫状态和功能以及肠道炎症状态的影响，为临床治疗提供理论依据。方法810 周龄 C57BL/6 小鼠随机分为对照组、脓毒症组和粪菌移植组，后两组通过腹腔注射脂多糖构建脓毒症小鼠模型，粪菌移植组小鼠在脂多糖注射 24h 后以灌胃的方式接受来自健康小鼠的粪菌移植，检测各组小鼠肠道固有层 T 细胞及其亚群以及表面功能性分子的表达，测量结肠长度，检测小肠和结肠组织的病理改变。结果相比对照组小鼠，脓毒症组小鼠小肠 T 淋巴细胞显著减少(22.03%1.50%vs30.78%1.62%，P0.01)，其中 CD4+T 细胞(15.08%1.01%vs21.58%1.95%，P0.01)和 CD8+T 细胞(5.05%0.39%vs6.28%0.21%，P0.01)均显著减少，小肠 CD4+T 细胞(227.2511.47vs266.006.27，P0.01)和 CD8+T 细胞(73.406.82vs102.804.80，P0.01)表面 CD28 的表达显著下调，CD8+T 细胞表面 PD-1 的表达(19.901.47vs15.002.25，P0.05)显著上调，差异均有统计学意义，说明脓毒症小鼠肠道 T 细胞的数量和功能受到抑制，结肠长度显著缩短(6.900.08)cmvs(8.180.22)cm，P0.01，组织病理结果显示小肠和结肠均出现明显的炎症和损伤；而与脓毒症组小鼠相比，粪菌移植组小鼠肠道 T 细胞(26.43%1.86%vs22.03%1.50%，P0.05)，包括 CD4+T 细胞(17.480.85%vs15.08%1.01%，P0.05)和 CD8+T 细胞(6.74%0.39%vs5.05%0.39%，P0.01)数量均出现回升，CD4+T 细胞(252.257.14vs227.2511.47，P0.05)和 CD8+T 细胞(95.303.63vs73.406.82，P0.01)表面 CD28 的表达出现回升，CD8+T 细胞表面 PD-1 的表达(17.100.52vs19.901.47，P0.05)出现回降，差异均有统计学意义，提示经粪菌移植治疗的脓毒症小鼠肠道 T 细胞的数量和功能得到一定恢复，结肠长度明显恢复(8.130.26)cmvs(6.900.08)cm，P0.01，组织病理结果显示小肠和结肠的炎症和损伤得到了明显的缓解。结论经粪菌移植治疗的脓毒症小鼠肠道 T 细胞数量和功能得到部分恢复，肠道 T 细胞的免疫稳态得到一定程度的恢复，并且显著缓解了脓毒症小鼠肠道的炎症和损伤。关键词：脓毒症；粪菌移植；肠道；免疫；T 淋巴细胞；小鼠中图分类号：R631；R392.12；R456文献标志码：A文章编号：2095-5227(2023)06-0662-06DOI：10.3969/j.issn.2095-5227.2023.06.015引用本文：徐嘉若，关伟，何婉雪，等.粪菌移植对脓毒症小鼠肠道 T 细胞免疫稳态和肠道炎症的作用J.解放军医学院学报，2023，44（6）：662-667.Effect of fecal bacteria transplantation on immune state of intestinal T cell and intestinalinflammation in septic miceXUJiaruo1,2,GUANWei1,2,HEWanxue3,XUJianqiao2,XIELixin21ChinesePLAMedicalSchool,Beijing100853,China;2CollegeofPulmonary&CriticalCareMedicine,ChinesePLAGeneralHospital,Beijing 100091,China;3Department of Pulmonary and Critical Care Medicine,Xuanwu Hospital Capital MedicalUniversity,Beijing100053,ChinaCorrespondingauthor:XIELixin.Email:Abstract:BackgroundSepsisisthemajorcauseofdeathincriticallyillpatients,buteffectivetreatmentstrategiesforsepsisare still lacking.Fecal microbiota transplantation(FMT)has recently gained concern as a potential treatment for sepsis.ObjectiveToinvestigatetheeffectsofFMTontheimmunestatusofintestinalTcellsandintestinalinflammationinsepticmice.MethodsC57BL/6miceaged8-10weekswererandomlydividedintocontrolgroup,sepsisgroupandFMTgroup.Themurinemodelofsepsiswasestablishedbyintraperitonealinjectionoflipopolysaccharide(LPS).After24hofLPSinjection,themiceinFMTgroupreceivedFMTfromhealthymice.Allmiceweresacrificedat48hafterinjectionofLPSorPBS.ThenumericalandphenotypicalterationsofTcellsinlaminapropriaofintestinal,colonlengthandthepathologicalchangesinsmallintestineandcolonweredetected.ResultsComparedwiththecontrolgroup,thenumberofTlymphocytes(22.03%1.50%vs30.78%1.62%,收稿日期：2022-11-21基金项目：首都卫生发展科研专项项目(首发 2022-1-5091)作者简介：徐嘉若，女，在读硕士，医师。研究方向：呼吸与危重症，微生态与宿主免疫。Email:通信作者：解立新，男，博士，主任医师，教授，解放军总医院呼吸与危重症医学部主任。Email:662解放军医学院学报Acad J Chin PLA Med Sch Jun 2023，44（6）https:/P0.01),CD4+Tcells(15.08%1.01%vs21.58%1.95%,P0.01)andCD8+Tcells(5.05%0.39%vs6.28%0.21%,P0.01)inlaminapropriaofintestinalinsepsisgroupdecreasedsignificantly.TheMFIsofCD28onCD4+Tcells(227.2511.47vs266.006.27,P0.01)andCD8+Tcells(73.406.82vs102.804.80,P0.01)weredown-regulatedsignificantly,whiletheMFIofPD-1onCD8+Tcells(19.901.47vs15.002.25,P0.05)wasup-regulatedsignificantly.Colonlengthsweresignificantlyshortened(6.900.08cmvs8.180.22cm,P0.01),andthesmallintestineandcolonshowedobviousinflammationandinjury.Comparedwiththesepsisgroup,thenumberofintestinalTcells(26.43%1.86%vs22.03%1.50%,P0.05),includingCD4+Tcells(17.480.85%vs15.08%1.01%,P0.05)andCD8+Tcells(6.74%0.39%vs5.05%0.39%,P0.01)inthefecalbacteriatransplantationgroupincreasedsignificantly.TheMFIsofCD28onCD4+Tcells(252.257.14vs227.2511.47,P0.05)andCD8+Tcells(95.303.63vs73.406.82,P0.01)alsoincreased,whiletheMFIofPD-1onCD8+Tcells(17.100.52vs19.901.47,P0.05)decreased,andthelengthofcolonincreasedsignificantly(8.130.26cmvs6.900.08cm,P0.01).Theinflammationandinjuryofsmallintestineandcolonweresignificantlyrelieved.ConclusionTheimmunestatusandhomeostasisofintestinalTcellsarepartlyrestored,andintestinalinflammationandinjuryaresignificantlyalleviatedbyFMTtreatmentinsepticmice.Keywords：sepsis;fecalmicrobiotatransplantation;intestines;immunity;T-lymphocytes;miceCited as：XuJR,GuanW,HeWX,etal.EffectoffecalbacteriatransplantationonimmunestateofintestinalTcellandintestinalinflammationinsepticmiceJ.AcadJChinPLAMedSch,2023,44（6）:662-667.脓毒症是感染引起的危及生命的器官功能障碍1。脓毒症的发病率和病死率较高，其导致的死亡占全球死亡总数的近 20%2。目前脓毒症的临床治疗缺乏有效的手段，仍是威胁人类健康的难治性疾病。粪菌移植(fecalmicrobiotatransplantation，FMT)是指将来自于健康供体的粪便(菌群)移植到受体肠道内，以重建其肠道菌群的治疗方式，在治疗感染性肠道疾病、炎症性肠病和非肠道疾病等方面都展现出了潜力3-5。近年来粪菌移植在脓毒症治疗中的应用得到越来越多的关注，有文献报道了应用粪菌移植成功治疗脓毒症合并腹泻的患者6。通过粪菌移植来调节和重建脓毒症患者的肠道菌群，其作用机制可能与恢复正常肠道菌群、调节免疫反应、协助病原体的清除有关7。有研究发现，粪菌移植治疗对脓毒症小鼠的肠道黏膜屏障产生了保护作用8。但目前缺乏粪菌移植对脓毒症肠道免疫状态和炎症状态影响的相关研究。本研究利用脓毒症小鼠模型和粪菌移植小鼠模型，探讨粪菌移植治疗对脓毒症小鼠肠道在抗感染免疫反应中发挥核心作用的 T 细胞免疫状态和功能以及肠道炎症状态的影响，从免疫学机制的角度探讨粪菌移植治疗的作用，从而为临床治疗提供理论依据。材料与方法1实验动物108 只雌性 SPF 级 C57BL/6 小鼠，810 周龄，体质量 1721g，购自北京维通利华实验动物技术有限公司 许可证号：SCXK-(京)2016-0006。小鼠饲养于中国科学院微生物研究所SPF 级实验动物房内，在保证适宜的温度、湿度和光照等条件下，适应性喂养 1 周后进行实验。动物实验由中国科学院微生物研究所伦理委员会批准(批准号：APIMCAS2022143)。2试剂和仪器Fortessa 流式分析仪(BD 公司，美国)；移液器(Eppendorf 公司，德国)；台式冷冻离心机(ThermoFisher 公司，美国)；掌上离心机(天根生化科技有限公司)；台式恒温振荡器(太仓豪诚实验仪器有限公司)；涡旋振荡器(天根生化科技有限公司)；脱水机(Leica，德国)；包埋机(Leica，德国)；病理切片机(Leica，德国)；病理切片扫描仪(Leica，德国)；显微镜(Nikon 公司，日本)。脂多糖(lipopolysaccharide，LPS；SigmaAldrich 公司，美国)；磷酸盐缓冲液(PBS，北京索莱宝科技有限公司)；胎牛血清(FBS，Gibco 公司，美国)；型胶原酶、型胶原酶(Worthington公司，美国)；脱氧核糖核酸酶(DNase，上海沪试实验室器材股份有限公司)；HEPES(北京酷来搏科技有限公司)；EDTA(北京酷来搏科技有限公司)；4%多聚甲醛固定液(生工生物工程(上海)股份有限公司)；无水乙醇(天津市康科德科技有限公司)；二甲苯(河北百灵威超精细材料有限公司)；石蜡(北京百灵威科技有限公司)；苏木素染色液(上海威奥生物科技有限公司)；伊红染色液(上海威奥生物科技有限公司)；BUV395HamsterAnti-MouseCD3e(BD 公司，美国)；FITCRatAnti-MouseCD4(BD 公司，美国)；BV510RatAnti-MouseCD8a(BD 公司，美国)；BB700HamsterAnti-MouseCD279(PD-1)(BD 公司，美国)；BV421HamsterAnti-MouseCD28(BD 公司，美国)。3脓毒症小鼠模型和粪菌移植小鼠模型构建(1)采用腹腔注射 LPS 的方法构建脓毒症小鼠模型，之所以没有采用盲肠结扎穿孔(cecalligationandpuncture，CLP)的方法，是因为肠穿孔是粪菌移植的禁忌证9。向小鼠腹腔内注射 1mg/mL 的解放军医学院学报Acad J Chin PLA Med Sch Jun 2023，44（6）https:/663脂多糖溶液，注射剂量采用文献报道中广泛采用的 10mg/kg10-11。(2)粪菌移植小鼠模型的构建是通过收集正常健康小鼠的粪便，以 PBS 溶解，研磨过滤后取 0.2mL 灌胃给腹腔注射脂多糖溶液24h 后的脓毒症小鼠。粪菌移植的浓度采用文献报道中广泛采用的 0.125g/mL12。4实验分组及处理采用随机数生成法将 36 只小鼠随机分为 3 组，每组 12 只。粪菌移植组小鼠是在腹腔注射脂多糖溶液诱导脓毒症 24h 后进行粪菌移植；脓毒症组小鼠是在腹腔注射脂多糖溶液诱导脓毒症 24h 后灌胃与粪菌移植同等剂量的PBS；对照组小鼠是在腹腔注射与脂多糖溶液同等剂量的 PBS24h 后灌胃与粪菌移植同等剂量的PBS。文献广泛采用 48h 这一最晚检测时间点来检测急性脓毒症小鼠模型13。三组小鼠均在腹腔注射脂多糖溶液或 PBS48h 后处死小鼠，分别获取组织标本进行以下检测：测量结肠的长度(每组4 只)，小肠和结肠组织病理切片 HE 染色(每组4 只)，分离小肠固有层细胞后进行流式细胞术检测(每组 4 只)。每种实验均独立重复 3 次。5小肠和结肠组织病理检测处死小鼠后获取小肠和结肠组织，测量结肠的长度，结肠长度是反映小鼠肠道炎症程度的一个重要指标，结肠长度越短通常反映出小鼠肠道炎症越重14。将小肠和结肠组织放入 4%多聚甲醛溶液中固定，石蜡包埋切片后进行 HE 染色，在光学显微镜下观察小鼠小肠和结肠组织病理改变。6流式细胞术检测小肠固有层 T 细胞及其表面分子 CD28、CD69 和 PD-1 的表达于腹腔注射脂多糖溶液 48h 后脱颈法处死小鼠，剖腹取出小肠置于预冷的 PBS 中，去掉肠系膜和派氏结，沿肠系膜将小肠纵向剪开，在装有 20mL 预冷的 PBS 的50mL 离心管中剧烈摇晃去除肠道内容物，将小肠剪成约 1.5cm 小段放入 20mL 含有 HEPES 和EDTA 的 HBSS(溶液)中，置于 37100r/min的摇床中消化 20min 后去上清，加入新鲜的溶液在 37100r/min 的摇床中消化 20min，涡旋震荡 30s，将小肠片段取出用 20mLPBS 清洗一遍，然后剪碎，放入 20mL 含有型胶原酶、型胶原酶、DNase以及 2%胎牛血清的 HBSS 中，置于 37100r/min 的摇床中消化 40min 后过滤收集上清，2000r/min 离心 5min，去上清，沉淀物即为分离出的小肠固有层细胞。向 50mLPBS 中加入 250LFBS 配制成染色缓冲液，用 1mL 染色缓冲液重悬沉淀并洗 1 次后，取适量的细胞悬液，根据需要检测的细胞表面标志物，搭配好需检测的流式抗体，避光冰上孵育 40min 染色，染色期间上下颠倒混匀细胞以避免细胞沉淀；染色完成后 43500r/min 离心 1min，去上清，用400L 染色缓冲液洗两次细胞，最后用根据细胞数量用适量体积的染色缓冲液重悬，过滤至流式管中上机进行检测分析。xs7统计学处理采用 SPSS22.0 对数据进行统计学分析。符合正态分布和方差齐性的计量数据以表示，两组间比较采用 t 检验，多组间比较采用单因素方差分析(One-WayANOVA)；不符合正态分布或方差齐性的数据以 Md(IQR)表示，组间比较采用非参数秩和 Mann-Whitney 检验。P0.05为差异有统计学意义。结果1各组小鼠的结肠长度变化脂多糖溶液注射后 48h，脓毒症组小鼠的结肠长度与对照组小鼠相比显著缩短(6.900.08)cmvs(8.180.22)cm,P0.01，提示脓毒症小鼠出现了显著的肠道炎症。而经粪菌移植治疗的脓毒症小鼠的结肠长度显著长于脓毒症组小鼠(8.130.26)cmvs(6.900.08)cm,P0.01。经粪菌移植治疗的脓毒症小鼠结肠长度有所恢复，反映出肠道炎症水平有所减轻(图 1)。2各组小鼠结肠和小肠的病理变化各组小鼠的结肠 HE 病理染色显示，对照组小鼠结肠组织结构清晰，未见异常；脓毒症组小鼠出现了结肠组织急性中度炎症，炎症累及肠黏膜及黏膜下层，甚至局部形成透壁性炎症，约 1/3 肠黏膜上皮损伤、脱落，局部隐窝破坏，浸润炎性细胞以中性粒细胞为主；而粪菌移植组小鼠结肠 HE 染色可见局部轻度肠黏膜间质炎症，炎症局限于肠黏膜间质，局部肠黏膜上皮损伤(受损范围小于 10%)、局部隐窝破坏，炎性细胞散在分布于黏膜间质，以中性粒细胞和淋巴细胞为主，范围相对局限(图 2)。各组小鼠的小肠 HE 病理染色显示，对照组小鼠小肠组织结构清晰，未见异常；脓毒症组小鼠小肠组织急性中度炎症，炎症累及肠黏膜及黏膜下层，约 1/5 肠黏膜上皮损伤、脱落，约 1/3 隐窝破坏，病变明显处整段黏膜基底缺失、纤维细胞增生，浸润炎性细胞以中性粒细胞为主；而粪菌移植组小鼠局部轻微肠黏膜间质炎症，炎症局限于肠黏膜间质，局部肠黏膜上皮损伤(受损范围小于3%)、未见明显隐窝破坏，病变部位炎性细胞散在664解放军医学院学报Acad J Chin PLA Med Sch Jun 2023，44（6）https:/分布于黏膜间质，以中性粒细胞和淋巴细胞为主，范围局限(图 3)。相比于对照组小鼠，脓毒症组小鼠肠道出现了明显的炎症和损伤，而经粪菌移植治疗的脓毒症小鼠肠道的炎症和损伤得到了显著的缓解。3各组小鼠肠道 T 细胞数量和功能变化脓毒症组小鼠小肠 T 淋巴细胞与对照组小鼠相比显著减少(22.03%1.50%vs30.78%1.62%，P0.01)，其中 CD4+T 细胞(15.08%1.01%vs21.58%1.95%，P0.01)和 CD8+T 细胞(5.05%0.39%vs6.28%0.21%，P0.01)均显著减少，此结果与前期研究报道的脓毒症促进细胞凋亡、诱导淋巴细胞减少症的相关结果一致15。而粪菌移植组小鼠肠道 T 细胞(26.43%1.86%vs22.03%1.50%，P0.05)，包括 CD4+T 细胞(17.480.85%vs15.08%1.01%，P0.05)和 CD8+T 细胞(6.74%0.39%vs5.05%0.39%，P0.01)的数量与脓毒症组相比均出现回升(图 4)。脓毒症组小鼠与对照组小鼠相比，小肠固有层 CD4+T 细胞表面 CD28 的 MFI(227.2511.47vs266.006.27，P0.01)和 CD8+T 细胞表面 CD28的 MFI(73.406.82vs102.804.80，P0.01)显著降低，CD8+T 细胞表面 PD-1 的 MFI(19.901.47vs15.002.25，P0.05)显著升高。而粪菌移植组小鼠与脓毒症组小鼠相比，CD4+T 细胞表面CD28 的 MFI(252.257.14vs227.2511.47，P0.05)和 CD8+T 细胞表面 CD28 的 MFI(95.303.63vs73.406.82，P0.01)出现回升，CD8+T细 胞 表 面 PD-1 的 MFI(17.10 0.52 vs 19.90 1.47，P0.05)出现回降(图 5)。结果提示脓毒症图 1 各组小鼠结肠长度比较(n=4)Fig.1 Colon length of mice in different groups(n=4)图 2 经与未经粪菌移植治疗的脓毒症小鼠结肠组织病理学改变(HE 染色，标尺=200 m)Fig.2 Representative images of colon tissues sections in septic mice with or without FMT treatment(HE staining,scale bar=200 m)图 3 经与未经粪菌移植治疗的脓毒症小鼠小肠组织病理学改变(HE 染色，比例尺=200 m)Fig.3 Representative images of small intestine tissues sections in septic mice with or without FMT treatment(HE staining,scale bar=200 m)解放军医学院学报Acad J Chin PLA Med Sch Jun 2023，44（6）https:/665小鼠肠道 CD4+T 细胞和 CD8+T 细胞数量和功能均受到抑制，出现 T 淋巴细胞活化障碍，而经粪菌移植治疗的脓毒症小鼠肠道 T 细胞数量出现一定回升，CD4+T 细胞和 CD8+T 细胞数量和功能得到一定程度的恢复。讨论目前脓毒症器官功能障碍的评估体系主要包括呼吸系统、心血管系统、肝、肾、神经系统和血液系统，而肠道功能障碍的症状是非特异性的，没有被纳入评估体系。但脓毒症会对肠道微生物群产生影响，进而可能导致器官功能障碍16。肠道微生物群对于维持肠道屏障功能和调节先天和适应性免疫系统具有重要作用。免疫失衡是脓毒症发生发展的关键机制之一，其中适应性免疫细胞尤其是在抗感染免疫反应中发挥核心作用的T 细胞的改变尤为重要1,17。肠道 T 细胞在调节肠道免疫激活和免疫耐受、维持肠道免疫稳态中起着核心作用18。此外，炎症反应在脓毒症的发生、发展过程中起着至关重要的作用19。因此，了解脓毒症肠道微生物群的紊乱与重建对脓毒症肠道 T 细胞免疫状态及肠道炎症的影响具有重要意义20。本研究建立了脓毒症和粪菌移植小鼠模型，通过粪菌移植的方式对脓毒症小鼠的肠道菌群进行重建，结果发现脓毒症小鼠肠道 CD4+T 细胞和CD8+T 细胞的数量和功能均受到抑制，其表面T 细胞活化中起关键作用的 CD28 表达下调，而抑制性受体 PD-1 表达上调，出现 T 淋巴细胞活化障碍，这与之前研究报道的脓毒症会导致机体免疫失衡一致21-24。提示脓毒症小鼠肠道免疫也存在免疫失衡，这可能与病理结果中出现的显著的肠道炎症和损伤相关。而经粪菌移植治疗的脓毒症小鼠肠道 T 细胞数量出现一定回升，CD4+T 细胞和 CD8+T 细胞的数量和功能得到一定程度的恢复，在一定程度上恢复了脓毒症小鼠肠道 T 细胞的免疫稳态，肠道的炎症和损伤也得到了显著的缓解。提示粪菌移植对脓毒症的治疗作用可能与一定程度上恢复了脓毒症小鼠肠道 T 细胞的免疫稳态、缓解了肠道的炎症和损伤相关。但还需进一步研究进行验证。本研究存在一定局限性：(1)本研究采用的腹腔注射脂多糖溶液的脓毒症小鼠模型，虽然是常用的脓毒症动物模型，但无法完全模拟临床脓毒症患者的病理生理状态；(2)本研究采用的粪菌移植小鼠模型是通过灌胃的方式将健康小鼠的肠道图 4 各组小鼠小肠固有层 T 细胞及其亚群数量变化(n=4)Fig.4 Relative numbers of T cells,CD4+T cells and CD8+T cells in lamina propria of small intestine in each group(n=4)图 5 各组小鼠小肠固有层 T 细胞表面 CD28 和 PD-1 表达情况(n=4)Fig.5 Expression of CD28 and PD-1 on CD4+T cells and CD8+T cells in lamina propria of small intestine in each group(n=4)666解放军医学院学报Acad J Chin PLA Med Sch Jun 2023，44（6）https:/菌群移植给脓毒症小鼠，该方式虽然是粪菌移植小鼠模型通常采用的方式，但与临床上常用的利用肠镜进行粪菌移植的方式相比还存在一定差距，无法直接将菌群递送至肠道内，无法消除胃液对粪菌移植的影响；(3)本研究将研究重点放在了适应性免疫系统尤其是 T 细胞上，缺乏对巨噬细胞、中性粒细胞、NK 细胞等固有免疫细胞的探索，对于其他免疫细胞的功能的进一步探索将有助于我们更好地综合分析粪菌移植治疗对脓毒症小鼠肠道免疫的影响；(4)本研究仅在小鼠模型中进行了研究，未来还需在临床进行进一步验证。综上，脓毒症小鼠经粪菌移植治疗后，肠道T 细胞的数量、功能及免疫稳态能够得到一定程度的恢复，肠道的炎症和损伤能够得到显著缓解。本研究初步探讨了粪菌移植治疗对脓毒症小鼠肠道 T 细胞免疫状态及肠道炎症的影响，初步探索了粪菌移植治疗对脓毒症小鼠肠道的作用机制，验证了粪菌移植在脓毒症中的潜在应用价值。我们未来的研究将继续探索粪菌移植治疗对脓毒症小鼠全身及各器官免疫状态和功能的影响，进一步深入认识粪菌移植治疗的免疫学机制和应用价值，为临床治疗提供参考。作者贡献作者贡献徐嘉若：总体构思，动物实验，文章撰写；解立新：总体构思，资金获取，监督指导，审读修订；关伟、何婉雪、徐建桥：数据管理，规范分析，软件处理。利益冲突利益冲突所有作者声明无利益冲突。数据共享声明数据共享声明本篇论文相关数据可依据合理理由从作者处获取，Email：。参考文献Cecconi M，Evans L，Levy M，et al.Sepsis and septicshockJ.Lancet，2018，392（10141）：75-87.1RuddKE，JohnsonSC，AgesaKM，etal.Global，regional，andnationalsepsisincidenceandmortality，1990-2017：analysisfor the Global Burden of Disease StudyJ.Lancet，2020，395（10219）：200-211.2Gupta A，Khanna S.Fecal microbiota transplantationJ.JAMA，2017，318（1）：102.3Hvas CL，Dahl Jrgensen SM，Jrgensen SP，et al.FecalmicrobiotatransplantationissuperiortofidaxomicinfortreatmentofrecurrentClostridiumdifficileinfectionJ.Gastroenterology，2019，156（5）：1324-1332.4PapanicolasLE，GordonDL，WesselinghSL，etal.Improvingrisk-benefitinfaecaltransplantationthroughmicrobiomescreeningJ.TrendsMicrobiol，2020，28（5）：331-339.5Wurm P，Spindelboeck W，Krause R，et 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