分散固相萃取结合超高效液相色谱-串联质谱法测定猪、鸡可食性组织中巴氯芬残留量.pdf

农产品质量与安全2023 年第 4 期分散固相萃取结合超高效液相色谱-串联质谱法测定猪尧鸡可食性组织中巴氯芬残留量严敏鸣1吴剑平2张静余1严凤2渊1.上海市浦东新区农产品质量安全中心袁 上海201202曰2.上海市兽药饲料检测所袁 上海201103冤作者简介院 严敏鸣 渊1979冤袁 高级兽医师袁 从事食品质量安全研究遥 Email院 遥严凤 渊1981冤袁 高级畜牧师袁 从事食品安全检测研究遥 Email院 渊通讯作者冤遥摘要院 建立分散固相萃取结合超高效液相色谱串联质谱法测定猪尧 鸡可食性组织中巴氯芬残留量的分析方法遥 取均质后的动物组织经乙腈1 moL/L 高氯酸 渊8020袁冤 溶液提取袁 加入无水硫酸镁和氯化钠进行脱水和盐析袁 高速离心分层后取适量乙腈层溶液经 200 目 C18粉末净化后袁 滤液以 40水浴氮气吹干遥 残渣以乙腈0.1甲酸 渊1585袁冤 复溶后袁以反相 C18为固定相袁 0.1甲酸水溶液与 0.1甲酸乙腈溶液为流动相袁 采用梯度洗脱程序进行分离袁 以超高效液相色谱串联质谱法进行同位素内标法定性定量分析遥 结果显示袁 巴氯芬在 0.550.0 滋g/kg 范围内线性关系良好 渊0.999 4冤袁 方法的检出限为 0.25 滋g/kg袁 定量限为 0.50 滋g/kg袁 回收率批间均值在 89.14109.52之间袁 批内批间变异系数3袁定量限 渊Limit of quantitation袁LOQ冤S/N10的原则对这两个添加含量水平的样品检测结果进行验证遥8.方法精密度与准确度遥 分别取均质后的猪尧鸡可食性组织各3批次袁 每批次称取6份样品袁 其中添加1倍定量限0.50滋g/kg尧2倍定量限1.00滋g/kg和10倍定量限5.00滋g/kg的巴氯芬袁 巴氯芬D4同位素内标均添加2.00滋g/kg袁 按上述 野3.前处理条件冶 进行前处理后袁 以 野1.色谱条件冶野2.质谱条件冶 进行检测袁 计算其回收率与批内批间变异系数 渊Coefficient of variation袁CV冤袁 以考察方法的准确度与精密度遥二尧 结果与分析渊一冤 色谱条件的优化巴氯芬水中解离系数pa3.87依0.1袁 水油分配系数log 1.56袁 其在酸性水溶液中水解易受抑制袁 更多呈现为分子状态袁易于被反相色谱柱所保留袁 通过梯度程序增加流动相中的有机相比例可增强其洗脱效果遥 本研究考虑后端接质谱仪袁 选用低相对分子质量尧 低沸点的0.1甲酸水溶液作为无机相袁 比较了用0.1甲酸乙腈溶液或0.1甲酸甲醇溶液作有机相的区别袁发现选用0.1甲酸甲醇溶液作有机相时袁 在梯度洗脱过程中柱压会产生较大波动袁 不利于方法的稳定性和耐用性袁 而用0.1甲酸乙腈溶液时具有与前者接近的保留行为袁 因此选定0.1甲酸乙腈溶液作为有机相遥 固定相分别比较了同品牌 渊Waters公司冤 的BEH C18色谱柱和五氟苯基PFP色谱柱袁规格均为100 mm伊2.1 mm袁1.7滋m粒径填料遥 结果显示袁 使用五氟苯基PFP色谱柱虽然加强了保留 渊保留时间从2.95 min提高至3.38 min冤袁 但其柱效和峰形对称性不如BEH C18柱袁 因此选用Wa-ters BEH C18色谱柱 渊100 mm伊2.1 mm袁1.7滋m冤遥渊二冤 线性定量范围按上文 野4.确定线性定量范围冶 进行实验袁 以巴氯芬进样浓度为横轴袁以其定量通道内目标峰与同位素内标定量通道内相应峰积分面积比为纵轴袁 绘制曲线并线性拟合袁获得线性拟合方程2.123 6x0.181 9与线性相关系数0.999 4袁 说明方法进样浓度在0.2525.0 ng/mL袁 即0.550.0滋g/kg添加含量范围内具有良好的线性遥渊三冤 提取效率与净化效率的优化动物可食性组织中富含蛋白尧 脂肪和磷脂等常见杂质袁 会对色谱质谱仪器造成污染而影响方法耐用性袁 过多的蛋白与磷脂杂质对目标物在电喷雾离子源中的离子化效率也会造成不利影响袁 因此在提取步骤中也要考虑初步除杂遥 结合巴氯芬的理化特性袁 通过调节提取液pH可破坏蛋白质等电点袁 造成蛋白质不可逆的凝结沉淀袁 因此选择酸性水溶液结合中强极性农产品质量与安全2023 年第 4 期有机试剂在提高提取效率的同时做到有效地初步净化遥 本研究按上文 野5.前处理方法比较实验冶 条件袁 选择了不同比例的水相和有机相的组合作为提取液袁 并在提取液中加入适量无水硫酸镁与氯化钠进行盐析袁 在提取与初步除杂后采用分散固相萃取技术或传统的固相萃取柱对提取液进一步净化袁 比较巴氯芬在猪肉尧 鸡肉中的绝对回收率以确定最优的前处理方式袁 结果见表3遥结果表明袁 在同等条件下采用更高比例有机相的提取液具有更高的提取效率袁 无机相选择1mol/L高氯酸相比0.1甲酸和1 mol/L盐酸具有更高的提取效率遥 高氯酸除了调节pH外袁 还有氧化还原作用袁 可以更好地破坏组织样品中的蛋白质与磷脂2629遥 有机相选择乙腈相比甲醇具有更高的提取效率袁 酸性条件下巴氯芬因水解抑制而大多呈低极性的分子状态袁 在高比例的有机相中具有很好的溶解性袁 尤其是配合后续盐析处理袁 乙腈可以通过与水相分层而对目标物有更好的选择性遥 在提取液的净化过程中采用阳离子交换机理和反相直过吸附非极性杂质两种机理的净化方式都得到了令人较为满意的回收率袁 但是相比较之下袁 采用中性疏水作用柱EMRLipid直过吸附净化和使用C18粉末分散固相萃取净化操作更便捷尧 回收率更好袁 两者在效果上较为接近袁 考虑到采用C18粉末成本上更为低廉袁 最终选择C18粉末作为本方法的净化方式遥渊四冤 基质效应基质效应是指在样品测试过程中袁 由于待测物以外的杂质存在袁 直接或间接影响待测物响应的现象遥 按上述 野6.基质效应 渊ME冤实验冶 条件分别在猪尧 鸡可食性组织中比较了0.5尧1.0尧5.0滋g/kg这3个添加量的基质效应袁 所得基质效应结果均处于80100之间遥 由此可见袁本方法条件下猪尧 鸡可食性组织基质中普遍存在基质抑制作用但并不显著袁 因此可以采用同位素内标对检测结果进行校准袁 可有效降低基质效应对检测结果准确性和稳定性的影响遥渊五冤 方法灵敏度分别取猪尧 鸡空白组织样品袁 按上文 野7.方法灵敏度实验冶 条件进行实验袁各可食性组织中巴氯芬定量限含量添加所得特征离子质量色谱图见图1图2遥 结果显示袁 在猪尧 鸡可食性组织中本方法检出限可达0.25滋g/kg袁 其信噪比均大于3袁 定量限可达0.50滋g/kg袁 其信噪比均大于10袁 表明本方法可满足猪尧 鸡可食性组织中违禁药物残留检测的灵敏度要求遥渊六冤 方法准确度与精密度按上文 野8.方法精密度与准确度冶 实验条件进行实验袁 所得结果见表4遥 结果显示袁 在3个添加水平下袁 巴氯芬在猪尧 鸡可食性组织 渊肌肉尧 皮脂尧 肝脏和肾脏冤 基质中的回收率批间均值在89.14109.52范围内袁 且批内尧 批间CV10袁 表明本方法在定量范围内具有较好的准确度与精密度遥三尧 结论本研究建立了测定猪尧 鸡可食性组织 渊肌肉尧表 3不同提取液和净化方式条件下猪肉尧 鸡肉中巴氯芬的提取和净化效率比较渊冤提取液动物组织阴离子交换柱SAX阳离子交换柱PCX中性疏水作用柱EMRLipidC18粉末PSA粉末中性氧化铝粉末乙腈0.1甲酸渊5050袁冤乙腈1 moL/L 盐酸渊5050袁冤乙腈1 moL/L 高氯酸渊5050袁冤乙腈1 moL/L 高氯酸渊8020袁冤甲醇0.1甲酸渊8020袁冤甲醇1 moL/L 盐酸渊8020袁冤甲醇1 moL/L 高氯酸渊8020袁冤猪肉鸡肉猪肉鸡肉猪肉鸡肉猪肉鸡肉猪肉鸡肉猪肉鸡肉猪肉鸡肉3.24.32.14.13.35.64.65.12.34.22.84.62.30.643.246.646.851.261.566.374.679.638.842.338.245.731.835.653.651.666.869.671.573.284.689.148.854.258.243.158.765.655.762.365.663.781.579.889.788.251.347.663.256.769.871.644.841.635.939.861.755.770.572.362.758.353.847.654.961.824.630.415.921.931.729.840.843.142.646.333.837.938.641.8农产品质量与安全2023 年第 4 期A猪肉曰 B猪皮脂曰 C猪肝曰 D猪肾图 1猪可食性组织中巴氯芬定量限含量添加 渊0.50 滋g/kg冤 的特征离子质量色谱图A鸡肉曰 B鸡皮脂曰 C鸡肝曰 D鸡肾图 2鸡可食性组织中巴氯芬定量限含量添加 渊0.50 滋g/kg冤 的特征离子质量色谱图皮脂尧 肝脏和肾脏冤 中巴氯芬残留量的分散固相萃取结合超高效液相色谱串联质谱法袁 采用分散固相萃取法进行提取和净化袁 使用超高效液相色谱法进行分离袁 三重四极杆质谱结合同位素内标法进行定性定量分析遥 结果显示袁 方法的检出限为0.25滋g/kg袁 定量限为0.50滋g/kg袁 在0.550.0滋g/kg范围内线性关系良好 渊0.999 4冤袁 回收率批间均值可达89.14109.52袁 批内批间CV10袁表明本方法具有较好的灵敏度尧 准确度与精密度遥目前袁 针对违禁药物巴氯芬检测的现行有效标准均不适用于畜禽可食性组织袁 因此本研究在达到灵敏度要求的前提下进一步补充了对猪尧 鸡可食性组织中巴氯芬残留量的监测技术手段袁 为市场监督执法提供了有力技术依据2830遥103050709010305070908.07.57.06.56.05.55.04.54.03.53.02.52.01.51.00.50.0巴氯芬214跃151巴氯芬D4218跃155巴氯芬214跃151巴氯芬D4218跃155RT院2.97AA院7 845SN院184RT院2.94AA院12 643SN院1338.07.57.06.56.05.55.04.54.03.53.02.52.01.51.00.50.0103050709010305070908.07.57.06.56.05.55.04.54.03.53.02.52.01.51.00.50.08.07.57.06.56.05.55.04.54.03.53.02.52.01.51.00.50.010305070901030507090103050709010305070908.07.57.06.56.05.55.04.54.03.53.02.52.01.51.00.58.07.57.06.56.05.55.04.54.03.53.02.52.01.51.00.50.08.07.57.06.56.05.55.04.54.03.53.02.52.01.51.00.50.08.07.57.06.56.05.55.04.54.03.53.02.52.01.51.00.50.010305070901030507090103050709010305070901030507090103050709010305070901030507090巴氯芬214跃151巴氯芬D4218跃155巴氯芬214跃151巴氯芬D4218跃155RT院2.86AA院6 595SN院174RT院2.83AA院12 215SN院139RT院2.87AA院7 339SN院193RT院2.84AA院12 305SN院148RT院2.88AA院8 069SN院179时间渊min冤RT院2.85AA院12 353SN院138时间渊min冤时间渊min冤时间渊min冤ABCD巴氯芬214跃151巴氯芬D4218跃155时间渊min冤RT院2.87AA院6 189SN院168RT院2.84AA院10 590SN院139RT院2.87AA院6 603SN院181RT院2.84AA院12 491SN院144巴氯芬214跃151巴氯芬D4218跃155巴氯芬214跃151巴氯芬D4218跃155巴氯芬214跃151巴氯芬D4218跃155RT院2.87AA院6 429SN院171RT院2.84AA院10 917SN院138RT院2.88AA院7 415SN院168RT院2.85AA院12 825SN院151时间渊min冤时间渊min冤时间渊min冤BADC农产品质量与安全2023 年第 4 期本文引用格式院 严敏鸣袁 吴剑平袁 张静余袁 等.分散固相萃取结合超高效液相色谱串联质谱法测定猪尧 鸡可食性组织中巴氯芬残留量 咱J暂.农产品质量与安全袁2023渊4冤院6773.YANMinming袁WUJianping袁ZHANGJingyu袁.Determination of baclofen residues in edible tissue ofpig and chicken by dispersive solid phase extractioncombined with ultra performance liquid chromatogra-phy tandem mass spectrometry咱J暂.袁2023渊4冤院6773.参考文献咱1暂 HOLAJOVA M袁 FRANEK M.Effect of short-and long-term administration of baclofen on spatial learning and表 4猪尧 鸡可食性组织中巴氯芬残留量测定的准确度和精密度渊6冤猪皮脂猪肉猪肝猪肾0.501.005.000.501.005.000.501.005.000.501.005.00103.25103.90102.8196.9097.8096.9489.1991.1989.74100.5099.50104.7797.7696.6798.5090.2490.9888.93102.03103.11102.4399.0698.9998.8688.0088.9290.50103.82102.96105.1397.2596.1398.1388.7587.9490.903.864.224.293.742.913.052.341.922.901.753.062.773.092.341.682.711.641.324.494.513.802.463.152.412.362.671.614.385.083.692.722.173.032.122.781.52103.3297.2190.04101.5997.6490.05102.5298.9789.14103.9797.1789.20样品添加量渊滋g/kg冤批次回收率批内均值渊冤批内CV渊冤回收率批间均值渊冤3.93.12.53.42.42.14.02.52.44.22.72.5批间CV渊冤样品添加量渊滋g/kg冤批次回收率批内均值渊冤批内CV渊冤回收率批间均值渊冤批间CV渊冤鸡皮脂鸡肉鸡肝鸡肾0.501.005.000.501.005.000.501.005.000.501.005.00107.61107.89107.7991.0090.5590.6791.5991.5491.14109.68108.98109.9190.4791.5091.6390.6390.4690.63108.37110.71108.8391.0591.0590.6691.7991.5492.48107.88108.66108.4590.8091.0991.2390.3390.9091.463.734.814.921.201.220.981.311.321.334.333.354.621.041.400.881.500.830.754.474.894.240.981.521.401.091.700.503.993.323.711.021.151.560.790.671.51107.7690.7491.42109.5291.2090.57109.3090.9291.93108.3391.0490.904.21.11.33.91.21.04.41.31.23.51.21.1农产品质量与安全2023 年第 4 期memory in rats 咱J暂.袁 2018袁 67渊1冤院 133141.咱2暂 KRAUS T袁 GEGENLEITNER K袁 SYEHLIK M袁.Long-term therapy with intrathecal baclofen improvesquality of life in children with severe spastic cerebral palsy咱J暂.袁 2017袁 21渊3冤院 565569.咱3暂 姜曼袁 张信芳.巴氯芬联合腺苷钴胺治疗三叉神经痛的效果 咱J暂.中国药物经济学袁 2022袁 17 渊9冤院 105107.咱4暂 任丽敏袁 王磊袁 李新旺.氨基丁酸对药物成瘾的调节及机制 咱J暂.中国药物滥用防治杂志袁 2008 渊3冤院 160162.咱5暂 肖敏袁 郭莲军袁 罗攀.巴氯芬改善慢性脑缺血大鼠情感障碍的作用及其机制 咱J暂.医药导报袁 2020袁 39 渊5冤院599603.咱6暂 赵敏袁 黄振光.巴氯芬致肾功能不全者不良反应文献分析 咱J暂.中国药物警戒袁 2020袁 17 渊5冤院 296299.咱7暂 康光明袁 侯萍萍袁 武俐君袁 等.都梁软胶囊联合巴氯芬片治疗慢性紧张型头痛的效果与安全性 咱J暂.临床医学研究与实践袁 2022袁 7 渊32冤院 139141.咱8暂 王霞袁 康海燕.中枢性肌松剂巴氯芬临床应用及不良反应 咱J暂.临床医学袁 2011袁 31 渊2冤院 114115.咱9暂 张冬侠.巴氯芬联合卡马西平治疗原发性三叉神经痛的临床有效性与安全性评估 咱J暂.吉林医学袁 2020袁 41渊10冤院 2 4672 469.咱10暂 严凤袁 潘娟袁 贡松松袁 等.超高效液相色谱串联质谱法测定猪肉中巴氯芬的残留 咱J暂.食品安全质量检测学报袁 2019袁 10 渊11冤院 3 3903 395.咱11暂 夏骏袁 李勇袁 徐国茂袁 等.固相萃取液相色谱串联质谱法测定猪尿中的巴氯芬 咱J暂.中国兽药杂志袁2013袁 47 渊5冤院 3235.咱12暂 董文婷袁 曾勇袁 卢芳袁 等.增强型脂肪净化技术结合超高效液相色谱串联质谱法测定牛羊可食性组织中碘醚柳胺残留 咱J暂.农产品质量与安全袁 2023 渊3冤院6267.咱13暂 孙瑞卿袁 李晋栋袁 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