微流控芯片技术在蛋白质分析中的应用进展.pdf

第 l 9卷第4期 2 0 0 7年 4月 化 学 研 究 与 应 用 C h e mi c a l R e s e a r c h a n d A p p l i c a t i o n V o 1 1 9 N o 4 Ap r ，2 0 0 7 文章编号：1 0 0 4-1 6 5 6(2 0 0 7)0 4 4 3 3 4 5 4 3 4 微流控芯片技术在蛋 白质分析 中的应用进展 蓝 悠，李全文，陈缵光(中山大学药学院，广东广州5 1 0 0 8 9)摘要：近年来，微流控芯片技术取得了显著的发展。随着微电子及微机械等制作技术的不断进步，高通量、高 效、快速、低成本的微流控分析芯片在蛋白质和多肽分析方面获得了令人瞩目的成果。本文主要介绍了微流 控芯片在蛋白质组学分析研究的应用和发展。引用文献 5 2篇。关键词：微流控芯片；微芯片；蛋白质分析 中图分类号：0 6 2 9 7 3 文献标误码：A 随着人类基因组测序计划的完成，分子生物 学已经进入蛋 白质组学 的研究 阶段。为了在蛋 白质水平上对各种生物学功能、各种生理、生化过 程以及各种疾病发生的机理更全面的了解，人们 的研究重点逐渐转向于用各种基于蛋 白质的检测 手段来研究蛋白质的结构、功能、翻译后修饰(M s)以及蛋 白质之间的相互作用 3 J。蛋 白质分 析对重大疾病机理、疾病诊断与治疗、药物筛选等 方面的研究有重要意义，其最基本的研究任务是 从生物样 品中分离和鉴定蛋 白质。蛋 白质检测分 析最常用的方法是先从 细胞 中提取蛋 白质，再通 过双向凝胶电泳(2一D G E)分 离生物样 品中的特 定蛋白质，然后用荧光扫描或质谱(M S)等方法检 测和分析，从而得到蛋白质的定性及定量数据 J。这些传统的技术过于繁琐、样品消耗量大、灵敏度 不高，无法满足蛋白质组学对分析系统快速、集 成、高通量、高灵敏度的需求。而微流控芯片(M i c r o fl u i d i c C h i p)的研究和发展给蛋 白质分析 开拓 了新思路。微流控芯片是利用微电子机械系统(M i c r o e l e c t r o m e c h a n i c a l S y s t e r，)技术在玻璃、硅和有机 高分子聚合物 等基片表面，构建微管、微池、微泵等 分析单元和系统0 7引，或基于芯片毛细管电泳技术，以 实现样品进样、生物和化学反应、预浓缩、分离和检测。具有快速、高效、高通量、低成本、低样品量、可批量分 析等”J，是蛋白 质研究的优良I|-其中有些蛋 白芯片在技术上比较成熟，已经开始向商业和临床应 用发展 J。微流控芯片的迅速发展需要灵敏的检测形式 与之相适应。由于芯片的检测区域 非常微小，分 离速度快，对检测器 的灵敏度和响应速度要求很 高 引。因此基于不同检测原理的众多检测方法 都被运用在微流控芯片系统的研究 中，按照其原 理可以分为光学检测法、电化学检测法和质谱检 测法等。1 光学检测法 光学检测法又分为荧光检测法、吸收光度检 测法、化学发光检测法等。其中荧光检测法，尤其 是激光诱导荧光检测，因其线性范 围宽，灵敏度极 高(可达到 1 0 一m o l L 1 0 m o L L，甚至能进行 单分子检测)，是应用最早且 至今仍应用广泛的光 学检测方法。但由于只有部分的化合物能产生荧 光，必须用荧光试剂对其进行 衍生，因此在激发光 源波长和荧光试剂选择上受到了限制。林炳承 等用 P V A修饰 氧化后的 P D MA芯 片通道表面，使不亲水的通道 表面变成亲水，并发 现 1 0 0 水解的 P V A吸附作用和电渗流都较 8 8 水解 的 P V A和未修饰 的 P D MA表面小。在 用覆盖了 3层 P V A涂层的 P D MA芯片分离，用荧 光标记的碱性蛋白(溶菌酶，核糖核酸酶)时获得 收稿日期：2 0 0 6-0 1-2 5；修 回日期：2 0 0 6 1 0-2 5 基金项 目：国家自然科学基金项 目(2 0 3 7 5 0 4 9，2 0 5 7 5 0 8 0)资助 联系人简介：陈缵光(1 9 6 1 )，男，博士，教授，研究方向为分析仪器、药物分析和临床化学等。E m a i l：e h e n z g g z s u m s e d u c n 维普资讯 http:/ 化 学 研 究 与 应 用 第 1 9卷 了超过 1 0 0 0 0 0塔板 m的结果，分离酸性蛋 白(牛 血清蛋白，B 一 乳球蛋白)的结果也令人满意。X i a o 等 通过修饰微通道表面，将蛋白质吸 附降低了几个数量级。他们将 P D M S与硅键合的 芯片的通道表面氧化后，利用原子传递 自由基聚 合反应在通道表面形 成一层聚丙烯酰胺，增加了 表面的亲水性。用此装置可在 3 5 s内分离溶菌酶 和细胞色素 C，分析荧光标记 的 B S A，塔板高度可 达 3 0 p m，有效塔板数为 3 3 0 0 0塔板 m，而且几乎 没有可逆和不可逆 的蛋 白质吸附。t 述 片j 百 道表面自 勺=揣了芯 片的分析分离能力，将是微流控芯片的个发展方向。S c h u l z e等 在用硅芯片分离蛋白质时，使用 激发波长为 2 6 6 n m 的远紫外激光诱 导荧 光技术 进行检测。这种方法能检测低分子量的芳香族化 合物(如5一羟色胺、普奈洛尔)和未标记的碱性 蛋白质，并成功分离了稀释 1 O倍后直接进样的鸡 蛋清样品(见图 1)。传统的紫外吸收检测灵敏度 较低，并且要求样 品具有适合 的功能 团 ，而远 紫外激光诱导对色氨酸和普奈洛尔的检测限达到 4 0 0 n g mL，灵敏度高且不需要标记样 品，扩展 了 荧光检测在微流控芯片技术 的应用范围。对于研 究蛋 白质的天然结构状态和蛋 白质问的相互作用 具有重要意义。图 1 用水稀释 1 O倍 的鸡蛋 清在 P V A涂层 的微流 控 芯片上直接进样分 离 1 6 F i g 1 S e p a r a ti o n o f e g g w h i t e wh i c h i s 1 O f 0 l d d i l u t e d i n w a t e r 1 溶茵酶；2 伴清蛋白；3 卵清蛋白，有效分离高度为3 1 c m 等电聚焦被认为是一种非常有效 的蛋 白质分 离方法，但是等 电聚焦凝胶 电泳 的准备 和染色步 骤繁琐，耗费时 间和材料。凝胶制备、电泳运行、染色等总共需 要数小时甚至一 天 引。而微 流控 芯片提供了一种新的仪器分析装置，可以在数厘 米 的微通道上等电聚焦快速分 离蛋 白质，并 只需 少量样品和试剂 。Wa n g 等 将等电聚焦毛 细管 区带 电泳集成 在 P D M S芯片上，先在微 通道表 面覆 盖聚丙烯酰 胺，再把 1 MC加入样品和两性 电介质来控制 电 渗流并成功的分离了4种蛋 白质。C u i 等 制 作 了 5 p m X 3 0 0 p,m X 2 c m 的 P D MS芯片，在阳极和阴极 的储液池里分别加入含 0 2 MC 的 5 0 t m o l L H P O 4和 5 0 l m o l L N a O H溶液以形成 p H梯度，电场强 度为 2 5 V c m 一1 0 0 V c m，并 用汞灯激发荧光 蛋 白。其 中 MC 可 以在微通道表面形成动态涂渍 层，可 以大 大降 低 电渗流对 等电聚焦的影 响，另外 MC能增加两 性 电介质的粘度从而减少迁移和峰压缩，提高分 辨率。他们用这个等电聚焦区带电泳芯片在 6 mi n 内分离了少于5 n g的蛋白质混合物并形成至少6 个 区带，其分辨率与毛细管等 电聚焦电泳相 近但 分离的时间更短，消耗更少。吸收光度检测法是一种常规的光学检测方 法，其 中紫外 吸收光度检测法应用最 为广泛，相应 的检测器已趋成熟。由于许多有机物化合物和生 物分子在 2 1 0 n m左右的紫外光都有较强 的吸收，所 以紫外吸光检测的适用性强。但是 因为微流控 芯片的检测区域检测体积小，吸收光程短，导致这 种检测方法的灵敏度较低，限制了其应用。Ma o等 运用紫外 一可见(U VV i s)吸收光 度成像检测技术，在分离通道 大小为 4 c m X 1 0 0 p m X 1 0 p m的微流控芯片上分离 了肌血球素，检 测限达到 2 4 n g。Wa n g等 在石英芯片上用紫外检测器直接 测定牛血清蛋 白、人运铁蛋 白和人免疫球 蛋白，只 需 2 mi n一 3 mi n，检测了 3 8例尿蛋 白阳性患者的尿 样，成功发现溢 出性蛋白尿 3例，选 择性和非选择 性蛋白尿各9例和2 6例，8 例健康对照尿样中则 未检 出蛋白峰，适用于临床检测。2 电化学检测法 电化学检测法可 以将微 电极制作在微芯片上 且灵敏度不受微通道的管径影响，对检测部位的 透光性无要求，成本低，选择性好，非常适合微流 控分析系统集成化、微型化的要求。根据检 测原理的不同，可以分为安培检测法、电导检测法 以及 电位检测法，其 中以安 培检测法 的灵敏度最 高，甚 至可与激光诱导荧光相媲美。Wa n g等 用安培检测法成功 测定 了鼠免疫 球蛋 白，检测限达到 2 5 X 1 0 一p mo l L。B i 等 通过修饰微流控芯片通道的表面，成功地分离了 维普资讯 http:/ 第4期 蓝悠等：微流控芯片技术在蛋白质分析 中的应用进展 3 4 7 手性氨基酸(D一色氨酸与 L一色氨 酸)。他们先 用(B MA)一(M S M A)活 化 P MMA 芯片 的微通 道，再用氧化铝凝胶与之形成稳固的显微结构，然 后用牛血清蛋白(B S A)作为靶蛋 白稳定均匀地固 定在修饰后的通道表面，制造出蛋 白质的固定相 并用安培检测法进行检测。这样处理能提高芯片 的电渗迁移率，减少非特异性吸附。修饰后的 P MMA芯片的通道与水分子的接触角为 2 2。，氧化 铝凝胶状态下的电渗流为 4 31 0 c m Vs，优于未经修饰的 P M M A芯片(分别为7 3。和 1 9 1 0-4 c m V s )，可用于生化药品的高通量筛选 对映异构体和受体相互作用的研究。wu等旧 将镀铂通电的双耦合器焊接在玻璃 芯片上，再将氧化处理过的 P D MA片与之粘合，用 3个电极检测，可以去除大部分干扰分离电场的检 测回路，使多巴胺的检测 限达到 0 1 2 5 l x m o l L，灵 敏度和不同浓度样品的线性都令人满意。与上述采用的直接把检测电极集成在微流控 芯片分离通道中的方法不同，wu 副等在玻璃芯片 上二次蚀刻出工作电极 的引导通道并采用微盘工 作电极。这样可 以在工作 电极钝化时，无需使用 显微镜和三维调节系统就能轻易的更换和对准工 作电极，提高了检测结果的重现性。他们对多巴 胺的检测灵 敏度 达到 0 5 1 IJ L m o l L，线 性范 围为 5I mo l L一2 0 01x mo l L。G a l lo w a y 等 利用通 5 0 K H z 的双脉冲电流 电极对，减少测量产生 的充电电流，使 溶液导电率 的记录更加准确，并能实现蛋白质和多肽的非液 相区带电泳。他们用这种接触式电导检测法测定 了溶菌酶、肌球蛋 白、碳酸酐酶等 8种蛋白质。A b a dV i l l a r 等 在玻璃和 P MMA复合芯片上用 非接触式 电导检测法 测定了人免疫球蛋 白，重现 性 R S D为 1 ，灵敏度达到 3 4 n g mL。D u等 研制了用于芯片毛细管 电泳的固态 电化学发光检测器，把经 T B R修饰 的铟锡氧化电 极集成到刻有微通道的 P D M S芯片上，使芯片更 加稳定和耐用。检测脯氨酸的灵敏度达到 2 1 x m o l L，线性范围为 2 5 p -n o l L一1 0 0 0 lx m o l L。这种检 测器还能用于药物分析(如氧氟沙星)。本课题组研制 了一种微流控芯片非接触式电 导检测器(高频电导检测器)，可在较低的频率 和较低的激 发 电压下 工作。电极 和溶液 之 间隔 离，不仅避免 了电极 的污染 中毒和电极附近气泡 的产生，而且消除了分离高压的干扰。芯片与电 极板之间相互独立，更换和清洗等操作非常方便。在 1 0 m m o l L M E S+1 0 m m o l L H i s 缓冲溶液中，2 m in 内实现了浓度均为2 m m o l L的苯丙氨酸、精 氨酸、谷氨酸和天冬氨酸的分离检测。3 质谱检测法 质谱检测法灵敏度极高(见表 1)。其中电喷 雾离子化质谱(E S I M S)和基体辅助激光解析离 子化质谱(M A L D I M S)能够在特定条件下保持 生物大分子的非共价相互作用，有利于蛋白质 和多肽 的组成和功能分析-3 。现 已实现用微 流控芯片与质谱联用对磷酸化 多肽 J、促 肾上腺 皮质激 素 】、细胞 色素 c 引、胰 蛋 白酶 的多 肽、烯醇化酶、醛缩酶 等蛋 白质的测序工作。表 1 质谱鉴别蛋白质的丰度和覆盖率 T a b l e 1 A b u n d a n c e an d s e q u e n c e c o v e r a g e o f p r o t e i n a c e o u s I d e n t i fi c a t i o n b y MS 蛋白质分(k子Da量)(p丰g 度m L)装 置 妻 维普资讯 http:/ 化 学 研 究 与 应 用 第 l 9卷 F o r t i e r 等 副将操作元件、反相 分离通 道和纳 米 电喷射接头集成在一块 6 5 c m x 2 5 c n l 的塑料 芯片上，用 L C MS检测和分离蛋 白质，使待测物的 转运和仪器的联接减到最小，减少 了死体积和峰 的拖尾，检测复杂蛋 白质混合 物时 的峰容量大，灵 敏度高，重现性好，线性范 围宽，能分离 鼠血浆样 本的白蛋 白和免疫球蛋 白等。重复进样 l 0次的 保留时间和峰强度的 R S D分别为0 5、9 1。Wa n g 等-49 把疏水薄膜、电喷射接头集成在 微流控芯片上，显著地提高 了 MA L D I M S检测 的 重现性，并实现了蛋白质的在线水解和完整测定。质谱与微流控芯片的联用具有相辅相成的效 果，在芯片上进行的试样前处理操作如预富集、酶 解和分离等均有利于质谱的高灵敏度、高效率和 高通量检测，具有显著的优越性，是微流控芯片发 展的重要方向之一。4 其他 近年来，多维微流控芯 片分 离系统成 为新 的 研究热点。实现多维蛋 白质分离 的关 键问题有 2 个：在微流控网络系统中注入和隔离多重分离 介质的方法；将聚集的蛋白质从一维分离系统 定量转移时不会大量损耗，使灵敏度降低。L i 等 u在塑料微流控芯片上集成 了等电聚 焦和 S D S凝胶 电泳，为分离蛋 白质混合物提供 了 显著的分析物浓缩和非常高的分辨率。在这个系 统中，蛋白质在等电聚焦洗脱后，聚集 的蛋 白质被 电动转移人平行、高通量的芯片通道 内，在 S D S凝 胶电泳中进一步分离，再用非共价的荧光探针(如 S y p r o R e d)来检测，并用带有电荷耦合器照相机的 荧光显微镜来测定。与共价标记的蛋白质相比，这种方法能消除标记反应造成的蛋 白质微观不均 匀性。在一块 2 c m X 3 c m的芯片上，能在 1 0 m i n内 参考文献：1 T y e r M，M a n n MF r o mG e n o m i c s t o P r o t e o m i c s J N a t u r e，2 O O 3。4 2 2(6 9 2 8)：1 9 3-1 9 7 2 H o c h s t r a s s e r D F，S a n c h e z J C，A p p e l R D，e t a1 P r o-t e o m i c s a n d I t s T r e n d s F a c i n g N a t u r e C o m p l e x i t y J P r 0 t e o m i c s，2 0 0 2，2(7)：8 0 7-8 1 2 3 P a c h c k o v a P，S c h n e i d e r E M，H u g H A d v anc e s i n R e c o mb i n ant A n t i b o d y Mi c ma r m y s J C l i n i c a C h i m ic a A c t o t，2 0 0 4，3 4 3(1-2)：1 7-3 5 4 A u r o u x P A，I o s s i fi d i s D，R e y e s D R，e t a1 Mi c r o T 0 t a l A-完成微清蛋白、卵清蛋 白、牛血清蛋 白等 4种蛋 白 质的分离，全部峰容量达到 1 7 0 0。岛留 啊圈酗一 i震圃 _-一 图 2 四种蛋 白质在二维微流控芯片分 离的荧光成像 I J F i g 2 F l u o res c e n t i ma g e s o f f o u r mo d e l p r o t e i n s b y o n c h i p 2-D s e p a r a t i o n【圳(A)四种蛋白质从左到右依次在等电聚焦中被聚集；肌动蛋白；牛血清蛋白和抑多酶；微清蛋白 (B)聚集的蛋 白质被 电动迁移(C)S D S凝胶 电泳。腔 j 傈是在 等电聚焦和 S I 3 S 凝胶电济 汾 q i i 绗 9 和 网s 时诈碍 o 5 结论与展望 微流控芯片是一种集成、快速、高效、高通量、试剂用量小的微型实验装 置，将极 大地促 进蛋 白 质组学的研究。但是目前芯片材料表面修饰方法 尚不成熟，难溶和低拷贝蛋 白质 的检测灵敏度 低-5。微通道网络结构的确定、分离介质与分离 体系和系统集成问题亦未很好地解决，因而限制 了微流控芯片在蛋白质组学和临床的应用。不过 一种新的技术总有一个发 展阶段，随着微机 电加 工技术、生物 技术、化学技术 与材料 学、电子学 等 技术和学科 的发展，微流控芯片 的功能将更加完 备，集成化微型化程度将更高，在蛋 白质组学和临 床的应用将更加广泛。n aly s i s S y s t e ms 2 A n a l y t i c a l S t and a r d Op e r a t i o n s and A p p l i c a t i o n s J A n a C h e m 2 0 0 2，7 4(1 2)：2 6 3 7-2 6 5 2 5 T i m o t h y B S，F r a n fi s e k S，J e an M J F C h i p E l e e t r o c h r o m-a to g r a p h y J J o u r n a l o fC h r o m a t o g r a p h y A，2 0 0 4，1 0 4 4 (1-2)：9 7 1 1 1 6 I n b i n c h e n g M i c r d l u i d-b a s e d I a b-o n-c h i p a n d I t s F t u r t i o n al i t y J O d n P h a m ，0 B，3 4(1)：1 7 S c h r u m D，C u l b e r t s o n C T，J a c o b s o n S C，e t a 1 维普资讯 http:/ 第4 期 蓝悠等：微流控芯片技术在蛋白质分析中的应用进展 3 4 9 Mi e r och i p F l o w C y t o me t r y U s i n g E l ect r o k i n e t i e F o c u s i n g J A n a 1 C h e m 1 9 9 9，7 1(1 9)：4 1 7 3-4 1 7 8 8 R o s sD，L oca s e i o L E E ff e c t o f C a g e d F l u o r e s c e n t D y e o n t h e E l ect roo s m o ti e Mo b i l i t y i n Mi e r och a r m e l s J A n a 1 C h e m 2 0 0 3，7 5(5)：1 2 1 8-1 2 2 0 9 F r e d r i c k s o n C K，F a n殂M a c r o-t o-m i c r o I m e rf a c e s c r u i d i cD e v i c e s J L a b o n A，2 0 O 4，4(6)：5 2 6-5 3 3 1 0 L i c h t e n b e r g J，d e R o o i j N F，V e r p o o e E S a m p l e P re-t re a t me n t o n M i c ro f a b r i c a t e d D e v i c e s J T a l a n t a，2 0 0 2，5 6(2)：2 3 3-2 6 6 1 1 B r u i n G J MR ece n t Dev e l o p m e n t s i n E l ect rok i n e t i e a ll y D ri v e n A n a l y s i s o n Mi c rof a b r i c a t e d A e vic es J E l e c t r o p h o r e s is，2 0 0 O，2 1(1 8)：3 9 3 1-3 9 5 1 1 2 B o u s s e L，Mo u r a d i an S，D u b row R，e t at P r o t e i n S i z i n g o n A M i c r och i p J A n a C h e m 2 0 0 1，7 3(6)：1 2 0 7 1 2 1 2 1 3 H e r r A E，Mo l h o J I，D r o u v al a k i s K A，e t at O n-C h i p C o u p li n g o f I s o e l e e t r i e F ocu s i n g and F r e e S o l u t i o n E l e e-t r o p h o re s i s f o r Mu l ti d i m e n s i o n a l S e p a r a ti o n s J A na1 C hem 2 0 o 3，7 5；1 1 8 0-1 1 8 7 1 4 wu D P，L u o Y，“n B c，e t a1 M ul t i l a y e r p o l y(v i n y l a1 c o h o 1)-a d s o r b e d C o a ti n g o n P o l y(d i m e t h y l s i l o x ane)Mi-e rofl u i die C h i p s fo r B i o p o l y me r Sep a r a t i o n J E l e c t r o-p h o r e s is，2 0 0 5，2 6(1)：2 1 1-2 1 8 1 5 X i a o D，L e T V，Wi n l l M J S u rf a c e Mo d i fi c a ti o n o f t h e C h a n n e l s o f P o l y(d i m e thy l s i l o x ane)Mi c rofl u i d c C h i p s w j t l l P o l y a c r y l a mi d e f o r F a s t E l ect r o p h o ret i e Sep a r a t i o n s o f P r o t e i n s J A n a C hem2 0 0 4，7 6(7)：2 0 5 5-2 O 6 1 1 6 S c h u l z e P，L u d w i g M，K o h l e r F，e t at Dee P U V L a s e r-I n d u c e d Flu o r e s c e n c e De t ecti o n o f Un l a b e l ed Dr a s and P r o t e i n s i n Mi e r och i pE l ect ro p h o r e s i s J A ri a C hem 2 0 o 5，7 7(5)：1 3 2 5-1 3 2 9 1 7 S l u s z n y C，Y e u n g E S O n e and T w o D i m e n s i o n al Mi n i a t u r i z ed E l ect r o p h o res i s o f P r o t e i n s wi th Na t i v e Flu o res c e n c e D e t e c ti o n J A n a l C hem2 0 0 4，7 6(5)：1 3 5 9 1 3 6 5 1 8 l(i l a r F，R a th o re A S，G u t t man A，e t a t E l ect r o k i n e fi e P h e n o me n a：P r i n c i p l e s and Ap p lic a ti o n s i n An aly t i c al C h e m i s t r y and Mi c r och i p T ech n o l o g y C Ma r c e l D e k k e r：Ne w y 0 ，2 0 0 4，4 3 _ 6 3 1 9A l b a r g h o u t h i M N，S t e i n T M，B a r t o n A E P o l y N h y d rox y e thy l a e ryl a mi d e as A No v e l，A d s o r b e d C o a ti n g f o r P r o t e i n Sep a r a ti o n b y C a p i l l a r y E l e e t r o p h o r e s i s J E le c t r o p h o r e s i s，2 0 0 3，2 4(7-8)：1 1 6 6 1 1 7 5 2 0 Wang Y C，C h o i MH，H an J _T w o-D i m e n s i o n al P rot e i n Se p a r a t i o n w i th A d v anc e d S am p l e a n d B u ff e r I s o l a ti o n U s i n g M i c ro fl u i di c V al v e s J A n a C h e m 2 0 0 4，7 6 (1 5)：4 4 2 6-4 4 3 1 2 1 C u i H，H o r i u c h i K，D u t t a P，e t a1 I s o e l e c t r i c F ocusi n g i n a P o l y(d i m e th y l s i l o x ane)M i c ro fl u i d i e C h i p J A n a l C h e m 2 0 0 5，7 7(5)：1 3 0 3-1 3 0 9 2 2 Ma o Q，P a w l i s z y n J D e m o n s t r a ti o n of I s o e l e e t r i e F ocu s i n g o n A n E t c h ed Q u a r t z C h i p w i th U V A b s o r p t i o n I ma s i n g D e t e c ti o n J A n a l y s t，1 9 9 9，1 2 4(5)：6 3 7 1 2 3 Wa n g HM，S u n C G，Z h a o J L，e t a1R a p i d E l ect r o-p h o r e t i e Sep a r a t i o n o f Uri n e P r o t e i n s U s i n g Mi c rofl u i d i e C h i p J C h i n l a bM e d，2 0 0 4，2 7(9)：5 5 1-5 5 4 2 4 L a c h e r N A，G a r ri son K E，Ma mn R S，e t at Mi e r och i p C a p i ll a r y E l ect r o p h o res i s E l ect r och e m i s t r y J p h o r e s i s，2 0 0 1，2 2(1 2)：2 5 2 6-2 5 3 6 2 5 V and a v e e r WR，P a s as S A，Ma r t i n R S，e t a1 R ece n t De v e l o p me n t s i n A mp e rome t r i e Ae t e c ti o n for Mi c r och i p C a p i l l a r y E l ect r o p h o res i s J E l e c t ro p h o r e s is i，2 0 0 2，2 3(2 1)：3 6 6 7-3 6 7 7 2 6 Wang J，C h a t r a t h i MP，T i an B Mi c r o s e p a r a t i o n C h i p s for P e rf o r mi n g Mult i e n z y ma ti c De h y d r o g e n ase O x i d ase As s a y s：S i mu l t a n e o u s E l ec t r o c h e mi c al Me asu reme n t o f E thano l and G l u c o s e J A n a 1 C hem 2 0 0 1，7 3(6)：1 2 9 6 1 3 0 o 2 7 Wu C C，Wu R C，H u ang J G，e t a1 T h r e e E l ect r o d e El e c t r o c h e mi c al De t e c t o r and P l a t i n u m F i l m Deco u p l e r I n t e g r a t e d wit h a Ca p i ll a r y E l e e t r o p h o r e s i s Mi e r och i p f o r A m p e ro m e t r i e D e t e c t i o n J A n a C hem2 0 0 3，7 4 (1 6)；9 4 7 9 5 2 2 8 Y 0 u y i Wu，J i n-Mi n g L i n，R o n g g u o S u，e t a1 An e n d c h ann e l a mp e rome t r i e d e t ect o r for mi c r o c h l p c a p ma r y e l e c t r o p h o r e s i s J T a a n t a，2 0 0 4，6 4：3 3 8-3 44 2 9 G al l o w a y M，S t r y j e w s k i W，H e n ry A，e t at C o n t a c t C o n d u c ti v i ty D e t e c ti o n i n P o l y(m e th y l me tha e y l a t e)B ased Mi c rofl md i c De v i c e s for An aly s i s o f Mo n o-and P o l y ani o n i c Mo l ecul e s J A n a l C hem 2 0 0 2。7 4 (1 0)：2 4 0 7-2 4 1 5 3 0 A b a d V i ll a r E M，T a n y any i w a J，F e rnand e z A b e d ul M T，e t a1De t e c ti o n of Hu ma n I mmuno g l o b u li n i n Mi e r och i p and Co n v e n ti o n a l Ca p i l l a r y E l e c t r o p h o r e s i s w i t h Co n t a c t-l e s s C o n d u c t i vi t y Me asu r e m e n J A n a l C hem 2 0 0 4，7 6(5)：1 2 8 2-1 2 8 8 3 1 D u Y，We i H，K ang J Z，e t at Mi e r och i p C a p i ll a r y E l ec-t rep h o res i s wi t h So l i d-S t a t e E l ect r o c h e mi l u mi n esc e n c e D e t e c t o r J A nal C hem 2 0 0 5，7 7(24)：7 9 9 3-7 9 9 7 3 2 Q u anw e n L i，O ul i an L i，Z u ang u ang C h e n，e t at A 1 1 1 i n Co v e r G l ass C h i p for C o n tae t hs s C o n d u c ti vity De t e c t i o n i n M i e r och i p C a p i l l a r y E l ect rop h o res i s J T a l a n t a，2 0 0 6，(i n p re s s)3 3 方肇伦 微流控分析芯片 M 北京：科学出版社，2 0 0 3，2 9 6 3 4 A r s c o t t a S，G a c a S L，R o l a n d o b C A P o l y s i li e o n N ano-e l ect r o s p r a y。mass S p e c t r o me t r ySou r c e B a s e d o nA Mi-c ro fl u i di e C a p i l l a r y S l o t J S e n s o r s a n d A c t u a t o r s B，2 0 o 5，1 0 6(2)：7 4 1-7 4 9 3 5 G a c a S L，C a r li e r J，C a ma r t J C，e t at Mo n o l i t h s fo r M i c ro fl mdic D e vi c e s i n P r o t e o m i e s J】J o u r n a l o f C h r o ，m的 J