HIV抗体检测与质量控制培训课件.pptx

Click to edit Master title style,Click to edit Master text styles,Second level,Third level,Fourth level,Fifth level,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,HIV抗体检测与质量控制,HIV抗体检测与质量控制培训课件,第1页,滋病毒（人类免疫缺点病毒）,艾滋病毒（即人类免疫缺点病毒）是一个,逆转录病毒,，它含有极强快速变异能力，这一特征不但使人体免疫系统难以抵抗其侵害，而且给特效治疗药品和预防用疫苗研制带来困难。艾滋病毒直接侵犯人体免疫系统，破坏人体,细胞免疫,和,体液免疫,。它主要存在于感染者和病人体液（如血液、精液、,阴道分泌物,、乳汁等）及各种器官中，它可经过含,HIV,体液交换或,器官移植,而传输。,HIV抗体检测与质量控制培训课件,第2页,病毒现实状况,在世界范围内造成了近,1200,万人死亡，超出,3000,万人受到感染。在感染后会整合入,宿主细胞,基因组中，而,抗病毒治疗,并不能把病毒根除。在,年底，全球有约四千万被感染并与人类免疫缺点病毒共同生存人，流行情况最为严重仍是,撒哈拉以南非洲,。,1986,年,7,月,25,日，,世界卫生组织,（,WHO,）公布公报，国际病毒分类委员会会议决定，把艾滋病病毒改称为人类免疫缺点病毒（,Human Immunodeficiency Virus,）简称,HIV,。,HIV抗体检测与质量控制培训课件,第3页,病毒特点,HIV,病毒主要攻击人体辅助,T,淋巴细胞,系统；一旦侵入机体细胞，病毒会和细胞整合在一起终生难以消除；病毒基因改变多样；广泛存在于感染者血液、精液、阴道分泌物、唾液、尿液、乳汁、脑脊液、有神经症状脑组织液，其中以血液、精液、阴道分泌物中浓度最高；对外界环境抵抗力较弱，对,乙肝病毒,有效消毒方法对艾滋病病毒消毒也有效；感染者,潜伏期,长、死亡率高；艾滋病病毒基因组比已知任何一个病毒基因都复杂。,HIV抗体检测与质量控制培训课件,第4页,体外生存,人类免疫缺点病毒在人体外生存能力极差，不耐高温，抵抗力较低，离开人体不易生存，常温下只可生存数小时至数天。,HIV对热敏感。在56条件下30分钟即失去活性，但在室温保留7天，仍保持活性。,HIV抗体检测与质量控制培训课件,第5页,灭活方法,国际卫生组织推荐对艾滋病病毒灭活加热100连续20分钟，效果较理想。,HIV抗体检测与质量控制培训课件,第6页,病毒形态,人类免疫缺点病毒直径约120纳米，大致呈球形。,HIV抗体检测与质量控制培训课件,第7页,致病机制,HIV选择性侵犯带有,CD4,分子，主要有T淋巴细胞、,单核巨噬细胞,、,树突状细胞,等。,HIV抗体检测与质量控制培训课件,第8页,传输路径,HIV感染者是,传染源,，曾从血液、精液、唾液、尿液、,阴道分泌液,、眼泪、乳汁等分离得HIV。,性接触传输,血液传输,母婴传输,HIV抗体检测与质量控制培训课件,第9页,疾病诊疗,HIV抗体筛查试验,ELISA试验,化学发光法,快速检测,补充试验,抗体确证试验：,免疫印迹试剂（,WB,）,和条带免疫试验（,RIBA）,核酸试验：核酸定性和核酸定量试验,HIV抗体检测与质量控制培训课件,第10页,HIV,抗体检测目标,HIV,抗体检测可用于诊疗、血液筛查、监测等。,以,诊疗,为目标检测是为了确定个体,HIV,感染情况，包含临床检测、自愿咨询检测、依据特殊需要进行体检等。,以,血液筛查,为目标检测是为了预防输血传输,HIV,，包含献血员筛查和原料血浆筛查。,以,监测,为目标检测是为了解不一样人群,HIV,感染率及其改变趋势，包含各类高危人群、重点人群和普通人群。,HIV抗体检测与质量控制培训课件,第11页,HIV,抗体筛查样品,血清,/,血浆,/,全血,滤纸干血斑,口腔黏膜渗出液,尿液,HIV抗体检测与质量控制培训课件,第12页,筛查试剂,国家食品药品监督管理局注册同意,使用期内,酶联免疫试剂应批批检合格,选择敏感性和特异性高试剂,HIV抗体检测与质量控制培训课件,第13页,筛查方法,酶联免疫吸附试验,（,ELISA,）,化学发光或免疫荧光试验,（,CIA/IFA）,：,采取发光或荧光底物，用发光或荧光仪测定结果,快速检测,（,RT,）,及其它检测试验,HIV抗体检测与质量控制培训课件,第14页,酶联免疫吸附试验（,ELISA,）,HIV,抗体检测试剂（第三代）：,检测,HIV-1/2,抗体,HIV,抗原抗体联合检测试剂（第四代）：,可同时检测血液中,HIV-1P24,抗原和,HIV-1/2,抗体,用,酶标仪,测定结果,有效试验阴性和阳性对照必须符合试剂盒要求,HIV抗体检测与质量控制培训课件,第15页,ELISA,试验中可能出现问题和原因分析,问题,可能原因（非试剂盒本身原因）,测定重复性差,1.,加样本及试剂量不准,2.,加样过快，孔间发生污染,3.,加错样本,4.,加样本和试剂时，加在孔壁上部非包被区,5.,温育时间、洗板、显色时间不一致,6.,酶标仪滤光片问题,HIV抗体检测与质量控制培训课件,第16页,ELISA,试验中可能出现问题和原因分析,问题,可能原因（非试剂盒本身原因）,白板（阳性对照不显色）,1.,漏加酶结合物,2.洗液配制问题，量筒不洁净含酶抑制物,3.,漏加显色剂,A,或,B,4.,终止液当显色剂使用,全部板孔都有显色,1.洗板不洁净,2.加底物吸头被酶污染,3.,洗板液受酶污染,4.因为仪器或加样头造成交叉污染,HIV抗体检测与质量控制培训课件,第17页,ELISA,测定中干扰原因,内源性干扰原因,外源性干扰原因,HIV抗体检测与质量控制培训课件,第18页,内源性干扰原因,人血清标本中含有非特异性干扰物质，能够不一样程度影响检测结果。常见有：类风湿因子、补体、嗜异性抗体、医源性诱导抗体、本身抗体、溶菌酶、磷脂、药品小分子等,HIV抗体检测与质量控制培训课件,第19页,外源性干扰原因,经常是因为血标本采集、贮存等不妥所致。如标本溶血、细菌污染、标本贮存时间过长、凝集不全、重复冻融等,HIV抗体检测与质量控制培训课件,第20页,分析,ELISA,测定中出现假阳性或假阴性结果时，需综合考虑试剂原因、,操作原因和标本原因等。,HIV抗体检测与质量控制培训课件,第21页,ELISA,法结果判断,临界值概念,:,将检测阳性和（或）阴性对照,OD,值代入计算公式计算出来判断阳性和阴性结果界值,判断标准,:,标本,OD,值与临界值比值大于等于,1(S/CO1),为阳性,注意,:,不一样厂家、不一样方法临界值计算公式不一样,HIV抗体检测与质量控制培训课件,第22页,酶联免疫吸附试验（,ELISA,）,优点：准确性高、价格低廉、判断结果标准客观、结果便于统计和保留,用途：流行病学监测及临床大量标本检测,HIV抗体检测与质量控制培训课件,第23页,化学发光或免疫荧光试验,采取,发光或荧光底物,既可检测抗体，也可联合检测抗原抗体,酶或荧光标识,HIV,抗原或抗体，加发光或荧光底物,用,发光仪或荧光仪,测定结果,HIV抗体检测与质量控制培训课件,第24页,（,1,）免疫渗滤试验：斑点免疫胶体金（或胶体硒）快速试验,以硝酸纤维膜为载体,HIV抗原点状固定在膜上,加待检样品,阳性结果在膜上抗原部位显示出有色斑点,有效试验质控点必须显色,快速检测（,RT,）及其它检测试验,HIV抗体检测与质量控制培训课件,第25页,斑点免疫胶体金快速诊疗试验,HIV抗体检测与质量控制培训课件,第26页,（,2,）免疫层析试验：,以硝酸纤维膜为载体,HIV抗原线状固定在膜上,待检样品（血液、唾液或尿液）沿着固相载体迁移,阳性结果在膜上抗原部位显示出有色条带,有效试验质控带必须显色,第四代快速试剂（,SD,）：,可区分抗原抗体检测,HIV抗体检测与质量控制培训课件,第27页,HIV抗体检测与质量控制培训课件,第28页,全血样品,加,50ul,样品于样品垫中,手指血方法,静脉血方法,加一滴缓冲液,15,分钟内读取结果,快速检测（,RT,）及其它检测试验,HIV抗体检测与质量控制培训课件,第29页,病人条,质控条,HIV抗体检测与质量控制培训课件,第30页,HIV抗体检测与质量控制培训课件,第31页,快速检测（,RT,）及其它检测试验,优点,:,快速,单份标本检测,不需额外试剂或设备,操作简便,缺点,:,肉眼判断较主观,价格较贵,结果不易保留（,提议拍照保留,）,HIV抗体检测与质量控制培训课件,第32页,HIV筛查试剂选择,检测目标,试验设施条件,价格,其它：检测数量、标本用量、复检问题、习惯等等,HIV抗体检测与质量控制培训课件,第33页,试剂,-1,有反应,无反应,试剂,1,双份或双孔检测或两种试剂,*,都有反应,一有反应,一无反应,均无反应,补充试验,汇报,HIV,抗体阴性,图,2,使用抗体检测试剂检测流程,*,两种试剂能够是原有试剂加另一个试剂，也能够是两种不一样试剂。,临床诊疗相关检测策略,使用抗体检测试剂筛查检测流程,HIV抗体检测与质量控制培训课件,第34页,HIV抗体筛查结果意义及处理,阴性：真阴性 未感染HIV病毒,假阴性 注意窗口期,阳性：真阳性 感染HIV病毒,假阳性 非特异性反应,操作失误,处理：筛查试验无反应汇报为“,HIV,抗体阴性”；有反应必须进行复检，复检两次检测均无反应汇报为“,HIV,抗体阴性”，复检检测都有反应或一个有反应一个无反应需进行“,补充试验,”；汇报为“,HIV,感染待确定”，不能出具阳性汇报。,HIV抗体检测与质量控制培训课件,第35页,补充试验,是经过检测样本中是否存在,艾滋病病毒抗体,或者,核酸,确定艾滋病病毒感染检测方法。,补充试验包含,抗体确证试验,免疫印迹试验、条带,/,线性免疫试验,，,特定条件下,替换检测（,三种酶联免疫、三种快速试验或酶联加紧速试验,）,，免疫层析和,核酸检测试验,（核酸定性检测和核酸定量检测试验）,HIV抗体检测与质量控制培训课件,第36页,HIV,抗体确证试验,确证试验试剂：,必须是经国家食品药品监督管理局注册同意、在使用期内试剂。,确证样品：,可采取血清、血浆、滤纸干血斑,确证试验方法：,免疫印迹试验、条带,/,线性免疫试验,，,特定条件下,替换检测（,三种酶联免疫、三种快速试验或酶联加紧速试验,）,，免疫层析,或,免疫渗滤试验,HIV抗体检测与质量控制培训课件,第37页,条带免疫试验（,RIBA,）,/,重组免疫印迹法（万泰）,HIV抗体检测与质量控制培训课件,第38页,阳性,免疫印迹试验,（,WB/RIBA,）,阴性,不确定,核酸试验或,2-4,周后随访,出现,HIV-2,指示带,依据情况深入,检测,HIV-2,汇报,HIV-1,抗体阴性,汇报,HIV-1,抗体阳性,图,5,免疫印迹试剂（,WB/RIBA,）试验流程,抗体确证试验检测流程,HIV抗体检测与质量控制培训课件,第39页,HIV,抗体,WB,及,RIBA/LIA,试验结果汇报,：,（,1,）符合,HIV-1,抗体阳性判断标准，汇报“,HIV-1,抗体阳性”，并按要求做好检测后咨询和疫情汇报。符合,HIV-2,抗体阳性判断标准，汇报“,HIV-2,抗体阳性”，并按要求做好检测后咨询和疫情汇报。,（,2,）符合,HIV,抗体阴性判断标准，汇报“,HIV,抗体阴性”。,如疑似“窗口期”感染，提议,2-4,周后随访或深入做,HIV,核酸检测，尽早明确诊疗。,（,3,）符合,HIV,抗体不确定判断标准，汇报“,HIV,抗体不确定”，,在备注中应注明“,2-4,周后复检”或尽快做核酸检测。,抗体确证试验检测汇报,HIV抗体检测与质量控制培训课件,第40页,WB不确定结果,原因：HIV感染早期,HIV感染晚期,非特异性反应,污染,处理：核酸检测,2-,4周后随访,重采血,HIV抗体检测与质量控制培训课件,第41页,HIV-1,核酸检测,HIV-1,核酸定性检测,HIV-1,核酸定量试验,有反应汇报,HIV-1,核酸阳性,无反应汇报,HIV-1,核酸阴性,汇报,低于检测限,5000cps/ml,汇报检测值,5000cps/ml,重新采样 检测,高于检测限,低于检测限,图核酸试验流程,临床诊疗相关检测策略,HIV抗体检测与质量控制培训课件,第42页,核酸补充试验汇报,定性检测,结果有反应，汇报“,HIV-1,核酸阳性”；无反应，汇报“,HIV,核酸,阴,性”。,定量检测,结果低于检测限，汇报低于检测限；,检测结果大于,5000CPs/ml,，汇报检测值；,检测结果低于等于,5000CPs/ml,，尽快再次严格按核酸检测要求采样检测，汇报检测值,。,临床医生可,结合临床及流行病史、,CD4+T,淋巴细胞检测值或者,HIV-1,抗体随访检测结果等进行,诊疗或排除诊,断,。,HIV抗体检测与质量控制培训课件,第43页,HIV,抗体,母亲,HIV,抗体经胎盘进入胎儿，出生时新生儿和婴儿早期抗体阳性，不一定是感染,出生时母亲抗体，,8090%,在生后,912,个月消失，出生后,18,个月基本上全部消失,18,个月后儿童,HIV,抗体依然阳性，视为本身感染产生抗体,18,个月以下婴幼儿,HIV,诊疗,HIV抗体检测与质量控制培训课件,第44页,婴幼儿,HIV,感染抗体检测,适合用于：,HIV,感染产妇所生婴幼儿；,母亲,HIV,感染状态不详，儿童出现,HIV,相关临床表现，临床怀疑,HIV,感染儿童。,婴儿,12,个月,时进行,HIV,抗体检测,阴性排除感染,，纳入正常儿童保健；,阳性者继续追踪随访,，至,18,个月再次进行,HIV,抗体检测，结果阴性排除感染。,HIV抗体检测与质量控制培训课件,第45页,HIV,抗体检测关键点,依据目标选择检测方法及检测策略。,严格恪守试验室标准操作程序（,SOP,）。,结果判定以试剂盒说明书为标准。,筛查试验有反应，须作补充试验,HIV抗体检测与质量控制培训课件,第46页,质量控制,质量控制是指为确保试验工作正常进行而在每一次试验过程中必须采取各种办法。以确保检验结果到达允许准确度。,HIV抗体检测与质量控制培训课件,第47页,试验前质量控制,正确标本采集和处理,正确及时运输样品,试验前正确地处理和保留样品,试验中质量控制,仪器校准,选择,合格试剂，采取,正确检测方法,标准程序,质控品准备,开展质控图质控,试验后质量控制,结果统计,统计查对,结果解释,统计保留,质量控制,HIV抗体检测与质量控制培训课件,第48页,试验前质量控制,样品采集：试验室应依据待测项目选取适当方法采集样品。,抗体检测可采集血清、血浆和全血；,CD4+T,淋巴细胞检测可采集,K3EDTA,或肝素或枸橼酸钠抗凝全血，并在,24,小时内室温送检；,HIV-1,病毒载量测定可采集,EDTA,或枸橼酸钠,(ACD),抗凝全血，最好在,6,小时内离心分离血浆和血细胞。将分离血浆分装到,2-3,支，冰冻保留，在冻存管上编号。做好样品处理统计并注明分装时间。,HIV抗体检测与质量控制培训课件,第49页,试验前质量控制,样品保留：,用于,HIV,抗体检测血清和血浆样品,应存放于,-20,以下，短期（,1,周）内进行检测样品可存放于,2-8,；,用于,CD4+T,淋巴细胞检测样品应在室温下（,18,23,）保留，防止极端温度（冷冻或过热）,样品采集时间超出,72h,则不可检测；,用于病毒载量检测样品保留条件应依据血浆检测时间而定，,4,天内可在,4,暂时保留，,3,个月以内冻存于,-20,以下，,3,个月以上应置于,-70,以下保留。血浆样品冻融次数不可超出,3,次。每次冻融在样品上标明。,HIV抗体检测与质量控制培训课件,第50页,试验前质量控制,样品运输：,1,、样品送检时需与对应送样单同时送检。,2,、血清和血浆样品在,2-8,条件下由专员低温运输。,3,、,CD4+T,淋巴细胞检测样品需在在室温下（,18,23,）运输，防止极端温度（冷冻或过热）。超出,37,温度会破坏细胞，对血液学和流式细胞仪检测有影响。,4,、病毒载量测定样品运输：冻存血浆样品在运输过程中要保持样品在冷冻状态，预防样品冻融。在,4,暂时保留样品，在,2-8,条件下低温运输。抗凝全血样品在,24,小时内,2-8,条件下低温运输。,HIV抗体检测与质量控制培训课件,第51页,试验前质量控制,运输采取,WHO,提出三级包装系统,第一层容器：装样品，要求防渗漏,第二层容器：要求耐受性好、防渗漏、容纳并保护第一层容器，能够装若干个第一层容器。,第三层容器：放在一个运输用外层包装内，应易于消毒,HIV抗体检测与质量控制培训课件,第52页,试验前质量控制,样品编号,:,试验室应建立和规范对待检样品唯一识别标识编码规则，不一样检测项目（抗体检测、,CD4+T,淋巴细胞检测和病毒载量检测）要采取不一样编号系统。普通应包含检测项目、年份代码、样品次序号等。可在收样时用不干胶纸打出编号条，也可用记号笔在样品或其包装容器上标注。,HIV抗体检测与质量控制培训课件,第53页,试验中质量控制,1.,仪器校准,2.,选择,合格试剂，采取,正确检测方法,3.,不一样检测方法对样品有不一样要求,4.,检测方法提升准确性,5.,标准程序,6.,做好试验室原始统计,7.,质控品准备,8.,商用,(,定值和非定值）和自制（小量分装保留，便于每日使用）,开展质控图。,HIV抗体检测与质量控制培训课件,第54页,试验中质量控制,开展质控图,针对每次检测所得到质控数据进行描点作图，判断该次检测可接收性,进行长久监控，对重复检测精密度进行评价,定时对数据表进行复查,HIV抗体检测与质量控制培训课件,第55页,质控规则及使用,试验室在汇报试验结果之前必须评价质控数据。,可经过图形统计检验或由计算机审核结果来决定,许多质控规则已被采取，惯用有,1,2s,和,1,3s,等规则。,HIV抗体检测与质量控制培训课件,第56页,试验后质量控制,试验后准确填写检验结果；,及时发出汇报；,正确地解释检验结果临床意义。,HIV抗体检测与质量控制培训课件,第57页,谢 谢！,谢 谢！,HIV抗体检测与质量控制培训课件,第58页,