真核翻译起始因子4A在上皮...中的表达及与患者预后的关系_赵立平.pdf

癌症进展2023 年 3 月第 21 卷第 6 期ONCOLOGY PROGRESS,Mar 2023 V ol.21,No.6*论著*真核翻译起始因子真核翻译起始因子4 4A A在上皮性卵巢癌中的表达及与患者预后的在上皮性卵巢癌中的表达及与患者预后的关系关系赵立平#，孙艳秋，张菲菲滨州医学院附属医院妇产科，山东 滨州 2566000 0摘要摘要：目的目的探讨真核翻译起始因子4A（eIF4A）蛋白在不同卵巢组织中的表达及其与上皮性卵巢癌（EOC）患者预后的关系。方法方法取123例EOC组织、30例交界性卵巢癌组织、15例卵巢良性病变组织和20例正常卵巢上皮组织，采用免疫组化法检测eIF4A蛋白的表达情况，并比较不同临床特征EOC患者EOC组织中eIF4A蛋白的表达情况，荧光原位杂交（FISH）检测eIF4A基因扩增情况。EOC患者预后的影响因素采用Cox比例风险回归模型分析。结果结果eIF4A蛋白高表达率在正常卵巢上皮组织、卵巢良性病变组织、交界性卵巢癌组织及EOC组织中依次升高，差异有统计学意义（P0.05）。123例 EOC患者 EOC组织中，eIF4A蛋白高表达 93例，低表达 30例，FIGO分期为期、组织学分级为G3级、有淋巴结转移、有腹腔积液EOC患者EOC组织中eIF4A蛋白高表达率分别高于临床分期为期、组织学分级为G12级、无淋巴结转移、无腹腔积液的患者，差异均有统计学意义（P0.05）。eIF4A高表达患者的5年总生存率为28.8%，明显低于低表达患者的45.8%（P0.01）。Cox比例风险回归模型分析结果显示，临床分期为期、组织学分级为G3级、术后病变残余均是EOC患者预后的独立危险因素（P0.05）。结论结论eIF4A在EOC的发生、发展中发挥重要作用，其高表达与患者的不良预后密切相关。关键词关键词：真核翻译起始因子4A；上皮性卵巢癌；荧光原位杂交；预后中图分类号中图分类号：R R737737.3131文献标志码文献标志码：AdoiAdoi：10.11877/j.issn.1672-1535.2023.21.06.12Expression of eukaryotic translation initiation factorExpression of eukaryotic translation initiation factor 4 4A in epithelial ovarianA in epithelial ovariancarcinoma and its relationship with prognosis of patientscarcinoma and its relationship with prognosis of patientsZHAO Liping#,SUN Yanqiu,ZHANG FeifeiDepartment of Gynaecology and Obstetrics,Binzhou Medical University Hospital,Binzhou 256600,Shandong,ChinaAbstractAbstract:ObjectiveObjectiveExplore the expression of eukaryotic translation initiation factor 4A(eIF4A)protein in different ovarian tissues and its relationship with the prognosis of epithelial ovarian carcinoma(EOC)patients.MethodMethodA total of 123 cases of EOC tissues,30 cases of borderline epithelial neoplasia tissues,15 cases of benign epithelial neoplasiatissues and 20 cases of normal ovarian tissues were collected,the expressions of eIF4A protein were detected by immunohistochemistry,and the expressions of eIF4A in EOC tissues of patients with different clinical features were compared.The amplification of eIF4A gene was detected by fluorescence in situ hybridization(FISH).The factors influencing prognosis of EOC patients were analyzed by using Cox proportional-hazards model.ResultResultThe high expression rate ofeIF4A protein in normal ovarian tissues,benign epithelial neoplasia tissues,borderline epithelial neoplasia tissues andEOC tissues increased in sequences(P0.05).There were 93 cases of high expression and 30 low expression of eIF4Aprotein in 123 cases of EOC tissues.The high expression rate of eIF4A protein in EOC tissues of patients with FIGO staging of stage III-IV,histological grading of G3,lymph node metastasis,and peritoneal effusion were higher than those withclinical staging of stage I-II,histological grading of G1-2,no lymph node metastasis,and no peritoneal effusion,respectively,with differences were statistically significant(P0.05).The overall 5-year survival rate of eIF4A high expression patients was 28.8%,lower than 45.8%of low expression patients(P0.01).The results of Cox proportional risk regressionmodel analysis showed that clinical stage III-IV,histological grade G3,and postoperative residual lesions were independent risk factors for the prognosis of EOC patients(P50临床分期组织学分级G3G12病理类型浆液性囊腺癌黏液性囊腺癌淋巴结转移无有腹腔积液有无例数527134897350843959648439eIF4A低表达n=30，n（%）16（30.77）14（19.72）14（41.18）16（17.98）12（16.44）18（36.00）22（26.19）8（20.51）20（33.90）10（15.62）13（25.48）17（43.59）eIF4A高表达n=93，n（%）36（69.23）57（80.28）20（58.82）73（82.02）61（83.56）32（64.00）62（73.81）31（79.49）39（66.10）54（84.38）71（84.52）22（56.41）2值1.9887.1806.1580.4665.55911.445P值0.1590.0070.0130.4950.0180.001正常卵巢上皮组织卵巢良性病变组织图图1 1eIFeIF4 4A A蛋白在不同卵巢组织中的表达情况蛋白在不同卵巢组织中的表达情况（SPSP染色染色，400400）交界性卵巢癌组织EOC组织组织学分级为G1级组织学分级为G3级图图2 2EOCEOC组织中组织中eIFeIF4 4A A蛋白的表达情况蛋白的表达情况（SPSP染色染色，400400）FIGO分期为期FIGO分期为期634ONCOLOGY PROGRESS,Mar 2023 V ol.21 No.6疗有效，将疾病稳定与疾病进展患者视为化疗无效，比较89例期EOC患者EOC组织中eIF4A蛋白低表达（n=16）和 eIF4A 蛋白高表达（n=73）患者的化疗有效率，结果显示，eIF4A 蛋白低表达患者的化疗有效率为 56.25%（9/16），高于 eIF4A 蛋白高表达患者的 24.66%（18/73），差异有统计学意义（2=6.198，P=0.013）。2 2.5 5 预后情况的比较预后情况的比较截至 2021年 12月，123例 EOC 患者失访 8例，随访率为93.50%（115/123）。30例eIF4A蛋白低表达 EOC 患者的中位总生存期为 58 个月（95%CI：52.0163.99），93 例 eIF4A 蛋白高表达患者的中位总生存期为 49 个月（95%CI：45.4452.56）；eIF4A蛋白低表达患者的 5年总生存率为 45.8%，明显高于高表达患者的 28.8%，差异有统计学意义（2=8.815，P=0.003）（图 4）。89例期 EOC患者复发 45 例，未控（指肿瘤持续或进展）15 例，缓解 29例，其中复发和未控 EOC 患者 EOC 组织中 eIF4A蛋白高表达55例，缓解EOC患者EOC组织中eIF4A蛋白高表达18例；复发和未控EOC患者EOC组织中 eIF4A 蛋白高表达率为 91.67%（55/60），明显高于缓解患者的 62.07%（18/29），差异有统计学意义（2=11.615，P=0.001）。2 2.6 6 EOCEOC患者预患者预后的影响因素分析后的影响因素分析单因素分析结果显示，年龄、病理类型均可能与 EOC 患者的预后无关（P0.05）；组织学分级、临床分期、淋巴结转移情况、腹腔积液情况、术后病变残余情况、eIF4A蛋白表达情况均可能与EOC患者的预后有关（P0.05）。Cox比例风险回归模型分析结果显示，临床分期为期、组织学分级为 G3级、术后病变残余均是 EOC 患者预后的独立危险因素（P0.05）。（表3）3 3讨论讨论eIF4A蛋白是相对分子质量最小的、最先被发现为翻译起始因子的 DEAD-box RNA解旋酶家族原型成员，既具有 RNA 解螺旋酶活性，又具有RNA 依赖的 ATP 酶活性。eIF4A 在人类体内以eIF4A1、eIF4A2、eIF4A3 三种形式存在，eIF4A1 蛋白（其基因位于 17p136）和 eIF4A2 蛋白（其基因位于18p11.27）主要存在于细胞质内并且有高达90%的同源性，主要作用是参与蛋白质翻译起始阶段对核糖体的募集；而 eIF4A3 蛋白则主要存在于细胞核，参与 RNA 代谢过程。本研究在蛋白水平上的研究限于细胞质中的蛋白，因技术所限无法进一 步 区 分 eIF4A1 蛋 白、eIF4A2 蛋 白 而 统 称 为eIF4A 蛋白。eIF4A 在生长活跃的细胞中高表达，抑 制 eIF4A 的 表 达 可 抑 制 肿 瘤 细 胞 的 迁 移8。Nishida 等9研究发现，eIF4A 在急性髓细胞性白血病（acute myelogenous leukemia，AML）中过表达，且通过罗欣替尼靶向抑制eIF4A能诱导抗AML作用，并证实了相关信号通路的存在。目前，eIF4A与 EOC 的关系仍处于初期研究阶段，对 eIF4A 进行深入、广泛的研究，有助于探索 EOC 的转移机制，为EOC的治疗提供理论依据。本研究结果显示，EOC组织中eIF4A蛋白高表达率更高，提示其过表达与卵巢上皮细胞失控性增殖和恶性转化密切相关。eIF4A 蛋白高表达率在卵巢良性病变组织、交界性卵巢癌组织及 EOC组织中逐渐升高，表明 EOC 发生发展的过程是连续的，交界性卵巢癌是卵巢上皮细胞恶变不可或缺的阶段；虽然eIF4A蛋白高表达率在卵巢良性病变组织与正常卵巢上皮组织之间无明显差异，但eIF4A 蛋白在卵巢良性病变组织中有一定程度的高表达，提示 eIF4A 过表达在卵巢病变早期即存图图3 3正常卵巢上皮组织和正常卵巢上皮组织和EOCEOC组织中组织中eIFeIF4 4A A基因扩增基因扩增FISHFISH图图正常卵巢上皮组织EOC组织图图4 4eIFeIF4 4A A蛋白高表达蛋白高表达（n n=9393）与与eIFeIF4 4A A蛋白低表达蛋白低表达（n n=3030）EOCEOC患者的生存曲线患者的生存曲线累积生存率0.20.40.60.81.00生存时间（月）4080100eIF4A蛋白低表达eIF4A蛋白低表达-删失200eIF4A蛋白高表达eIF4A蛋白高表达-删失60表表3 3EOCEOC患者预后影响因素的单因素和多因素患者预后影响因素的单因素和多因素CoxCox比例比例风险回归模型分析风险回归模型分析因素年龄临床分期组织学分级病理类型淋巴结转移腹腔积液术后病变残余eIF4A蛋白表达注：各因素赋值为年龄（50岁=0，50岁=1）；临床分期（期=0，期=1）；组织学分级（G12级=0，G3级=1）；病理类型（浆液性囊腺癌=0，黏液性囊腺癌=1）；淋巴结转移（无=0，有=1）；腹腔积液（无=0，有=1）；术后病变残余（无=0，有=1）；eIF4A蛋白表达情况（低表达=0，高表达=1）；“”表示无数据单因素分析HR1.1292.7362.4101.0681.5121.6322.1461.49895%CI0.7561.5381.9734.7591.4543.9960.8561.9311.1032.1731.1642.2911.3213.3760.5891.709P值0.6430.010.010.7850.0320.0190.010.041多因素分析HR1.9811.8731.1371.2502.1270.89595%CI1.1573.6141.1972.8750.7451.6210.8451.9381.4133.3580.4891.253P值0.0360.0480.7620.5130.010.931635癌症进展2023年3月第21卷第6期在，这与临床医师对卵巢良性上皮性肿瘤尽早行手术治疗的观点相一致。本研究结果显示，FIGO分期为期、组织学分级为 G3级 EOC 患者EOC 组织中 eIF4A 蛋白高表达率分别高于临床分期为期、组织学分级为 G12级的患者，与Thompson 等10的 研 究 结 果 相 符，该 研 究 证 实，eIF4A能上调蛋白激酶B（protein kinase B，PKB，又称AKT）蛋白的表达及活性，并激活雷帕霉素靶蛋白（mechanistic target of rapamycin kinase，MTOR）/Notch 信号通路，促进肿瘤细胞的黏附和侵袭，因此推测eIF4A高表达的患者更易发生复发和转移。本研究结果显示，FISH检测eIF4A基因的扩增与免疫组化法检测 eIF4A 蛋白（+）和（+）的符合率分别为40.00%（16/40）和39.62%（21/53），符合率较低，但值得肯定的是，eIF4A 蛋白高表达的EOC 组织中存在 eIF4A 基因扩增，这与 Shuda 等11的肝细胞癌中 eIF4A mRNA 的相对表达量上升了1.21.7 倍相一致；此外，Gao 等12通过高通量基因表达数据库发现，胃癌组织中eIF4A mRNA的相对表达量明显高于正常胃壁组织。人17号染色体上含有多个已知及未知的癌基因和抑癌基因，郑淑芳等13研究发现，卵巢癌细胞株 SKVO3 及 OV2 中存在 17 号染色体上基因的扩增，造成这种基因扩增的原因可能有两种：17号染色体拷贝数增加；某一基因本身扩增。本研究应用存在于17号染色体上的eIF4A基因与17号染色着丝粒共杂交，排除了染色体本身扩增导致的目的基因的扩增。而免疫组化与FISH结果一致率较低的原因也可能有两种：本研究样本量过少；eIF4A1和eIF4A2主要存在于细胞质内，并且有高达 90%的同源性，免疫组化染色结果可能是 eIF4A1 和 eIF4A2 共同作用的结果。本研究未证实 eIF4A2 基因的扩增，也无法证实二者在 EOC 中各自作用的大小，下一步研究将扩大样本量，寻找eIF4A2基因探针，进一步分析 eIF4A1及 eIF4A2基因在 EOC中的表达、作用及与患者预后的关系。本研究随访结果发现，eIF4A 低表达患者的 5年总生存率为45.8%，高于高表达患者的28.8%；89例期EOC患者中，复发和未控患者EOC组织中eIF4A蛋白高表达率为91.67%，明显高于缓解患者的62.07%，与Gao等12和Sridharan等14的研究结果相符。Gao等12研究发现，eIF4A1高表达与胃癌患者的高 TNM 分期、低分化及不良预后显著相关。Sridharan等14研究显示，在紫杉醇耐药的三阴性乳腺癌细胞中，eIF4A 酶活性增加。Hashimoto等15研 究 证 实，在 胰 腺 导 管 癌 中，eIF4A1 抑 制剂西藜芦醇（Silvestrol）能够与 eIF4A1 结合并抑制其基因活性，进而抑制下游的二磷酸腺苷核糖 基 化 因 子 6（adenosine diphosphate ribosylationfactor 6，ARF6）和 MYC 的表达，增加其对程序性死亡受体 1（programmed cell death 1，PDCD1，也称PD-1）免疫治疗的敏感性，这为EOC的靶向治疗提供了新的思路和方法，具体的方法和作用机制尚有待进一步研究。本研究多因素分析结果显示，临床分期为期、组织学分级为G3级、术后病变残余均是EOC患者预后的独立危险因素（P0.05），尽管未能证实 eIF4A 表达是 EOC 患者预后的独立影响因素，但能证明eIF4A蛋白过表达能促进肿瘤的发生、发展，未来可进一步增加样本量并采取多种随访方式进行更深入的研究探讨，并且国外已有一些实验证实了靶向抑制或沉默 eIF4A 基因能有效抑制肿瘤的发生。研究显示，eIF4A抑制剂西藜芦醇可增加乳腺浸润性导管癌细胞 T-47D 对放疗的敏感性16；CR-31 介导的 eIF4A 抑制剂可以抑制胰腺导管癌细胞的生长，提高患者的生存率并避免全 身 毒 性17；沉 默 黑 色 素 瘤 WM858 细 胞 中 的eIF4A1，可显著抑制其增殖和侵袭18；罗卡格拉茨已 被 证 明 在 体 内 和 体 外 均 可 使 mRNA 结 合 到eIF4A1和 eIF4A2，并增强其抗肿瘤活性19；但遗憾的是，上述这些研究尚未成功应用于临床。综上所述，eIF4A参与了卵巢上皮组织由正常-良性病变-交界性肿瘤-癌的渐进过程，且EOC患者预后与 FIGO 分期、组织学分级、术后病变残余情况有关，eIF4A 高表达者的总生存率明显降低，eIF4A 有望成为 EOC 靶向治疗及预后评估的分子标志物。参参 考考 文文 献献1 夏继珍,刘鑫,柳英兰,等.HOTAIR 在卵巢上皮性癌中的作用机制研究进展J.临床与病理杂志,2022,42(1):209-214.2 Sridharan S,Robeson M,Bastihalli-Tukaramrao D,et al.Targeting of the eukaryotic translation initiation factor 4Aagainst breast cancer stemnessJ.Front Oncol,2019,9:1311.3 Liang SH,Zhou YQ,Chen YR,et al.Decreased expressionof EIF4A1 after preoperative brachytherapy predicts bettertumor-specific 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