乳杆菌的生长曲线和世代时间测定.pdf

6 一z 2 7，。一 2 2 6 上海 口腔医学V o 1 7 N o 4 1 9 9 8 乳杆菌的生长 曲线和世代时间测定 刘 正 宋 培 智 R 7 争 2 R g-f I 口己 【摘要】目的了解乳杆菌的生长规律以研究其致龋特性。方法本实验在培养条件不 变的情况下，定时取样，采用 OD值法和活菌计致法计算细菌致，并绘制生长曲线。结果乳杆 菌的对致生 长期为培养 6 I 6 h，世代 时间为 5 4 rai n。结论其 生长 曲线 基本与变链 菌一致。关 键 词 堡 皇 !重 啮禹 素 恤 Th e m e a s u r e me n t o f g r o wt h c u r v e a n d g e n e r a t i o n t i m e o f l a c t o b a c i l l u s Gu S h u p i n g，Li u Z h e n g De p a r t me n t o f O r a l Me d i c i n e S c h o o l of S t o m a t o l o g y S h a n g h a i S e c o n d Me d i c a l U n i v e r s i t y，S ha n g h a i 2 0 0 0 1 I l S o n g P e i z h i，De p a r t me n t o f S t o ma t o l o g y，S h a n g hai Na v y 4 1 1 Ho i t a l，Sh a n g h a i 2 0 0 0 8 1 A b s t r a c t Ob j e c t i v e T h e p u r p o s e o f t h i s t e s t Wa S t o u n d e r s t a n d t h e g r o wt h p a t t e r n o f l a c t o b a c i l l u s O r t h e r e s e a r c h of i t s c a r i o g e n i c i t y Me t h o d s Th e g r o wt h q u a n t i t y o f l a c t o b a e i l l u s wh i c h Wa S c u l t u r e d i n a c o n s t a nt c o n d i t i o n Wa S me a s u r e d p e r i o d k：a l l y b y s p e c t r o p h o t o me t r y a n d f l o r a c o u n t i n g，a n d i t s g r o wt h e u r v a n d g e n e r a t i o n t i me we r e me a s u r e d Re s u l t s I t Wa S f o u n d t h a t t h e l o ga r i t h mi c p ha s e o f l a e t o b a c i l l u s Wa S 6-1 6 h o u r s a f t e r i t wa s c u l t u r e d A n d i t s g e n e r a t i o n t i me Wa S 5 4 mi n u t e s Ce mc l u s i o n Th e g r o wt h c o r v e o f l a c t o b a c i Hu s Wa S i n a c c o r d a n c e wi t h s t r e p t o c o c c u s mu t a n K e y w o r s l a c t o b a c i l l u s g r o w t h c u r v e fl o r a c o u n t ing 乳杆菌为牙本质龋的主要相关细菌，为 了研 究其在牙本质龋 中的作 用，有必要 了解 其生长规律，本实验用 比浊法和活菌计数法 测试 了三株乳杆菌的生长 曲线和世代 时间，并探讨 了两种方法 的优缺点。材料和方法 1 菌株及培养方法 菌 株：临 床 深 龋 中 分 离 的 乳 杆 菌 L B 9 5 0 5 1、国 际 参 考 菌 株 嗜 酸 乳 杆 菌 ATC C 4 3 5 6、干酪乳杆菌 AT C C4 6 4 6。培养基：L Ro g o s a液体培养基 培养方法：将上述细菌在 L R o g o s a液 体培养基中 3 7 C 微 需氧培养 1 8 h后，调 OD 作者单位。2 0 0 0 1 1 上海第二医科大学口腔医学院口腔内 科教妍 蛊(顾 敬萍 刘 正)-2 0 0 0 8 1 上海海军 4 1 1医院口腔 科(束培智)值为 1，取 i m l 菌液接种于 1 0 0 m l L R o g o s a 培养液中混匀，分 装小试 管，每管 2 ml，各试 管分罐在 3 7 C微需氧培 养。2 测O D值、活菌计数、生长曲线、世代时间 从培养 6 h起，每小时每株细菌取 3试管 测 O D值，并将菌液连续稀释至 1 0 ，培养 1 1 h及 以前 的菌液 取 1 0 _。、1 0、1 0 一，培养 1 2 h及 以后 的菌液 取 1 O、1 0 。、1 O 三 个 稀释度 5 0 p l 接种 于 L R o g o s a平皿上，3 7 C 微需 氧培养 7 2 h，计算 活 茵数 ml，各培 养 期的细菌数对数为纵座标，时间为横座标，作 图绘制生长 曲线，取对数 生长期 中的一段按 下式计算世代时间。+T 0 g=I n Mt -I n MO g 为世代时间 t 为培养时间l MO；为开 始时 的活菌 致；Mt 为 经 t 时 间培 养后 的 插菌致 维普资讯 http:/ 上海 口腔医学V o 1 7 N o 4 1 9 9 8 2 2 7 结 果 筹 墨 盏 生 不同时 间段 的细 iZ OD值见表 1，不 同 寰 1 三种乳杆菌 6 2 0 h的 OD爰 L g OD僵 丽 i孺 盟 6_黼 L 一 梧 量 附田乳杆苗的生长曲线 寰 3 三种乳杆曹的生 括世代时间(1 n i n)一活曹计数法 讨 论 细菌 的生长指细菌有规律的增长，包括 细菌体积的增大 代谢功能 的完善 及细胞数 量的增多。不同的菌种有其各 自不同生长规 律。在培养条件不变 的情况下，定时取样计算 细菌数，如以时间为横坐标，细菌的对数为纵(下转第 2 3 2页)维普资讯 http:/ 2 3 2 上海 口腔 医学Vo 1 7 No 4 1 9 9 8 红霉素对链 球苗、葡萄 球菌有较大 的杀菌作用，两者 能相互 弥补 杀菌作用，有效 地杀灭、抑制根管 内及根 尖 区常见病 菌。氢氧 化钙能使局部 P H值增加，达到 抑制细菌 生长 中和炎症酸性产物 的作用。并 且乳 糖 酸红霉幕在碱性环境中抗菌活性更强叫，所以也增 加丁疗效。3 对根 尖 尚未发育完 成 的年轻恒 牙 用氢氧 化钙根 充有促进 根尖 区钙化 闭锁作用。但氢 氧化 钙为可 吸 收性 糊荆，若 甩馄合剂 填 塞根尖 后再 用氧化锌 糊荆 加 牙胶根 充就弥 补丁这一不足。氢 氧化 钙除有可靠 的杀菌作 用以外，还具 有 以下优 点：(1 它的 溶解速 度慢，有持续消毒的效果；(2)具收殓性，对根管有渗 渡者 效果 良好；(3)强碱 性可使 蛋 白质 变性 水解，放 能溶解根管 内坏死牙髓组织，而有利手清洁根管；(4)不刺激根尖周组织 (5)廉价和使用方便。4 从表 1、2可以看 出，慢性根尖 周炎较急性根 尖周 炎的失败率 高，后磨牙 失败 率较 双尖 牙失败率高，前 牙均成功。我们分析认为慢性根尖周炎尤其是瘘管 型根 尖周炎，其 本身根管 治疗 的失败 率就 高，而后磨 牙 的根管 治疗固其 解剖 形 态复 杂，加之本 方 法对侧 枝根管 的治疗 具有局限性，故效 果不佳。5 应用氢氧化钙加抗菌素填塞根尖孔，十别病何充 填后有轻微 的咬黯痛，经 口服抗菌素，一般在 一周 内症状 消失。本治疗方法未 做更长 时间的疗效观 察，其远期效果还 有待 于进一 步研 究。参考 文献 1 薛教。报管治疗药物对部分赝氧苗的抗苗教果。国外医 学 口腔分册 1 9 9 6，2 1 f 5)。3 0 5 2 史隶成，方拆。感染根管和牙本质小管中细菌和真菌的 扫描电镜观察。国外医学 口腔分册。1 9 9 6，2 3(1)5 1 3 何界生主编。临床医药大典。第 1 版。青岛：青岛出版社 出版 1 9 9 5、1 2 2 6 4 扬藻宸主编 医用药理学。第2版。北京 人民出舨社出 版。1 9 9 4，6：8 6 7 9 马秀华 刘正。氢氧化钙应用于根管治疗中的新进展 上 海 廿腔 医学 r 1 9 9 8，7 f 1)r 5 7 5 8 (收精：1 9 9 8 0 1 0 3 修 回：l 9 9 8 一O 7 一 o 8)(上接第 2 2 7页)坐标，可形成一条生长曲线。这条曲线反映出 细菌从开始生长到衰亡的过程 整个曲线可 分为四个 时期：迟缓期、对数 生长期、稳定期 和衰亡期。在对不 同细菌进行各种特性 比较研究 时，这条 曲线有助 于选定一致生长状态的细 菌，一般选择对数生长期末、稳定期初始阶段 的细菌2】，以便实验结果更可靠。本实验结果 显示；乳杆菌在培养 6 h后就已进入对数生长 期，井 持续 到 1 5、1 6 h，1 6 1 9 h为 稳 定期，1 9 h后进入 衰亡 期，这 个结果 与变 链菌 的生 长规律基本致 3】。因此，在对这两种细菌进 行 比较研究时，可选用相同培养时段的细菌，一般为培养 1 8 h的细菌。本实验用 比浊和活菌计数两种方法测定 了乳 杆菌 的生长规律，并计算了细菌的世代 时间。用两种方法测出的细菌对数生长期的 数据基本一致。三株细菌的世代时间分别为 5 6 7、5 3 7、5 2 6 rai n，这个结 果 与翁方 敏报 道的变链菌生长世代时间相一致E“。但本实 验发现用 比浊法测定生长曲线时 l 9 2 0 h时 的细菌 的 O D值与 1 5 1 6 h时一致，没有下 降的趋势，从 曲线看细菌仍处于稳定期；而用 活菌计数法则发现 在 1 9 h时，细菌数量 明显 低于 l 5 1 6 h时的细 菌数，细菌已进入衰亡 期。这是因为比浊法测出的为细菌总数，其 中 包括死细菌，在对数生长期死亡细菌极少，可 忽略不计，两种测定方法结果一致 而稳定期 时就 有大量细菌死亡，因此两种测定方法的 结果有差异。我们认为在测定细菌世代时间 和生长曲线时，以活菌计数法较准确。参考文献 1 余贺。医学 羲 生物学。北京，人民卫生出版社，1 9 8 0，5 3 2 Mc Gr a 曲J，B u t c h e r WG，B e i g h t o n DS p e c i f i c a t e d c h a r g e d i n t e r a c t i o n me d ia t e c o l l a g e n r e c o g n i t i o n b y or a l l l c t a c il l u s J De n t Re s 19 9 8。7 4 r 6 4 9 3 Va n L o v e r e n C，Va n P l a s s e h e S i mn n 宴YM。De S o e t J J，e t a 1 Ae d o g e n e s i s i n r e l a t i o n t o f l o ur d e r e al i s t m n e of s t r e p E c o c c u s f n ut a ns Or a l Mi c r o bio l l mmu n o l，l 9 91 6：2 8 8 4 翁方敏，刘正 廿腔变形链球茁生长的世代时间测定 口 睦医学 1 9 8 4 4；l 4 1 (收精，l 9 9 8-0 6-0 4)维普资讯 http:/