志贺菌及三糖铁原理.doc

志贺氏菌的检验
   发布日期：2010-09-01  浏览次数：4375
核心提示： 一、增菌　　称取检样25g，加入装有225mLGN增菌液的500mL广口瓶内，固体食品用均质器以8000-10000r/min打碎1min，或用
一、增菌
　　称取检样25g，加入装有225mLGN增菌液的500mL广口瓶内，固体食品用均质器以8000-10000r/min打碎1min，或用乳钵加灭菌砂磨碎，粉状食品用金属匙或玻璃棒研磨使其乳化，于36℃培养6～8h。
　　培养时间视细菌生长情况而定，当培养液出现轻微混浊时即应中止培养。
二、分离和初步生化试验
　　取增菌液1环，划线接种于HE琼脂平板或SS琼脂平板1个；另取1环划线接种于麦康凯琼脂平板和伊红美蓝琼脂平板各1个，于36℃培养18～24h。
　　志贺氏菌在这些培养基上呈现无色透明不发酵乳糖的菌落。
　　附：HE琼脂平板原理及照片
　　　SS平板原理及照片
　　　麦康凯琼脂平板照片　
　　　伊红美蓝琼脂平板照片
　　　在沙门氏菌的检验中，有时也使用HE、SS平板进行初步筛选。
　　　SN 0332-94 出口食品中沙门氏菌(辛酯酶荧光)检验方法
　　挑取平板上的可疑菌落，接种三糖铁琼脂和葡萄糖半固体各1管。一般应多挑几个菌落，以防遗漏，经36℃培养18～24h，分别观察结果。
　　附：葡萄糖半固体原理及结果。
　　　 　三糖铁琼脂现象及原理分析
　　下述培养物可以弃去：
　　a.　在三糖铁琼脂斜面上呈蔓延生长的培养物；
　　b.　在18～24h内发酵乳糖、蔗糖的培养物；
　　c.　不分解葡萄糖和只生长在半固体表面的培养物；
　　d.　产气的培养物；
　　e.　有动力的培养物；
　　f.　产生硫化氢的培养物。

　　凡是乳糖、蔗糖不发酵，葡萄糖产酸不产气(福氏志贺氏菌6型可产生少量气体)，无动力的菌株，可做血清学分型和进一步的生化试验。
三、血清学分型
　　挑取三糖铁琼脂上的培养物，做玻片凝集试验。
　　先用4种志贺氏菌多价血清检查，如果由于K抗原的存在而不出现凝集，应将菌液煮沸后再检查；
　　如果呈现凝集，则用A1、A2、B群多价和D群血清分别试验。
　　如系B群福氏志贺氏菌，则用群和型因子血清分别检查。福氏志贺氏菌各型和亚型的型和群抗原见表1。可先用群因子血清检查，再根据群因子血清出现凝集的结果，依次选用型因子血清检查。
　　4种志贺氏菌多价血清不凝集的菌株，可用鲍氏多价1、2、3分别检查，并进一步用1～15各型因子血清检查。如果鲍氏多价血清不凝集，可用痢疾志贺氏菌3～12型多价血清及各型因子血清检查。
　　附：福氏志贺氏菌各型和亚型的型抗原和群抗原

四、进一步的生化试验
　　在做血清学分型的同时，应做进一步的生化试验，即：
　　葡萄糖铵
　　西蒙氏柠檬酸盐
　　赖氨酸和鸟氨酸脱羧酶
　　pH7.2尿素
　　KCN生长
　　水杨苷和七叶苷的分解
　　除宋内氏菌和鲍氏13型为乌氨酸阳性外，志贺氏菌属的培养物均为阴性结果。
　。必要时还应做革兰氏染色检查和氧化酶试验，应为氧化酶阴性的革兰氏阴性杆菌。生化反应不符合的菌株，即使能与某种志贺氏菌分型血清发生凝集，仍不得判定为志贺氏菌属的培养物。
　　已判定为志贺氏菌属的培养物，应进一步做
　　5%乳糖发酵
　　甘露醇
　　棉子糖
　　甘油的发酵
　　靛基质试验
　　志贺氏菌属4个生化群的培养物，应符合该群的生化特性。但福氏6型的生化特性与A群或C群相似。

　　附：志贺氏菌属四个群的生化特性

五、结果报告：综合生化和血清学的试验结果判定菌型并作出报告。
编
三糖铁（TSI）琼脂试验的原理
   发布日期：2010-05-13  浏览次数：2610
核心提示：　　试验方法：以接种针挑取待试菌可疑菌落或纯培养物，穿刺接种并涂布于斜面，置36±1℃培养18~24h，观察结果。　　三
　　试验方法：以接种针挑取待试菌可疑菌落或纯培养物，穿刺接种并涂布于斜面，置36±1℃培养18~24h，观察结果。
　　三糖铁琼脂(TSI)成分：
　　蛋白胨 20.0g
　　牛肉膏　3.0g
　　乳 糖 10.0g
　　蔗　糖 10.0g
　　葡萄糖　1.0g
　　硫酸亚铁铵(含6个结晶水) 0.5g
　　酚　红 0.025g或5g/L溶液5mL
　　氯化钠　　　　　　　　　　5.0g
　　硫代硫酸钠　　　　　　　　0.5g
　　琼　脂 12.0g
　　蒸馏水 1000.0mL
　　除酚红和琼脂外,将其他成分加入400mL蒸馏水中,搅拌均匀,静置约10min,加热煮沸至完全溶解,调至pH7.4±0.1。另将琼脂加入600mL蒸馏水中,搅拌均匀,静置约10min, 加热煮沸至完全溶解。
　　将上述两溶液混合均匀后,再加入酚红指示剂,混匀,分装试管(12mm×100mm),每管约2～4mL,高压灭菌121℃ 10 min或115℃15 min,灭菌后置成高层斜面,呈桔红色。
　　原理分析：本培养基适合于肠杆菌科的鉴定。用于观察细菌对糖的利用和硫化氢（变黑）的产生。该培养基含有乳糖、蔗糖和葡萄糖的比例为10:10:1，只能利用葡萄糖的细菌，葡萄糖被分解产酸可使斜面先变黄，但因量少，生成的少量酸，因接触空气而氧化，加之细菌利用培养基中含氮物质，生成碱性产物，故使斜面后来又变红，底部由于是在厌氧状态下，酸类不被氧化，所以仍保持黄色。

　　而发酵乳糖的细菌(e.coli)，则产生大量的酸，使整个培养基呈现黄色。
　　如培养基接种后产生黑色沉淀，是因为某些细菌能分解含硫氨基酸，生成硫化氢，硫化氢和培养基中的铁盐反应，生成黑色的硫化亚铁沉淀。
微生物在培养基上的典型特征  
2009-09-22 18:10:29|  分类： 微生物学 |  标签： |字号大中小 订阅
金黄色葡萄球菌在BP琼脂上典型特征

金黄色葡萄球菌呈圆形 , 表面光滑、凸起、湿润 , 直径 2 ～ 3mm 。灰黑色至黑色 , 有光泽 , 常有浅色 ( 非白色 ) 的边缘 , 周围绕以不透明圈 ( 沉淀 ), 其外常有一清晰带 ( 卵磷脂环 ) 。当用接种针触及菌落时具有黄油样粘稠感。有时可见到不分解脂肪的菌株 , 除没有不透明圈和清晰带外 , 其他外观基本相同。从长期贮存的冷冻或脱水食品中分离的菌落 , 其黑色常较典型菌落浅些 , 且外观可能较粗糙 , 质地较干燥。

大肠菌群在结晶紫中性红琼脂(VRBA)上典型特征

典型菌落为紫红色 , 菌落周围有红色的胆盐沉淀环。菌落直径为 0.5mm 或更大。

                                                                   沙门氏菌在HE琼脂上典型特征

在 37 ℃ 培养 18-24 小时后， 沙门氏菌、亚利桑那菌和变形杆菌为蓝绿色至蓝色、有或无黑色中心的菌落；大肠杆菌和大肠菌群为粉红色菌落，有沉淀环； ，无色半透明有黑色中心或几乎全为黑色。志贺氏菌和普罗菲登斯菌为绿色、湿润而隆起菌落。

                                                    大肠杆菌在伊红美蓝琼脂(EMB)上典型特征

大肠杆菌呈 黑色中心 ,有或无金属光泽.

                                                   大肠菌群在去氧胆酸盐琼脂(DC)上典型特征

典型菌落为红色 , 菌落周围有红色的胆盐沉淀环。菌落直径为 2-3mm 或更大。

                                                                        沙门氏菌在SS琼脂上典型特征

沙门氏菌在 37 ℃ 培养 18-24 小时后，无色透明菌落有黑色中心；志贺氏菌呈无色透明菌落。

                                                    副溶血性弧菌在海博弧菌显色培养基上典型特征

典型 副溶血性弧菌显蓝色至蓝绿色 ， 霍乱弧菌和其它弧菌显无色。

                                                           霉菌在孟加拉红培养基上典型特征

霉菌在孟加拉红培养基上典型特征为灰色菌落，有黑色孢子 。

                                                李斯特氏菌在牛津琼脂(OXA agar)上典型特征

李斯特氏菌在 35 ℃ 培养 24-48 小时后，灰绿色菌落。其外围