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1、志贺氏菌的检验 发布日期：2010-09-01 浏览次数：4375 核心提示： 一、增菌 称取检样25g，加入装有225mLGN增菌液的500mL广口瓶内，固体食品用均质器以8000-10000r/min打碎1min，或用 一、增菌 称取检样25g，加入装有225mLGN增菌液的500mL广口瓶内，固体食品用均质器以8000-10000r/min打碎1min，或用乳钵加灭菌砂磨碎，粉状食品用金属匙或玻璃棒研磨使其乳化，于36℃培养6～8h。 培养时间视细菌生长情况而定，当培养液出现轻微混浊时即应中止培养。 二、分离和初步生化试验 取增菌液1环，划线接种于H
2、E琼脂平板或SS琼脂平板1个；另取1环划线接种于麦康凯琼脂平板和伊红美蓝琼脂平板各1个，于36℃培养18～24h。 志贺氏菌在这些培养基上呈现无色透明不发酵乳糖的菌落。 附：HE琼脂平板原理及照片 SS平板原理及照片 麦康凯琼脂平板照片 伊红美蓝琼脂平板照片 在沙门氏菌的检验中，有时也使用HE、SS平板进行初步筛选。 SN 0332-94 出口食品中沙门氏菌(辛酯酶荧光)检验方法 挑取平板上的可疑菌落，接种三糖铁琼脂和葡萄糖半固体各1管。一般应多挑几个菌落，以防遗漏，经36℃培养18～24h，分别观察结果。 附：葡萄糖半固体
3、原理及结果。 三糖铁琼脂现象及原理分析 下述培养物可以弃去： a. 在三糖铁琼脂斜面上呈蔓延生长的培养物； b. 在18～24h内发酵乳糖、蔗糖的培养物； c. 不分解葡萄糖和只生长在半固体表面的培养物； d. 产气的培养物； e. 有动力的培养物； f. 产生硫化氢的培养物。 凡是乳糖、蔗糖不发酵，葡萄糖产酸不产气(福氏志贺氏菌6型可产生少量气体)，无动力的菌株，可做血清学分型和进一步的生化试验。 三、血清学分型 挑取三糖铁琼脂上的培养物，做玻片凝集试验。 先用4种志贺氏菌多价血清检查，如果由于K抗原的存在而不
4、出现凝集，应将菌液煮沸后再检查； 如果呈现凝集，则用A1、A2、B群多价和D群血清分别试验。 如系B群福氏志贺氏菌，则用群和型因子血清分别检查。福氏志贺氏菌各型和亚型的型和群抗原见表1。可先用群因子血清检查，再根据群因子血清出现凝集的结果，依次选用型因子血清检查。 4种志贺氏菌多价血清不凝集的菌株，可用鲍氏多价1、2、3分别检查，并进一步用1～15各型因子血清检查。如果鲍氏多价血清不凝集，可用痢疾志贺氏菌3～12型多价血清及各型因子血清检查。 附：福氏志贺氏菌各型和亚型的型抗原和群抗原 四、进一步的生化试验 在做血清学分型的同时，应做进一步的生化试验，即
5、 葡萄糖铵 西蒙氏柠檬酸盐 赖氨酸和鸟氨酸脱羧酶 pH7.2尿素 KCN生长 水杨苷和七叶苷的分解 除宋内氏菌和鲍氏13型为乌氨酸阳性外，志贺氏菌属的培养物均为阴性结果。 。必要时还应做革兰氏染色检查和氧化酶试验，应为氧化酶阴性的革兰氏阴性杆菌。生化反应不符合的菌株，即使能与某种志贺氏菌分型血清发生凝集，仍不得判定为志贺氏菌属的培养物。 已判定为志贺氏菌属的培养物，应进一步做 5%乳糖发酵 甘露醇 棉子糖 甘油的发酵 靛基质试验 志贺氏菌属4个生化群的培养物，应符合该群的生化特性。但福氏6型的生化特性与A
6、群或C群相似。 附：志贺氏菌属四个群的生化特性 五、结果报告：综合生化和血清学的试验结果判定菌型并作出报告。 编 三糖铁（TSI）琼脂试验的原理 发布日期：2010-05-13 浏览次数：2610 核心提示： 试验方法：以接种针挑取待试菌可疑菌落或纯培养物，穿刺接种并涂布于斜面，置36±1℃培养18~24h，观察结果。 三 试验方法：以接种针挑取待试菌可疑菌落或纯培养物，穿刺接种并涂布于斜面，置36±1℃培养18~24h，观察结果。 三糖铁琼脂(TSI)成分： 蛋白胨 20.0g 牛肉膏 3.0g 乳 糖 10.0g
7、 蔗 糖 10.0g 葡萄糖 1.0g 硫酸亚铁铵(含6个结晶水) 0.5g 酚 红 0.025g或5g/L溶液5mL 氯化钠 5.0g 硫代硫酸钠 0.5g 琼 脂 12.0g 蒸馏水 1000.0mL 除酚红和琼脂外,将其他成分加入400mL蒸馏水中,搅拌均匀,静置约10min,加热煮沸至完全溶解,调至pH7.4±0.1。另将琼脂加入600mL蒸馏水中,搅拌均匀,静置约10min, 加热煮沸至完全溶解。 将上述两溶液混合均匀后,再加入酚红指示剂,混匀,分装试管(12mm×100mm),每管约2～4
8、mL,高压灭菌121℃ 10 min或115℃15 min,灭菌后置成高层斜面,呈桔红色。 原理分析：本培养基适合于肠杆菌科的鉴定。用于观察细菌对糖的利用和硫化氢（变黑）的产生。该培养基含有乳糖、蔗糖和葡萄糖的比例为10:10:1，只能利用葡萄糖的细菌，葡萄糖被分解产酸可使斜面先变黄，但因量少，生成的少量酸，因接触空气而氧化，加之细菌利用培养基中含氮物质，生成碱性产物，故使斜面后来又变红，底部由于是在厌氧状态下，酸类不被氧化，所以仍保持黄色。 而发酵乳糖的细菌(e.coli)，则产生大量的酸，使整个培养基呈现黄色。 如培养基接种后产生黑色沉淀，是因为某些细菌能分解含硫
9、氨基酸，生成硫化氢，硫化氢和培养基中的铁盐反应，生成黑色的硫化亚铁沉淀。 微生物在培养基上的典型特征 2009-09-22 18:10:29| 分类： 微生物学 | 标签： |字号大中小 订阅 金黄色葡萄球菌在BP琼脂上典型特征 金黄色葡萄球菌呈圆形 , 表面光滑、凸起、湿润 , 直径 2 ～ 3mm 。灰黑色至黑色 , 有光泽 , 常有浅色 ( 非白色 ) 的边缘 , 周围绕以不透明圈 ( 沉淀 ), 其外常有一清晰带 ( 卵磷脂环 ) 。当用接种针触及菌落时具有黄油样粘稠感。有时可见到不分解脂肪的菌株 , 除没有不透明圈和清晰带外 , 其他外观基本相同。从长期贮
10、存的冷冻或脱水食品中分离的菌落 , 其黑色常较典型菌落浅些 , 且外观可能较粗糙 , 质地较干燥。 大肠菌群在结晶紫中性红琼脂(VRBA)上典型特征 典型菌落为紫红色 , 菌落周围有红色的胆盐沉淀环。菌落直径为 0.5mm 或更大。 沙门氏菌在HE琼脂上典型特征 在 37 ℃ 培养 18-24 小时后， 沙门氏菌、亚利桑那菌和变形杆菌为蓝绿色至蓝色、有或无黑色中心的菌落；大肠杆菌和大肠菌群为粉红色菌落，有沉淀环； ，无
11、色半透明有黑色中心或几乎全为黑色。志贺氏菌和普罗菲登斯菌为绿色、湿润而隆起菌落。 大肠杆菌在伊红美蓝琼脂(EMB)上典型特征 大肠杆菌呈 黑色中心 ,有或无金属光泽. 大肠菌群在去氧胆酸盐琼脂(DC)上典型特征 典型菌落为红色 , 菌落周围有红色的胆盐沉淀环。菌落直径为 2-3mm 或更大。
12、 沙门氏菌在SS琼脂上典型特征 沙门氏菌在 37 ℃ 培养 18-24 小时后，无色透明菌落有黑色中心；志贺氏菌呈无色透明菌落。 副溶血性弧菌在海博弧菌显色培养基上典型特征 典型 副溶血性弧菌显蓝色至蓝绿色 ， 霍乱弧菌和其它弧菌显无色。 霉菌在孟加拉红培养基上典型特征 霉菌在孟加拉红培养基上典型特征为灰色菌落，有黑色孢子 。 李斯特氏菌在牛津琼脂(OXA agar)上典型特征 李斯特氏菌在 35 ℃ 培养 24-48 小时后，灰绿色菌落。其外围
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