化学毒物的一般毒性作用省名师优质课赛课获奖课件市赛课百校联赛优质课一等奖课件.ppt

,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,本资料仅供参考，不能作为科学依据。谢谢。本资料仅供参考，不能作为科学依据。本资料仅供参考，不能作为科学依据。谢谢。本资料仅供参考，不能作为科学依据。,化学毒物普通毒性作用,第一节 急性毒性作用,第二节 重复剂量、亚慢性、慢性毒性作用,第三节 局部毒性作用,1/94,1,普通毒性作用(general toxicity),外源化学物质在一定剂量、一定接触时间和一定接触方式下对试验动物产生,综合毒效应,能力称为化学毒物普通毒性，又称为化学毒物,基础毒性,，分为急性毒性、重复剂量毒性、亚慢性毒性和慢性毒性作用。,普通毒性：全身各系统对外源化学物毒作用反应。,特殊毒性：致癌、致畸、致突变,2/94,2,外源化学物,机体,普通毒性,特殊毒性,生殖毒性致突变致癌,生殖毒性试验致突变试验致癌试验,急性毒性重复剂量毒性亚慢性毒性慢性毒性,急性毒性试验重复剂量毒性试验亚慢性毒性试验慢性毒性试验,3/94,3,普通毒性评价,(evaluation for general toxicity),按接触化学毒物时间长短所进行哺乳动物试验以观察毒效应、评价化学毒物综合毒性试验，即为急性毒性试验、重复剂量毒性试验、亚慢性毒性试验和慢性毒性试验。依据以上试验结果对化学毒物毒性进行评价称为普通毒性评价。,4/94,4,意义：,1是毒理学工作中非常主要内容；,2是化学物毒理学安全性评价和危险度评定基础；,3对防治化学毒物中毒、制订标准以及管理毒理学等有主要意义。,5/94,5,第一节 急性毒性作用及其评价,一基本概念,急性毒性(acute toxicity)：,是指机体(人或试验动物)一次或24小时内屡次接触一定剂量化学物后在短期(最长到14天)内所发生毒性效应，包含普通行为、外观改变、大致形态改变以及死亡效应。,6/94,6,急性接触含义：,“一次接触”,是含有时间原因。,“屡次”,是指当化学物毒性很低，需要给予动物较大剂量时，可在24小时内分屡次给予(普通不超出3次)。,7/94,7,中毒效应出现时间:,急性毒性效应普通是指机体接触化学物后，在较短时间内观察到毒性症状。,“一次或24小时内屡次接触”后所产生毒性效应。,观察时间普通为7天-14天，如有必要可延长至14天以上。,8/94,8,中毒效应强度,机体急性一次性大剂量接触毒物后所表现出普通行为、外观、大致形态改变十分显著，中毒症状严重，经常发生死亡。,9/94,9,二急性毒性试验目标与惯用参数,目标：,A.求出LD,50,以及其它急性毒性参数，了解急性毒作用强度。,B.经过观察动物中毒表现和死亡情况，了解急性毒作用性质、可能靶器官和致死原因，提供化学毒物急性中毒资料，初步评价对人体产生损害危险性。,C.探求化学毒物急性毒性剂量-反应关系，为深入毒理学试验染毒剂量设计提供参考依据。,10/94,10,惯用急性毒性参数：,（一）LD,50,(或LC,50,),：是急性毒性评价中主要参数，是比较不一样化学毒物急性毒性主要基础。,局限：,LD,50,(或LC,50,)测定受许多原因影响；不能反应化学毒物致死作用中毒特征；LD,50,波动性很大。,11/94,11,（二）其它指标,1.急性毒作用带,（Zac=LD,50,/Lim,ac,）：,可反应急性阈剂量距离LD,50,宽窄，即表示引发试验动物死亡剂量与最低毒作用剂量之间剂量范围宽窄。其越大，表示化学物引发急性死亡危险性越小。,2.LD,84,/LD,16,(或LC,84,/LC,16,)：,灵敏性好、重复性强而且轻易求。,3.LD,100,、LD,01,4.剂量反应曲线斜率,(即剂量-死亡曲线概率单位直线斜率)。图,12/94,12,死亡率 死亡率%,（概率,单位）,A,B,5 50,剂量（mg/kg）,图 两种化学物毒性比较,13/94,13,三急性毒性试验设计,(一)经典急性毒性试验,1.试验动物,要求：,代谢和毒效应表现；,易于取得、品系纯化、价格较低和易于喂养等；,检疫。,14/94,14,1）种属：,普通要求最好能选择两个种属动物进行试验，,啮齿类,和,非啮齿类,。实际应用中以啮齿类动物为主。,急性皮肤毒性试验：成年大鼠、豚鼠或家兔。,急性吸入和经口毒性试验：大、小鼠。,15/94,15,2）年纪和体重：,未曾交配和受孕刚成年动物,：大鼠180-220g、小鼠18-22g、家兔2-2.5kg、豚鼠200-250g、Beagle犬4-6kg、杂种犬8-15kg。,（试验动物年纪与体重普通是呈正比关系，所以常依据体重来推算其年纪）,普通来说，同一次试验同一批试验动物体重变异范围不应超出该批动物平均体重20%。,3）性别：,普通要求雌雄各半。,16/94,16,4）动物数量与随机分组：,最少3个剂量组，普通5-7剂量组（依据不一样LD,50,计算方法要求）。,小动物数量为每组10只，大动物6只。,严格遵照随机化标准。,5）动物在试验前需喂养观察3-5d。,17/94,17,2.受试物及处理,受试物接收、分样、保管、称量、配制以及在此过程中严格质量确保是急性毒性试验成功是否主要步骤。,急性毒性试验受试物配制惯用剂型为水溶液、混悬液、油溶液。所用溶剂和助溶剂应该是基本无毒，与受试物不起反应。,18/94,18,3.染毒路径选择,应考虑人在生产和生活环境中接触该化学毒物情况，通常依据试验目标、化学毒物性质和用途、人类实际接触路径和方式来选择染毒路径。,19/94,19,1）经口（胃肠道）染毒（oral exposure）,普通来说新化学物均先进行经口染毒路径急性毒性试验，求出LD,50,值。通常以经口路径LD,50,值来比较不一样化学物急性毒性大小。,灌胃法、喂饲法、吞咽胶囊,灌胃法能够准确控制染毒剂量，最惯用。,20/94,20,急性经口毒性试验惯用试验动物,适宜容积（最大容积）,分别为：,大鼠灌胃1.0(2.0)ml/100g体重,小鼠灌胃0.10.2(0.4)ml/10g体重,等容量灌胃法。,21/94,21,禁食：,经口染毒试验，要求动物试验前禁食。禁食期间均正常给予饮水，染毒34后提供饲料。经口屡次染毒，可不禁食。,22/94,22,2）经呼吸道染毒（inhalation）：,硕士产条件下以气体、蒸气、粉尘、烟、雾等形式存在化学毒物和评价环境空气污染物以及吸入给药路径药品。,23/94,23,静式吸入：,将一定量易挥发静态化学毒物或一定体积气态化学毒物加入到含有一定体积密闭容器内，使试验动物吸入染毒。,优点：设备简单、操作方便、受试物消耗量少，尤其适合于小鼠接触易挥发液态或气态化学物急性毒性试验。,缺点：随时间延长氧含量下降、CO,2,增加；毒物浓度不易长久保持稳定，试验动物有经皮吸收可能。故普通仅用于急性试验。,24/94,24,动式吸入：,即染毒柜装备有补充新鲜空气和排出含化学毒物之空气动力系统以及随时补充化学毒物配气系统。,优点：染毒过程中受试物浓度和氧分压较稳定。,缺点：设备昂贵，操作复杂，花费毒物量较多。,25/94,25,气管注入法：,经喉插入法、气管穿刺法。,优点：染毒剂量较准确，用毒物量少；形成中毒模型速度快。,缺点：操作易造成损伤，引发动物死亡；不能发挥上呼吸道防卫作用，与自然吸入有差异。,26/94,26,3）经皮肤染毒（dermal exposure）：,液态、固态化学毒物。,首选大鼠，也可选取家兔和豚鼠。,试验开始前24h，采取动物脊柱两侧皮肤脱毛（剪毛法、剃毛法、化学脱毛法）。,局部涂敷受试化学毒物并以塑料薄膜或玻璃纸和两层纱布覆盖，再用无刺激性胶布或绷带加以固定。24h后取下固定物和覆盖物，用温水或适当溶剂洗去皮肤上残留受试样品。,27/94,27,4）经注射路径染毒（ingestion）：,进行化学毒物毒作用机制研究、比较毒性研究、了解化学毒物代谢与毒物动力学参数或对抢救药品进行筛选研究。,腹腔注射、静脉注射、肌内注射、皮下注射。,28/94,28,4.染毒剂量与分组,了解化学毒物理化特征，纯度，杂质成份与含量等。,有相关毒性资料可供参考者,没有毒性资料可供查阅者,限量试验,预试验,找出大致致死范围,(即死亡率从0-10%至90-100%),设计正式试验剂量和分组,近,似化学物,LD,50,(LC,50,),值作预期毒性,中间剂量,上下各设,计,1,2,个剂量组进,行预试验,29/94,29,在实际工作中，除有特殊要求外，均不设置对照组。,5.试验周期：,化学毒物LD,50,（LC,50,）测定普通要求计算试验动物接触受试物后14天内总死亡数。,30/94,30,6.毒效应观察,1)中毒症状,观察动物出现中毒症状、发生时间、症状发展经过、死亡前特征以及死亡时间等。图,2)体重,体重能够反应动物中毒后整体改变。对存活动物，应在观察期14天内称量其体重改变，方便了解受试物引发毒效应连续时间。,31/94,31,表,6,-,1,啮齿类动物急性中毒表现,系统和器官,观察项目,中毒后常见表现,中枢神经系统与躯,体感觉和运动系统,行为,体位异常，叫声异常，活动异常，不安，多动、,少动或呆卧，侧倒,运动状态,运动异常、运动失调、步态蹒跚、痉挛、抽搐、,强直、麻痹，后肢无力，,管状尾,对外界刺激反应性,易兴奋、易激惹，感觉迟钝或过敏，反应低下或,过高,脑、脊髓反射,减弱或消失,肌肉张力,松弛或担心,自主神经系统,瞳孔,散大或缩小,腺体分泌,流涎，流泪，出汗,32/94,32,3)病理检验及其它指标,对死亡动物：均应及时进行大致解剖和病理组织学检验。,对存活动物：在观察期结束时进行大致病理检验.,4)死亡和死亡时间,分析中毒死亡时间分布规律，也能够提供主要信息。,33/94,33,四、急性毒性评价,各种急性毒性分级标准是以LD,50,/LC,50,值为基础划分，以往没有统一标准。,如1994年颁布实施食品安全性毒理学评价程序和方法中提出急性毒性分级,六级标准,(表6-3)。联合国世界卫生组织(WHO)推荐了一个五级标准。,34/94,34,表,6,-,3,化学物质急性毒性,(LD,50,),剂量分级,_,级,别,大鼠口服,LD,50,相当,于人致死剂量,(mg/kg)_,mg/kg g/,人,_,极,毒,15000,500000 2500,_,引自,GB15193.3,-,94,食品安全性毒理学评价程序和方法,35/94,35,36/94,36,WHO于年公布全球化学品统一分类和标签制度（GHS），年修订，年全方面实施。,37/94,37,五、急性毒性试验汇报,受试样品名称、理化性状、配制方法、所用浓度。,试验动物种属、品系和起源。,所用剂量和动物分组、每组所用动物性别、数量级体重范围。,染毒后动物中毒表现和死亡情况及出现时间，大致解剖及病理所见。,计算LD,50,值方法及其LD,50,和95%可信限。,结论。,38/94,38,（二）急性毒性替换试验,“3R标准”,OCED（经济合作和发展组织）推荐：,固定剂量法,急性毒性分级法,上下移动法,39/94,39,1.急性经口毒性试验固定剂量法（fixed dose procedure）,不以动物死亡作为观察终点，而是利用预先选定或固定一系列剂量染毒，从而观察化学物毒性反应来对化学物毒性进行分级。,观察终点：,显著毒性（evident toxicity）,：给予受试样品后出现明确毒作用表现，可作为危险度评价充分依据，预期伴随染毒剂量增加可发展为严重中毒症状直至死亡。,40/94,40,预试验：,选择5、50、300和mg/kg 4个固定剂量，特殊情况下可增加1个5000mg/kg剂量。,采取单性别（普通为雌性）,1只,动物循序进行，依据受试物相关资料，从上述剂量中选择1个作为初始剂量；如没有相关资料可参考，可用300mg/kg作为初始剂量进行预试验。,依据预试验结果选择,一个,能产生显著毒性效应但不引发死亡剂量进行正式试验。,41/94,41,注：A死亡；B显著毒性；C无毒性,42/94,42,43/94,43,正式试验,每个剂量组5只动物（包含预试验在该水平做过动物）。普通只需一个剂量。,假如正式试验选择起始剂量未见显著毒性，应接着进行下一个较高剂量染毒。如正式试验选择起始剂量出现动物死亡或严重毒性反应时，应从保护动物免受痛苦出发，选择下一个较低剂量进行。,出现以下情况,结束试验,：当出现显著毒性反应或已确认不多于一只动物死亡；最高剂量未出现毒性反应；最低剂量动物出现死亡。,应在确认前一个剂量组动物存活后，才可进行下一个剂量试验。普通两个剂量组试验之间要间隔34d。,44/94,44,限量试验,：,假如有相关资料表明受试物可能无毒，可进行限量试验。,染毒剂量为mg/kg（5000mg/kg），选择另外4只动物进行。,预试验和正式试验都不出现中毒体征，试验终止。,结果判定：,GHS类别。,45/94,45,注：A死亡数大于或等于2只；B观察到显著毒性大于或等于1只，或者1只死亡；C无毒性。,46/94,46,2.急性毒性分级法（acute toxic class method）,以死亡为终点分阶段试验法。,每一阶段使用单性别3只动物（通常为雌性，如雄性更敏感则用雄性）。,从5、50、300、mg/kg 4个固定剂量中选择,一个,剂量开始进行试验。,依据死亡动物数，决定下一阶段：,不需要深入试验即可分级；,以相同剂量另一个性别试验；,以较高或较低剂量水平进行（从300mg/kg开始）。,47/94,47,平均经过24阶段即可判定急性毒性。,急性毒性分级法依据在某一染毒剂量下死亡发生数量，经过生物统计学方法判定大致LD,50,值范围，然后进行评价和分级。,48/94,48,阶梯法,以死亡为终点，也可观察不一样终点。,推荐剂量序列：1.75、5.5、17.5、55、175、550、mg/kg。,如无毒性资料可参考，推荐从175mg/kg开始。,如有资料参考，从比理论LD,50,值稍低剂量开始。,一只动物序贯进行,，,需单性别毒物610只。,3.上下移动法（up/down procedure）,49/94,49,一只动物染毒后观察48h。,存活：下一只动物提升一档剂量；,死亡：下一只动物降低一档剂量；,每一只存活动物都要观察至14天。,后期死亡动物在统计结果时也记为死亡。,50/94,50,第二节 短期、亚慢性、慢性毒性作用,一、基本概念及试验目标,蓄积作用：,指外源化学物连续地、重复地进入机体，而且吸收速度或总量超出代谢转化排出速度或总量时，化学物质就有可能在体内逐步增加并,贮留，称为化学物质蓄积作用。,蓄积作用是发生慢性毒作用前提。,51/94,51,蓄积作用有两个含义：,1.物质蓄积（material accumulation）：当试验动物重复接触化学毒物一定时间之后，用化学分析方法能够测得机体内（或一些组织器官内）存在该化学毒物原型或其代谢产物时。,2.损伤蓄积（damage accumulation）：有化学毒物在机体内虽不能被测出，然而在长久接触情况下机体能够出现慢性中毒现象。,52/94,52,重复剂量（短期）毒性：,指试验动物或人连续接触外源化学物14-30天所产生中毒效应。（28天）,亚慢性毒性：,指试验动物或人连续较长久（相当于生命周期1/10）接触外源化学物所产生中毒效应。（90天）,慢性毒性：,指试验动物或人连续长久(甚至终生)重复接触低剂量外源化学物所产生毒性效应。,53/94,53,短期、亚慢性、慢性毒性试验目标（,共同点,）：,1.剂量反应（效应）关系,2.毒性效应谱、毒作用特点和毒作用靶器官,3.毒性作用可逆性,4.比较不一样动物物种、不一样接触时间毒效应差异，为受试物毒性机制研究和将研究结果外推到人提供依据。,54/94,54,试验目标,不一样点,重复剂量毒性试验目标：,1.初步预计未观察到有害作用剂量（NOAEL）。,2.为亚慢性试验剂量设计和观察指标提供依据。,亚慢性毒性试验目标：,1.确定NOAEL和LOAEL，提出安全限量参考值。,2.为慢性试验剂量设计和观察指标选择提供依据。,慢性毒性试验目标：,1.确定NOAEL和LOAEL，为制订人类接触时安全限量标准以及危险度评价提供毒理学依据。,55/94,55,二、试验设计,(一)试验动物,1.物种和品系：,遵照动物选择大标准,普通选择两种试验动物：啮齿类、非啮齿类,亚慢性：首选,大鼠，也可用小鼠,犬：Beagle犬,经皮：兔或豚鼠,56/94,56,2.性别、年纪和动物数,（以大鼠为例）,：,性别：雌雄各半,年纪：不超出9周,大鼠,（短期）；,68周龄大鼠（亚慢性）；,刚断乳大鼠（慢性）,各试验组和对照组动物数应相同，在试验开始时动物体重差异不得超出同性别平均体重20%。,数量：每组不少于10只（短期）,每组不少于20只（亚慢性）,每组不少于40只（慢性）,如设计要定时处死动物，需增加动物数。,57/94,57,3.喂养条件:,动物房温度应为22,3,。相对湿度应为30-70%，以50-60%为最正确。常规饲料，饮水不限。单笼或按性别少许动物群养。,4.动物准备：,健康动物，未进行过其它试验，染毒前在试验室最少适应5d。标识和随机分组。,58/94,58,（二）染毒条件（以亚慢性毒性试验为例）,染毒路径应尽可能采取人群实际接触路径和方式，并与预期进行慢性毒性试验接触路径相一致。,普通以经口（喂饲法、灌胃法、胶囊法）、经呼吸道和经皮肤染毒三种路径为多。注射剂型新药需进行注射染毒长久毒性试验（犬）。,59/94,59,小动物（,大鼠和小鼠）,惯用灌胃法和喂饲法,。,犬：胶囊法或灌胃法,喂饲法：受试物稳定，受试物掺入饲料要有严格要求。30天试验不得超出10g/100g饲料,90天试验，不得超出8g/100g饲料,慢性试验不得超出5g/100g饲料,60/94,60,染毒频率：普通,天天一次,。,每日,定时染毒,：普通为早晨。,经呼吸道染毒时间通常为每日2-6小时，工业毒物能够缩短至1小时或延长，环境污染物可延长至8小时。,经皮染毒普通天天6小时，而且每七天应对染毒部位脱毛一次。,61/94,61,（三）剂量分组（以亚慢性毒性试验为例）,最少设3个染毒组和1个同时对照组。,必要时加1个赋形剂对照组（以各染毒组中使用赋形剂量最大组使用量进行）。,附加对照：,如需要，可设雌雄各5只附加组作为附加对照，以高剂量组剂量染毒，在停顿染毒后暂不处死，用以观察是否有迟发毒作用和毒性作用可逆性，时间长短依据所观察到毒性来确定。,62/94,62,如混入饲料中受试物使动物进食量降低，应设计,饲料配对对照组,，用于判别是毒性造成进食量降低？受试物影响饲料适口性造成？,剂量设计：依据重复剂量毒性试验和进行确实定染毒剂量范围预试验结果，并结合受试物或结构相关化合物已经有毒理学和毒代动力学研究数据进行。,63/94,63,最高剂量组,染毒剂量应使动物在染毒期间产生较显著毒性，但不应引发动物死亡和承受显著痛苦，即使有死亡，也应小于10%动物数。通常以该化学物急性毒性阈剂量（同一动物品系和一样染毒路径）或以该化学物1/20-1/5 LD,50,作为最高染毒剂量；,最低剂量组,动物应无中毒反应或仅有极其轻微反应，相当于亚慢性阈剂量或NOAEL水平。,在低、高剂量组之间再设置1个,中间剂量组,（约相当于LOAEL）。组间隔普通为2-4倍。,对照组,除不染毒外，其它处理与染毒组动物相同。,64/94,64,对于人群主动摄入食品和药品：,采取人体可能拟用最高剂量为剂量设计依据。,大鼠：10、30和100倍，,非啮齿类：5、15、50倍。,预期受试物无显著毒性：,亚慢性和慢性试验设计最少等于人拟用剂量最大倍数，保健食品为100倍，化学药品为30倍，中药为50倍。,65/94,65,（四）观察指标,短期、亚慢性和慢性毒性试验检测各种毒性终点流程图,短期、亚慢性、,慢性毒性试验,过程中,外观,生长和发育,行为功效,毒性体征,生物体液,最终体重,脏器湿重,脏,/,体比,活杀解剖,器官/组织,大致尸解,固定/染色,显微镜检验,血液学,血清-化学-生化学,尿分析,生物学标志,酶,内源性成份,胆汁,66/94,66,1.普通观察：,动物体重：每七天称量全部动物体重一次。,试验动物体重增加抑制或体重减轻受到各种毒效应影响，包含食欲、消化功效、代谢和能量消耗改变等。假如各剂量组体重增加改变呈剂量-反应关系，能够必定这是一个综合毒性效应。,食物利用率：,即动物每食入100g饲料所增加体重克数（g体重/100g饲料），可,判别动物体重降低是因为进食降低，还是受试物毒作用,。,每七天观察并统计饲料消耗量。,67/94,67,中毒症状：,试验期间最少天天相同时间对动物进行一次临床观察，最好在染毒后预期中毒症状出现高峰期。天天最少两次检验动物有没有濒死征象或死亡。,详细统计各症状出现时间和先后次序，包含食欲、活动、被毛、分泌物、呼吸等，尤其要留心动物被毛光洁度和色泽、眼分泌物、呼吸、神态、行为等。,68/94,68,血液学指标：,红细胞计数、血红蛋白含量、白细胞计数及分类、血小板计数、凝血时间等。,血液生化学指标,：转氨酶、碱性磷酸酶、尿素氮、总蛋白、清蛋白、血糖、总胆红素、肌酐、总胆固醇等。,2.试验室检测项目：,69/94,69,大致解剖检验：,全部动物。包含体表、体腔各开口处、颅腔、胸腔、腹腔及其内容物检验。,取出心、肝、脾、肾、肺、肾上腺、甲状腺、睾丸、附睾、卵巢、胸腺、脑等，肉眼检验，尽快称重，保留在固定液中。,脏器系数：,指某个脏器湿重和单位体重比值，通常是每100g体重中某脏器所占质量。表示为脏器质量（g）/体重（100g），又称脏/体比值。,组织病理学：,对照组和高剂量组全部动物及肉眼见到损害器官和组织都应进行详尽组织病理学检验。如高剂量组出现异常，中低剂量组也应检验。,3.病理学检验：,70/94,70,最终染毒后24小时，每组活杀动物(如2/3)，检测各项指标，剩下停顿染毒，继续观察24周。,如病理学检验发觉有异常改变，应将剩下动物活杀剖检，重点观察毒性反应器官。,4.可逆性观察：,71/94,71,指毒物对机体毒作用本质特征性指标，与其毒作用机制相关，有时可作为效应生物学标志。,依据受试物毒性资料，适当增加检测指标,心血管系统有毒性：心电图、血压、眼底检测；,电解质、微量元素代谢：血钙、血磷等含量。,5.特异性指标：,72/94,72,重视试验项目管理,合理试验设计：明确剂量反应关系，获到理想LOAEL和NOAEL。,合乎要求试验动物环境,检测条件控制,（五）长久毒性试验注意事项,73/94,73,三、结果评价,亚慢性毒性评价:,明确化学物质毒效应。,确定毒效应敏感指标，并依据指标出现改变情况来确定阈剂量和/或最大无作用剂量。,依据阈剂量和/或最大无作用剂量，进行评价。,74/94,74,观察指标是否有差异？,这种差异是否与受试物相关？,是否有生物学意义和毒理学意义？,75/94,75,1.剂量相关趋势,剂量-反应关系是反应效应与处理原因关系主要指标。,有剂量-反应关系说明受试物和效应相关；,没有剂量-反应关系，可初步判断与受试物无关。,理想试验结果是最高剂量组中毒效应显著，中剂量组有轻度表现，而低剂量组无任何异常毒效应。,如差异有显著性而无生物学意义参数过多，试验可能存在质量问题。,76/94,76,试验结果能够重复，才可确定与受试物相关。,重复形式：,另一个物种中发生相同差异；,同一物种不一样时间点发生相同差异。,2.反应重现性,77/94,77,3.相关指标改变,处理原因,某项指标,对应指标,GOT升高,肝坏死,GST活性升高,4.差异大小和性别差异,差异越大，与受试物相关可能性越大。,注意：需要知道数据正常范围。,差异大多发生在两种性别，也可能只发生在高敏感性别,78/94,78,5.历史性对照作用,历史参考范围,能够识别异常阴性对照；,能够更加好地了解低发生率发觉；,能够更加好判断差异生物学意义。,79/94,79,差异是否代表有害效应？,以下情形，能够排除有害效应：,受试对象功效没有改变，该效应为短暂、适应性改变；,没有相关指标或参数改变；,出现效应不是该受试物已知效应前期表现等。,80/94,80,全部观察和检测结果，进行全方面综合分析,结合化学物理化性质、化学结构,应用生物学和医学基本理论进行科学评价,81/94,81,第三节 局部毒性作用及其评价,局部毒性,是指发生化学毒物与机体直接接触部位处损伤作用。,用于评价机体接触化学毒物局部（如皮肤、眼睛等）所出现损伤作用。,局部毒性反应往往发生在全身毒性作用之前，所以研究局部毒性作用有利于早期脱离接触，防止全身毒性作用。,通常包含皮肤刺激试验、皮肤致敏试验和眼刺激试验等。,82/94,82,一、急性眼刺激试验 (acute eye irritation test),目标：,确定和评价化学毒物对毒物眼睛是否有刺激作用或腐蚀作用及其程度。,眼刺激性,：指眼睛表面接触受试物后眼睛产生可逆性炎症改变。,眼腐蚀性,：指眼睛表明接触受试物后眼睛产生不可逆性组织损伤。,83/94,83,受试物为强酸或强碱（pH,2或,11.5），或已证实对皮肤有腐蚀性或强刺激性时，可免做眼刺激试验。,pH值靠近中性大部分化学物质，皮肤和眼刺激性反应不一定一致，应单独做眼刺激试验。,84/94,84,1.试验方案,首选健康成年白色家兔（体重23kg）,46只。,试验开始前24h内，借助辅助光源对每一只动物双眼进行肉眼检验，然后深入做荧光素检验。,受试物为液体，直接用原液染毒。,受试物为固体、颗粒、粉末，在染毒前粉碎、研细。,85/94,85,将动物头左倾，右眼侧向斜上方，轻轻提起双睑，将受试物0.1ml直接滴（涂或放）于角膜上；染毒后松开双睑，任其自然开或闭。24h后可冲洗。,以左眼睛作为本身对照。,86/94,86,给予受试物后1小时、24小时、48小时、72小时、和第4天、第7天对眼睛进行检验。,肉眼观察毒物眼睛结膜（充血和水肿）、角膜（混浊）和虹膜（充血和出血）反应。,染毒后第24h观察统计之后，对全部动物眼睑用荧光素做深入检验。,假如72小时内未出现刺激反应，即可终止试验。,假如有刺激反应发生，要观察损伤经过及其可逆性，观察期最长可至21天。,87/94,87,2.评价,眼刺激性反应评分与分级标准。,88/94,88,89/94,89,90/94,90,将每只动物不一样观察时间角膜、虹膜、结膜刺激反应分值分别相加，即为该动物各时点眼刺激反应总积分。,全部动物各时点刺激反应总积分之和除以动物数，即为受试物在不一样时点对眼刺激反应平均积分。,取平均积分最高者，进行眼刺激强度评价。,91/94,91,表 眼刺激评价标准,累加最高积分,刺激强度,05,无刺激性,515,轻刺激性,1530,刺激性,3060,中度刺激性,6080,中度至重度刺激性,80110,重度刺激性,92/94,92,二、局部毒性试验进展,1.观察指标量化研究。设计改进观察方法和利用当代图象分析技术，走向半定量，甚至定量观察。,2.试验规范化、标准化研究。,3.染毒专用装置研究。局部毒性试验染毒路径改变较多，有些部位不易染毒或染毒量不易准确，有不少专用小型装置和器械出现，大大提升试验准确性和方便性。,4.替换试验：如受精鸡胚尿囊绒毛膜试验代替兔眼刺激试验。,93/94,93,The end!,94/94,94,