一篇细胞生物学市公开课获奖课件省名师优质课赛课一等奖课件.ppt

,按一下以編輯母片標題樣式,按一下以編輯母片本文樣式,第二層,第三層,第四層,第五層,*,*,*,本资料仅供参考，不能作为科学依据。谢谢。本资料仅供参考，不能作为科学依据。本资料仅供参考，不能作为科学依据。谢谢。本资料仅供参考，不能作为科学依据。,第一篇 细胞生物学,细胞生物学概论,生命基本单位细胞,细胞膜,细胞质,细胞核,1/35,第一章 医学细胞生物学概论,研究内容,研究方法,2/35,第一节,医学细胞生物学研究内容,细胞生物学,是从细胞、亚细胞和分子三个水平硕士命现象和本质科学,医学细胞生物学,是一门专门研究与人体医学相关细胞生物学,形态：,观察和分析细胞内各部分超微结构和分子结构,功效：,探索和揭示生命活动详细反应过程，真正了解人体生、老、病、死等各种生命现象。,3/35,第二节医学细胞生物学研究方法,显微技术,生物化学与分子生物学技术,细胞分离技术,细胞培养与细胞杂交,4/35,一、显微技术,显微镜是观察细胞主要工具。依据光源不一样，可分为光学显微镜和电子显微镜两大类。,5/35,普通光学显微镜,6/35,荧光显微镜,细胞中有些物质，如叶绿素等，受紫外线照射后可发荧光；另有一些物质本身虽不能发荧光，但假如用荧光染料或荧光抗体染色后，经紫外线照射亦可发荧光,7/35,荧光显微镜照片,（微管呈绿色、微丝红色、核蓝色）,8/35,激光共聚焦扫描显微镜,9/35,蓝色为细胞核,绿色为微管,激光共聚焦扫描显微镜用激光作扫描光源，因为激光束波长较短，光束很细，所以共焦激光扫描显微镜有较高分辨力，大约是普通光学显微镜,3,倍。,调焦深度不一样时，就能够取得样品不一样深度层次图像，这些图像信息都储于计算机内，经过计算机分析和模拟，就能显示细胞样品立体结构。,10/35,暗视野显微镜,照明光线不直接进人物镜，只允许被标本反射和衍射光线进入物镜，因而视野背景是黑，物体边缘是亮。,利用这种显微镜能见到小至,4200nm,微粒子，分辨率可比普通显微镜高,50,倍。,11/35,相差显微镜,把透过标本可见光光程差变成振幅差，从而提升了各种结构间对比度，使各种结构变得清楚可见。,这种显微镜最大特点是能够观察未经染色标本和活细胞。,一个介壳虫染色体,12/35,微分干涉差显微镜,优点是能显示结构三维立体投影影像，使细胞结构，尤其是一些较大细胞器，如核、线粒体等，立体感尤其强，适合于显微操作。,当前像基因注入、核移植、转基因等显微操作常在这种显微镜下进行。,13/35,倒置显微镜,用于观察培养活细胞,14/35,透射电子显微镜,1932,年,Ruska,创造了以电子束为光源，,用电磁场作透镜,电子显微镜。,电子显微镜放大倍数最高可达近百万倍,透射电子显微镜,扫描电子显微镜,15/35,RER,形态,16/35,显微操作,/,注射仪,17/35,二、生物化学与分子生物学技术,细胞化学技术,组织化学或细胞化学染色：是利用染色剂可同细胞某种成份发生反应而着色原理，对某种成份进行定性或定位研究技术。,利用这种方法对细胞各种成份几乎都能显示，包含有没有机物、醛、蛋白质、糖类、脂类、核酸、酶等。,18/35,免疫细胞化学,依据免疫学原理，利用抗体同特定抗原专一结合，反抗原进行定位测定技术。,假如将抗体结合上标识物，再与组织中抗原发生反应，即可在光镜或电镜下显示出该抗原存在于组织中部位。,惯用标识物有荧光素和酶。,荧光素标识称为,免疫荧光法,酶标识称为,酶标免疫法,19/35,显微光谱分析技术,细胞中有一些成份含有特定吸收光谱，核酸、蛋白质、细胞色素、维生素等都有自己特征性吸收曲线。比如，核酸吸收波长为,260nm,，而蛋白质则为,280nm,。依据细胞成份所含有这种特征，可利用显微分光光度计对一些成份进行定位、定性，甚至定量测定,20/35,放射自显影术,用于研究标识化合物在机体、组织和细胞中分布、定位、排出以及合成、更新、作用机理、作用部位等等。,原理是将放射性同位素（如,14,C,和,3,H,）标识化合物导入生物体内，将标本制成切片或涂片，涂上卤化银乳胶，组织中放射性即可使乳胶感光。显示还原黑色银颗粒，即可得知标本中标识物准确位置和数量。,21/35,分子杂交技术,含有互补核苷酸序列两条单链核苷酸分子片段，在适当条件下，经过氢键结合，形成,DNA-DNA,，,DNA-RNA,或,RNA-RNA,杂交双链分子。,这种技术可用来测定单链分子核苷酸序列间是否含有互补关系。,22/35,人类染色体,端粒,DNA,荧光原位杂交,最初是使用带放射性,DNA,探针，经过放射自显影来显示位置。以后又创造了免疫探针法，将探针核苷酸侧链加以改造，探针杂交后，其侧链可被带有荧光标识抗体所识别，从而显示出位置。,23/35,PCR,技术,聚合酶链式反应（,polymerase chain reaction,，,PCR,）用于在体外将微量目标,DNA,大量扩增，方便进行分析。,24/35,三、细胞分离技术,离心技术,流式细胞术,细胞电泳,25/35,离心技术,差速离心,速度逐步提升，样品按大小先后沉淀,26/35,用差速离心法分离已破碎细胞各组份,27/35,A,等速度沉降，,B,等密度沉降,离心技术,密度梯度离心,28/35,流式细胞术,流式细胞术是对单个细胞进行快速定量分析与分选一门技术。,在分析或分选过程中，包在鞘液中细胞经过高频振荡控制喷嘴，形成包含单个细胞液滴，在激光束照射下，这些细胞发出散射光和荧光，经探测器检测，转换为电信号，送入计算机处理，输出统计结果，并可依据这些性质分选出高纯度细胞亚群，分离纯度可达,99%,。,包被细胞液流称为鞘液，所用仪器称为流式细胞计。,29/35,30/35,细胞电泳,在一定,PH,值下细胞表面带有净正或负电荷，能在外加电场作用下发生泳动现象称为,细胞电泳,。,引发细胞电泳电位值称为,电位,。,各种细胞或处于不一样生理状态同种细胞电荷量有所不一样，故在一定电场中泳动速度不一样，所以可用来分离不一样种类细胞。,在恒定电场条件下，同种细胞电泳速度相当稳定，因而可经过测定电泳速度来推算出细胞,电位。,电位常因细胞生理状态和病理状态而异，所以在诊疗疾病上有一定价值。,31/35,四、细胞培养与细胞杂交,细胞培养,选取最正确生存条件对活细胞进行培养和研究技术,。,细胞融合,经过培养和诱导，两个或多个细胞合并成一个双核或多核细胞过程称为细胞融合或细胞杂交,。,32/35,动物细胞培养,群体培养（左）和克隆培养（右）,33/35,植物细胞培养,1,、组织培养：诱发产生愈伤组织，假如条件适宜，可培养出再生植株。,2,、悬浮细胞培养：适合于进行产业化大规模细胞培养，制取植物代谢产物。,3,、原生质体培养：脱壁后植物细胞称为原生质体。,4,、单倍体培养：经过花药或花粉培养可取得单倍体植株，经人为加倍后可得到完全纯合个体。,34/35,正常淋巴细胞含有分泌抗体能力，但不能在体外长久培养，瘤细胞能够在体外长久培养，但不分泌抗体。于是英国人,Kohler,和,Milstein 1975,将两种细胞杂交而创建了单克隆抗体技术，获,1984,年诺贝尔奖。,35/35,