宫颈鳞状上皮病变中EGFR蛋白表达及基因扩增的临床意义.pdf

4 4 8 J D i a g P a t h o l，D e c e mb e r2 0 1 0，Vo 1 1 7，No 6 d o i：1 0 3 9 6 9 j i s s n 1 0 0 7-8 0 9 6 2 0 1 0 0 6 0 1 7 宫颈鳞状上皮病变中 E G F R蛋白表达及基因 扩增 的临床意义 李青h，纪捷，吴王飞，周晓军(1 南京大学医学院临床学院 南京军区南京总医院 病理科，南京2 1 0 0 0 2；2 南京医科大学 附属南京市妇幼保健 院病理科，南京2 1 0 0 0 4)摘要 目的探讨表皮生长因子受体(E G F R)蛋白在宫颈鳞状上皮内瘤变和鳞状细胞癌中的表达及基因扩增，并评估其在宫颈癌发生、发展和预后中的价值。方法分别应用免疫组化 E n V i s i o n法和荧光原位杂交(F I S H)技术 检测 7 5例宫颈各种病变组织 中的 E G F R蛋白表达、基 因扩增及基 因拷 贝数 的变化，其 中慢性宫颈炎 1 0例，低级别 鳞状上皮内瘤变(C I N)1 6例，高级别 C I N 2 5 例，宫颈癌 2 4例。结果E G F R在高级别 C I N和宫颈癌中的阳性表达 率分别是7 6 和 7 9 1 7，而在慢性宫颈炎和低级别 C I N中的阳性表达率分别是 1 0 和4 3 7 5。高级别 C I N和 鳞癌中的基因扩增阳性率为 2 5，而慢性宫颈炎和低级别 C I N中的阳性率为 3 3 3。4 2例 E G F R阴性或低等阳 性病例中 F I S H检测出2 6 例(6 1 9)二倍体和 1 1例(2 6 2)三倍体，而2 0例 E G F R中等或强阳性病例中却有 1 3 例(6 5)为多倍体或单纯 E G F R基因扩增；所有 E G F R基因扩增病例的蛋白表达均为中 强(+)。结论E G F R 可能参与了宫颈癌的发生，并且是宫颈癌发生的早期事件。E G F R蛋白过表达可能由 E G F R基因扩增或基因拷贝 数增加所致。关键词 宫颈肿瘤；表皮生长因子受体；蛋白表达；基因扩增；基因拷贝数；荧光原位杂交 中图分类号 R 7 3 5 【文献标识码 A 文章编号 1 0 0 78 0 9 6(2 0 1 0】0 6 0 4 4 8 0 5 Cl i n i c a l s i g n i f i c a n c e o f EGFR p r o t e i n e x pr e s s i o n a n d g e n e a mpl i fic a t i o n i n s qua m o u s i n t r a e pi t he fial l e s i o n s o f c e r v i x L I Q i n 9 ，J I J i e ，WU Wa n 9 一 f e i ，Z HO U X i u o-j u n (1 D e p a r t m e n t o fP a t h o l o g y，C l i n i c a l S c hoo l of Me d ic a l C o l l e g e，n g U n i v e m i，a n d N a n j i r g l G e r v e r a l H o s p i t a l o fN a n j i n g Mi l i t a r y C o m m a nd N a n j i 2 1 0 0 0 2，C h i n a；2 D e p a r t m e n t o f Pat ho l o g y，Na r ut Ma t e r n i t y a nd H e a l t h H o s p i t a l，N a r u d Me d i c a l U n i v e m i，N a n j i 2 1 0 0 0 4，C h i na)C o r r s p o n d i n g a u t h o r：Z H O U X i u o j u n(E ma i l：z h o u x j l y a h o o c o m c n)Ab s t r a c t：O b j e c ti v e T o s t u d y t h e p r o t e i n e x p r e s s i o n a n d g e n e a m p l i fi c a t i o n o f e p i t h e l i a l g r o w t h f a c t o r r e c e p t o r (E G F R)i n i n t r a e p i t h e l i a l n e o p l a s i a s a n d s q u a mo u s c e ll c a r c i n o m a o f c e r v i x a n d t o e x p l o r e t h e v a l u e o f E G F R i n t h e c a r c i n o g e ne s i s，p r o g r e s s i o n an d p r o g n o s i s o f c e r v i c a l s q u a mo u s c e l l c arc i n o ma M e t ho d s EGFR pr o t e i n e x p r e s s i o n a n d g e n e a m p l i fi c a t i o n w e r e e v a l u a t e d b y i m m u n o h i s t o c h e m i c al a n d f l u o r e s c e n c e i n s i t u h y b r i d i z a t i o n(F I S H)t e c h n i q u e s，r e s p e c t i v e l y，i n 75 c a s e s o f v a r i o u s c e r v i c a l l e s i o n s，i n c l u di n g 1 0 c h r o n i c e e r v i c i t i s，1 6 l o w g r a d e i n t r a e pi the l i a l ne o p l a s i a s (C I N)，2 5 h i g h g r a d e C I N a n d 2 4 i n v a s i v e s q u a m o u s c e l l c a r c i n o m a s R e s u l t s E x p r e s s i o n o f E G F R w a s o b s e rve d i n 7 6 h i g h g r a d e C I N a n d 7 9 1 7 i n v a s i v e c a r c i n o ma，r e s p e c t i v e l y I n c o n t r a s t，the r e w e r e l o w l e v e l s o f E GF R e x p r e s s i o n i n c h r o n i c e e r v i c i ti s(1 0 )a n d l o w gra d e C I N(4 3 7 5)T h e r e w e r e s t a t i s t i c al d i ff e r e n c e s a m o n g t h e m(P8 0 计 3分。染色深度 以大多数细胞着色为准，不着色计0分，浅棕黄色计 1 分，棕 黄色计2分，深棕黄色计 3分。根据这两项指标的计分数之 和分为 4级：0分为(一)，2分 为(+)，3 4分为(+)，5 6 分 为(卅)。1 3 2 荧光原位杂交(F I S H)检测探针 L S I E G F R C E P 7 为红 绿双色，其中 E G F R基 因为红色信号，7号染色体着丝 粒序列为绿色信号，胞核通过 D A P I 滤波片辨别。由2位病 理 医师随机计 数细胞 观察，结 果一致 方可认 定。随机计 数 1 0 0个细胞，统计 R a t i o 值(R a t i o 值=1 0 0个细胞核中红信号 总数 1 0 0个细胞 核 中绿 信号 总数)。R a t i o 2及 出现成 团 集簇扩增细胞视为 E G F R基 因扩增 阳性。1 4 统计学分析运用 S P S S 1 0 0统计软件包对数据进行 统计学处理，采用 检验及确切概率法。2结果 2 1 E G F R在宫颈各组病 变中的表达 由图 1可 见，E G F R在慢性宫颈炎鳞状上皮细胞 中有少数 阳 性表达，但阳性细胞均位于基底层(此可作为 自身 内对照)，我们将这种只位 于基底层 的少数细胞 阳 性着色视为阴性。C I N I 级开始出现副基底层细胞 的阳性表达，中表层细胞的阳性着色在 C I N I I 逐渐显著，癌巢的阳性表达以边缘部着色明显，强于 中间区域 细胞。从慢性 宫颈炎(图 1 A)一低级别 C I N(图 1 B)一高级别 C I N(图 1 C)一鳞状细胞癌(图 1 D)的各级病变发展中，E G F R的阳性表达率逐渐升 高，且阳性表达强度也逐渐增强。鳞状细胞癌组 的 阳性表达率虽高于高级别 C I N，但差异不显著(P 0 O 5)，与低级别及慢性宫颈炎组 比较差异显著(P 0 0 5)。高级别 C I N中 E G F R的表达率与低级别 及慢性宫 颈炎组 比较 则差异极 显著(P 0 0 5)(表 1)。表 1 宫颈各组病变中 E GF R蛋白表达情况 2 2 E G F R与宫颈鳞状细胞癌的关 系 由表 2可 见，在 2 4例 宫 颈 鳞 癌 中 有 1 9例 E G E R(+)(7 9 1 7)，其 中 5例(+)、9例(+)、5例(卅)。高分化与低分化组差异不显著(P0 0 5)；有淋巴 4 5 0 J D i a g P a t h o l，D e c e mb e r 2 01 0，Vo 1 1 7，No 6 结转移组与无淋巴结转移组相 比较，虽然阳性率数 值相差较大，但亦无统计学意义(P 0 0 5)。表 2 E G F R蛋 白表达与宫颈癌临床病理特征的关 系 2 3 E G F R基 因扩增与基 因拷贝数7 5例 中有效 信号病例为 6 2例(除去杂交不足及细胞堆集无法 计数的 1 3例)。图 2列出了 4种主要杂交信号模 式，我们在宫颈病变 中检测到的 E G F R基 因拷贝数 变化模式与文献报道相一致 。红绿信号变化反 映的是 E G F R基因和 7号染色体拷贝数 的变化，同 时也可反映 7号染色体的倍体数 目变化(1 lJ t iE 整倍 体)。由表 3可知，三倍体及多倍体大部分为均衡 倍体增加(图2 A，2 B)，即 E G F R基 因和 7号染色体 均衡扩增。另有 9例 E G F R基因有扩增(图 2 C)，其 中低水平扩增 5例，高水平扩增 4例。高级别 C I N 和鳞状细胞癌组基因扩增 阳性率为 2 5(8 3 2)，而 慢性宫颈炎和低级别 C I N组的阳性率为 3 3 3(1 3 0)，两组阳性率数值差异较大，但差异不显著(P3 0 5 4 3 2 4 E G F R和基 因拷 贝数与基 因扩增的关 系 见 表 4。在 E G F R蛋 白表达 阴性 或低 表达 组，F I S H 检测 模 式 出 现二 倍 体 和 三 倍 体 的 比率 分 别 为 6 1 9 和 2 6 2，而多倍体 仅为 1 1 9 ，未 检测 到 E G F R基因扩增。然而，在 E G F R蛋 白表达中等 程度阳性和强阳性组 中，仅有 1 0 为二倍体，三倍 体和多倍体分别为 2 5 和 2 0，E G F R基因扩增 9 例。E G F R蛋白表达水平与基 因拷贝数增加密切 相关(P0 0 5)。所有 E G F R基 因扩增病例其蛋 白均 为 中 强 阳性 表 达。这 些 数据 资料 提 示：E G F R基 因低拷贝数(包括二倍体和三倍体两种模 式)对蛋白表达水平影响不大，而且 E G F R基因高 拷贝数(包括多倍体和 E G F R基 因扩增)明显影响 蛋 白表达水平。表 4 E GF R蛋白表达和基因拷贝数变化的关系 3 一 喜 。苎 4 曼 ；2 乏 妻 c -e r b S -1(I-IF,R-1)一 二 E G F uR 明，人类大多数肿瘤细胞(特别是实体肿瘤细胞)常 一。一一 2 4 5 ；一 8 9 8 0 O O 4 5 2 J D i a g P a t h o l，De c e mb e r2 01 0，Vo 1 1 7，No 6 E G F R的蛋白表达是多 因素、多步骤综合作用 的结果，影响 E G F R蛋白表达的因素包括基因扩增、转录、基 因突变 及基 因多态 性 等。据文 献报 道，E G F R蛋 白表达主要与 m R N A的表达有关，而且可 以肯定 C A S S R 1多态性在一定程度上影 响 E G F R 的表达。由于 E G F R表达的复杂性、多样性以及 实验技术本身的限制等，目前还不能精确分析特定 个体及特定肿瘤的 E G F R表达。我们本次实验虽然 发现 E G F R基因扩增和基因拷贝数变化与其蛋 白表 达有 相关性，但二 者之 间并不 完全对 等，尤 其是 E G F R基因扩增阳性率与其蛋白表达阳性率相差较 大，说明在宫颈各级病变中也许还存在其他分子机 制导致 E G F R蛋白过表达。现今很多临床前期研究及临床研究显示，阻断 E G F R可抑制肿瘤生长。由于 E G F R酪氨酸激酶是 信号传导的必要条件，因而成为肿瘤治疗的重要靶 标 。据新近文献报道，对标准治疗产生耐药性的 复发宫颈癌患者吉非替尼有一定疗效。本研究不仅证实 E G F R在宫颈高级别 C I N和鳞 癌中过表达，而且还发现 E G F R多数 目基因拷贝数 和基因扩增明显影响其蛋 白表达水平，故检测宫颈 各级上皮内瘤变及鳞癌中 E G F R蛋 白表达及基因扩 增和基因拷贝数的变化不仅可作为高级别和低级别 C I N鉴别诊断的辅助指标，在宫颈癌的早期诊断和 早期治疗中也可发挥作用，而且还可作为生物学指 标预测宫颈癌预后，同时也为宫颈癌的治疗提供了 新思路。5 6 7 8 9 1 0 1 2 1 3 1 4 参考文献：1 P e c t a s i d e s D，K a m p o s i o r a s K，P a p a x o i n i s G，e t a 1 C h e m o t h e r a p y f o r r e c u r r e n t c e r v i c a l c a n c e r J C a n c e r T rea t 1 5 R e v，2 0 0 8，3 4(7)：6 0 3 6 1 3 2 H i t c h F R，V a r e l l a G a r c i a M，P a u l A，e t a 1 E p i d e r m a l g r o w t h f a c t o r r e c e p t o r i n n o n s ma ll-c e l l l u n g c a r c i n o ma s：c o r r e l a t i o n b e t w e e n g e n e c o p y n u mb e r a n d p r o t e i n e x p r e s s i o n a n d i mp a c t o n p r o g n o s i s J J C l i n O n c o l，2 0 0 3，2 1(2 0)：3 7 9 83 8 0 7 3 M i a n C，B a n c h e r D，K o h l b e r g e r P，e t a 1 F lu o r e s c e n c e i n s i t u h y b rid i z a t i o n i n c e rvi c al s me a l：d e t e c t i o n o f n u me fi c M a b e rra t i o n s o f c h r o mo s o me s 7，3，an d X an d r e l a t i o n s h i p t o HP V i n f e c t i o n J G y n e c o l O n c o l，1 9 9 9，7 5(1)：4 1 4 6 4 K i r c h o ff M，R o s e H，P e t e r s e n B L，e t a 1 C o mp a r a t i v e g e n o mi c h y b ri d i z a t i o n r e v e a l s n o n r a n d o m c h r o mo s o ma l a b e rra ti o n s i n e a r l y p r e i n v a s i v e c e r v i c a l l e s i o n s J C a n c e r G e n e t C y t o g e n e t，1 6 1 7 2 0 0 1，1 0 9(1)：4 7 5 1 S a mp s o n J H，C r o t t y L E，L e e S，e t a 1 Un a r me d，t u mo r s p e c i f i c mo n ocl o n a l a n t i b o d y e ff e c t i v e l y t r e a t s b r a i n t u m o r s J P r oc N a d A c a d S c i U S A，2 0 0 0，9 7(1 3)：7 5 0 37 5 6 8 Ma y e r A，Ta k i mo t o M，F ritz E，e t a 1 Th e p r o g n o s t i c s i g n ific a n c e o f p rol if e r a t i n g c e l l n u c l e ar an t i g e n，e p i d e r mal g r o w t h f a c t o r r e c e p t o r，and m d r g e n e e x p res s i o n i n c o l o r e e t al c anc e r J C a n c e r，1 9 9 3，7 1(8)：2 4 5 4 2 4 6 0 罗秉庆，唐青梅，郑绍光胃癌 D N A含量与 E c a d、E G F R表 达的关系及其意义 J 诊断病理学杂志 2 0 0 4，l 1(4)：2 5 7 2 5 9 张智慧，滕茂芳，刘树范E R、E G F R、p 5 3在乳腺癌 的免疫 组 化研究 J 诊断病理学杂志，1 9 9 8，5(1)：2 5 2 7 Mc l e n d o n RE，Wi k s t r a n d C J，Mt h e ws MR，e t a 1 Gl i o ma a s s o c i a t e d an t ig e n e x p r e s s i o n i n o l i g o d e n d r o g l i a l n e o p l asms T e n a s c i n and e p i d e rma l g r o w t h f a c t o r rec e p t o r J J H i s t o c h e m，2 0 0 0，4 8(8)：1 1 0 31 1 1 0 张爱臣，张晓红，冷维春，等 E G F R在卵巢癌中的表达及其临 床意义 J 中国实验诊 断学，2 0 0 7，1 1(2)：1 6 61 6 9 T a n g j i t g a mo l S，R am ir e z P T，S u n C C，e t a 1 E x p r e s s i o n o f H E R-2 n an，e p i d e rm al g r o wt h f a c t o r r e c e p t o r，v a s c u l ar e n d o t h e l i al g r o w t h f a c t o r，c y c l o o x y g e n a s e-2，e s t r o g e n r e c e p t o r，an d p rog e s t e ron e r e c e p t o r i n s mall c e l l a n d l a r g e c e l l n e u r o e n d o c fin e c a r c i n o ma o f t h e u t e rin e c e r v ix：a c l i n i c o p a t h o l o g l e a n d p r o g n o s t i c s t u d y J I n t J G y n e c o l C a n c e r，2 0 0 5，1 5(4)：6 4 6 6 5 6 于晓红，李隆玉，魏宝秀，等 C D 4 4 V 6、E G F R在宫颈上皮内瘤 变及宫颈鳞癌中的表达 与意义 J 实用癌症杂志，2 0 0 5，2 0 (5)：2 7 3 2 7 6 王利娟，田园，高积勇，等 宫颈癌预后 与表 皮生长 因子受体 蛋 白表达关 系 J 中国 妇幼 健 康研 究，2 0 0 6，1 7(4)：2 8 0 2 81 Ma r z a no R，C o n a d o G，Me r o l a R，e t a 1 An a l y s i s o f c h romo s o me s 3，7，X a n d t h e EG FR g e n e i n u t e rin e c e rvi c al c a n c e r p r o g r e s s i o n J E u r J C anc e r，2 0 0 4，4 0(1 0)：1 6 2 41 6 2 9 B u e r g e r H，G e b h a r d t F，S c h mi d t H，e t a 1 L e n g t h a n d l o s s o f h e t e r o z y g o s i t y o f a n i n t r o n 1 p o l y mo r p h i c s e q u e n c e o f e g f r i s r e l a t e d t o c y t o g e n e t ic alt e r a t i o n s a n d e p i the l i a l g r o wt h f a c t o r rec e p t o r e x p r e s s i o n J C a n c e r R e s，2 0 0 0，6 0(4)：8 5 4 8 5 7 Ba s e l g a J Ne w t e c h n o l o g i e s i n e p i d e rm a l g r o wt h f a c t o r r e c e p t o r t a r g e t e d c anc e r t h e r a p y J S i g n al，2 0 0 0，1：1 22 1 Go n c alv e s A，F a b b r o M，L h o mme C，e t a 1 A p h a s e I I t ria l t o e v a l u a t e g e fit i n i b a s s e c o n d-o r t h i r d-l i n e t r e a t me n t i n p a t i e n t s wi t h r e c u r r i n g lo c o r e g i o n a l l y a d v an c e d o r me t ast a t i c c e rvi c al c a n c e r J G y n e c o l O n c o l，2 0 0 8，1 0 8(1)：4 2 4 6 收稿 日期：2 0 1 0 0 3 0 5