霉菌污染的处理方法.doc

避免真菌污染的几个措施：
1、严格的无菌操作;
2、无菌间定期打扫、消毒，保持干燥；
3、各种培养液、培养器皿的严格消毒；
4、温箱中消毒水中放置过饱和的消毒的磷酸氢二钠或者硫酸铜。
如果细胞好养或有存货的话，干脆从头作起，要是舍不得可以用PBS液洗3遍，在新的培基中加两性霉素。
比如霉菌包子感染可能这样，因为我的前面一批细胞就这样，培养基不混，细胞内有很多空泡，且可见一些比细胞大得多无明显细胞结构的“圆形细胞”里面有很多小的空泡，如果是这样的话，那就是霉菌污染

（1）操作：做实验时应养成无菌观念（操作前用70%酒精檫手，实验时如吸管等物品接触到台面应立即更换，并隔3-5分钟用酒精灯烧灼吸管）。
（2）超净台：如果超净台使用时间过长（3-5年以上），应及时更换滤板。消毒的紫外灯管也按时更换。在操作前用酒精或新洁尔灭檫拭台面。
（3）孵箱：怀疑孵箱污染时，将孵箱关掉，然后用上述消毒剂消毒，之后用移动紫外消毒车将紫外灯插入孵箱照射30分钟以上。
zrzhong6519：还有注意孵箱内的水盆， 经常检查， 如发现有絮状物，立即更换灭菌水， 之前用75%乙醇擦拭， 第二天要及时察看是否彻底，不彻底在按上述方法再来。
天气炎热，霉菌也开始肆无忌惮的繁殖。想想去年这个时候，也被霉菌折腾得郁闷无比。还好后来控制住了。经验如下：
1、细胞培养室大扫除，水池、吸引器中的引流瓶等无一不是霉菌孳生的地方。然后室内进行紫外灯照射杀菌。
2、培养箱消毒时是否注意了里面的几层钢板。紫外线照射时得拿出来。我当时干脆就放到180度烤箱里考过夜。
3、处理培养箱时还有个要考虑的地方，培养箱内的细胞培养瓶。重新放回去的时候得用酒精将瓶周搽洗数次，能换掉更好。
4、培养箱搽洗时重点在箱底的四个角落。
整个培养间用福尔马林和高锰酸钾熏蒸,孵箱内部包括托盘等全部用苯酚搽洗,封闭2天,基本就没问题!!但培养良好的无菌观念是前提！
可能的原因：
1、天气太热，实验者在培养和接种或者换液时出汗（有空调稍好，但是手也出汗）。
2、培养间里可能暗藏污染原。
3、注意培养箱（这点最重要），仔细检查培养箱里的隔板的下面，有可能有霉菌斑。（我遇到过）
4、培养基污染多数是配置过程中造成的，仔细检查配置过程用到的器具。
5、血清过期一个月，如果保存的好应该没有问题，但是保存不好，新来的血清，用一次就可能污染。血清过期和污染是否有必然的联系不好说，个人体会觉得其联系不大。

解决办法：
1、彻底清洁培养间，显微镜室。然后，紫外灯多照射一端时间消毒空气。
2、彻底清洁培养箱：（1）每个隔板仔细清洗，火烤。（2）培养箱大换水，换成新鲜干净的蒸馏水。（3）培养箱内壁用酒精棉球或者稀过氧乙酸认真擦洗。（4）紫外灯长时间照射（一天）。
3、实验用器械消毒：注意消毒时间和压力，有必要检查压力锅和校正压力表是否准确。
4、一次性手套在打开使用前一天放入无菌间照射消毒。
5、如果用双抗，应该现用现配。
6、注意过滤器的消毒灭菌。
7、过期的血清，可以做培养检查是否被污染。如有怀疑，建议不用。
8、检查培养间和超净台的通风过滤网，如果脏了，需要更换。
总之，潮湿闷热天气培养细胞非常容易污染，必须注意每一个环节。真菌多数是空气中悬浮污染，所以除紫外线照射外，每次进出培养间要用来苏或者新洁尔灭搽地，减少空气悬浮颗粒及细菌
1、用碘伏仔细擦洗浮箱和操作台，地面，然后用紫外灯照1小时
2、处理完细胞放回浮箱是用酒精棉擦培养瓶的底部
避免污染，我认为：
1、每次做完实验，超净台要用酒精喷擦；打开紫外线照射；
2、严格无菌操作；
3、孵箱定期清洗，换水；
4、每次观察细胞后，酒精喷瓶口；

1、我操作的时候，总是在灭菌同时超净台外侧窗口处，喷一些医用酒精，以控制周围附近的空气中漂浮菌。
2、在做完试验后，超净台里喷一遍医用酒精，然后严格按照紫外灭菌等操作。
3、 还有，超净台长时间使用了的话，要把里面的防尘过滤网拆下来，用吸尘器或者其他东西吸净，洗净。