口腔溃疡动物模型的制备及其评价.pdf

口腔内细菌、病毒的感染,某些药物的应用及某些全身性疾病均可导致口腔溃疡的发生,尤其是复发性口腔溃疡(R O U)。由于R O U的病因及发病机制不明,而发病率又在逐年提高,临床且无特效药物治疗。因此积极寻找抗口腔溃疡的有效药物一直是国内外广大医药工作者所关注的话题,而口腔溃疡动物模型的制备对药物的研究就显得十分的重要。1口腔溃疡动物模型的制备与评价1.1免疫法诱导口腔溃疡动物模型将正常家兔急性处死,在无菌条件下取口腔粘膜组织,用内切式匀浆器匀浆,超声波震荡,低温离心,保留沉淀物,取上清液再行透析滤过小分子物质,将大分子蛋白留于袋内。反复透析5次,将袋内物冷冻干燥,获得粉末状蛋白,溶于磷酸缓冲液中,再加入完全弗氏佐剂成乳化液,注入家兔脊柱两侧皮内,共注射2 0点,每隔2周注射1次,共5次。家兔于第2次注射抗原后第8 d口腔内均出现口腔溃疡1。该实验模型与人类R O U的发作极其相似,其机理可能是特异性蛋白作为抗原进入机体,产生了特异性抗体而引发口腔粘膜免疫反应。其观测指标除了溃疡出现的次数、溃疡愈合的平均时间外,还可以测定血清中抗口腔粘膜抗体滴度、外周血中淋巴细胞的亚型以及各种淋巴细胞的比例,同时检测T N F-a、I L-6、I L-8,以及组织病理学检查。该法造模的缺点是耗时长,方法较复杂,口腔溃疡出现的部位不固定,溃疡平均愈合面积的测量不容易掌握,不适合大规模动物实验。1.2化疗法建立口腔溃疡动物模型选用7周龄金黄地鼠,标准饮食,不限水,室内温度保持在(2 2 2)。腹腔注射6 0 m g/k g 5-F U两次,中间间隔1 d。每次给予5-F U后并在乙醚麻醉的情况下用小钢丝刷将其左侧颊囊粘膜造成磨损面,大约在第3 d时出现溃疡2。也可按一定浓度给予小鼠腹腔注射氨甲喋呤引起口腔溃疡3。该造模的观测指标有溃疡愈合的平均面积、平均时间,某些生化和免疫学指标以及组织病理学检查。该模型的表现与临床很接近,具有一定的代表性。但损伤比较大,在口腔溃疡的发生部位、发生时间、动物选择、药物种类、给药剂量及途径等方面还口腔溃疡动物模型的制备及其评价崔相一,彭芳,李玲(大理学院药学院,云南大理6 7 1 0 0 0)摘要目的:探讨和评价口腔溃疡动物模型制备的方法。方法:综合分析国内外关于口腔溃疡动物模型制备的研究进展并加以归纳。结果:制备口腔溃疡动物模型的方法虽然较多,但存在某些局限性,有待于进一步的开发和完善。结论:口腔溃疡动物模型的建立对探讨口腔溃疡的病因及发病机制具有重要意义,同时也为抗口腔溃疡的新药研究提供理论依据。关键词口腔溃疡;动物模型;免疫中图分类号R 7 8 1.5文献标识码B文章编号1 6 7 2-2 3 4 5(2 0 0 7)1 0-0 0 3 0-0 3收稿日期2 0 0 7-0 6-1 5作者简介崔相一(1 9 7 9-),男,吉林白城人,2 0 0 5级硕士研究生,主要从事药理学研究.大理学院学报J O U R N A LO FD A L I U N I V E R S I T Y第6卷 第1 0期2 0 0 7年1 0月V o l.6N o.1 0O c t.2 0 0 73 0要进一步摸索。1.3化学烧灼法建立口腔溃疡动物模型方法一:取成熟健康家兔,用一内径0.6 c m,长3 c m的玻璃管垂直固定于家兔口腔粘膜表面,向管内注入体积分数为3 0%的冰醋酸0.2 m l,3 0 s后用棉签蘸出冰醋酸。2 4 h后,测定粘膜溃疡面积和观察炎症充血情况4。方法二:取健康豚鼠,将小棉球置于直径为5 m m的玻璃管一端(使之与关口平齐),再将玻璃管放在9 0%石炭酸溶液中,使药液浸透棉球,然后将玻璃管的棉球端置于豚鼠一侧粘膜上烧灼6 0 s,2 4 h后观察口腔溃疡的出现5。方法三:用0.0 2 5 g/k g戊巴比妥钠麻醉大鼠,将N a O H晶体在双侧下唇靠口角粘膜处烧灼5 8 s,生理盐水冲洗后形成溃疡6。方法四:用0.2 m o l/L的稀盐酸涂在豚鼠的口腔粘膜及舌面上,3次/d。一周后选择有4个以上(包括4个)溃疡面的豚鼠进行实验7。以上几种方法是利用酸、碱等化合物诱发口腔溃疡模型,观测的指标主要有溃疡大小、愈合时间、炎症细胞数等。该法操作简便易行,适合大规模动物实验,可作为某些促进口腔粘膜愈合的药物及抗炎的药物筛选模型,但该法不适合作为R O U的动物实验研究。1.4氧自由基法诱导口腔溃疡动物模型方法一:给乙醚麻醉后的Wi s t a r大鼠双侧颊囊粘膜下注射1 0 m m o l/L甲基紫精(P Q)溶液,每侧注射1个部位,每个部位注射1 0 l,诱发口腔溃疡8。方法二:取金黄地鼠,乙醚麻醉,止血钳分开上下颌,固定后用平齿镊轻轻拉出右侧颊囊,用5号皮试针头,准确扇形注射0.2 5 m l配制好的P Q溶液于右侧颊囊粘膜下层约0.8 c m。给药2 4 h后,注射部位形成溃疡9。该法造模的最大缺点是动物全身毒性反应较重,且室内温度要在2 0 2 2。在给药剂量方面应根据不同动物而选择合适的剂量,在药物筛选实验时要适当扩大样本量。可观察动物的一般状态、溃疡面积及愈合时间,还可以测定外周血或组织中S O D和L P O的含量,从而探讨氧自由基在口腔溃疡疾病中的发病机制。1.5细菌感染诱导法建立口腔溃疡动物模型方法一:取健康家兔,每天仅给予3 0 g/k g淀粉饼饮食,共7 d。然后在其右侧下牙床后半部用镊子夹起粘膜造成0.3 0.5 c m2的创面,再用滴管滴一滴2 0 0 0个/m l金黄色葡萄球菌溶液于创面上,从第二天起即用被上述菌液污染的镊子刺激创面,直至该部位出现溃疡面1 0。方法二:给雄性Wi s t a r大鼠腹腔注射0.4 m l/1 0 0 g的1 0%水合氯醛,动物麻醉后,将1 5亿c f u/m l的白色念珠菌液0.0 7 m l注入大鼠口腔粘膜下,4 8 h后形成的脓疱自行破溃形成溃疡1 1。其观测的指标有:溃疡的面积、溃疡愈合平均时间、外周血中炎细胞指数以及组织病理学检测。该模型操作易行,粘膜溃疡病变明显且溃疡出现部位固定,易于测量溃疡面积的大小。在造模期间易引起动物感染,可用庆大霉素(2 0万U/次,2次/d)肌肉注射控制全身中毒症状。该法造模的关键是注入细菌的量,由于动物存在个体差异,在造模前应适当扩大样本量。常用于口腔内细菌、真菌感染性疾病及抗菌药物评价的动物模型,不适合作为R O U的实验动物模型。1.6放射法建立口腔溃疡动物模型取体重(2 0 0 1 0)g的清洁级S D大鼠,经1 0%水和氯醛3 m l/k g腹腔注射麻醉大鼠,左侧颊粘膜接受X射线照射,1次/d,周一到周五每天1 5时开始照射,休息2 d,周一到周三再照射3次,共照射8次,总吸收剂量为8 0 G y。头部、右侧颊粘膜及大鼠身体其他部分采用铅皮防护不予照射,取右侧颊粘膜作为自身对照,照射4 d时动物左侧颊粘膜出现肉眼可见的明显溃疡1 2。该法适用于放射性口腔溃疡的研究,还可以为开发某些促进口腔粘膜愈合的新药研究提供线索。2展望口腔溃疡动物模型的制备与机体免疫力、氧自由基作用、病毒感染、内分泌紊乱、维生素以及锌、铜等微量元素缺乏有关。国内外关于口腔溃疡动物模型的制备方法非常多,但是否能够真正利用口腔溃疡的相关致病因素来建立动物模型还存在争议。而且制备口腔溃疡动物模型所观测的指标还需进一步探讨。没有一种动物模型能完全复制人类疾病的真实情况,动物毕竟不是人体缩影。总之,制备口腔溃疡动物模型对于口腔溃疡的病因、发病机制的探讨及为临床新药的开发提供有利的线索。崔相一,彭芳,李玲口腔溃疡动物模型的制备及其评价第6卷总第4 6期3 1(上接第2 9页)菌应到种的水平。粪肠球菌、屎肠球菌对万古霉素及替考拉宁敏感率均较高,仍为治疗肠球菌感染最有效的药物。对粪肠球菌感染可选用青霉素、氨苄西林。对屎肠球菌感染宜选择万古霉素及替考拉宁。目前还没有治疗耐万古霉素肠球菌(v a n c o m y c i n-r e s i s t a n t E n t e r o c o c c u s,V R E)感染的最佳方案,治疗原则是根据药敏试验选择适宜抗菌药物,但对V a n B表型的V R E感染,可选用替考拉宁治疗。由上可见,青霉素、氨苄西林对肠球菌仍具有较稳定的抗菌活性,万古霉素及替考拉宁对肠球菌的抗菌活性最高,屎肠球菌对抗菌药物的耐药性较粪肠球菌的耐药性更高。临床上已出现了对糖肽类抗生素万古霉素及替考拉宁耐药的肠球菌,临床医师一定要严格按药敏结果选用抗生素,防止多重耐药菌的传播。参考文献1J o n e s R N.I m p a c t o f c h a n g i n g p a t h o g e n s a n da n t i m i c r o b i a ls u s c e p t i b i l i t y p a t t e r n s i n t h e t r e a t m e n t o f s e r i o u s i n f e c t i o n s i nh o s p i t a l i z e d p a t i e n t sJ.A mJ M e d,1 9 9 6,1 0 0(6)3-1 2.2N C C L s.P e r f o r m a n c e S t a n d a r d s f o r A n t i m i c r o b i a lS u s c e p t i b i l i t y T e s t i n g;F o u r t e e n t h I n f o r m a t i o n a lS u p p l e m e n tS.2 0 0 4,2 4(1)1 1 0-1 1 3.3袁喆,肖永红,王其南.临床分离肠球菌对1 2种抗菌药物耐药监测 J.中国抗感染化疗杂志,2 0 0 2,2(3)1 5 1-1 5 3.4B o n t e n M J,Wi l l e m s R,We i n s t e i n R A.V a m c o m y c i n-r e s i s t a n te n t e r o c o c c i:w h y a r e t h e y h e r e,a n dw h e r e d o t h e y c o m ef r o mJ.L a n c e t I n f e c t i o n s D i s e a s e s,2 0 0 1,8 2(1)3 1 4-3 2 5.5罗燕萍,自立彦,李俊玲,等.2 1 1株肠球菌属细菌对l 8种抗生素的耐药性征 J.中华医院感染学杂志,2 0 0 4,1 4(1)8 0-8 2.参考文献1陶学金,李明,逄爱慧,等.免疫方法建立复发性口腔溃疡动物模型 J.临床口腔医学杂志,2 0 0 4,2 0(1)5 3-5 4.2H i r o m i M i t s u h a s h i,K a t s u y a S u e m a r u,B i n g j i nL i,e t a l.E v a l u a t i o no f t o p i c a l e x t e r n a l m e d i c i n e f o r 5-f l u o r o u r a c i l-i n d u c e d o r a l m u c o s i t i s i nh a m s t e r sJ.E u r o p e a nJ o u r n a l o fP h a r m a c o l o g y,2 0 0 6,(5 5 1)1 5 2-1 5 5.3钟大平,张翼军.氨甲喋呤致口腔粘膜损伤动物模型的建立 J.中国药科大学学报,2 0 0 4,3 5(1)9 2-9 4.4李前进,王宇翎,尹艳艳,等.一种简便实用的口腔溃疡实验模型 J.安徽医科大学学报,2 0 0 2,3 7(4)3 2 7-3 2 8.5施红卫,尹丰圣,黄玉云,等.干草散治疗口腔溃疡的动物实验研究 J.临床口腔医学杂志,2 0 0 5,2 1(2)1 2 2-1 2 3.6段开文,谭葆春,史朋.壳聚糖复合膜的研制及实验研究J.实用口腔医学杂志,2 0 0 5,2 1(1)1 0 2-1 0 5.7苗明三,徐玉茵,刘会丽.口腔溃疡动物模型研究进展 J.中医药学刊,2 0 0 6,2 4(9)1 6 3 6-1 6 3 7.8朱希强,袁勤生.S O D口腔膜剂的研制及对口腔粘膜溃疡的治疗作用 J.华东理工大学学报(自然科学版),2 0 0 5,3 1(4)4 4 2-4 9 4.9过伟峰,夏卫军,项晓仁,等.口疮平口服液对甲基紫精所致金黄地鼠口腔溃疡模型的影响 J.中国中医药信息杂志,2 0 0 6,1 3(4)2 3-2 4.1 0田景振,王静,李庆诒,等.冰硼帖片的药理作用及对动物口腔正常粘膜影响的研究 J.山东中医学院学报,1 9 9 5,1 9(2)7 9-8 0.1 1蒋王林,傅风华,田京伟,等.口腔溃疡含片对大鼠实验性口腔溃疡的治疗作用 J.中草药,2 0 0 3,3 4(9)8 3 5-8 3 7.1 2冯崇锦,郭俊兵,李楚玉,等.大鼠放射性口腔粘膜炎模型的建立 J.中华放射医学与防护杂志,2 0 0 6,2 6(4)3 4 6-3 4 8.大理学院 学报总第4 6期 自然科学3 2