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山东大学本科生毕业论文 1 山东大学本科生毕业论文 2 山东大学本科生毕业论文 3 山东大学本科生毕业论文 4 山东大学本科生毕业论文 5 山东大学本科生毕业论文 6 山东大学本科生毕业论文 7 山东大学本科生毕业论文 8 山东大学本科生毕业论文 9 山东大学本科生毕业论文 10 山东大学本科生毕业论文 11 山东大学本科生毕业论文 12 山东大学本科生毕业论文 13 山东大学本科生毕业论文 14 山东大学本科生毕业论文 15 山东大学本科生毕业论文 16 山东大学本科生毕业论文 17 山东大学本科生毕业论文 18 山东大学本科生毕业论文 19 山东大学本科生毕业论文 20 山东大学本科生毕业论文 21 山东大学本科生毕业论文 22 山东大学本科生毕业论文 23 山东大学本科生毕业论文 24 山东大学本科生毕业论文 25 山东大学本科生毕业论文 26 山东大学本科生毕业论文 27 山东大学本科生毕业论文 28 山东大学本科生毕业论文 29 山东大学本科生毕业论文 30 山东大学本科生毕业论文 31 山东大学本科生毕业论文 32 山东大学本科生毕业论文 33 山东大学本科生毕业论文 34 山东大学本科生毕业论文 35 山东大学本科生毕业论文 36 山东大学本科生毕业论文 37 山东大学本科生毕业论文 38 山东大学本科生毕业论文 39 山东大学本科生毕业论文 40 山东大学本科生毕业论文 41 山东大学本科生毕业论文 42 山东大学本科生毕业论文 43 山东大学本科生毕业论文 44 山东大学本科生毕业论文 45 山东大学本科生毕业论文 46 目录目录 关于使用乳酸杆菌作为活疫苗载体关于使用乳酸杆菌作为活疫苗载体研究研究的进展和展望的进展和展望 Jos.F.M.L.Seegers 越来越多的证据表明乳酸杆菌以群落的形式影响着宿主机体的免疫反应。这种免疫能力对于免疫应答很重要，同时也暗示了乳酸杆菌作为口服疫苗载体的潜在可能性。现在关于以乳酸杆菌作为疫苗的知识都是通过以破伤风毒素作为模式抗原得来的。随着我们对免疫系统理解的不断加深以及近来在克隆和表达方面的进展，这些知识可以使得利用除了破伤风毒素以外的抗原称为可能，并且使得用乳酸菌制作活体疫苗具有前景。本文章于 2002 年 10 月 4 号在网上公布 在过去的几百年甚至是几千年中，人们就已经发现食用发酵食品，尤其是酸奶，对胃肠健康有好处。在过去的二十年中人们了解到这些益生作用主要是由乳酸菌杆菌引起的。为了弄清楚这种益生作用的原理人们进行了一系列的研究，结果发现不同的菌株的益生作用有所不同。这些发现使得人们对于使用乳酸菌作为活体疫苗载体变得很感兴趣。现在，乳酸杆菌正在用于进行积极免疫，被动免疫以及耐受诱导方面的研究。被动免疫需要病原体和毒素中和试剂的传递，这些中和试剂大部分是寻常的免疫球蛋白。由于完整的免疫球蛋白很难在细菌体内产生，因此现在的策略是使用乳酸菌的分泌物以及细胞壁单链锚定多肽，它们只包含免疫球蛋白的结合域。这项用于乳酸菌的技术的价值在近期显示出来1。乳酸杆菌也被用于诱导老鼠对于室尘的免疫耐受，这些实验显示了乳酸杆菌在治疗自身免疫系统疾病方面的作用，比如糖尿病和多发性硬化2。本篇综述主要讲述乳酸菌在活疫苗方面的应用。由于这方面的大多数研究成果都是通过破伤风毒素实验得来的，因此此次的重点还是这些。接种和免疫力接种和免疫力 尽管肠胃以外的接种在诱发保护性免疫反应方面很有效果，但是接种所引起的反应并不一定是我们想要的那一种。病原体进入有机体后最初先会引发一个粘山东大学本科生毕业论文 47 膜的或者是系统的反应，这跟病原体进入体内的路线有关系。每一个都有一个体液的或者细胞的组分。粘膜的体液反应主要由免疫球蛋白 A 调节3。然后系统性的体液反应发生在次级淋巴器官并且是由免疫球蛋白 G 调节的。对于通过系统途径进入体内的病原体比如伤口感染来说，肠道外的接种效果很好。对于多数病原体来说，在它们感染整个系统之前，最初的感染主要发生在肺和肠道的粘膜上。因此，肠道外的接种会减少而不是阻止传染源向其他对该病原体没有免疫的个体传播。理论上讲，最初的的感染和病原体的复制就会被阻止。这一点通过粘膜免疫可以得到很好的印证。当前有很多关于粘膜疫苗的研究正在进行，与此同时，为了研制口服疫苗，人们研究了各种疫苗传递系统。Ryan et al 最近出版一篇此方面的综述。这篇综述介绍了粘膜免疫的总体要求，并且还阐明了当前的各种正在被研究的疫苗传递系统是如何满足这些要求的。4其中的一种疫苗传递系统是用活体细菌作为载体的。现在我们主要讨论以乳酸杆菌作为疫苗传递载体的过程。乳酸杆菌和接种乳酸杆菌和接种 减毒的病原体可以诱导机体发生针对这种病原体的免疫反应，从而使机体具备免疫能力。但是这种病原体也具有潜在的抗原性，有可能会引发不良的免疫反应。5然后现在的担忧是这些细菌本身具有一定的免疫原性，对于一些免疫功能不全或者是体质虚弱的个体来说，它们仍然可能是潜在的病原体。另外，优先暴露于这种细菌载体之中可能会造成与疫苗构建能力的妥协，就如同在沙门氏菌中所观察到的一样6。乳酸菌被广泛的应用于制造诸如乳酪、酸奶和香肠之类的食品。正因为如此，乳酸菌被人们大量的使用了成百上千年，迄今为止没有引起任何健康问题。这使得它们成为研制安全口服疫苗的后备载体。乳酸菌作为活疫苗载体的潜力已经在最近的几篇文献中得到了阐述。这些文献证明以乳酸菌作为载体的疫苗可以抵抗布鲁氏菌7和幽门螺杆菌8，以格式链球菌作为载体的活疫苗可以抵抗艾滋病毒9和麻疹病毒10。由于有了乳酸菌作为载体，我们可以研制针对炭疽病毒11和轮状病毒12的疫苗，并且我们已经研制出针对破伤风的活疫苗13，14。跟乳球菌和S.gordonii相比，乳酸杆菌的几个特征使得它们更加适合作为活体疫苗的载体。这些特征包括它们本身固有的免疫原性，对胆汁酸的抗性以及山东大学本科生毕业论文 48 它可以在肠胃中定值。不过乳球菌和S.gordonii对抗原的的刺激反应更为强烈，阳性反应比乳酸杆菌要强。出现这种不同的原因现在还不清楚，不过这可能跟乳酸杆菌体内较低水平的抗原表达有一定的关系。乳酸杆菌和免疫应答乳酸杆菌和免疫应答 乳酸菌对人体健康总体上是有利的，尤其是乳酸杆菌对人体健康的作用。乳酸菌这种益生作用从防止肠胃失调到防止结肠癌等不一而足。Marteau 最近出版了一篇关于益生素在临床上的作用的综述15，但是这种作用的机制目前了解的还很少。定义微生物益生素的一系列标准条件已经被编纂出来16。对于疫苗的发展来说，它所引起的免疫应答的持续性和可调整型是非常重要的标准条件，值得我们深入研究。我们能够区分活体乳酸杆菌对免疫应答的两种效应。一种是加强效应而另一种则是减弱效应。这样例子有自身免疫和过敏反应。已知和乳酸杆菌相关联的固有的免疫调节包括过敏减少效应17，肠粘膜屏障功能的改善，甚至还包括对于治疗自身免疫疾病所起到的积极作用。18如果反复的给个体喂食这种活体疫苗，那么由此产生的抗体跟正常免疫产生的抗体相比会多出三到五个折叠，这是其激活作用的体现。这种免疫是以血细胞凝集素作为抗原进行的。15因此，如果每天都定量的摄取一部分乳酸杆菌的话，那么对于每年都要进行的流感疫苗免疫会有相当的加强作用，可以帮助个体更好的对抗病毒。对于易感人群特别是老人来说，这种免疫加强作用更加明显。老年人如果增加酸奶的摄取量19，那么对于增强自身的免疫力会很有帮助。婴儿体内的抗体分泌细胞的成熟跟体内双歧杆菌和乳酸菌的定居有一定的关系。20同时研究证实，给患有因感染轮状病毒而腹泻的婴儿喂食乳酸杆菌 GG 有助于其病情的康复21。这可能是因为增加了婴儿体内的非特异性免疫球蛋白 G，A 和 M 的缘故。通过口服乳酸杆菌可以对个体的整个免疫系统产生积极的作用，这是一种典型的辅助作用。这种辅助作用也可能通过由乳酸杆菌引起的细胞激素的介导来影响细胞免疫22。实际上，最近有证据表明L.rhamnosus HNOO1 可以加强小鼠体内细胞激素 TH1 和 TH2 的含量23。在一个综合性的研究中，研究者研究了八种不同的乳酸杆菌对于受到基孔肯雅24病毒免疫的肠道绒毛膜细胞中细胞激素的表达的影响。在这个实验中，尤其是促进发炎的细胞激素的表达量有所上升；L.reuteri 和 L.brevis的作用最强，但是对于IL-1 -干扰素，IL-10 和 IL-1 几乎没有影响。在对免疫反应的质量进行更山东大学本科生毕业论文 49 进一步的测试的过程中，这些菌株对于 IgG1 和 IgG2a 的水平的影响被测定了。引人注目的是，L.reuteri显示了疫苗的一般特征。同样在本次实验中使用的另一种菌株L.plantarum strain NCIB 8826 并没有起到加强反 CGG 反应的效果。这些结果跟 Pouwels et a25l以及 Christensen et al26.得出的结果有所不同。在Pouwels et al的实验中，他在小鼠腹膜上用Lactobacillus菌株进行了抗-CGG实验。反应是由DTH决定的。在接受测试的菌株中L.casei shirota 和L.plantarumATCC8014都降低了最高反应，这种结果跟使用和佐剂合用的抗原是一样的。Christensen et al.测试了经过辐射照射的细胞中细胞激素和树突细胞的表面标记的表达水平。乳酸杆菌强烈的降低了IL-6的表达水平，并且小量的降低了IL-10,IL-12 and TNF-的表达水平。L.casei表现出了最强的诱导能力，并且它还是诱导TNF-表达的非常好的材料。值得注意的是，L.reuteri几乎不诱导任何IL-12表达，尽管它在诱导IL-10表达方面表现出了最大的潜力。此外，少量的L.reuteri还可以抑制L.casei对于IL-12，IL-6和TNF-的诱导表达作用。以上实验中相反的结果说明我们现在很难准确的描述一种乳酸杆菌对于免疫反应的影响。此外，由于受到肠道中其他数以百计的微生物的影响，细胞激素在体外的测量值跟在肠道中的真实情况是存在差异的。对疫苗的要求和乳酸杆菌对疫苗的要求和乳酸杆菌 为了准确的理解对高效乳酸菌活体疫苗的要求，我们必须要了解机体针对某一抗原的免疫反应是如何发动的。在抗原通过位于Peyers节上的M细胞突破场粘膜屏障以后就会被巨噬细胞和树状细胞捕获27。抗原还有一种选择就是直接被树状细胞取样28。巨噬细胞和树状细胞可以一起表达PRRs，PRRs是结合在微生物结构上的29。PAMPs结合到巨噬细胞PRRs上会介导巨噬细胞吞噬抗原，还会介导细胞激素和趋化激素的分泌，所有的这些会导致发炎的结果30。树状突细胞也可以吞噬病原体并且还可以在细胞内将其降解，通过这个过程树状突细胞可以转化为成熟的APCs。这些活化的APCs可以到达淋巴结，在这儿它们可以激活特异病原体淋巴球。这些元件属于非特异性的先天免疫系统。这一系统可以刺激细胞表面产生一种分泌信号31。除此之外，抗原的迁移带动树状细胞到淋巴结的过程可以被CD4 T细胞所分泌的细胞激素所激活，比如TNF-。这种相遇会导致CD4 T细胞的进一山东大学本科生毕业论文 50 步的变异，变成TH1细胞或者TH2细胞。TH1细胞可以激活细胞免疫反应，TH2细胞可以引起体液免疫反应。到TH1细胞的变异反应是由IL-12的表达起始的。然而IL-4和IL-6的表达倾向于向TH2细胞的变异。机体对于某个病原体的免疫反应并非是单纯的细胞免疫或者体液免疫，多数情况下是二者综合起来起作用，但是它会倾向于TH1或者TH2。细胞内的细菌和病毒感染通常会产生TH1细胞，然而TH2细胞可以激活B细胞，引起抗体水平升高。并且TH2细胞主要是在应对细胞外病原体时产生的。乳酸杆菌像其他的共生菌一样，并不会增强炎症反应，有可能通过阻止细胞核因子-B（NF-B）32并且不会激发免疫系统。这种系统对于机体保护非常重要。挑战在于在没有激活先天免疫系统的条件下如何建立一个适应的反应，从而引起发炎。这些适应反应部分受到特定细胞因子表达的影响。一个可能的方案就是让这些疫苗重组株共表达这些细胞因子使这些反应到一个特定的方向。这种方法已经通过TTFC表达乳球菌证实33。作为一种选择，可以通过测定是否促进某种特定的细胞因子表达来选择菌株。用乳酸杆菌来递送抗原用乳酸杆菌来递送抗原 若干个有效的克隆系统可以应用于乳酸杆菌的转化。传递载体的克隆载体的主要特征包括引发序列。这种引发序列可以引起组成型表达或者诱导性表达。Nisin诱导表达系统34是最著名的诱导表达系统。Nisin贴别适用于乳酸杆菌35，并且这种系统依赖于糖代谢，它的发起序列会受到降解物阻遏效应的调节比如说木糖36。除此之外，这些载体含有分泌物和锚定信号可以确保在细胞的不同部位进行蛋白的表达37，38。大多数情况下质粒表达系统适用于温和操纵处理。综合的系统可以保证免疫菌株的遗传稳定性，但是这样会影响表达水平。当在不同的乳酸杆菌菌株中使用相似的表达系统时，我们必须明确启动子有不同的活性水平。这种活性水平因菌株而异39,并且其复制效率和质粒拷贝数也会不同。除此之外，不同基因之间的密码子偏好性也不相同，这回引起在Escherichia coli表达水平的降低40。不同乳酸杆菌菌株之间的密码子偏好性也不相同41，这会影响某种特定抗原的翻译效率。破伤风毒素碎片破伤风毒素碎片C C（TTFCTTFC）最初关于重组乳酸菌作为抗原传递体的研究是用可以在细胞表面表达人类山东大学本科生毕业论文 51 乳头瘤病毒16型的E7蛋白重组链球菌进行的。这些细菌是在皮下生存的，尽管在小鼠体内会有免疫反应，但是仍有会有一个依赖于Freunds完全佐剂的积极的反应。在没有足够的佐剂的存在下发生的小鼠体内成功的免疫使用无毒的破伤风毒素的C片段之后发生的42。这个积极的结果会起始一系列的使用TTFC作为模式抗原的反应。用活细菌表达TTFC的疫苗配方 从那以后人们就知道TTFC43可能会触发一种保护性的免疫反应，这种毒素曾经用于活疫苗的研究。多数情况下，这些涉及到的衰减的病原体包括，比如说Salmonella44，Mycobacterium45，最近还包括部分Bordetella46，47的菌株。这种尝试经常旨在用于建立一个可以取代现有疫苗的单一的配方，这种配方可以抵抗破伤风，白喉和百日咳。同时，若干种非致病性的格兰仕阳性菌株，就像L.lactis42，S.gordonii48和Bacillus subtilis49，已经被用于破伤风活疫苗的配方，并且使用TTFC作为抗原。在第一个在乳球菌中表达TTFC的成功的实验中，小鼠被进行了皮下免疫42。当保护可以通过口服进行时我们取得了一个突破性的进展50。为了增强L.lactis的免疫原性，我们构建了不仅能表达TTFC而且还能分泌IL-2或者IL-6的菌株33。用这些菌株进行鼻内免疫产生的抗-TTFC抗体既迅速而且量还很大。这种效果跟菌株的生存能力息息相关，这代表我们刺激细胞激素表达的目的已经达到了。由乳酸杆菌表达的由乳酸杆菌表达的TTFCTTFC 乳酸杆菌的自然益生作用和它们调节免疫反应的能力激起若干组起始实验，旨在决定这种能力和应用的可能性。考虑到用TTFC和L.lactis做实验得到的阳性结果，我们用多种读出系统来测量变量（详细结果见表1）。用表达TTFC的乳酸杆菌得到的第一个阳性反应在细胞表面表达TTFC的L.casei的无细胞提取物做了皮下免疫18。我们测试了两种不同的构建方法表达方面的微小差异，正是这种差异导致了它跟在细胞表面携带更多TTFC的菌株相比有更高的末端滴定度。后来的实验表明表达TFCC的原封不动的细菌，不论表达位点在哪里，同样能 山东大学本科生毕业论文 52 够诱发一个免疫反应。不过这种免疫反应的水平是不一样的37。原封不动的乳酸杆菌的皮下表达显示表达的水平会影响终结点的滴定度35。因此，由不同实验得到的结果并不具有太大的可比性。造成这种现象的原因是因为使用的表达系统不同并且确切的表达水平不容易测量。实验数据表明小鼠BALB/c并不像小鼠C57BL/6一样，它并不会优先产生TH2细胞51，52。因此，携带TTFC的乳酸杆菌的小鼠免疫实验的结果不仅与所用的乳酸杆菌菌株有关系还与所使用的小鼠品系有关系。因此，用BALB/c小鼠系做实验得出的抗体滴定度可能会比用C57BL/6小鼠系做实验得出的要高。由此得出的TTFC特异性抗体的平均终结点滴定度并没有明显的差别。因此，至少对于TTFC来说，选择哪种小鼠系都是可以的。但是当我们用不同的菌株作比较时情况就不一样了。比如L.plantarum和L.casei。这些结果说明不同的菌株对免疫系统的影响是不同的。独立的研究表明表达TTFC的L.plantarum可以诱发鼻腔和口腔内的免疫反应 山东大学本科生毕业论文 53 13.37。意料之中的是，鼻腔免疫实验中的得到终结点滴定度比在口腔中进行相同实验所得到的结果要大。为了确定这些免疫反应是否需要活细菌，我们使用活细菌和用丝裂霉素C处理过的细菌对鼻腔进行免疫来进行对照14。结果CFU从109到0.5105不等。血清中的TTFC特异性IgG抗体的水平并没有明显的不同。总体来说，这些实验表明表达水平和免疫反应水平之间有比较明确的关系。实验结果同时也表明细胞内的表达比分泌和细胞表面的表达是足够的，是有效的。使用经丝裂霉素C处理过的细胞进行的实验表明尽管血清中IgG抗体水平跟细菌的生存能力并没有关系，但是使用活体细菌能得到更好的免疫效果。面临的挑战面临的挑战 通过使用TTFC进行免疫实验我们确定用乳酸杆菌对肠粘膜进行免疫是可能的（图1）。这个成功的实验是使用TTFC做到的，然而，也有一些其他的类似实验是使用其他的抗原完成的。随之未来的挑战便是使用任意一种抗原引发想要的免疫反应(耐受和保护)。随着我们对粘膜免疫系统了解的加深，特别是对于免疫反应起始的了解，这种反应看起来仅仅是个时间问题53。如果想得到特定的免疫反应一个重要的问题就是佐剂。佐剂可以被分离到：（1）以APCs作为标靶的疫苗传递系统；或者是（2）免疫刺激者，通常是病原体的衍生物。通过Toll受体和其他病原体识别受体来激活先天免疫系统的细胞54。有些时候，这两种途径可以被合并以求更加有效的传递免疫刺激者，尤其是在粘膜上55。很明显乳酸杆菌菌株具有不同的佐剂特征以至于对免疫系统能产生不同的影响，从而把递送和辅助两种功能结合起来。在多数研究中，L.casei和L.plantarum充当了传递抗原的载体，并且还有许多菌株需要接受测试。显然的，就跟上面所提到的情况一样，L.reuteri具有将不同的物种区分开来的能力，并且它还能揭示某种菌株是如何行使传递载体的功能的。在在这方面，最近L.johnsonii得出的结果是非常有前途的。乳酸杆菌是如何起始一个免疫反应的过程现在还不清楚。对于某种特征，比如说非甲基的CpG基因，LTA和肽聚糖，这些都是先天免疫反应的兴奋剂。然而，因为乳酸杆菌并不能通过先天免疫系统引起一个特定的免疫反应，这些东西看起来并不是用乳酸杆菌作为活疫苗载体的佐剂。我们通过可以再细胞表面表达TTFC的S.gordonii得出一个实验结果，我们山东大学本科生毕业论文 54 明确了免疫系统是如何对乳酸菌做出反应的56，57。这些实验表明和处在可溶状态的TTFC相比，TTFC和S.gordonii相结合可以更加有效的激活树状细胞将抗原呈递给CD4+T细胞。这表明S.gordonii也具有良好的佐剂性质。激活因子的共表达提供了一种调节免疫反应的方式。这种方案的可行性已经得到了证实，因为IL-2和IL-6可以可以加强针对TTFC的免疫反应。在其他方面也有类似的例证58。后一种方案近来已经开始应用于临床。用S.gordonii进行的体外实验已经得到了结果。在胃肠道中我们找到了树状细胞，但是免疫系统的组分在肠道内部的更加细节化的相互作用和肠胃内的微生物一起对于免疫反应是很重要的。同时，机体摄取的乳酸杆菌的去向和归属也应该得到密切的监控以确定这些乳酸杆菌具体是作用于免疫系统的什么地方59。人们已经研制出了可以进行这种监控的仪器，并且已经使用荧光通过 Peyer，s节上的M细胞来跟踪摄入体内的乳酸杆菌60。在设计一个新型疫苗时有一个不可忽视的变量，那就是病原体的性质。正像上面所提到的一样，一些病原体可能会减弱免疫反应。特异的抗体sIgA经常被看过是粘膜反应的特点61。IgA可以在没有IgG的条件下引发免疫反应62。因为保护作用是不同的，因此对于读出系统的选择可能就会导致对不同的病原体会产生不同的反应。可能以后我们就需要使用不同的策略来对付不同的病原体。由细胞内外病原体和病毒所揭示的先天免疫系统的不同的触发机制是由不同的反应来指导 山东大学本科生毕业论文 55 的。因此我们必须通过测试确定乳酸杆菌是优先激活TH1细胞免疫反应还是优先激活TH2免疫反应。其他的进展则借助于遗传工具的改进。尽管现在使用的这些用于分泌或者锚定蛋白的基因序列是有效果的，但是这些进程的效率还比较低，这些导致了抗原数量的减少。多种从基因组序列中鉴定出来的可供选择的分泌和锚定信号可以改善这些特点。关于乳酸菌锚定的细节正逐渐被人们所了解，这些将有助于人们了解新的锚定机制63。有一些乳酸杆菌菌株的表面完全覆盖着一种透明的蛋白结构。这些蛋白和它们的分泌信号具有表达新的分泌信号的潜力64。体内诱导系统的发展也是现代系统的必要的提高和改善。总而言之，所有可以用于构建新颖安全高效的乳酸杆菌活疫苗的必要的工具都已经准备好了。现在我们所面临的挑战就是如何才能综合使用这些工具来引起我们想要的免疫反应。为了达到这个目的，我们需要通过进一步的研究来确定乳酸杆菌自身的佐剂性质并且找到加强这种性质的方法。1 Kruger,C.et al.(2002)In situ delivery of passive immunity by lactobacilli producing single-chain antibodies.Nat.Biotechnol.20,702706 2 Kruisselbrink,A.et al.(2001)Recombinant Lactobacillus plantarum inhibits house dust mite-specific T-cell responses.Clin.Exp.Immunol.126,28 3 McGhee,J.R.and Mestecky,J.(1990)In defense of mucosal surfaces.Development of novel vaccines for IgA responses protective at the portals of entry of microbial pathogens.Infect.Dis.Clin.North Am.4,315341 4 Ryan,E.J.et al.(2001)Immunomodulators and delivery systems for vaccination by mucosal routes.Trends Biotechnol.19,293304 5 Medina,E.and Guzman,C.A.(2001)Use of live bacterial vaccine vectors for antigen delivery:Potential and limitations.Vaccine 19,15731580 6 Attridge,S.R.et al.(1997)Oral delivery of foreign antigens by attenuated Salmonella:Consequences of prior exposure to the vector strain.Vaccine 15,155162 7 Ribeiro,L.A.et al.(2002)Production and targeting of the Brucella abortus antigen L7/L12 in Lactococcus lactis:A first step towards food-grade live vaccines against brucellosis.Appl.Environ.Microbiol.68,910916 8 Lee,M.H.et al.(2001)Expression of Helicobacter pylori urease subunit B gene in Lactococcus lactis MG1363 and its use as a vaccine delivery system against H.pylori infection in mice.Vaccine 19,39273935 9 Oggioni,M.R.et al.(1999)Antigenicity and immunogenicity of the V3 domain of HIV type 1 glycoprotein 120 expressed on the surface of Streptococcus gordonii.AIDS Res.Hum.Retroviruses 15,451459 10 Maggi,T.et al.(2000)Expression of measles virus antigens in Streptococcus gordonii.New 山东大学本科生毕业论文 56 Microbiol.23,119128 11 Zegers,N.D.et al.(1999)Expression of the protective antigen of Bacillus anthracis by Lactobacillus casei:Towards the development of an oral vaccine against anthrax.J.Appl.Microbiol.87,309314 12 Enouf,V.et al.(2001)Bovine rotavirus nonstructural protein 4 produced by Lactococcus lactis is antigenic and immunogenic.Appl.Environ.Microbiol.67,14231428 13 Shaw,D.M.et al.(2000)Engineering the microflora to vaccinate the mucosa:Serum immunoglobulin G responses and activated draining cervical lymph nodes following mucosal application of tetanus toxin fragment Cexpressing lactobacilli.Immunology 100,510518 14 Grangette,C.et al.(2001)Mucosal immune responses and protection against tetanus toxin after intranasal immunization with recombinant Lactobacillus plantarum.Infect.Immun.69,15471553 15 Marteau,P.R.(2002)Probiotics in clinical conditions.Clin.Rev.Allergy.22,255273 16 Dunne,C.et al.(1999)Probiotics:from myth to reality.Demonstration of functionality in animal models of disease and in human clinical trials.Antonie Van Leeuwenhoek 76,279292 17 Kalliomaki,M.et al.(2001)Probiotics in primary prevention of atopic disease:A randomised placebo-controlled trial.Lancet 357,10761079 18 Maassen,C.B.et al.(1999)Instruments for oral disease-intervention strategies:Recombinant Lactobacillus casei expressing tetanus toxin fragment C for vaccination or myelin proteins for oral tolerance induction in multiple sclerosis.Vaccine 17,21172128 19 Meydani,S.N.and Ha,W.K.(2000)Immunologic effects of yogurt.Am.J.Clin.Nutr.71,861872 20 Gronlund,M.M.et al.(2000)Importance of intestinal colonisation in the maturation of humoral immunity in early infancy:A prospective follow up study of healthy infants aged 06 months.Arch.Dis.Child.Fetal Neonatal Ed.83,F186F192 21 Kaila,M.et al.(1992)Enhancement of the circulating antibody secreting cell response in human diarrhea by a human Lactobacillus strain.Pediatr.Res.32,141144 22 Haller,D.et al.(2002)Activation of human NKcells by staphylococci and lactobacilli requires cell contact-dependent costimulation by autologous monocytes.Clin.Diagn.Lab.Immunol.9,649657 23 Cross,M.L.et al.(2002)Dietry intake of Lactobacillus rhamnosus HNOO1 enhances production of both Th1 and Th2 cytokines in antigen-primed mice.Med.Microbiol.Immunol.191,4953 24 Maassen,C.B.et al.(2000)Strain-dependent induction of cytokine profiles in the gut by orally administered Lactobacillus strains.Vaccine 18,26132623 25 Pouwels,P.H.et al.(1996)The potential ofLactobacillus as a carrier for oral immunization:development and preliminary characterization ofvector systems for targeted delivery of antigens.J.Biotechnol.44,183192 26 Christensen,H.R.et al.(2002)Lactobacilli differentially modulate expression of cytokines and maturation surface markers in murine dendritic cells.J.Immunol.168,171178 27 Jepson,M.A.and Clark,M.A.(1998)Studying Mcells and their role in infection.Trends Microbiol.6,359365 28 Rescigno,M.et al.(2001)Dendritic cells express tight junction proteins and penetrate gut epithelial monolayers to sample bacteria.Nat.Immunol.2,361367 山东大学本科生毕业论文 57 29 Medzhitov,R.and Janeway,C.A.J.(1997)Innate immunity:the virtues of a nonclonal system of recognition.Cell 91,295298 30 Janeway,C.A.J.and Medzhitov,R.(2002)Innate immune recognition.Annu.Rev.Immunol.20,197216 31 Harris,N.L.and Ronchese,F.(1999)The role of B7 costimulation in T-cell immunity.Immunol.Cell.Biol.77,304311 32 Neish,A.S.et al.(2000)Prokaryotic regulation of epithelial responses by inhibition of IkappaBalpha ubiquitination.Science 289,15601563 33 Steidler,L.et al.(1998)Mucosal delivery of murine interleukin-2(IL-2)and IL-6 by recombinant strains of Lactococcus lactis coexpressing antigen and cytokine.Infect.Immun.66,31833189 34 Kleerebezem,M.et al.(1997)Controlled gene expression systems for lactic acid bacteria:Transferable nisin-inducible expression cassettes for Lactococcus,Leuconostoc,and Lactobacillus spp.Appl.Environ.Microbiol.63,45814584 35 Pavan,S.et al.(2000)Adaptation of the nisincontrolled expression system in Lactobacillus plantarum:A tool to study in vivo biological effects.Appl.Environ.Microbiol.66,44274432 36 Lokman,B.C.et al.(1997)Regulation of expression of the Lactobacillus pentosus xylAB operon.J.Bacteriol.179,53915397 37 Reveneau,N.et al.(2002)Comparison of the immune responses induced by local immunizations wi