中药六君子汤对慢性支气管炎大鼠气道炎症因子的影响.pdf

实用医学杂志2009年第25卷第22期Ang诱导的p27蛋白水平下降，而且与CFs进入S期受阻相一致。提示细胞内p27蛋白可能是Ang介导CFs增殖的重要负调控因子，而Mat通过促进p27的表达而抑制CFs增殖。本研究发现，Ang对p21的蛋白表达无影响，可能的解释为p21的表达变化更多地依赖于其他细胞生长因子或周围环境的作用，而不依赖局部活化的Ang。但加入苦参碱后，p21的表达轻度增加，说明苦参碱可影响p21的表达，且这种改变可能与Mat的抑增殖作用有关。4参考文献Aras O，Dilsizian VTargeting tissue angiotensin converting enzymefor imaging cardiopulmonary fibrosisJ Curr Cardiol Rep，2008，10（2）：12834伍严安苦参碱抑制血小板衍生生长因子诱导的小鼠皮肤成纤维细胞增殖 J第二军医大学学报，2000，21（8）：724726何立人苦参碱对血管紧张素诱导的血管平滑肌增殖及超微结构的影响 J上海中医药大学学报，1999，13（4）：4749刘东，蒋毅萍，程玉芳，等甘草甜素与苦参碱联合用药对实验性大鼠肝纤维化的防治作用 J实用医学杂志，2007，23（13）：19821983雷怀定，刘先军，涂明利，等苦参碱对体外人肺癌A549细胞的抑制作用 J实用医学杂志，2006，22（15）：17171719陆丽华，冉志华氧化苦参碱对人结肠癌细胞P21、P27、cyclinE1及CDK2表达的影响J世界华人消化杂志，2007，15（12）：13541358（收稿：20090725编辑：李强）慢性支气管炎是由多种因素所引起的支气管各层及其周围组织的慢性非特异性炎症。随着炎症不断发展，支气管管腔越来越狭窄，导致通气障碍，进而发展为慢性阻塞性肺气肿和慢性肺源性心脏病12，目前尚未有药物能够改变这一趋势。中医作为我国的传统医学，在慢性支气管炎的急性发作期及稳定期治疗方面均具有许多优势，能有效缓解呼吸困难等症状，促进机体的康复；同时，中药以其经济、长期用药等优点为基层患者广泛接受。其中，经典方六君子汤出自景岳全书，是根据中医五行相生理论及脏腑学说而形成的一种治疗肺脾亏虚病证的方法。此方经过长期的临床实践，在慢性支气管炎的预防及治疗效果等方面均得到肯定。然而，此方成分复杂、功效多样，发挥疗效时的作用机制尚不明确。本文拟从其对气道炎症的影响方面探讨其治疗慢性支气管炎的机制。1材料与方法11材料111动物Wistar大鼠50只，雌雄各半，体重150 200 g，由中山大学动物中心提供。112中药六君子汤组成：党参9 g、炒白术9 g、茯苓9 g、陈皮9 g、制半夏12 g、甘草6 g，水煎浓缩为浓度0675 gmL浓缩液。由中山大学附属第一医院黄埔院区药房提供。113试 剂 与 仪 器Trizol，5 逆 转 录buffer，5 SYBR Green PCR buffer，dNTPs，MMLV，Taq酶；放免法试剂购自北京普尔伟业生物科技公司，试剂批号为20080829。ABI 3900台式高通量DNA合成仪，科大创新HC-3018R高速冷冻离心 机，ABI 9700 PCR仪，ABI 7500全自动荧光定量PCR仪，中佳GC2010免疫计数器。12方法121造模与给药正常对照组：实验动物适应性饲养1周后，随机取10只大鼠不行任何干预，相同室内环境下自由饮食饮水，作为正常对照组。建立大鼠慢性支气管炎模型：根据实用中医候证动物学中的方法3并加以改良建立大鼠慢性支气管炎模型。即取无水亚硫酸钠3 g盛于50 mL广口瓶置于容积约50 L的干燥瓶中，加入30硫酸3 mL反应产生SO2气体，将50只大鼠放入干燥瓶中熏1 min，每天1次。经处123456基金项目：2005年度广州市黄埔区政府资助科研项目（HP2005028）作者单位：510700广州市，中山大学附属第一医院黄埔院区通信作者：张常然E-mail：zhcr2303sinacomcn中药六君子汤对慢性支气管炎大鼠气道炎症因子的影响刘小云牛媛媛张常然李鸣林建聪谭清华邢艳利摘要目的：探讨中药六君子汤对慢性支气管炎大鼠气道炎症的影响。方法：建立SO2烟熏法建立慢性支气管炎大鼠模型，采用放射免疫实验方法，比较六君子汤治疗后血清IL-8的变化，并对肺组织的病理进行了观察。结果：六君子汤治疗组大鼠的血清IL-8较对照组大鼠明显减少（0434 3 0272 9）ngmL vs（0768 6 0189 7）ngmL，P 005）；慢性支气管炎模型大鼠病理损害明显，六君子汤治疗后病理损害较对照组显著恢复。结论：六君子汤能减少炎症细胞因子IL-8的释放，减轻肺组织损伤程度，有干预气道炎症的作用。关键词支气管肺炎；白细胞介素8（IL-8）；六君子汤3776实用医学杂志2009年第25卷第22期表1不同组别大鼠IL-8测定值组别六君子汤治疗组生理盐水对照组例数1515IL-8（x s，ngmL）0434 3 0272 90768 6 0189 7图1不同级别大鼠血清IL-8测定值死大鼠，观察其气管、肺组织病理形态学的变化，以确定模型制作是否成功。30 d后，大鼠支气管的变化达到慢支一般的病理形态学的改变，模型制造成功。给药：随机将造模成功后的30只大鼠分为两组，每组15只：（1）六君子汤治疗组，自造模成功后的第1天开始，予以六君子汤灌胃，每天1次，每次3 mL，连续35 d；（2）慢性支气管炎生理盐水模型对照组（生理盐水对照组），予以等体积生理盐水，连续35 d，其他喂养条件相同。122样本血采集将大鼠断颈处死，行心脏穿刺采血，EDTA抗凝，分离血清20保存。疗程完成后将所有大鼠按上法采血保存待测。123放免法（EIA）检测血清IL-8采用放射免疫实验方法检测血清白细胞介素（IL-8）的血清浓度变化。124取材与固定染色所有动物被仰卧固定于手术台上，沿胸腹正中线剪开皮肤、胸骨、暴露气管。将气管从甲状软骨下4 mm至肺门分支处剪下、剖开，并取双下肺边缘肺组织各一块，用09NS冲洗5次、去掉血液，置于10的福尔马林标本瓶中，于4冰箱内固定24 h以上。石蜡切片，HE染色，光学显微镜观察。125统计学处理各组数据以均数标准差表示。采用SPSS 160统计软件配对t检验，以P 005认为差异具有统计学意义。2结果21放免法（EIA）检测血清IL-8六君子汤治疗组大鼠的血清IL-8较生理盐水对照组大鼠的血清IL-8明显下降（P 0000 6）。统计结果见表1、图1。22各组大鼠气道病理改变（1）生理盐水对照组大鼠气管内壁黏膜完整，细胞饱满，纤毛长而粗细均匀、排列整齐、方向一致；肺泡内无渗出，肺泡壁排列规整，小动脉及毛细血管网通畅（图2）。（2）慢性支气管炎模型组肺泡管、肺泡囊及肺泡明显扩大，肺泡壁变薄、断裂、肺泡间融合；肺泡内出现渗出物，肺泡毛细血管腔狭窄、闭塞、毁损（图3）。（3）六君子汤治疗组肺泡内渗出明显吸收，肺泡壁重建；小动脉周围炎症细胞减少；肺泡毛细血管网丰富（图4）。（4）生理盐水对照组肺泡管、肺泡囊及肺泡明显扩大，间隔变薄、断裂，肺泡扩大融合。见图5。54图2正常组大鼠肺组织病理（HE 20）；图3慢性支气管炎模型组大鼠肺组织病理（HE 40）；图4六君子汤治疗组大鼠肺组织病理（HE 20）；图5生理盐水对照组大鼠肺组织病理（HE 20）323讨论目前大多数观点认为，气道的长期慢性炎症可能是慢性支气管炎发病的主要机制4。慢性支气管炎涉及小气道和肺实质的慢性炎症，而嗜中性粒细胞，巨噬细胞，CD8阳性的T淋巴细胞参与了炎症过程56。IL-8增加对气道炎症具有激发和促进作用。使中性粒细胞、T淋巴细胞等多种炎症细胞在效应部位增生、聚集和活化，而活化的中性粒细胞自身也产生白细胞介素8而引起进一步聚集，这样就形成了自身的炎症反应放大回路79。六君子汤是由四君子汤加半夏、陈皮而成，实际上是四君子汤与二陈汤的合方。被景岳全书分别列为古方八阵补阵第一方与和阵第一方，四君子汤有益气补中，健脾养胃之功，二陈汤具有燥湿化痰，理气和中之效。国内张葵等10采用参芪补肺汤对肺气虚证慢性阻塞性肺疾病大鼠气道中炎症的影响进行了研究，证实中药对慢性支气管炎的气道炎症有干预作用。西医学认为慢性支气管炎的主要病理改变为黏液纤毛运载系统破坏，支气管的腺体增生肥大、分泌3777实用医学杂志2009年第25卷第22期功能亢进，支气管管壁充血、水肿、炎细胞浸润和纤维组织增生，管腔内充满分泌物；终末细支气管管腔为黏液和炎性渗出物阻塞、管壁增厚、管腔狭窄；同时肺毛细血管被破坏，肺血管床减少，肺内血液循环障碍。这些与中医的“痰”“瘀”观点可谓是不谋而合，因此慢性支气管炎的治疗应充分重视本虚标实的病理本质及痰瘀交互为患的危害性。本实验的结果提示，慢性支气管炎模型组大鼠的肺组织破坏较重，采用六君子汤治疗后，组织损伤好转更为明显。从组织学上进一步证实了六君子汤确实能减轻气道炎症程度，有利组织损伤的修复，六君子汤对慢性支气管炎有抗炎、抗损伤作用，从而加强对细胞的保护作用。4参考文献Walter R E，Wilk J B，Larson M G，et al Systemic inflammationand COPD：the framingham heart studyJ Chest，2008，133（1）：1925Yende S，Waterer G W，Tolley E A，et al Inflammatory markersare associated with ventilatory limitation and muscle dysfunction inobstructive lung disease in well functioning elderly subjectsJThorax，2006，61（1）：1016陈小野实用中医证候动物模型学 M北京：北京医科大学中国协和医科大学联合出版社，1993：314Rohde G，Schlosser B，Arinir U，et alThe role of respiratoryinfections in chronic obstructive pulmonary diseaseJMed Klin（Munich），2007，102（11）：893898白春学COPD的炎症和抗炎研究进展J继续医学教育，2007，21（2）：2224Gerritsen W B，Asin J，Zanen P，et al Markers of inflammation andoxidative stress in exacerbated chronic obstructive pulmonary diseasepatientsJ Respir Med，2005，99（1）：8490Mortaz E，Rad M V，Johnson M，et al Salmeterol with fluticasoneenhancesthesuppressionofIL-8releaseandincreasesthetranslocationofglucocorticoidreceptorbyhumanneutrophilsstimulated with cigarette smokeJ J Mol Med，2008，86（9）：10451056叶锦辉，林琦，陈燕，等老年慢性气管炎患者血清及痰液白细胞介素水平的检测及其意义J实用医学杂志，2004，20（6）：610612李正清，田正鉴，张珍祥慢性支气管炎大鼠IL-8水平与炎症细胞变化特点的探讨 J中国医师杂志，2004，6（9）：12031204张葵，张樱，陈翌江，等参芪补肺汤对肺气虚证慢性阻塞性肺疾病大鼠气道重构中NF-B和MMP-9，TIMP-1表达的影响J中国中药杂志，2008，33（18）：21292132（收稿：20090409编辑：宋妮妮）2002年美国实施了第1例腰椎间盘突出症等离子刀髓核成形术（CN）1，CN虽然临床已经应用，但是目前还缺乏基础实验研究，现就颈椎间盘行CN量效及安全性进行研究，为临床应用提供理论依据。1材料与方法11实验仪器等离子刀手术系统购自美国杰西公司，HSP70单克隆抗体购自Santa cruze公司。12实验材料制作羊颈椎间盘标本，采用8具18月龄新鲜宰杀羊颈椎，（购自石河子市牛羊屠宰市场）制作成每具含6个羊颈椎椎间盘的标本，共计48个羊椎间盘，分4组，每组12个椎间盘。实验组每组12个椎间盘使用相同时间（25 s）、三种不同能量1档（80W、1档组）、2档（100W、2档组）、3档（120W、3档组）等离子刀对颈椎间盘进行CN，CN对照组模拟手术操作，单行穿刺。13方法先用专用套管穿刺针于椎间盘前缘中点刺入，等离子刀消融刀头于套管保护下于椎间盘前缘中点进入，消融工作刀头最远点设定在距椎间盘后缘正中5 mm处，对椎间盘髓核组织汽化消融前，于标本椎间盘前后缘及椎间孔内壁处放置电子探针式温度仪探头，记录消融前及汽化时温度；手术后切取手术间盘及双侧神经节，分别测量三实验组汽化消融效能腔和对照组穿刺腔半径，神经节标本经固定、脱水、浸蜡包埋，连续切片厚度为4 m，所有标本均经病理学证实，行HSP70免疫组化染色。12345678910颈椎等离子刀髓核成形术量效及安全性研究康波史晨辉摘要目的：探讨颈椎间盘等离子刀髓核成形术（coblation nucleoplasty，CN）量效及安全性。方法：分别通过相同时间不同能量等离子刀行羊颈椎间盘CN，观察记录CN在椎间盘形成的效能腔、椎间盘周围温度变化并取CN间盘节段双侧神经节观察热休克蛋白70的表达，对数据进行统计学分析。结果：三实验组手术效能腔与对照组穿刺腔比较有统计学意义，其中3、2档组与对照组比较有显著差异（P 005）；三实验组温度与对照组比较有显著差异（P 005）；三种能量手术时，2档温度在安全范围内，3档形成的有效效能腔最大，3档HSP70免疫组化染色阳性表达，1、2档无表达。CN效能腔、温度与能量成正相关。结论：等离子刀髓核成形术的量效、温度变化与能量成正相关，临床使用2档行颈椎间盘CN较为安全。关键词椎间盘移位；等离子刀髓核成形术；热休克蛋白作者单位：472000河南省三门峡市中心医院骨科（康波）；832008新疆石河子大学医学院第一附属医院骨一科（史晨辉）3778