微生物复习2.docx

复 习 题
1、 微生物的概念
微生物是一类体积微小、结构简单、肉眼直接看不见，必须用光学显微镜或者电子显微镜放大后才能看得见的微小生物的总称。
2、微生物的生物学特点
微生物的六大共性 ：
1、体积小，面积大（基础、微米纳米、物质交换）
2、吸收多，代谢旺
3、食谱杂，易培养
4、生长旺，繁殖快
5、适应强，易变异
6、分布广，种类多
3、 原核微生物和真核微生物的概念及区别
原核微生物是指细胞核分化程度低，仅有原始核质，没有核膜与核仁；细胞器不完善的原始单细胞生物。
一般有细菌、螺旋体、支原体、立克次体、衣原体和放线菌这几种分类
真核微生物是一类具有真正细胞核，具有核膜与核仁分化的较高等的微生物。
真核微生物包括除蓝藻以外的藻类、酵母菌、霉菌、原生动物、微型后生动物等。
原核微生物与真核微生物的主要区别如下：
1.核:原核微生物:没核膜、核仁，只有一条环状染色体，DNA含量比真核多。
真核微生物: 有一至多条线形染色体。
2.细胞分裂
原核微生物：二分裂(无性繁殖、裂殖）。
真核微生物：有丝分裂，减数分裂，产生孢子（有性、无性）
3.生理特性
原核微生物： 化能合成作用、生物固氮能力、专性厌氧生活、细胞膜进行呼吸和光合作用
真核微生物：线粒体叶绿体进行呼吸和光合作用，但真菌没光合色素
4.中体、细胞器
原核微生物:有中体只有核糖体一个细胞器
真核微生物:无中体有细胞器:有线粒体、高尔基体、内质网、叶绿体、中心体。
5.核蛋白体
原核微生物：70S（在细胞质中）。
原核微生物：80S（在细胞质中）；70S （在某些细胞器中）。
6.细胞壁组成
原核微生物：肽聚糖或脂多糖。
真核微生物：几丁质、多聚糖或寡糖。
7.运动器官
原核微生物：较细鞭毛（中空管状结构）。
真核微生物：较粗鞭毛或纤毛（9+2结构）。
8.细胞大小
原核微生物 ：较小，1—10um。
真核微生物 ：较大，10—100um
4、革兰氏染色的步骤、原理及关键步骤
5． 革兰氏染色、主要步骤、结果及实际意义如下：
操作过程如下：涂片→干燥→固定→草酸铵结晶紫染色（1min）→水洗→路哥氏碘液媒染（1min）→水洗→95%乙醇脱色（30s）→水洗→番红复染（1min）→水洗→干燥→镜检。

(2)染色结果是：G＋菌呈紫色，G—菌呈红色。
(3)革兰染色的意义：有助于鉴定细菌、指导用药、研究和了解细菌的染色性、致病性等。
原理：革兰氏阳性细菌细胞壁 肽聚糖含量高，肽聚糖层较薄厚，类脂质含量低，乙醇处理使细胞壁脱水，肽聚糖层孔径变小，细胞壁通透性降低，结晶紫--碘复合物被保留在细胞内，于是不被脱色。

革兰氏阴性菌细胞壁 类脂质含量高，肽聚糖含量低，肽聚糖层较薄， 乙醇溶解了类脂质，使细胞壁通透性增加，结晶紫--碘复合物被洗脱出来，于是被脱色。

G+:特有磷壁酸
G-：特有脂多糖
类脂质不等于脂多糖

3细菌、放线菌、酵母菌和霉菌的细胞结构、繁殖方式和菌落特征

4、 噬菌体的繁殖过程
A.噬菌体将自己的DNA注入到细菌体内

B.噬菌体的DNA利用细菌体内的成分复制出DNA和蛋白质外壳

C.新合成的DNA和蛋白质外壳组成装成子代噬菌体

D.释放子代噬菌体

双选，请说出为什么
问题补充：
噬菌体侵染细菌的过程中能说明DNA分子是遗传物质的关键步骤
5、 微生物的营养物质、营养类型和营养物质的吸收方式
微生物的营养物质六大类要素：碳源、氮源、能源、生长因子、无机盐、水
（1） 碳源：
能提供微生物营养所需碳（元）素或碳架的营养物质称为碳源。（提供细胞生命活动所需的能量，提供合成产物的碳架）。对于为数众多的化能异养微生物来说，碳源兼有能源功能的双功能营养物。
碳源在制作微生物培养基或细胞培养基时有重要的作用，为微生物或细胞的正常生长，分裂提供物质基础。
（2） 能源：
提供微生物生命活动所需的营养物质。
（3） 氮源：
提供细胞原生质和其他结构物质中的氮源，一般不作为能源使用。但化能自养细菌中的亚硝化细菌能从氨和二氧化氮等还原无机含氮化合物氧化中获得其生命活动所需的能源，所以对它来说氮源兼有氮源和能源双重功能。
（4） 无机盐：
A) 提供微生物细胞化学组成中（除碳和氮外）的重要元素；B）参与并稳定微生物细胞的结构；C）镁、铜和锌等是许多酶的激活剂，固氮酶含Fe、Mo辅因子；D)调节和维持微生物生长过程中诸如渗透压、氢离子浓度和氧化还原电位等条件；E）用作某些化能自养细菌的能源物质；F）用作呼吸末端的氢受体。
（5） 生长因子和生长抑制因子：
指在组织培养中，除了氨基酸、维生素、葡萄糖以及无机盐等正常成分之外，其可以代替培养基血清高分子物质的而促进细胞生长的物质。具有刺激细胞生长活性的细胞因子。
（6） 水:
水是营养物质代谢产物的良好溶剂，营养物质和代谢产物都是通过溶解和分散在水中而进出细胞的。水还可保证细胞内的温度不会因代谢过程中释放的能量骤然上升。它还有利于生物大分子结构的稳定。
营养五大类型
1．光能无机自养型（光能自养型）
能以CO2为唯一或主要碳源； 进行光合作用获取生长所需要的能量；以无机物如H2、H2S、S、H2O等作为供氢体或电子供体，使CO2还原为细胞物质；
例如：藻类及蓝细菌等和植物一样，以水为电子供体（供氢体），进行产氧型的光合作用，合成细胞物质。红硫细菌，以H2S为电子供体，产生细胞物质，并伴随硫元素的产生。

2．光能有机异养型（光能异养型）

不能以CO2为主要或唯一的碳源；以有机物作为供氢体，利用光能将CO2还原为细胞物质；在生长时大多数需要外源的生长因子；

例如，红螺菌属中的一些细菌能利用异丙醇作为供氢体，将CO2 还原成细胞物质，同时积累丙酮。
3．化能无机自养型（化能自养型）

生长所需要的能量来自无机物氧化过程中放出的化学能；以CO2或碳酸盐作为唯一或主要碳源进行生长时，利用H2、H2S、Fe2+、NH3或NO2-等无机物作为电子供体使CO2还原成细胞物质。

4．化能有机异养型（化能异养型）

生长所需要的能量均来自有机物氧化过程中放出的化学能；生长所需要的碳源主要是一些有机化合物，如淀粉、糖类、纤维素、有机酸等。

5．营养缺陷型

某些菌株发生突变（自然突变或人工诱变）后，失去合成某种（或某些）对该菌株生长必不可少的物质（通常是生长因子如氨基酸、维生素）的能力，必须从外界环境获得该物质才能生长繁殖，这种突变型菌株称为营养缺陷型，相应的野生型菌株称为原养型。
营养物质的吸收方式：
6、 培养基的概念及配制原则
培养基是经人工配制而成的、适合微生物生长繁殖或产生代谢产物的营养基质。
配制原则：1、目的明确2、选择适宜的营养物质3、选择适宜的原料来源4、选择适宜的灭菌方法5、控制营养物质的比例及浓度6、控制适宜的酸碱度 7、控制氧化还原电位
7、 培养基的类型
1. 按照培养基的成分可分为天然培养基、合成培养基和半合成培养基三类。
2. 按照培养基的物理状态可分为液体培养基、半固体培养基和固体培养基三类
3.按照培养基用途可分为基础培养基和加富培养基、选择培养基和鉴别培养基 、生产培养基五类
8、 微生物生长量的测定方法
一、直接计数法（特点：测定死菌和活菌数）
1． 显微镜计数法：
(1)血球计数板法 血球汁数板中央有一个体积一定的计数室( 0.1mm3)。将菌悬液或孢子悬液在显微镜下计数，然后再按一定公式计算出细菌总数。
(2)涂片计数法 将一定体积(0.1ml)的样品，均匀地涂在载片的一定面积内(1cm2)。在显微镜下计算细胞数量，推算1cm2所含细胞数目。
2、比浊法：菌体细胞培养液混浊，在一定范围内，菌体数量与浑浊成正比，故可通过分光光度计或比色计求出浑浊度，通过与标准曲线对比，求出样品中菌液浓度，算出个体数。
二、间接计数法（特点：仅测定活菌数）
3. 平板菌落计数法：
是通过测定样品在培养基上形成的菌落数来间接确定其活菌数的方法．故又称平板计数法。
（1）涂布平板法 用灭菌的涂布器将一定体积(不大于0.1ml)的适当稀释度的菌液涂布在琼脂培养基的表面，然后保温培养有到菌落出现，记录菌落的数目并换算成每毫升试样中的活细胞数量。
（2）倒平板法 将样品稀释到一定浓度，取一定体积(0.1—1ml)倒入冷却至45℃的固体培养基混合，制成平板，培养后，出现菌落，由菌落数推算出的菌总数。
4、 薄膜过滤计数法：样品同过微孔滤膜后，细菌收集在滤膜上，然后将滤膜放在培养基中培养，通过菌落计数求出样品活菌落。
5、液体稀释最大概率数法
三、重量法（特点：适合与菌体浓度高的样品。表示菌体生长量。）
1．湿重法：将单位体积微生物培养液离心，收集沉淀物，然后再称重。
2．干重法：将离心得到的细胞沉淀物，置于100---105℃的烘箱中干燥过夜除去水分，然后再称重。
成分：
3、 含氮量测定法：N在细胞内稳定，测定总N量，粗蛋白=N*6.25g。
4、 DNA测定法：微生物细胞DNA含量稳定，采用荧光指示剂或染色剂与菌体DNA作用荧光比色或分光光度法测得DNA的含量。
9、 微生物生长曲线及其生长特点
　微生物生长曲线是以微生物数量（活细菌个数或细菌重量）为纵坐标，培养时间为横坐标画得的曲线。一般说，微生物（细菌）重量的变化比个数的变化更能在本质上反应出生长的过程。曲线可分为三个阶段即生长率上升阶段（对数生长阶段）、生长率下降阶段及内源呼吸阶段。　　单细胞微生物典型生长曲线分为 4 个时期:延滞期（适应期）、指数期、稳定期和衰亡期　　
各个时期的特点是：停滞期：（1）细胞物质开始增加；（2）有的细胞开始不适应环境而死亡；（3）细菌总数下降；（4）停滞期末期，细胞代谢活动能力强，细胞中RNA含量高，嗜碱性强。对不良环境条件较敏感，呼吸速度、核酸及蛋白质的合成速度接近对数细胞，并开始细胞分裂。　　
对数期：（1）菌体以几何数增加，增长速度快；（2）细胞代谢能力最强；（3）细菌很少死亡或不死亡。
稳定期：（1）生长速率下降，死亡率上升；（2）细胞数达到最大值，新生的细菌数和死亡的细菌数相当。　
衰亡期：（1）死亡率增加，细菌少繁殖或不繁殖；（2）细菌常出现多形态、畸形或衰退型，有的会产生芽孢。
10、 微生物的分离技术方法
11、 灭菌锅的操作步骤及使用的注意事项
12、 菌种保藏的目的是使菌种被保藏后不死亡、不变异、不被杂菌污染，并保持其优良性状，以利于生产和科研应用。
13、 菌种的保藏方法及其优缺点。
14、 食品卫生标准中微生物指标有细菌总数、大肠菌群、致病菌的 检测。
15、 细菌和酵母菌在食品中的应用。
酵母菌在酿造、食品、医药等工业上占有重要的地位。
酵母菌的维生素、蛋白质含量高，可作食用、药用和饲料用
16、 油镜的使用注意问题。
A、将标本片放载物台上，用标本推进器固定，将欲检部分移至接物镜下。先用低倍镜找出标本的位置，然后提高镜筒，在标本的待检部位滴镜油一滴，再换油镜观察。

　　B、转动粗调节器使载物台徐徐上升（或使镜筒渐渐下降），直至油镜头浸没至油中。此时眼睛应从侧面观察，以免压碎标本片和损坏镜头。

　　C、然后双眼移至接目镜，一面从接目镜观察，一面反方向缓慢地转动粗调节器（下降载物台，或上升镜筒），当出现模糊物象时，换用细调节器，转动至物象清晰为止。

　　D、观察完毕，应先提高镜筒，并将油镜头扭向一侧，再取下标本片。油镜头使用后，应立即用擦镜纸擦净镜头上的油。若镜油粘稠干结于镜头上，可用擦镜纸蘸少许二甲苯擦拭镜头，并随即用干的镜纸擦去残存的二甲苯，以免二甲苯渗入，溶解用以粘固透镜的胶质物，造成镜片移位或脱落。
17、 酵母的死活辨别的方法。
1．形态观察：酵母菌是不运动的单细胞真核微生物，通常比常见细胞大几倍甚至十几倍。大多数酵母菌以出芽方式进行无性繁殖，有的分裂繁殖；有性繁殖是通过接合产生子囊孢子。
2．死活鉴定：美蓝 是一种无毒性的染料，它的氧化型呈蓝色，还原型呈无色。用美蓝对酵母的活细胞进行染色时，由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的氧化型变为无色的还原型。因此，具有还原能力的酵母活细胞是无色的，而死细胞或代谢作用微弱的衰老细胞则成蓝色或淡蓝色。
18、 微生物的大小测定方法及计算。
19、 微生物的数量计数方法及计算。
20、 培养基的配制、倒平板、斜面接种、平板划线等要注意的事项。
培养基的配制:
1. 分装时注意不要使培养基沾染在管口或瓶口，以免浸湿棉塞， 引起污染。
2.pH不要调过头，以避免回调而影响培养基内各离子的浓度。
3.需不断搅拌,以防琼脂糊底烧焦。
4.严格按照培养基配方配制
倒平板:
在操作倒平板是，平板冷凝后，为什么将其倒置？防止培养液蒸发的附在上板的水蒸气倒流到培养液中.
倒入融化并于已冷却至45℃左右的培养基，立即摇匀，否则细菌将不易分散或长成的菌落连在一起
21、 细菌总数的测定方法、计数方法及报告。

取一定容量的菌悬液，作一系列的倍比稀释，然后将定量的稀释液进行平板培养，根据培养出的菌落数，可算出培养物中的活菌数。