有关_HILIC色谱柱的使用.docx

如下是有关HILIC色谱柱的使用：

• HILIC色谱柱的平衡
使用50倍柱体积的50/50的乙腈/水相缓冲溶液（缓冲液的最终浓度为10mM）平衡新色谱柱
在开始进样前，用20倍柱体积的起始流动相平衡色谱柱
进行梯度分析时，进样间隔需要用10倍柱体积起始流动相平衡色谱柱
说明：色谱柱平衡不充分将导致保留时间漂移

• HILIC流动相需要注意的问题
流动相中总是至少保持5％的极性溶剂（如5％水相缓冲液，5％甲醇或3％甲醇/2%水相缓冲液等），这保证Atlantis HILIC硅胶填料始终被水浸润
在流动相或梯度中至少保持有机溶剂（如乙腈）的比例不低于40％
不要使用磷酸盐缓冲溶液体系，因为磷酸盐缓冲液在HILIC色谱模式下会析出；使用磷酸则没有问题
缓冲系统如甲酸铵或乙酸铵水溶液比甲酸或乙酸的水溶液有重现性更好的结果。如果不能使用缓冲液而一定要使用流动相添加剂如甲酸，最好使用0.2%的浓度而非0.1%
为得到最好的峰形，在流动相或梯度中总是保持缓冲系统的浓度为10mM

• HILIC进样溶剂需要注意的问题
如果可能，尽量用100％乙腈溶解样品进样。避免使用水配制样品溶液，请选择较弱的HILIC溶剂如乙腈、甲醇、异丙醇等配制样品溶液。
最常用的进样溶剂为75/25 乙腈/甲醇，这个体系充分平衡了样品的溶解度和峰形两个因素。
不要用水或DMSO做进样溶剂，它们将导致峰形变得很差；
使用反相SPE技术将水或DMSO置换成乙腈再进样。如果不能这样操作，用有机溶剂稀释水或DMSO。

• 其它有关使用HILIC的建议
开始时可以运行一个95％乙腈至50％乙腈的梯度，如果样品不保留，使用95/3/2乙腈/甲醇/水相缓冲溶液的流动相进行等度分析
将流动相中的水换成甲醇、丙酮或异丙醇也可以增加极性化合物的保留
请确保弱洗针溶剂/冲洗溶剂包含和流动相一样的高比例有机相，否则峰形会受到影响