1、单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,#,淀粉酶的固定化及淀粉水解作用的检测,固定化酶,分离纯化后固定在非水溶性载体上、可投放到反应溶液中使用又能被收回的酶。,水溶性酶,非水溶性载体,非水溶性酶,(固定化酶),固定化技术,多糖、蛋白质、玻璃、陶瓷、聚酯、聚胺、尼龙、,树脂、淀粉、明胶、胶原、,吸附法,包埋法,共价交联法,共价偶联法,载体结合法,优点,(,1,)提高酶稳定性;,(,2,)可反复或连续使用;成本降低,(,3,)易于和反应产物分开;,产物溶液无酶残留,简化提纯工艺;提高产物质量,(,4,)酶反应过程可严格控制;,缺点,固定化时酶活性有损失
2、,淀粉,糊精,淀粉酶,淀粉酶,来源,固定,产物检测,最适,pH,最适温度,枯草杆菌,石英砂,碘,碘化钾,5.5,7.5,50,75,实验步骤,用,50ml,小烧杯称取,5g,石英砂,加入,4ml,淀粉酶溶液,缓慢搅拌,30,分钟,使,淀粉酶固定到石英砂上,放入注射器中。,实验,6,-,淀粉酶的固定化及淀粉水解作用的检测,怎样使石英砂不从注射器中漏出?,夹子、滤纸片,用,10,倍蒸馏水清洗注射器,最后一次清洗时取其上清液,2,滴加到点样板上,同时滴加,1%,淀粉溶液混匀,再加入,KI-I,2,溶液,若溶液变为蓝色,说明未固定到石英砂上的,淀粉酶已完全除去;,怎样保证注射器中不含游离的酶?怎样确定
3、?,将灌注了固定化酶的注射器放在注射器架上,用滴管加淀粉溶液,使淀粉溶液约以,0.3ml/min,的流速过柱。,在流出,1,2mL,反应液后接收约,0.5mL,流出液,加入,1-2,滴,KI-I,2,溶液,观察颜色。,用水稀释淀粉滤液,1,倍后再观察颜色。,实验后,用,10,倍柱体积的蒸馏水洗涤此柱,放置在,4,冰箱中,几天后再重复上述实验,看是否有相同的结果。,样品,水,淀粉溶液,淀粉滤液,KI-I,2,溶液,稀释,1,倍,结果,对照,+,-,-,+,-,碘色,样品,1,-,+,-,+,-,蓝色,样品,2,-,-,+,+,-,红色,样品,3,-,-,+,+,+,浅红,实验结果,1,流出,5mL,后,接收,0.5mL,流出液,加入,1,2,滴,KI-I,2,溶液,溶液呈,红,色。,2,几天后,再重复上述实验,,与几天前的相比,结果相同,。,实验结论,淀粉被,-,淀粉酶水解成为糊精。,-,淀粉酶制成不溶性的固定化酶后,酶的稳定性增加,