第节 糖化血红蛋白测定.docx

第 节 糖化血红蛋白测定
文件编号：SMXYY-JYK-3-SH-
版本： A/0
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1检测原理
本法利用TTAB作为溶血试剂，用来消除白细胞物质的干扰（TTAB不溶解白细胞）。血液样品不需要除去不稳定HbA1c的预处理。全血溶血液中的HbA1c浓度，用浊度抑制免疫学方法测定。
先加入抗体缓冲液，样本中的糖化血红蛋白（HbA1c）和抗HbA1c抗体反应形成可溶性的抗原-抗体复合物，因为在HbA1c分子上只有一个特异性的HbA1c结合位点，不能够形成凝集反应。然后，加入多聚半抗原缓冲液，多聚半抗原和反应液中过剩的抗Hb1c抗体结合，生成不溶性的抗体-多聚半抗原复合物，可用比浊法进行测定。
同时在另一个通道上测定Hb浓度。在改通道中，溶血液中的血红蛋白转变成特征性吸收光谱的血红蛋白衍生物，用重铬酸盐作标准参照物，进行比色法测定Hb浓度。
根据Hb含量及HbA1c含量，计算出HbA1c%。
（TTAB：十四烷基三甲基溴化铵）
2标本采集及影响因素
2.1采血方法
空腹抗凝（EDTA-K2）静脉血2~3ml。
2.2标本保存
抗凝全血于4~8℃可保存7d。
2.3注意事项
标本应尽量避免溶血。
3试剂和设备
3.1试剂
采用罗氏原装双试剂
3.1.1试剂组成：
R1试剂：抗体试剂 MES﹡﹡缓冲液：0.025mol/L：TRIS﹡﹡﹡缓冲液：0.015mol/L PH6.2
HbA1c抗体（绵羊血清）：≧0.5mg/mL；稳定剂；防腐剂（液体）
R2试剂：多半抗原试剂 MES缓冲液：0.025mol/L；TRIS缓冲液：0.015mol/L，PH6.2

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HbA1c多半抗原：≧8μg/mL；稳定剂；防腐剂（液体）
﹡﹡MES=2-吗啉乙烷磺酸
﹡﹡﹡TRIS=三（羟甲基）-基氨基
3.1.2试剂准备：直接使用。
3.1.3试剂保存：2~8℃冷藏保存。
3.2控制品
Roche cobas c 501原装配套控制品。
3.3校准品
Roche cobas c 501 原装配套校准品。
3.4仪器
Roche cobas c 501全自动生化分析仪。
4操作程序
4.1检测过程流程

表1-1-1 HbA1c在Roche cobas c 501分析仪上的分析参数
测定模式
2点终点法
反应时间/
测定点
10/34—70
波长A/B
660/340nm
反应方向
上升
单位
mmol/L （g/dL）
试剂移液

稀释液（H2O）
R1
120μL

R2
24μL

样本容量
样 本
样 本 稀 释

样 本
稀 释 液（NaCl）
正 常
5μL
—
—
减 少
5μL
—
—
增 加
5μL
—
—
签收标本→离心→上机检测→审核报告→签发报告→标本保存。
4.2样本签收

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严格按照标本签收程序签收标本。
4.3样本处理
标本以3500r/min，离心10分钟，分离血清上机检测，若标本不能及时检测，分离血清于2~8℃保存。
4.4样本检测
4.4.1手工编排测试项目：适用于无双向条形码标本或标本复查。将标本按编号次序装载于仪器专用架上，放置于c150模块内。在Roche cobas的操作窗选择
选择项目
常规工作菜单

保 存

选择标本
类型、输
入序列号
或样本号
常规标本
单个标本
选择项目
常 规

重 复

输入最后
的样本号
批量标本

急诊标本
急 诊

保 存
选择项目
输入架号位 放置标本到
置及标本号 急诊位
4.4.2运行：确认样本已经装载在样本架上，架号、样本号、项目设置无误的情况下，进入如下操作：
开 始
开 始
在相应的标本类型里
输入起始号，回车
4.5检验后样本保存
样本检验完后将样本由样本架上卸下，放置于试管架上，密封后保存于样本保存冰箱（2~8℃）保存期为5d。
5校准程序
5.1校准品准备和储存
每瓶准确加3ml蒸馏水复溶，轻轻旋转摇匀，室温放置30min待充分溶解后分装，-20℃可保存20d，2~8℃可稳定24h。

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5.2校准条件
在更换试剂批号、更换仪器主要配件、仪器进行维修、大保养、室内质控失控时均需校准，无特殊情况校准周期为7d。

5.3校准程序
保 存
状 态
校 准
选定定标液
及定标方法

开 始
开 始
加载定标液
定标结果查看
状 态
校 准
红色消失为成功
有红色且出现Failed为失败
6质量控制程序
6.1质控品准备和储存
平时保存在-20℃低温冰箱，启用时取出，室温放置30min待充分融化后使用，2~8℃稳定72h。
6.2控制品水平和分析批长度
每24小时至少进行1批，每批至少2个水平。
保 存
选 择
6.3质控操作程序
状 态
质 控
选中质控项目
开 始
开 始

加载质控品
质控结果查看
Levy-Jennings图
图表

结果误差判断
实时质控
运行状态
质 控

选择项目
结果累积
累积

7性能参数
线性范围：3~26g/L ，不准确度允许范围X±15.0% ，不精密度CV＜5.0%。

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7性能参数
线性范围：3~26g/L ，不准确度允许范围X±15.0% ，不精密度CV＜5.0%。对于超出线性范围的结果，用生理盐水对标本进行稀释再检测，结果乘以稀释倍数。
8生物参考区间
成人：4.8~ 5.9 %
9临床意义
9.1此试验用于评定糖尿病的控制程度。当糖尿病控制不佳时，糖化血红蛋白浓度高
至正常2倍以上。因为糖化血红蛋白是血红蛋白生成后与糖类经非酶促结合而成的。它的合成过程是缓慢且相对不可逆的，持续存在于红细胞120天生命期中，其合成速率与红细胞所处环境中的糖浓度成正比。因此，糖化血红蛋白所占比率能反映测定前1~2月内平均血糖水平。本实验已成为反映糖尿病较长时间血糖控制水平的良好指标。如果HbA1c的浓度高于10%，胰岛素的剂量就需要调整。在监护中的糖尿病患者，其中Hb1c的浓度改变2%,就具有明显的临床意义。
9.2此试验不能用于诊断糖尿病或判断天-天间的葡萄糖控制，亦不能用于取代每天家庭
查尿或血液葡萄糖。
9.3HbA1c水平低于确定的参考范围，可能表明最近有低血糖发作、Hb变异体存在或
红细胞寿命短。
9.4任何原因使红细胞生存期缩短，将减少红细胞暴露到葡萄糖中的时间，随HbA1c%
就会降低，即使这一时间平均血液葡萄糖水平可能是升高的。红细胞寿命缩短的原因，可能是溶血性贫血或其他溶血性疾病、链状细胞特征、妊娠、最近显著的血液丧失或慢性血液丧失等，当解释这些患者的HbA1c结果时应当小心。
10参考文献
[1] Roche cobas c 501糖化血红蛋白（免疫比浊法）测定试剂说明书。
[2]叶应妩，王毓三，申子瑜. 全国临床检验操作规程. 第3版. 南京：东南大学出版社，2006:347~350.

编制人：高强 审核人：王永锋 批准人：吴田明 生效日期：2014.01.01