蛋白相互作用.pdf

ThS itifiPiThermo Scientific Pierce蛋蛋白相互作用的研究方法和白相互作用的研究方法和实实践践蛋实蛋实罗罗 莎莎罗罗 莎莎Rosa Luo Ph.D.Application Scientist Biosciences DivisionThermo Fisher Scientific China酵母蛋白质相互作用图谱酵母蛋白质相互作用图谱?Thick blue lines represent literature-derived interactions from PreBIND+MIPS in the HMS-PCI dataset.?Thin orange lines represent potential novel interactions.Courtesy MDS Proteomics 2蛋白质相互作用技术蛋白质相互作用技术?Two Hybrid?CrosslinkingGeneticChemical?Phage DisplayM t tilli?Label-transferF BABEi?Mutational analysis?FeBABE mappingBiochemicalFluorescent?Immunoprecipitation(IP)CIi it ti(CIP)?ImmunofluorescencecolocalizationBiochemicalFluorescent?Co-Immunoprecipitation(Co-IP)?Pull-Down Assays?FRET(Fluorescence ResonanceEnergy Transfer)?Far Western3蛋白相互作用研究方法蛋白相互作用研究方法 免疫沉淀免疫沉淀(IP)富集富集纯化纯化检测兴趣蛋白检测兴趣蛋白富集富集、纯化纯化、检测兴趣蛋白检测兴趣蛋白用抗体捕获抗原用抗体捕获抗原Prey 免疫共沉淀免疫共沉淀(Co-IP)富集、纯化、检测兴趣蛋白富集、纯化、检测兴趣蛋白用抗体捕获抗原和互作蛋白用抗体捕获抗原和互作蛋白PreyBait用抗体捕获抗原和互作蛋白用抗体捕获抗原和互作蛋白 Pull-DownPrey确定蛋白之间的互作确定蛋白之间的互作用标签蛋白捕获结合蛋白用标签蛋白捕获结合蛋白PreyBait4传统的免疫沉淀传统的免疫沉淀(IP)+Step 2.Add sampleStep 1.Immobilize antibodypppyStep 4.Elute antibody:protein complexStep 3.Bind protein and wash away unbound protein+琼脂介质琼脂介质抗原抗原5琼脂介质琼脂介质Protein A/G抗原抗原传统的免疫沉淀碰到的困难传统的免疫沉淀碰到的困难IP)问题问题选择适合的树脂取液困难Either loss of beads or solution remainsEither loss of beads or solution remains with beads,contaminating sample抗体和抗原共洗脱Ab+AgAbAgHeavy ChainAntigenAb+AgAbAgLight Chain抗体被破坏6免疫沉淀免疫沉淀(Immunoprecipitation)AntigenPt iProteinA/G7IgG结合蛋白比较结合蛋白比较Recombinant Protein ARecombinant Protein GRecombinant Protein A/GRecombinant Protein L天然来源天然来源StaphylococcusStreptococcusN/APeptostreptococc天然来源天然来源StaphylococcusaureusStreptococcusN/APeptostreptococcus magnus产品来源产品来源E.coliE.coliE.coliE.coli分子量分子量44,60021,60050,46035,800SDS PAGE45 kDa32 kDa40 45 kDa36 kDaSDS-PAGE表观分子量表观分子量45 kDa32 kDa40-45 kDa36 kDaIgG结合位点数量结合位点数量4264结合位点数量结合位点数量白蛋白结合位点白蛋白结合位点NoNoNoNo最佳反应最佳反应pH8 255 8 27 5最佳反应最佳反应pH8.255-8.27.5Ig 结合位点结合位点FcFcFcVL-kappa8Pain:Selecting IgG binding resinAntigenProtein A 和 Protein G 对不同来源和不同亚型的抗体结合能力不同.Protein A只与 Fc 区域结合Pt iProtein对于IgG1和大鼠抗体结合力弱Protein G结合F 区和轻链ProteinA/GProtein G结合Fc 区和轻链对于IgA,IgM,IgE,等相对结合力较弱Protein A/GProtein GProtein A/G蛋白质工程技术，将Protein A 的两个结合位点和Protein G的4个抗体结合位点组ProteinA/GGProteinA合到一起能够分别与Protein A 和 G 结合的抗体均可与之结合9可与之结合A/G+is the most robust IgG binding protienA/G+A+G+ControlLFTPDFT PDFTPDFT PDKey:L=Lysate LoadFT=Flow ThroughPDSlP ll DAnti-PP2A(Mouse)LFTPDFT PDFTPDFT PDPD=Sample Pull DownControl=Lysate+resin(no antibody)Anti-Cdk2(Rabbit)()Anti-p53(Sheep)p(p)Conclusion:Thermo Scientific Pierce Classic IP Kit is compatible with most IgGspecies isotypes.10Antibody Binding Protein Specificity11Pierce Classic IP Kit 26146 样品样品样品样品（如细胞裂解液）（如细胞裂解液）抗体通过蛋白抗体通过蛋白A/G与基质结合与基质结合 用于从样品中纯化抗原用于从样品中纯化抗原用于从样品中纯化抗原用于从样品中纯化抗原 抗体与抗原一起被洗脱抗体与抗原一起被洗脱12取液困难离心柱的解决方案 Thermo Scientific Pierce Spin Columnsp Thermo Scientific Pierce IP Kits contain convenient spin columns Flip top cap for easy handling Screw cap for longer storage No decanting or transferring ofwashes or samples Centrifuging provides faster washingg g pg Tapered bottom provides improvedsample recovery(smaller volumesand more concentrated sample recovery)13py)Pierce Classic IP Kit 特点特点结果稳定结果稳定 Pierce使用离心管形式，使用方便，避免琼脂使用离心管形式，使用方便，避免琼脂/抗体及样品的抗体及样品的损失，降低非特异性损失，降低非特异性快速快速 一小时之内完成一小时之内完成洗脱条件温和洗脱条件温和 回收抗原不使用强烈的去污剂和还原剂回收抗原不使用强烈的去污剂和还原剂适用于大多数抗体使用方便适用于大多数抗体使用方便试剂盒提供全套试剂试剂盒提供全套试剂缺点缺点 抗体不能再利用抗体不能再利用 抗体在抗体在Western Blot上被显色，影响结果上被显色，影响结果14抗体影响实验结果抗体影响实验结果Ii iif PP2AiImmunoprecipitation of PP2A protein 抗原被抗体覆盖抗原被抗体覆盖AbAgAb+Ag抗原被抗体覆盖抗原被抗体覆盖IgG Heavy Chain（55kD)抗体重链抗原抗体重链抗原PP2AIgG Light Chain（25kD）抗体轻链抗体轻链二抗检测二抗检测15Clean-Blot IP Detection Reagent Clean-Blot IP 检测试剂检测试剂 只结只结合合未变性未变性的一的一抗抗只结未变性抗只结未变性抗 替代二抗替代二抗 用于用于IP结果检测或检测含内源结果检测或检测含内源IgG的组织细胞裂解液的组织细胞裂解液 去除变性的抗体对去除变性的抗体对Western Blotting结果的干扰结果的干扰抗体重链抗体重链AbAgAb+AgAbAgAb+Ag抗体重链抗体重链抗体重链抗体重链抗原抗体轻链抗原抗体轻链抗体重链抗体重链抗原抗体轻链抗原抗体轻链二抗检测二抗检测Clean-BlotIP 检测试剂检测试剂16Clean-Blot IP Detection Reagent让让IP结果更清晰结果更清晰Clean-Blot IP Detection Reagent(HRP)GAM-HRP p53 IP:Anti-p53 antibody(2 g)A431 total cell extract(500 g)?Western blot:Mouse anti-p53 antibody(BD Biosciences)(1 g/ml)Clean-Blot IP Detection Reagent(HRP)A431 total cell extract(500 g)Protein A Agarose Resin or Goat Anti-Mouse HRP(Product#31430,0.16 g/ml)SuperSignal West Pico ChemiluminescentSubstrate(Product#34080).17Clean-Blot IP 检测试剂检测试剂 Clean-Blot IP Detection Reagent(HRP)Product#21230 Package Size:2 5 mL Package Size:2.5 mL Kit(HRP)Product#21232 Clean-Blot IP Detection Reagent(HRP)2.5 mlClean Blot IP Detection Reagent(HRP)2.5 ml StartingBlock T20(TBS)Blocking Buffer 1L Pierce ECL Detection Reagent 1,Peroxide Solution 125 ml Pierce ECL Detection Reagent 2,Luminol Enhancer Solution 125 mlg,Clean-Blot IP Detection Reagent(Alkaline Phosphatase)Product#21233 Package Size:2.5 mLReferences：?Journal of Biological Chemistry,2010,Vol.285,5896-5906?Molecular Biology of the Cell,2009,Vol.20,43134323?Science Signaling 2008 Vol 1 4313 4323 ra1718?Science Signaling,2008,Vol.1,43134323,ra17Seize X抗体耦联抗体耦联26147Pierce Crosslink IP KitBeadProtein Aor GDSS交联剂交联剂BeadProtein Aor G未结合抗体抗体被共价结合到蛋白未结合抗体抗体被共价结合到蛋白A，G上上试剂盒组成试剂盒组成Protein A/G Plus Agarose,0.55mLDSS Crosslinker,8 x 2mgCoupling Buffer(20X),25mLIP Li/Wh B ff250LDSS 交联剂：交联剂：将抗体共价耦联到琼脂固相化的将抗体共价耦联到琼脂固相化的IP Lysis/Wash Buffer,2 x 50mLConditioning Buffer(100X),5mLTris-Buffered Saline(20X),25mLElution Buffer,50mL将抗体共价耦联到琼脂固相化的将抗体共价耦联到琼脂固相化的Protein A或或G上上,Lane Marker Sample Buffer(5X),5mLControl Agarose Resin,2mLSpin Columns and Collection Tubes1926147Pierce Crosslink IP Kit特点特点 抗体非共价结合到蛋白抗体非共价结合到蛋白 A/G Plus上上抗体非共价结合到蛋白抗体非共价结合到蛋白 A/G Plus上上 DSS 交联剂共价结合抗体和蛋白交联剂共价结合抗体和蛋白A/G Plus 抗体不被洗脱下来抗体不被洗脱下来优点优点优点优点 高高/中蛋白结合产量中蛋白结合产量 可可以使用纯化和未纯化的抗以使用纯化和未纯化的抗体体 可可以使用纯化和未纯化的抗以使用纯化和未纯化的抗体体 固定化 抗体反复使用固定化 抗体反复使用 抗体不被洗脱抗体不被洗脱，不影响抗原的检测不影响抗原的检测抗体不被洗脱抗体不被洗脱，不影响抗原的检测不影响抗原的检测 DSS交联可能需要优化交联可能需要优化实用实用但操作步骤较多但操作步骤较多20实用实用，但操作步骤较多但操作步骤较多Seize Primary抗体耦联抗体耦联26148Pierce Direct IP KitONH2HCHBeadCBeadNAminoLink Plus SupportPrimary AntibodyImmobilized Antibody SupportAminoLink PlusAminoLink Plus Coupling Resin,2mLCoupling Buffer(20X),25mLQuenching Buffer,50mLWash Solution,50mL试剂盒组成试剂盒组成AminoLink Plus直接将抗体共价耦联到胺基活化的凝胶上直接将抗体共价耦联到胺基活化的凝胶上Wash Solution,50mLSodium Cyanoborohydride Solution(5 M),0.5mLIP Lysis/Wash Buffer,2 x 50mLConditioning Buffer(100X),5mLTris-Buffered Saline(20X),25mL(),Elution Buffer,50mLLane Marker Sample Buffer(5X),5mLControl Agarose Resin,2mLSpin Columns and Collection Tubes21pPierce Direct IP Kit 26148特点特点 无需蛋白无需蛋白A/G，抗体直接共价结合在，抗体直接共价结合在基质上基质上基质上基质上 无需交联剂，无需优化交联步骤无需交联剂，无需优化交联步骤抗抗体不被洗脱下来体不被洗脱下来 抗抗体不被洗脱下来体不被洗脱下来优缺点优缺点 高高/中蛋白结合产量中蛋白结合产量 固定化 抗体抗原反复使用固定化 抗体抗原反复使用 抗体不被洗脱，不影响抗原的检测抗体不被洗脱，不影响抗原的检测 抗体缓冲液不能够含有干扰成分（胺抗体缓冲液不能够含有干扰成分（胺基基基团基团）基基基团基团）?Tris?Glycine?Gelatin22?Gelatin?BSA?Other proteins三种三种IP产品比较产品比较：Classic vs.Crosslink vs.Direct ClassicCrosslinkDirectProtein A,GAntibodies交联剂交联剂23不同不同IP结果比较结果比较GFP Protein spiked into MOPC cell lysate杂质少无干扰杂质少无干扰24三种三种IP方法比较方法比较TraditionalPiercePiercePierceFeatureTraditionalIPMethodPierceClassicIPKitPierceCrosslinkIPKitPierceDirectIPKitUseshighbindingcapacityresinVariableYes(Protein A/G+)Yes(Protein A/G+)Yes(AminoLink+)(ProteinA/G+)(ProteinA/G+)(AminoLink+)Crosslinker mediatedimmobilizationNoNoYesNoRequires purified antibody inNoNoNoYesRequirespurifiedantibodyinaminefreeandproteinfreestoragesolutionNoNoNoYesAntibody covalently attached toNoNoYesYesAntibodycovalentlyattachedtoresinNoNoYesYesAntibodyisorientedYesYesYesNoAntibodyeluteswithantigenYesYesNoNoAntigenrecoverymethodBoilingw/SDS(LowpH)LowpHelution(Boilingw/SDS)LowpHelutionLowpHelutionSDS)RelativeantigenrecoveryVariableHighestHighHighImmobilizedantibodycanbeNoNoPossiblePossible25reusedPierce Co-IP Kit 26149PreyBaitPreyBaitHighlightsgg 与Direct IP kit原理相同 抗体直接与AminoLink bead交联 需要摸索适合蛋白质间相互作用和蛋白与抗体相互作用的条件26Pierce HA-or c-Myc Tag IP/Co-IP Kit 23610/20Anti-HA Anti-cMyc偶联常用抗体偶联常用抗体y适用于过表达并含有适用于过表达并含有27适用于过表达并含有适用于过表达并含有HA/c-Myc蛋白标签的体系蛋白标签的体系Previous Seize kits versus new Pierce IP KitsPrevious KitsNew KitsS iCli Pt i APierce Classic IP Kit(26146)Seize Classic Protein ASeize Classic Protein G Seize Classic MammalianPierce Crosslink IP KitSeize X Protein ASeize X Protein G(26147)PiDit IP KitSeize X Mammalian(G)Seize PrimaryPierce Direct IP Kit(26148)Seize PrimarySeize Primary MammalianProFound Co IPPierce Co-IP Kit(26149)ProFound Co-IPProFound Co-IP Mammalian 28IP and co-IP方便可靠方便可靠易于检测易于检测节约抗体节约抗体29Capturing Protein Interactions 使用交联剂使用交联剂 通过共价结合捕获相互作用（弱）的蛋白通过共价结合捕获相互作用（弱）的蛋白30Crosslinkers(交联剂交联剂)传统交联剂传统交联剂短碳链两端均有活化基团Example:BS3OOOONaNOOOONOOOSOOOSOONa在分子间形成共价连接O用于稳定蛋白质间的相互作用每一端均可与特定的化学基团发生反应(-NH2,-SH,-COOH,-C=O)31Diazirine Crosslinkers(双吖丙啶双吖丙啶)带有琥珀酰亚胺和双吖丙啶两个不同的功能基团短化学链适于进行“fishing”实验可对蛋白进行标记并找出与之发生相互作用的蛋白可对蛋白进行标记，并找出与之发生相互作用的蛋白In a protein mixture or inside cells高度可控的交联操作 在适宜条件下，UV激活激活diazirine基团短的化学链保了交联是发生在真发生相作用的两个蛋白之间经短的化学链保证了交联是发生在真正发生相互作用的两个蛋白之间。经过活化的卡宾会和靠近的任何分子形成共价键，稳定结合交联效率高于另一个用UV激活的交联剂aryl azide32Crosslinking标记标记相互作用相互作用空间靠近空间靠近相互作用相互作用空间靠近空间靠近对蛋白相互作用的锁定是易于检测和可控的对蛋白相互作用的锁定是易于检测和可控的交联交联33对蛋白相互作用的锁定是易于检测和可控的对蛋白相互作用的锁定是易于检测和可控的Label Transfer Reagents 标记转移标记转移 鉴定未知的相互作用的蛋白鉴定未知的相互作用的蛋白34Label Transfer Reagents什么是标记转移试剂?将交联剂和生物素化试剂相结合的产物 将生物素标记从纯化了的Bait蛋白上转移到未知的Prey蛋白什么研究会用到这类试剂?什么研究会用到这类试剂 已经有纯化好的Bait蛋白，而希望对与其发生相互作用的蛋白进行研究研究 在体外对酵母双杂交，Pull-Download Assay或者是Co-IP的结果进行验证行验证35Label Transfer标记标记相互作用相互作用传传递递相互作用相互作用空间靠近空间靠近传传鉴鉴定未知相互作用蛋白定未知相互作用蛋白连接连接鉴鉴定未知相互作用蛋白定未知相互作用蛋白36蛋白质相互作用的研究方法实战一蛋白质相互作用的研究方法实战一某实验室通过大规模酵母双杂交数据（或蛋白芯片、TAP/串联亲和层析和BN胶，通过质谱数据分析），发现X蛋白可能联亲和层析和BN胶，通过质谱数据分析），发现X蛋白可能与Y蛋白发生相互作用，欲进行深入验证。方方原核水平蛋白原核水平蛋白方方案案细菌蛋白的表达和裂解细菌蛋白的表达和裂解GST/His Pull down原核水平存在蛋白原核水平存在蛋白原核水平蛋白原核水平蛋白相互作用验证相互作用验证GST/His Pull downELISA原核水平存在蛋白原核水平存在蛋白两两相互作用两两相互作用真核水平蛋白真核水平蛋白相互作用验证相互作用验证过表达体系过表达体系HA/Myc Co-IP相互作用区域验证相互作用区域验证相互作用验证相互作用验证内源表达体系内源表达体系截短体截短体 Co-IPclassicDirect哺乳动物水平存在蛋哺乳动物水平存在蛋白两两相互作用白两两相互作用真核蛋白裂解试剂盒真核蛋白裂解试剂盒Co-IP37Directcrosslink白两两相互作用白两两相互作用蛋白质相互作用的研究方法实战二蛋白质相互作用的研究方法实战二某实验室发现X蛋白能够和对Hela细胞发挥特定的生物学功胞够未能，欲寻找在Hela细胞中能够与X蛋白发生相互作用的未知蛋白质Y，准备开展实验。方案方案GST组织抽提液质谱样品处理组织抽提液质谱样品处理Pull downGSTHis银染银染差异蛋白质谱鉴定差异蛋白质谱鉴定进入方案进入方案进入方案进入方案fUV crosslink特异标记蛋白分离特异标记蛋白分离质谱鉴定质谱鉴定进入方案进入方案一一进入方案进入方案一验证路线验证路线一验证路线验证路线Label Transfer特异标记蛋白分离特异标记蛋白分离质谱鉴定质谱鉴定38蛋白蛋白:核酸相互作用核酸相互作用39常见的研究核酸：蛋白相互作用的方法：常见的研究核酸：蛋白相互作用的方法：DNA：蛋白：蛋白RNA：蛋白：蛋白DNA EMSARNA EMSADNAEMSARNAEMSAPulldownAssayRNAPulldownAssayThetranscriptionfactorassayFISH/ISHTechniqueReporterAssaysChIP Assays40EMSA：Electrophoretic Mobility Shift Assay检测蛋白质-核酸相互作用检测蛋白质-核酸相互作用 相互作用部位相互作用部位相相互作用强弱互作用强弱 相相互作用强弱互作用强弱 鉴定调控序鉴定调控序列列鉴定调控序鉴定调控序列列 应用最广应用最广应用最广应用最广41EMSA原理原理DNA-或或RNA-蛋白复合物比未结合蛋白的蛋白复合物比未结合蛋白的DNA/RNA移动得慢移动得慢42LightshiftTM化学发光化学发光EMSA 特点特点（DNA/RNA）安全：化学发光检测安全：化学发光检测 灵敏灵敏：亚飞克级亚飞克级，等同于同位素灵敏度等同于同位素灵敏度灵敏灵敏：亚飞克级亚飞克级，等同于同位素灵敏度等同于同位素灵敏度 稳定：生物素标记的探针可保存一年稳定：生物素标记的探针可保存一年 生物素末端标记，不影响相互作用生物素末端标记，不影响相互作用 快速：从标记探针到快速：从标记探针到EMSA结果分析只需一天的时间结果分析只需一天的时间43蛋白：核酸相互作用产品蛋白：核酸相互作用产品 EMSA试剂盒试剂盒LightShift 化学发光化学发光EMSA 试剂盒试剂盒（#）20148X:Positive control(Biotin-EBNA Control DNA（Pro#20148）(+Unlabeled EBNA DNA+EBNA Extract)EMSA Binding Buffer 5X EMSA loading buffer MgCl2,KCl,NP-40,EDTA and Glycerol for optimization Poly(dIdC)89880（化学发光检测）（化学发光检测）:Streptavidin-HRP p Luminol/enhancer solution Stable peroxide solution EMSA Blocking buffer EMSA wash buffer Substrate equilibration buffer44DNA EMSA 阳性对照45蛋白：核酸相互作用产品蛋白：核酸相互作用产品 EMSA试剂盒试剂盒LightShift 化学发光化学发光 RNA EMSA 20158X:Positive control(IRE RNA probe+liver试剂盒（试剂盒（Pro#20158）Positive control(IRE RNA probe+liver extract containing IRP protein)REMSA Binding Buffer 5X REMSA loading buffer 5X REMSA loading buffer MgCl2,KCl and Glycerol for optimization Nuclease-free water 500 mM DTT89880（化学发光检测化学发光检测）:500 mM DTT tRNA89880（化学发光检测化学发光检测）:Streptavidin-HRP Luminol/enhancer solution Stable peroxide solutionStable peroxide solution EMSA Blocking buffer EMSA wash buffer Substrate equilibration buffer46qRNA EMSA 阳性对照47Nuclear and Cytoplasmic Protein Extraction(NE-PER)优化后的即用型即用型试剂：CER I 和 CER II:胞质蛋白提取试剂，NER：核蛋白提取试剂 细胞培养物和匀浆的组织均可使用 与后续分析兼容与后续分析兼容：EMSA，Western blotting,报告基因检测等（将NER g1:2 稀释，而CER1:4稀释）.逐步顺序分离胞质和核蛋白，2小时内小时内即可完成逐步顺序分离胞质和核蛋白，2小时内小时内即可完成 只需台式离心机和冰盒即可完成操作，无需反复冻融和长时间超速离心 温和的试验流程保证了蛋白的完整性完整性 温和的试验流程保证了蛋白的完整性完整性胞质蛋白核蛋白胞质蛋白核蛋白48生物素标记探针生物素标记探针DNA探针和探针和RNA探针探针89818:DNA标记标记 5X TdT Reaction Buffer用于用于:DNA EMSA(Product#20148)5X TdT Reaction BufferTerminal Deoxynucleotidyl Transferase(TdT)Biotin-11-UTPUnlabeled Control Oligo DNA EMSA(Product#20148)生物素化DNA 的pull-downs Northern 或 Southern 杂交Biotin-Control Oligo Northern 或 Southern 杂交 原位杂交20610:RNA标记标记 T4 RNA Ligase Ligase reaction buffer用于用于:g Biotinylated Nucleotide Control RNA Biotinylated Control RNA RNA EMSA(Product#20158)生物素化RNA pull-downs RNase inhibitor Nuclease-Free water DMSO,PEG,Glycogen for optimization Northern Blotting49高灵敏度高灵敏度同样曝光时间,是地高辛灵敏度的8倍同样曝光时间,是地高辛灵敏度的8倍Biotinylated IRE(2 min).05 .1 .25 .38 .5 .68 .75 1 fmol32P IRE(over night)生物素末端标记试剂盒与传统的地高辛，生物素末端标记试剂盒与传统的地高辛，P32标记在灵敏性，曝光标记在灵敏性，曝光50时间和信噪比的结果比较时间和信噪比的结果比较极高的信噪比和极短的曝光时间极高的信噪比和极短的曝光时间51LightshiftTM化学发光化学发光EMSA EMSA蛋白转录复合体蛋白转录复合体/核酸相互作用核酸相互作用基因转录调控研究重要工具常用且好用的试剂盒高灵敏性高灵敏性低背景低背景非放射性，生物素标记探针非放射性，生物素标记探针高灵敏性高灵敏性，低背景低背景操作简单迅速操作简单迅速从标记到检测的全套试剂盒从标记到检测的全套试剂盒LightShift Chemiluminescent EMSA KitBiotin 3 End DNA/RNA Labeling Kit比地高辛探针灵敏！比地高辛探针灵敏！52EMSA的局限性的局限性 蛋白和核酸结合物不稳定，易解离易解离蛋白和核酸结合物不稳定易解离易解离 蛋白和核酸复合物的迁移率受到诸多因素的影响受到诸多因素的影响 不能直接提供与蛋白发生相互作用的核酸位点的信息核酸位点的信息 体外实验体外实验不能严格阐述体内的机制体外实验体外实验不能严格阐述体内的机制53ChIP试剂盒试剂盒染色质免疫沉淀技术是 染色质免疫沉淀技术（ChIP）是目前研究体内体内DNA与蛋白质相互作用的方法。ChIP可以检测体内反式因子与DNA的动态作用，还可以用来研究组蛋白的各组蛋白的各种共价修种共价修饰与基因表达的关饰与基因表达的关种共价修种共价修系系。目前已经成为表观遗传信息研究的主要方法。究的主要方法。54ChIP试剂盒试剂盒实验流程实验流程55ChIP试剂盒试剂盒 产品优势产品优势ChIP试剂盒的优势试剂盒的优势特点优势特点优势快快速速 经过优化从开始到结束只需 8 hours的时间快快优化从开始到结束只需的时间灵敏灵敏 每次ChIP实验只需要 1X106的细胞 可以利用培养的细胞或者组织进行ChIP灵活灵活可以利用培养的细胞或者织进行 也可以用于其它物种酵母或小鼠等 试剂盒与其他ChIP级的抗体兼容 低泡裂解试剂与超声和MNase兼容完整完整 试剂盒中带有完成ChIP实验所需的所有试剂可提供ChIP级抗体(可为客户定制)可提供ChIP级抗体(可为客户定制)可靠可靠 提供一致的高质量DNA用于进行定量PCR实验56Find Technical Handbooks at th/