溶液各种配制.doc

附录：常用试剂配制及应用

一、常用缓冲液、试剂的配制
碳酸盐缓冲液(Carbonate-Bicarbonate Buffer)
由于碳酸盐pH值偏碱，因此，常用于pH>9的缓冲液配制（附表1）。
附表1. 0.2 mol/L碳酸盐缓冲液（pH9.2～10.7）
pH
0.2mol/L Na2CO3
(ml)
0.2mol/L NaHCO3 (ml)
pH
0.2mol/L Na2CO3
(ml)
0.2mol/L NaHCO3 (ml)
9.2
4.0
46.0
10.0
27.5
22.5
9.3
7.5
42.5
10.1
30.0
20.0
9.4
9.5
40.5
10.2
33.0
17.0
9.5
13.0
37.0
10.3
35.5
14.5
9.6
16.0
34.0
10.4
38.5
11.5
9.7
19.5
30.5
10.5
40.5
9.5
9.8
22.0
28.0
10.6
42.5
7.5
9.9
25.0
25.0
10.7
45.0
5.0
磷酸缓冲液(Phosphate Buffers，PB)
磷酸盐是使用最广泛的一种缓冲剂，由于它们是二级解离，有二个pKa 值，所以用它们配制的缓冲液，pH 范围最宽。NaH2PO4：pKa1＝2.12，pKa2＝7.21； Na2HPO4：pKa1＝7.21，pKa2＝12.32。
另外，磷酸盐还有钾盐分子形式，一般来说，低温时钠盐难溶，钾盐易溶，因此，配制细胞培养用试剂时常常添加钾盐试剂，但若配制十二烷基硫酸钠（SDS）-聚丙烯酰胺凝胶电泳的缓冲液时，只能用钠盐而不能用钾盐，因为SDS会与磷酸钾生成难溶的十二烷基硫酸钾。
磷酸缓冲液的优点为：①可配制成不同离子强度的缓冲液；②适用pH缓冲范围较宽；③受温度影响缓冲液pH值变化较小；④离子强度对缓冲液pH影响较小，如0.1mol/L缓冲液稀释10倍其pH变化小于0.1。
磷酸缓冲液的缺点是：①磷酸盐易与钙离子（Ca2+）、镁离子（Mg2+）及重金属离子结合生成不溶的沉淀物；②可能干扰某些生物化学反应过程，如对某些酶的催化活性具有一定程度的抑制作用。
NaH2PO4的pH值偏酸性，可用作pH<4的缓冲液。
Na2HPO4的pH值偏碱性，可用作pH>10的缓冲液。
而pH＝6～8的中性缓冲液是更常用的缓冲液，需要NaH2PO4与Na2HPO4两种磷酸盐混合配制（附表2）。
附表2. 0.2 mol/L磷酸盐缓冲液（pH5.7～8.2）
pH
0.2mol/L NaH2PO4
(ml)
0.2mol/L Na2H PO4 (ml)
pH
0.2mol/L NaH2PO4
(ml)
0.2mol/L Na2H PO4 (ml)
5.7
93.5
6.5
7.0
39.0
61.0
5.8
92.0
8.0
7.1
33.0
67.0
5.9
90.0
10.0
7.2
28.0
72.0
6.0
87.7
12.3
7.3
23.0
77.0
6.1
85.0
15.0
7.4
19.0
81.0
6.2
81.5
18.5
7.5
16.0
84.0
6.3
77.5
22.5
7.6
13.0
87.0
6.4
73.5
26.5
7.7
10.5
89.5
6.5
68.5
31.5
7.8
8.5
91.5
6.6
62.5
37.5
7.9
7.0
93.0
6.7
56.5
43.5
8.0
5.3
94.7
6.8
51.0
49.0
8.1
4.2
95.8
6.9
45.0
55.0
8.2
3.0
97.0
磷酸盐缓冲溶液（Phosphate-buffered saline, PBS)
磷酸盐缓冲液是在磷酸缓冲液基础上添加NaCl以维持溶液的渗透压，因此，PBS适用于做细胞缓冲液，常用PBS配制如下。
NaCl 8g
KCl 0.2g
Na2HPO4 1.44g
KH2PO4 0.24g
在800ml蒸馏水中溶解，用HCl调节溶液的pH值至7.2～7.4加水定容至1L，15psi（1.05kg/cm2）高压灭菌20min，室温保存备用。
Tris缓冲液（Tris-HCl Buffer, TB）
Tris的pH值偏于碱性，因此，通过添加HCl调节pH至所需值，Tris-HCl缓冲液的离子强度（mol/L）是专指Tris的浓度，如某一特定pH的0.05 mol/L Tris缓冲液的配制是将50ml 0.1 mol/L Tris碱溶液与附表3所示相应体积（ml）的0.1 mol/L HCl混合，加水至将体积100ml，即为0.05 mol/L Tris缓冲液。
另外，按附表3制备的缓冲液，由于试剂来源的不同，缓冲液pH可能与所需略有差异，此时可通过稍许减少或增加HCl用量，精细调节pH至所需值。
附表4. 0.05 mol/L Tris缓冲液
pH
需0.1 mol/L HCl（ml)
pH
需0.1 mol/L HCl（ml)
7.1
45.7
8.1
26.2
7.2
44.7
8.2
22.9
7.3
43.4
8.3
19.1
7.4
42.0
8.4
17.2
7.5
40.3
8.5
14.7
7.6
38.5
8.6
12.4
7.7
36.6
8.7
10.3
7.8
34.5
8.8
8.5
7.9
32.0
8.9
7.0
8.0
29.2

Tris盐缓冲液（TBS）：
Tris盐缓冲液是在Tris缓冲液基础上添加NaCl以维持溶液的渗透压，因此，TBS也适用于做细胞缓冲液，常用TBS配制如下。
8g NaCl、0.2g KCl以及3g Tris溶解于800ml蒸馏水中，加入0.015g酚红并用HCl调pH至7.4用蒸馏水定容至1L，分装后在15psi（1.05kg/cm2）高压灭菌20min，室温保存。
现在常用Tris盐缓冲液通常不加pH指示剂，而且该溶液如果不用于细胞培养，通常不加KCl及酚红。
Hank’s液 (Hank’s Balanced Salt Solution)
Hank’s液是一种平衡盐溶液，主要用于细胞培养取材时组织块的漂洗、细胞的漂洗等。
贮存液A液：
(I)NaCl 80g
KCl 4g
MgSO4·7H2O 1g
MgCl2·6H2O 1g
用双蒸馏水定容至450ml。
(II)CaCl2 1.4g (或CaCl2·2H2O 1.85g)
用双蒸馏水定容至50ml。
将I和II液混合，即成A液。
贮存液B液：
Na2HPO4·12H2O 1.52g，
KH2PO4 0.6g,
酚红 0.2g,
葡萄糖 10.0g,
酚红应先置研钵内磨细，然后按配方顺序一一溶解，用双蒸馏水定容至500ml。
(3)应用液：A、B储存液分别经112.6℃湿热灭菌20min，取A和B液各25ml，加无菌双蒸馏水至450ml，使用前用无菌的3.5%或5.6% NaHCO3调至所需pH。
注意：药品必须全部用A.R试剂，并按配方顺序加入，用适量双蒸水溶解，待前一种药品完全溶解后再加入后一种药品，最后补足水到总量。
无Ca2+、Mg2+ Hank’s液（Hank’s Solution without calcium, magnesium sulfate）
NaCl 80g,
KCl 4g,
Na2HPO4·12H2O 1.52g，
KH2PO4 0.6g,
葡萄糖 10g,
用双蒸馏水溶解后，加入0.4％酚红溶液50ml，再加入双蒸水至1000ml，112.6℃湿热灭菌20min，4℃ 冰箱保存。临用前将原液用无菌双蒸水作1：10倍稀释，用无菌的3.5%或5.6% NaHCO3调至所需pH。
pH7.2柠檬酸盐缓冲液(Citrate Buffer)
柠檬酸 0.327g
柠檬酸钠 2.63g
磷酸氢钠 0.222
葡萄糖 0.00255mg
蒸馏水加至100ml。
pH3.3枸橼酸-磷酸盐缓冲液（Citric acid- Phosphate Buffer)
0.131mol/L citrate acid，0.066mol/L Na2HPO4，等量混合，调节pH至3.3。
0.5 mol/L EDTA, pH 8.0
EDTA·2H2O 186.1 g
NaOH ～20 g
将EDTA·2H2O加入800ml水中，在磁力搅拌器上剧烈搅拌。用NaOH调节pH至8.0，EDTA直到接近pH 8.0才完全溶解，定容至1L。分装后高压蒸汽灭菌。
0.4%酚红溶液
取酚红0.4g置于研钵中逐滴加入1mol/L NaOH溶液11.28ml，边研磨边使酚红转变为钠盐溶于水中，加双蒸水至100ml，过滤后，4℃ 冰箱保存。
醋酸钾（Potassium Acetate）
在60ml 5mol/L醋酸钾溶液中，加入11.5ml冰醋酸和28.5ml水。该溶液用于碱性裂解。
3mol/L 醋酸钠（Sodium Acetate），pH5.2和pH7.0
在800ml水中溶解408.1g三水醋酸钠，用冰乙酸调pH至5.2或用稀释乙酸调pH至7.0，加双蒸水至1L。分装后高压灭菌。
柠檬酸钠缓冲液(Sodium Citrate Buffer)
柠檬酸钠 1.8g
HCl(1mol) 4ml
无水乙醇 95ml
先用100ml去离子水溶解柠檬酸钠，然后加入HCl和无水乙醇，再补充去离子水至总量200ml。
饱合硫酸铵溶液(Saturated Ammonium Sulfate Solution)
取500ml双蒸馏水，加入约400克硫酸铵，水浴加热至70℃，磁力搅拌器充分搅拌，直到加入的硫酸铵不再溶解，以氨水（也可用NaOH）调pH7.2，室温保存。

二、酶免疫检测常用试剂配制
包被液(Coating Buffer)（pH9.5碳酸盐缓冲液）
Na2CO3·10H2O 8.58g
NaHCO3 5.8g
溶于双蒸水至1000ml。
封闭液(Confining liquid)（5%脱脂乳-PBS溶液，pH7.4）
脱脂乳 50g
加0.02mol/L pH7.4磷酸盐缓冲液（PBS）至1000ml溶解。
洗液(washing liquid)
氯化钠 8.0g
磷酸二氢钾 0.2g
磷酸氢二钠（12H2O） 2.9g
吐温-20 0.5ml
加去离子水至1000ml溶解即可。
终止液(stop buffer)（2mol/L H2SO4）：
21.7ml H2SO4 加去离子水至200ml。
缓冲甘油(glycerine buffer)
甘油 9份
PB（pH8.0） 1份
将9份甘油与1份PB合并，充分混匀。
0.5%H2O2-甲醇液(Hydrogen Peroxide-Methanol Solution)（总体积120ml）
3%H2O2 20ml
甲醇 100ml
DAB-H2O2底物缓冲液(DAB- H2O2 Substrate Buffer)
取6mg二氨基联苯胺(3,3’-Diaminobenzidine Tetrahydrochloride DAB)溶解于10ml 0.05mol Tris-HCl pH7.6。使用前取0.3%H2O2 0.1ml加入到DAB溶液中(H2O2的终浓度为0.003%)。如有沉淀生成，则用滤纸过滤。
5-溴-4-氯-3吲哚磷酸/四唑氮蓝底物显色液（BCIP/NBT Substrate Solution）
贮存液配制：
NBT：在10ml 70%的乙醇中溶解0.5g NBT。
BCIP：在10ml 100%二甲基甲酰胺中溶解0.5g BCIP。
贮存液4℃保存，可稳定一年。
底物显色液：
取66μl NBT贮液与33μl BCIP加入到10ml碱性磷酸酶缓冲液中，充分混匀，底物显色液应在用前1小时内配制。

三、细胞相关试剂配制
L-谷氨酰胺（L-G）溶液（L-glutamin Solution）（0.2 mol/L）
称2.9 g L-谷氨酰胺（分子量为146.15）用去离子水溶解至100 ml，过滤除菌，分装小瓶，4～5 ml/瓶，-20℃冻存。
100x青-链霉素（双抗）溶液（P/S Penicillin/Streptomycin Solution）
取青霉素G（钠盐）100万单位和链霉素（硫酸盐）1 g，溶于100 ml去离子水中，分装小瓶，4～5 ml/瓶，-20℃冻存。
7.5% NaHCO3溶液（NaHCO3 Solution）
称分析纯NaHCO3 7.5 g，用去离子水溶解至l00ml，过滤除菌，分装小瓶，4～5 m1/瓶，盖紧瓶塞，4℃保存。
HEPES溶液（HEPES Solution）（1mol/L）
称23.83 g HEPES（N-2-Hydroxyethylpiperazine-N'-2-ethanesulfonic acid，N-2-羟乙基呱嗪-N'-2-乙基磺酸，分子量为238.3），用去离子水溶解至100 ml，过滤除菌，分装小瓶，4～5 m1/瓶，4℃保存。
氨基喋呤（A）贮存液（Aminopterin Stocking Solution）（100×, 4×10-5 mol/L）
称1.76 mg氨基喋呤（Aminopterin, 分子量440.4），溶于90 m1去离子水中，滴加l mol/L NaOH 0.5 m1，并不断搅动，待氨基喋呤完全溶解后，加1 mol/L的HCl 0.5m1中和，再补加去离子水至100 m1。过滤除菌，分装小瓶，2 ml/瓶，-20℃冻存。
次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷贮存液（HT Stocking Solution）（100×,H: 10-2 mol/L; T: 1.6×10-3 mol/L）
称取136.l mg次黄嘌呤（Hypoxanthine，分子量136.1）和38.8 mg胸腺嘧啶核苷（Thymidine，分子量242.2），加去离子水至l00 ml，置45～50℃水浴中使完全溶解，过滤除菌，分装小瓶，2 m1/瓶，-20℃冻存。用前可置37℃加温助溶。
HAT培养液
培养液98 ml，A贮存液1 m1，HT贮存液l ml。
秋水仙素溶液（colchicine Solution）
称取10 mg秋水仙素，溶于100 m1生理盐水中（即为100 μg/ml），过滤除菌后，分装小瓶，－20℃冻存备用。
Alsever’s血细胞保存液（Alsever’s Solution）
葡萄糖 2.05g,
柠橡酸钠 0.8g,
NaCl 0.42g，
蒸馏水 l00ml。
以上成分混匀后，微加温使其溶解后，用柠檬酸调节pH 6.1，分装于三角瓶中(30～50ml/瓶), 113℃湿热灭菌15min，4℃保存备用。
细胞冻存液(Freezing Medium)
50%小牛血清；40%不完全培养液；10%DMSO（二甲基亚砜）。
0.025%胰蛋白酶－0.2%EDTA细胞消化液(Trypsin-EDTA Solution)
A: 2.5%胰蛋白酶:
胰蛋白酶 2.5g
磷酸缓冲盐溶液 100ml
过滤除菌保存。
B: 0.2%二乙胺四乙酸二钠（EDTA）
EDTA 0.2g
双蒸馏水 100ml
高压灭菌保存。
取A液1份，加B液99份，混匀，分装-20℃保存。
0.83% NH4CI溶液(Ammonium Chloride Solution)
NH4CI 0.83g
KHCO3 0.1g
EDTA·2Na 0.0037g
蒸馏水加至100ml。
Tris-NH4Cl溶液(Tris-Ammonium Chloride Solution)
NH4Cl 3.735g/450ml双蒸水+Tris 1.3g/50ml双蒸水（pH 7.65）。
细胞裂解液（Cell Lysis Solution）
20mmol/L HEPES(pH 7.5)
150mmol/L NaCl
1 mmol/L EDTA
10mg/ml leupeptin
1mmol/L PMSF
1% Triton X-100
0.5% deoxicholate (sodium salt)
0.1% SDS
组织匀浆缓冲液（Histolysis Buffer）
50mmol/L Tris-HCl (pH7.5)
150mmol/L NaCl
1% NP40
1mmol/L phenylmethylsulfonyl fluoride
4mg/ml leupeptin
1mg/ml aprotinin
细胞核裂解液(Nuclear Lysis Buffer)
10mmol/L Tris-HCl (pH8.0)
150mmol/L NaCl
10mmol/L EDTA
蛋白酶K 100µg/ml
0.4%SDS（最后加）
10mmol/L苯甲基磺酰氟（PMSF）
在异丙醇中溶解PMSF至1.74mg/ml，即10mmol/L，分装后保存于-20℃，如果需要的话，可将储存液制备至17.4mg/ml，即100mmol/L的高浓度。
闪烁液(Scintillation Solution)
PPO (2,5-二苯基) 5.0g、POPOP（1,4-双－5－苯基）0.5g溶于1000ml二甲苯中。也可将POPOP加入二甲苯，在37℃水浴上溶解后，再加PPO，然后补足二甲苯。
3H-TdR 工作液（woking Solution）
按1:20的比例将浓度为1mCi/ml的3H－TdR用无血清的RPMI培养液稀释，终浓度为50µCi/ml。
肝素溶液的配制：
含有肝素的培养液可以使内皮细胞纯度提高，肝素加入全培养液中最终浓度为50ug/ml。因为现在市售的多为肝素钠，包装为约为0.56克/瓶，配制时，可将其溶于100ml三蒸水中，定容，过夜，然后过滤除菌，分装小瓶，保存温度为4 ℃ 。使用时，向100ml培养液中加入1ml（精确可加入0.9ml）即可。
Ⅰ型胶原酶：
0.1％Ⅰ型胶原酶溶液同胰蛋白酶一样配制和消毒灭菌。注意：因为Ⅰ型胶原酶分子颗粒比胰酶大，不容易过滤，因此可以用蔡式滤器过滤除菌。分装入10ml小瓶-20℃保存。 用时提前一小时37℃复温即可. 0.1%的I型胶原酶的配置，100mg的粉末状的I型胶原酶可以溶于100ml的DMEM/F12，0.22微米滤器过滤0.1%的I型胶原酶的配置，100mg的粉末状的I型胶原酶可以溶于100ml的DMEM/F12，0.22微米滤器过滤.

四、染色液配制（Prepration of Staining Solution）
苏木素液(Hematoxylin Solution)：
苏木素2.5g，乙醇25.0ml，钾明矾2.5g，氧化汞1.25g，冰乙酸20.0ml，蒸馏水500.0ml。配制方法是先将苏木素溶于乙醇中（稍加热）。将预先已溶解明矾的蒸馏水加入苏木素乙醇液中，使溶液尽快沸腾后，将火焰熄灭，慢慢加入氧化汞，防止溶液油溅出，再煮沸2min。将烧瓶立即浸入冷水中，当染液冷却后，加入醋酸，室温保存，用前过滤。
伊红Y染色液(Eosin Y Solution)
伊红Y 0.5～1.0g，蒸馏水75ml，95%乙醇25ml，冰乙酸1～2滴。先取少许蒸馏水加入伊红，用玻棒将伊红研碎，再加入全部蒸馏水，溶解后加入乙醇。
甲基绿染色液(Methyl Greeen Solution)
新购买的甲基绿需用氯仿处理去除甲基紫。方法是将2%甲基绿水溶液20ml倾入洁净分液漏斗，移去慢慢下沉带紫红色的氯仿，再加入新的氯仿10ml，如此反复更换氯仿，到无紫红色为止。该液作为贮存液，4℃保存。染色液：甲基绿贮存液5ml，5%派诺宁水溶液1ml，蒸馏水12ml，0.2mol/L乙酸钠(pH4.8)18ml（临用前配制，滤纸过滤）。
吖啶橙贮存液(Acridine Orange Stocking Solution)
10mg吖啶橙溶解于100ml PBS中，pH4.8～6.0滤过，4℃避光保存。
吉姆萨贮存液(Giemsa Solution)
吉姆萨染色粉1g先溶于少量甘油，在研钵内研磨30min以上，至看不见颗粒为止，再将全部(66ml)剩余甘油倒入，于56℃温箱内保温2h。然后再加入甲醇(66ml)，搅匀后保存于棕色瓶中。母液配制后放入冰箱可长期保存，一般刚配制的母液染色效果欠佳，保存时间越长越好。
临用时用pH7.4磷酸缓冲液稀释10倍，随配随用。
瑞氏染色液(Wright’s Solution)
瑞氏染色粉 0.3g
甘油 3ml
甲醇 97ml
将瑞氏染色粉放干燥研钵内磨细，加入甘油继续研磨，不断滴加甲醇并继续研磨，将上层溶解的染料倒入棕色瓶中，直至染料全溶后加甲醇至所需量。混匀后置棕色瓶中保存，用前过滤。一般配制后置室温一周便可使用，保存时间愈入，则染色效果愈佳。
吉姆萨-瑞氏染色液(Giemsa- Wright’s Staining Solution)
瑞氏染色粉0.3g
吉姆萨染色粉 0.03g
甲醇 100ml
将二种粉末置于研钵中磨细，再逐滴加入甲醇混匀后倒入棕色瓶中，塞紧瓶口并充分振荡。置室温溶解后使用。
噻唑兰（MTT）
称取250mgMTT，加50ml PBS（0.01mol/L，pH 7.4）在磁力搅拌器上搅拌30min，用0.22mm的微孔滤膜过滤除菌，分装，4℃保存。两周内有效。
台酚蓝染色液(Trypan Blue Solution)
A：台酚蓝染料 1g
蒸馏水 100ml
将染料置于研钵中边研磨边加入蒸馏水溶解。
B：NaCl 1.7g
蒸馏水 100ml
临用前A、B液1：1混合，离心沉淀，取上清供染色用。混合后的染液存放过久，易形成沉淀，故应新鲜配制。
染色时，取细胞悬液0.1ml加入新鲜配制的染色液一滴，室温下染5～10分钟，取一滴悬液于载波片上，加盖玻片，高倍镜下检查。死亡细胞膨大并染成浅蓝色，活细胞不着色，大小正常。

五、固定剂(Fixatives)
大多数神经激素、肽类物质为水溶性，在用于免疫细胞化学研究之前，常需固定。但肽类和蛋白质的物理、化学性质不同，因而对不同的固定方法或固定剂的反应也不同。某些固定剂甚至可同时破坏和/或保护同一抗原的不同抗原决定簇。因此，在进行免疫细胞化学研究之前，很有必要了解所要研究的物质（蛋白质或肽类）的化学性质，并根据需要来选择适宜的固定剂（或固定方法）以及改进固定条件。目前，免疫细胞化学研究中常用的固定剂仍为醛类固定剂，其中以甲醛类和戊二醛最为常用。
4%多聚甲醛-0.1mol/L磷酸缓冲液, pH7.3（formaldehyde-Phasphate Buffer）
　 多聚甲醛　　　　　　　　 40g
　　 0.1mol/L磷酸缓冲液　　　　　　至1000ml
　　 配制方法：称取40g多聚甲醛，置于三角烧瓶中，加入500～800ml 0.1mol/L磷酸缓冲液（Phosphate Buffer以下简称PB），加热至60℃左右，持续搅拌（或磁力搅拌）至完全溶解，通常需滴加少许1N NaOH才能使溶液清亮，最后补足0.1mol/L的PB于1000ml，充分混匀。
　　该固定剂较适于光镜免疫细胞化学研究，最好是动物经灌注固定取材后，继续浸泡固定2～24h。另外，该固定剂较为温和，适于组织标本的较长期保存。
4%多聚甲醛-磷酸二氢钠/氢氧化钠（formaldehyde-Sodium Phosphate/Sodium Hydroxide Buffer）
　　 A液：多聚甲醛　　　　 40g
　　 蒸馏水　　　　　　　　400ml
　　 B液：Na2HPO4·2H2O　　　　 16.88g
　　 蒸馏水　　　　　　　　 300ml
　　 C液：NaOH　　　　　　　　　 3.86g
　　 蒸馏水　　　　　　　　 200ml
配制方法：A液最好在500ml的三角烧瓶中配制（方法同前），至多聚甲醛完全溶解后冷却待用。注意，在溶解多聚甲醛时，要尽量避免吸入气体或溅入眼内。B液和C液配制好后，将B液倒入C液中，混合后再加入A液，以1N NaOH或1N HCl 将pH调至7.2～7.4，最后，补充双蒸水至1000ml充分混合，4℃冰箱保存备用。
该固定剂适于光镜和电镜免疫细胞化学研究，用于免疫电镜时，最好加入少量新鲜配制的戊二醛，使其终浓度为0.5%～1%。该固定剂较温和，适于组织的长期保存。组织标本于该固定液中，4℃冰箱保存数月仍可获得满意的染色效果。

六、蛋白电泳相关试剂
30％丙烯酰胺（Acrylmide）
丙烯酰胺 29g
N, N’-亚甲双丙烯酰胺 1g
溶于60ml水中，加热至37℃溶解，补加水至终体积100ml。0.45µM滤器过滤除杂质，置深色瓶中室温保存。
考马斯亮蓝R-250染色液（Coomassie Staining Solution）
1. 称取1 g考马斯亮蓝R-250，置于1 L烧杯中。
2. 量取250 ml的异丙醇加入上述烧杯中，搅拌溶解。
3. 加入100 ml的冰醋酸，搅拌均匀。
4. 加入650 ml的去离子水，搅拌均匀。
5. 用滤纸除去颗粒物质后，室温保存。
考马斯亮蓝脱色液（Destaining Solution）
量取下列溶液，置于1 L烧杯中，充分混合后使用。
醋酸 100ml
乙醇 50ml
dH2O 850ml
1mol/L二硫苏糖醇贮存液（DTT Stocking Solution）
用20ml 0.01mol/L 乙酸钠溶液（pH5.2）溶解3.09gDTT，过滤除菌后分装成1ml小份贮存于－20℃保存。DTT或含有DTT的溶液不能进行高压处理。
0.1mol/L pH 2.4甘氨酸-HCl缓冲液(Glycine-HCl Buffer)
称取固体甘氨酸 (MW 75.07)15.01克，用蒸馏水溶解后，加入0.2mol/L HCl 648ml，然后定容成2000ml。
2×SDS凝胶加样缓冲液(2×Loading Buffer)
100 mmol/L Tris.Cl（pH6.8）
200 mmol/L二硫苏糖醇（DTT）
4%SDS（电泳级）
0.2% 溴酚蓝
20% 甘油
不含二硫苏糖醇的2×SDS凝胶加样缓冲液可以保存于室温，临用前须从1mol/L二硫苏糖醇（DTT）贮存液现用现加于上述缓冲液。
10%十二烷基硫酸钠（SDS）
在900ml蒸馏水中溶解100g电泳级SDS,加热至68℃助溶，加入几滴浓盐酸调节溶液的pH值至7.2，加水定容至1L，分装备用。
SDS的微细晶粒易于扩散，因此称量时要戴面罩，称量完毕后要清除残留在称量工作区和天平上的SDS,10%SDS溶液无需灭菌。
电转印缓冲液为(Semi-Dry Transfer Buffer)
Tris 3g
Glycine 14.4g
SDS 0.185g
加入甲醇200ml，用去离子水调至1000ml。
Tris-乙酸50×（TAE）
Tris 碱 242g
冰乙酸 57.1ml
0.5mol/L EDTA(pH8.0) 100ml
蒸馏水定容至1L。
Tris-硼酸5×（TBE）
Tris 碱 54g
硼酸 27.5g
0.5mol/L EDTA(pH8.0) 20ml
蒸馏水定容至1L。
TE缓冲液 10×(pH7.4, 7.6, 8.0)
1. 量取下列溶液，置于1 L烧杯中。
1mol/L Tris-HCl(pH7.4, 7.6, 8.0) 100ml
500mmol/L EDTA(pH8.0) 20ml
2. 向烧杯中加入约800 ml的去离子水，均匀混合。
3. 将溶液定容至1 L后，高温高压灭菌。
4. 室温保存。
Tris－甘氨酸缓冲液（Tris-Glycine Buffer 5×）
Tris 15.1g
甘氨酸（电泳级） 94g
10％SDS（电泳级） 50ml
蒸馏水定容至1L。

七、淋巴细胞分离液
聚蔗糖－泛影葡胺分层液(Ficoll-paque Gradient Mixer)
90g/L聚蔗糖15ml，加500g/L泛影葡胺10ml（比重1.14)。
90g/L聚蔗糖17.5ml，加500g/L泛影葡胺10ml（比重1.13)。
90g/L聚蔗糖20ml，加500g/L泛影葡胺10ml（比重1.12)。
90g/L聚蔗糖24ml，加500g/L泛影葡胺10ml(比重1.08)。
Percoll配制 (Prepration of Percoll)
将一份10×PBS与9份Percoll贮存液混合，制成等渗Percoll悬液，此悬液被认为是100%Percoll，其密度为1.1294/ml。利用1×PBS或细胞培养液稀释100% Percoll，可获得适宜密度的细胞分层液，用于各种细胞的分离，其浓度与密度的关系如下：
70% Percoll 比重1.090g/ml
60% Percoll 比重1.077g/ml
50% Percoll 比重1.067g/ml
40% Percoll 比重1.056g/ml
30% Percoll 比重1.043g/ml
20% Percoll 比重1.037g/ml
人外周血单个核细胞（PBMC）分离Ficoll分层液配制
　　9％聚蔗糖（Ficoll）　　　　　　　　　24份
　　34％泛影葡胺（Urografin）　　　　　 10％
　　混合，测比重为1.077～1.078，G5玻璃滤器过滤除菌。4℃冰箱保存备用。

八、其它试剂
佐剂(Adjuvant)
动物实验常用弗氏佐剂（Freund adjuvant），其成分通常是羊毛脂1份、液体石腊油5份，羊毛脂与石腊油的比例，视需要可调整为1：2～9（V/V），充分混合后即是不完全福氏佐剂，如果在每毫升不完全佐剂加入1～20mg卡介苗就成为完全弗氏佐剂。
配制方法：将羊毛脂与石蜡油按比例置于容器内，超声波混匀，高压灭菌， 4℃保存备用。免疫前取等容积完全或不完全佐剂与免疫原溶液混合，用振荡器混匀成乳状，也可以在免疫前取需要量佐剂置乳钵中研磨，均匀后再边磨边滴加入等容积抗原液（其中加卡介苗3～4mg/ml或不加），加完后再继续研磨成乳剂，滴于冰水上5～10min内完全不扩散为止。为避免损失抗原，亦可用一注射器装抗原液，另一注射器装佐剂，二者以聚乙烯塑料管连接，然后二者来回反复抽吸，约数十分钟后即能完全乳化。检查合格后即以其中一注射器作注射用。
清洁液(Cleaning Solution)
配方1： 重铬酸钾 100g
蒸馏水 200ml
浓硫酸 800ml
将重铬酸钾加入蒸馏水中，使之自然溶解或水浴溶解，亦可在大坩埚中加热溶解，然后慢慢加入浓硫酸，边加边搅拌，见发热过剧则稍停，冷却后再继续加。此为强洗液。盛清洁液的容器要坚固，上加厚玻璃盖，操作时要穿橡皮围裙、长统胶靴、戴上眼镜和厚胶皮手套，以保安全。洗液一旦变绿，表示铬酸已经还原，失去了氧化能力，不宜再用。如将这样洗液加热，再加适量重铬酸钾，又可重新使用。
配方2： 重铬酸钾 60g
蒸馏水 300ml
浓硫酸 460ml
此为中等强度洗液。
配方3： 重铬酸钾 100g
蒸馏水 750ml
浓硫酸 250ml
此液为弱洗液，为棕红色。使用此液时，必须预先用热肥皂水将玻璃器皿洗净，经自来水冲洗，沥干然后才能浸入，否则该洗液很快失效。

（崔雪玲）
氨苄青霉素（Ampicillin）
     在9ml蒸馏水中溶解1g Ampicillin粉末并定容至