病原生物学检验.doc

第一章 细菌的形态及其检测方法 一、 革兰氏阴菌在肽聚糖层外还有特殊的三层外膜结构，由内向外依次为脂蛋白、脂质双层、脂多糖。脂多糖为细菌的内毒素，是由类脂A、核心多糖和特异多糖三部分组成，与细菌的致病性有关，也的革兰氏阴菌的菌体抗原，决定细菌的抗原性。 第二章 细菌的生理学和生化试验一、革兰氏阴菌（外膜）和革兰氏阳性菌（磷壁酸）在细胞壁上的差异的生物学意义1、 与细菌的染色性有关2、 与细菌的药物敏感性有关3、 与细菌的致病性有关4、 与细菌的抗原性有关二、鞭毛的功能1、 鞭毛是细菌的运动器官。有鞭毛的细菌能运动，可作为鉴别细菌的指标之一2、 鞭毛具有抗原性。可用于对细菌的鉴别和分型3、 有些细菌的鞭毛与致病性有关。三、动力试验不属于生化试验四、 细菌生长和繁殖的条件1、 充足的营养物质2、 适宜的酸碱度3、 合适的温度4、 必要的气体五、选择培养基：在基础培养基中加入抑制剂，可抑制费目的的菌生长，选择性的促进目的菌生长。多为固体平板，用于从混杂标本中分离出病原菌。六、 菌落：将标本或培养物化纤接种稻谷体培养基表面，一般经过1824h培养后，单个细菌可分裂繁殖成一堆肉眼可见的细菌集团，称为菌落。选取一个菌落移种至另一培养基，生长出来的细菌即时由一个菌体繁殖而成的纯种，称为纯培养。七、 菌落课分为三型：光滑型菌落、粗糙型菌落、粘液型菌落八、 氧化发酵试验的结果（O/F试验）（原理：细菌对葡萄糖的分解有三种不同的类型）：若两管均不变色，为产碱型或不活动型，O/F试验为阴性；两管均产酸变为黄色为发酵型；仅开管产酸变黄，闭管不变色，为氧化型。（铜绿假单胞菌为氧化型）。九、 吲哚试验原理：某些细菌含有色 氨酸酶，能分解蛋白胨中的色氨酸产生吲哚，吲哚与对二甲基氨基苯甲醛作用，形成玫瑰吲哚而呈红色。该实验也称靛基质试验。十、 凝固酶试验的应用：用于常规鉴定金黄色葡萄球菌与其他葡萄球菌，作为鉴定葡萄球菌致病性的主要依据。经黄色葡萄球菌的凝固酶阳性，表皮葡萄球菌和腐生葡萄球菌的凝固酶阴性。十一、 试验原理：群溶血性链球菌（无乳链球菌）能产生一种胞外物质CAMP因子， 该物质课促进金黄色葡萄球菌-溶血素溶解红细胞，故在血平板上两种细菌交界处溶血力增强，形成箭头状透明溶血区。 第三章 细菌遗传的物质基础与基因诊断技术一、 质粒的基本特征1、 质粒具有自主复制能力2、 质粒DNA所编码的产物可赋予宿主菌某些生物学性状3、 质粒的转移性，质粒可通过接合、转化或传导的方式在细菌之间转移4、 质粒具有不相容性二、 耐药质粒分为两种类型，即接合型和非接合型。接合型耐药质粒又称R质粒，由两部分组成耐药决定因子（r因子）：具有1至数个耐药基因，是细菌对抗生素产生耐药性；耐药传递因子（RTF）：编码宿主菌产生接合和自主复制的蛋白，最主要为性菌毛，具有传递因子的功能。三、 噬菌体可分为两类：毒性噬菌体和温和噬菌体四、 常将失去鞭毛的变异称为H-O变异，此变异是可逆的，失去鞭毛的细菌在五石碳酸的培养基上又可长出鞭毛。五、 S型菌落表面光滑、湿润、边缘整齐，经人工培养多次传代后菌落表面变为粗糙、干燥、边缘不整，即从光滑型变为粗糙型称为S-R变异。S-R变异是由于细菌失去LPS的特异性寡糖重复单位引起的。 第四章 其他微生物检验技术一、 双份血清学诊断试验是将血清配对，一份在疾病的发病期（发生症状的7天内），另一份是在恢复期（疾病的34周后），恢复期较急性期的总抗体滴度增长4倍或更多可认为有临床诊断意义。二、 影响纸片法药敏结果的因素1、 培养基的质量，如PH、厚度、硬度和表面湿度等。2、 药敏纸片的质量，含药量和保存方式3、 接种菌量正确与否是影响结果的重要因素之一，取决于麦氏比浊标准的配制、正确使用和保存。4、 试验操作质量5、 孵育条件、温度和时间6、 抑菌圈测量工具的精密度7、 质控标准菌株本身的药敏特性是否合格，有无变异三、 稀释法所测得的某抗菌药物能抑制检测菌肉眼可见生长的最低浓度，称为最低抑制浓度（）四、 抗菌药物联合运用后的结果有四种类型：协同作用；相加作用；无关作用；拮抗作用五、 内酰胺酶检测碘测定法：青霉素的内酰胺环能被细菌产生的内酰胺酶水解变为青霉噻唑酸，后者与碘结合，使蓝色的碘淀粉复合物转变为无色即为阳性，否则仍为蓝色。第五章细菌的分类和命名一、 具有某种细菌典型生物学特殊性的菌株称为该菌的标准菌株或代表株二、 细菌的科学命名采用国际上通用的拉丁文双命名法，一个细菌种的学名包括种名和属名。属名在前，用名词，首字母要大写，种名在后，用形容词，首字母小写 第六章 病原性球菌的鉴定第一节 葡萄球菌属菌名触酶试验葡萄糖发酵试验动力葡萄球菌属+微球菌属+一、二、 在高盐甘露琼脂平板上，金黄色葡萄球菌的菌落呈（CNS）的菌落多为白色三、 蛋白抗原为葡萄球菌细胞壁上的一种蛋白成分，称为葡萄球菌A蛋白（SPA），它与IgG的Fc段能非特异的接合而不影响Fab段的免疫活性，故可作为检测各种抗原或抗体的试验诊断试剂。四、 肠毒素30%50%金黄色金黄色葡萄球菌可产生这种外毒素，耐热，10030分钟不被破坏，尚可对抗胰蛋白酶的消化。该毒素分为A、B、C、D、E、F六个类型。金黄色葡萄球菌引起的毒素型食物中毒以A型多见，其次为B、C型。五、 目前临床上已把耐热核酸酶作为判断葡萄球菌有无致病力的重要指标六、 甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）和表皮葡萄球菌（MRSE）已成为医院感染的主要病原菌。CNS作为条件致病菌成为医源性感染的常见的病原菌。MRSA的治疗，轻度感染可选用利福平，SMZ-TMP和环丙沙星，严重全身感染者可选用万古毒素。七、 葡萄球菌属的鉴定程序： 标本采集 检验程序 检验方法与鉴定直接涂片镜检取标本涂片，革兰染色镜检，如为革兰阳性球菌呈葡萄状排列，则可初步报告：“找到革兰阳性葡萄状排列球菌，似葡萄球菌”。分离培养挑取可疑菌落行涂片染色镜检鉴定要点本菌特征：致病性葡萄球菌在血平板上的菌落一般呈金黄色，革兰阳性球菌，呈葡萄状排列，血浆凝固酶试验和耐热核酸酶试验均呈阳性，发酵甘露醇。 药敏试验第二节 链球菌属七、侵袭型菌类透明质酸菌：又称扩散因子，能分解细胞间质的透明质酸，使细菌及其毒素易在组织中扩散链激酶（SK）链道酶（SD），使脓液稀薄促进细菌扩散八、肺炎链球菌可引起人类大叶性肺炎九、甲型溶血性链球菌也称草绿色链球菌可导致人类龋齿和亚急性细菌性心内膜炎十、鉴定草绿色链球菌（阴）和肺炎链球（阳）菌的方法1、胆汁溶菌试验2、Optochin敏感试验3、血清聚糖发酵试验4、荚膜肿胀试验5、小鼠独立试验十一、淋病奈瑟菌的鉴定程序标本采集：用无菌棉拭子取尿道脓性分泌物，患眼结合膜炎的新生儿取眼结合膜分泌物，全身淋病者可采取血液。直接涂片镜检：于中性粒细胞内外找到革兰阴性双球菌、呈肾形、凹面相对。分离培养：挑取可疑菌落，涂片染色镜检，并进一步做生化鉴定。 第七章 肠杆菌科的检验第一节 概述一、 肠杆菌科细菌氧化酶、触酶和硝酸盐还原实验均为阳性，发酵葡萄糖（产酸或产气产酸）。传统致病菌一般不能分解乳糖；而非致病菌株多分解乳糖。二、 肠道杆菌构造复杂，主要有O抗原（菌体抗原）、H抗原（编码抗原）、K抗原（荚膜或包膜抗原）及菌毛抗原等。第二节 埃希菌属三、 肠出血型大肠埃希菌（EHEC）的主要致病菌为O157：H7第三节 沙门菌属四、 伤寒沙门菌试验：发酵葡萄糖产酸不产气；不发酵乳糖；用动力五、 鉴定程序与特殊检验（一） 标本采集根据肠热症病程采集相应的样本。第一周取外周血，第周采取骨髓液，第周起采集粪便和尿液，败血症采取血液，胃肠炎采集粪便、呕吐物和可疑食物（二） 检验方法和鉴定血清学诊断 常用于肠热症的血清学诊断有肥大实验。（原理）该实验是用已知伤寒沙门菌的O抗原和H抗原以及引起甲型副伤寒沙门菌、肖氏沙门菌和希氏沙门菌的H抗原，与受试血清在试管或微孔板上进行的一种定量凝集试验，用于测定血清中有无相应的抗体及其效价。（临床意义）可协助肠热症的诊断。（结果分析）解释肥大实验的结果时必须结合患者的临床表现、病程、病史、地区流行病学及用药情况等；应参考当地人群是正常值，一般伤寒沙门杆菌的O凝集效价 1:80，H凝集效价1:160，引起副伤寒沙门杆菌的H凝集效价1:80有诊断价值；此外还要注意观察抗体的动态变化，若效价逐渐递增或两次效价相差4倍以上时有诊断意义；H或O抗体单项增高时，应结合临床进行分析。第四节 志贺菌属（一） 生物学特性 无荚膜、鞭毛和芽孢，有菌毛 动力阳性（二） 大多志贺菌不发酵乳糖，故在麦康凯平板也SS平板上形成无色半透明或透明的中等大小菌落。宋内志贺菌因能迟缓发酵（48小时）乳糖，故在麦康凯和SS平板上可出现粉红色或无色透明两种菌落。第六节 其他常见的肠杆菌科细菌一、 克雷伯菌属动力阴性二、 变形杆菌属 本菌营养要求不高，在固体培养基上呈迁徙生长现象，即快速形成以接种菌为中心的厚薄交替、同心圆形的多层波状菌膜。三、 肠杆菌属动力试验阳性 第八章 弧菌科、弯曲菌属和螺杆菌属的鉴定第一节 弧菌科 霍乱弧菌（一） 生物学性状形态颜色 取病人的米泔水样便作悬滴观察，可见细菌呈穿梭运动且细菌首尾相接，平形排列呈“鱼群”状。培养和生化反应 具有耐碱性，初次分离时常用PH8.5，甚至9.2的碱性蛋白胨水增菌培养，以抑制其他杂菌。O-1血清群包括霍乱弧菌的两个生物型，即古典生物型与EI-Tor生物型（二） 临床意义霍乱肠毒素（CT），有强烈致泻作用。系由一个A亚单位和5 个相同的B亚单位够成的聚合蛋白。B亚单位是毒素的接合部位，能与小肠的粘膜上皮细胞受体结合（神经节苷脂GM1）接合，介导A亚单位进入细胞。A亚单位在发挥毒性作用前需经蛋白酶作用为A1和A2两条多肽链。其中A1是霍乱毒素的毒性成分，能够激活细胞内的腺苷酸环化酶的活性，使ATP转化为cAMP。（为不耐热的外毒素） 第九章 分枝杆菌属和放线菌第一节 概述本菌属的主要特点是细胞壁脂质含量甚高，特别是、有80个碳原子的分枝菌酸，这和其染色性、致病性、抵抗力等密切相关。一般不易着色，经加温或延长染色时间着色后，能抵抗盐酸乙醇的脱色，故又称抗酸杆菌。第二节 结核分枝杆菌结核分枝杆菌简称结核杆菌，结核分额枝杆菌复合群包括人型、牛型、非洲型鼠型分枝菌。结核分枝杆菌为专性需氧菌。常用的有罗氏固体培养基，一般24周长出菌落，液面形成菌膜（原因该细菌为专性需氧菌，细菌的细胞壁含大量脂质）卡介苗（BCG）就是牛型分枝杆菌毒力变异株结核分枝杆菌不产生内毒素和外毒素，其毒性物质主要为索状因子和硫酸脑苷脂。分离培养中标本的前处理目的是液化痰液和杀灭杂菌。 第十章 非发酵革兰氏阴性菌的鉴定一、 非发酵菌是指一大群不发酵糖或只氧化利用葡萄糖的需氧或兼性厌氧、无芽孢的格兰仕阴性杆菌二、 辨认非发酵菌的基本方法1、 在克氏双糖琼脂（KIA）或三糖琼脂（TSI）上，斜面极易生长而底层穿刺生长不良或斜面即高层均呈碱性反应2、 氧化酶阳性。虽然少数非发酵菌可以是氧化酶阴性，但氧化酶阳性的细菌，则可以从肠杆菌科中被排除3、 在麦康凯琼脂上不生长或生长不良。任何革兰氏阴性菌，在血平板上生长良好，而在麦康凯琼脂平板上不生长或生长不良，均为怀疑为非发酵菌二、 对疑为非发酵菌的细菌可根据葡萄糖氧化发酵试验（O/F试验）、氧化酶试验、硝酸盐还原试验和动力观察等几项常用的试验进行初步分群（菌属）三、 动力和鞭毛 最好采用悬滴法（动力试验），不仅快速而且更准确四、 铜绿假单胞菌（一） 培养特性专性需氧最适温度为35营养要求不高，普通培养基上均能生长在血琼脂平板上形成大而扁平、湿润、边沿不整齐、有金属光泽、呈灰绿色或蓝绿色、有生姜味的菌落，菌落周围有透明溶血环。（二） 铜绿假单胞菌主要产生两种色素，一种为绿脓素，为蓝绿色，溶于水和氯仿；另外一种为荧光素，为绿色荧光素，只溶于氯仿 第十一章 其他细菌的鉴定1、 异染颗粒：若用Albert、Neisser、美蓝等法染色可见深染的颗粒，这些颗粒与菌体着色不同，称为异染颗粒，其主要成分为核糖核酸和多偏磷酸盐。2、 炭疽芽胞杆菌 为致病性细菌中最大的革兰阳性菌，经人工培养或在外界环境中易形成芽胞。 荚膜和炭疽毒素是炭疽芽胞杆菌的主要致病物质。炭疽毒素是造成感染者致病和死亡的主要原因，毒素可直接损伤微血管内皮细胞，使血管通透性增加而形成水肿。3、 产单核细胞李斯特菌的特点 在4能生长故可通过冷增菌 在半固体培养基内，可出现倒伞形生长 25有动力，37无动力或动力缓慢4、 线索细胞：阴道加特纳菌在大量阴道上皮细胞、少量脓细胞及无数成簇的小杆菌群集或吸附于上皮细胞表面，致使细胞边缘晦暗，呈锯齿形，即为线索细胞。5、 流感嗜血杆菌的特性： 需氧，5%10%CO2可促生长 生长时需X、V因子 最适培养基为巧克力琼脂平板 在培养基中加入抗生素可抑制杂菌6、卫星现象：流感嗜血杆菌与金黄色葡萄球菌在同一血平板上培养，由于葡萄球菌生长时能合成较多V因子，可促进流感嗜血杆菌生长，于是在葡萄球菌菌落周围生长的流感嗜血杆菌的菌落较大，远离葡萄球菌的流感嗜血杆菌的菌落较少，即成为卫星现象。 第十二章 厌氧菌的鉴定1、 厌氧菌是一群在有氧条件下不能生长，必须在无氧条件下才能生长繁殖的细菌。2、 厌氧菌分为芽胞厌氧菌和无芽胞厌氧菌两大类，目前已知无芽胞厌氧菌共有40多个属，有芽胞的厌氧菌只有一个属，即梭菌属。3、 厌氧菌感染的临床及细菌学特征： 感染局部有气体产生 发生在粘膜附近的感染 深部外伤 有特殊的分泌物 某些抗生素治疗无效的感染 分泌物直接涂片革兰染色，发现细菌染色不均、形态奇特呈明显的多形态 镜检查见细菌，而需氧培养阴性者 在液体及半固体培养基深部有细菌生长者4、 梭状芽胞杆菌属简称梭菌属，是芽胞厌氧菌唯一的一个属，多为腐生菌。5、 破伤风梭菌的芽胞呈圆形，位于菌体顶端，使细菌呈鼓槌状。其致病物质主要是外毒素痉挛毒素。6、 产气荚膜梭菌的培养特性： 在血琼脂平板上，有双层溶血环，内环完全溶血，由毒素引起，外环不完全溶血，是由毒素所致。 Nagler反应：在卵黄琼脂平板上，产气荚膜梭菌产生的卵磷脂酶（毒素）能分解卵黄中的卵磷脂，使菌落周围出现乳白色浑浊圈，若在培养基中加入毒素的抗血清，则不出现混浊圈，称为Nagler反应。 “汹涌发酵”现象：在牛乳培养基中，能分解乳糖产酸使酪蛋白凝固，同时产生大量气体将凝固的酪蛋白冲成蜂窝状，并将液面上的凡士林向上推挤。甚至冲开棉塞。气势凶猛，称为“汹涌发酵”现象。7、 产气荚膜梭菌是气性坏疽的主要致病菌。8、 肉毒梭菌在厌氧条件下可产生毒素极强的外毒素肉毒毒素，是已知最剧烈的毒素。9、 艰难梭菌可引起伪膜性肠炎，是伪膜性肠炎的主要致病原。10、 艰难梭菌能产生两种外毒素，即A（肠毒素）与毒素B（细胞毒素）。第十三章 螺旋体的鉴定1、 奋森螺旋体菌体寄生于正常人口腔齿龈部。2、 在致病性螺旋体中，钩端螺旋体是唯一较易人工培养的螺旋体。3、 回归热螺旋体以体虱为传播媒介，导致流行性回归热。4、 赫姆疏螺旋体以软蜱为传播媒介，引起地方性回归热。5、 梅毒螺旋体的传染过程可分三期：第一期、第二期和第三期，其中第一期的传染性最强。6、 观察螺旋体的最好方法：暗视野镜检7、 絮状沉淀试验有WHO推荐的简易玻片沉淀试验(VDRL)和快速血浆反应素法(RPR)。 第十四章 支原体与细菌L型的鉴定1、 支原体是一类无细胞壁、呈高度多形性，可通过除菌滤器，在无生命培养基中能生长繁殖的最小原核细胞型微生物。2、 支原体最外层的细胞膜有三层结构：内外两层主要是蛋白质，中间层为脂质，其中胆固醇约为36%。3、 肺炎支原体和生殖支原体有一种特殊的顶端结构，能使支原体粘附在宿主上皮细胞表面，与其致病性有关。4、 支原体和细菌L型比较：都能形成油煎蛋状菌落，只是大小差异，前者稍小。5、 支原体和细菌L型对青霉素都不敏感。6、 肺炎支原体是人类原发性非典型肺炎的主要病原体，经飞沫传播。 第十五章 立克次体与衣原体的鉴定1、 地方性斑疹伤寒 是通过鼠蚤传播给人的。2、 恙虫病 恙螨是立克次体的传播媒介和宿主。3、 外斐反应是指某些立克次体与变形杆菌的某些杆菌，有共同完复成分，所以可与变形杆菌的OX19、OX2、OXk来代替立克次氏体4、 衣原体是一类能够通过细菌滤器、专性细胞内寄生、具有独特发育周期的原核细胞微生物。5、 常见的衣原体病：沙眼沙眼生物亚种；包涵体结膜炎沙眼生物亚种；性传播疾病性病淋巴肉芽肿。 第十六章 病毒的鉴定1、 病毒体的基本结构是核衣壳（核心和衣壳）。2、 病毒核酸决定其致病性和传染性。3、 由病毒增殖引起的细胞改变称为细胞病变效应（CPE），系细胞受染的迹象。4、 人类轮状病毒式婴幼儿急性胃肠炎的第一位病原，我国婴幼儿腹泻多发生在秋冬季。5、 人腺病毒是引起婴儿病毒性腹泻的第二位病原体，主要经粪-口传播，夏季多见。 第十七章 真菌的鉴定1、 类酵母型真菌是芽生方式繁殖，其延长的芽体可伸进培养基内，称假菌丝。2、 菌丝按功能分类可分为：营养菌丝和气中菌丝。3、 皮肤癣真菌的致病性可侵犯指（趾）甲，还可以侵犯毛发。4、 念珠菌主要引起阴道炎。5、 区别：名称培养基温度 时间芽管形成试验动物血清或白蛋白37 3h厚膜孢子形成试验1%吐温-80-玉米培养基25 2448h后6、 隐球菌的特征: 菌体外周的荚膜与其致病性有关 隐球菌病主要经呼吸道吸入孢子感染 新生隐球菌易引起脑膜炎 新生隐球菌主要引起内源性感染 直接镜检 使用墨汁染色法7、双相性真菌在自然界环境中或在2530培养时呈真菌型（菌丝相），而在组织内或营养丰富的培养基上于37培养时为酵母型（组织型）。 第十八章 寄生虫学的基本概念1、 在联合国开发计划署、世界银行和世界卫生组织联合倡议的热带病特别规划提出要求在全球防治的6种主要热带病中，除麻风病外，其余5种都是寄生虫病，它们是疟疾、血吸虫并、丝虫并、利什曼病和锥虫病。2、 寄生虫病的流行特点：地方性、季节性、自然疫源性、机会致病性。 第十九章 医学蠕虫1、吸虫生活史 其中间宿主为淡水螺。2、血吸虫生活史 其中间宿主为钉螺。3、毛蚴孵化法是血吸虫特有的检查方法。 第二十章 医学原虫1、 阿米巴原虫的粪便检查 特别是对其大滋养体的检查。2、 检查阿米巴包囊多采用碘液染色法。3、 疟原虫在人体内的发育分为肝细胞内的发育（称红细胞外期）和红细胞内的发育两个阶段。4、 疟疾的典型临床表现为周期性的寒战、高热、出汗退热而缓解。第二十二章 环境卫生与病原感染的临床特征1、 我国生活饮用水的卫生标准涉及两个主要指标：大肠菌群数，即1L水中大肠菌群数不得超过3个；细菌总数，系指1ml水中的细菌菌落不得超过100个。2、 我国关于医院污水排放的标准，要求医院污水经处理和消毒后达到：连续三次取500ml水样检查不得检出致病菌；大肠菌群数每毫升应少于500个。第二十三章医院感染与控制1、医院感染是指在住院期间获得并发生的感染，即病人在入院时无感染，也不处于感染的潜伏期，当病人出院后发病而又证实是在住院期间受到的感染，被视为医院感染。第二十四章临床标本的病原性生物检验1、 标本的采集与运送原则 适宜的标本采集时间 恰当的标本采集部位 采集足量的标本 选用合适的标本容器 标本的保存与运送 采集合适标本 无菌操作 注意生物安全防护2、采血多采取静脉血，血量达增菌培养基量的110为宜第二十五章临床病原生物学实验室与病原生物检验的质量控制1、 微生物的主要保存方法有：培养基保存法、干燥保存法、冷冻干燥保存法和液氮超低温保存法其中培养基保存法和冷冻干燥保存法最常用。