黄牛肝菌凝集素的分离纯化及部分性质.pdf

2 0 1 5年 3月 第 5 2卷 第 2期 四川 大学学报(自然科 学版)J o u r n a l o f S i c h u a n Un i v e r s i t y(Na t u r a l S c i e n c e Ed i t i o n)M a r 2 01 5 Vo1 5 2 No 2 d o i：1 0 3 9 6 9 j i s s n 0 4 9 0 6 7 5 6 2 0 1 5 0 2 0 3 4 黄 牛肝 菌凝集素 的分离纯化及部分性质 鲍小敏，卢帮敏，鲍锦 库(四川大学 生命 科学学院，成都 6 1 0 0 6 4)摘 要：黄 牛 肝 茵(Bo l e t u s f u l v u s)经 生 理 盐 水 浸 提、C M S e p h a r o s e、DE A E S e p h a r o s e及 S e p h a c r y 1 S 一 1 0 0分子 筛层析 后得 到 黄 牛肝 菌凝 集素(B F L)经 S D S P AGE 电泳 及 S e p h a c r y l S 一 1 0 0分子 筛层析检 测 表 明，所得 的 B F L是 由两个 分子 量 约 1 5 8 k Da、非二硫 键 相 连 的 亚基 组 成 的表观 分 子量 为 3 2 k D a的 二聚 体B F L可快速 凝 集兔血 红 细胞，其 最低凝 集 浓度 为 3 9 g mL；糖抑 制 试 验 表 明，胃粘蛋 白、甲状腺 球 蛋 白、卵粘 蛋 白和 卵 清蛋 白均 可抑 制 B F L活 性 当温度 在 7 0 以下和 p H 值 在 6 O 9 8之 间时，B F L凝 血 活性 基本 不 变。然 而 当 温度 至 9 O 以上 和在 极 端 p H 值 下，B F L 凝 血 活 性 减 弱 甚 至 完全 丧 失 不 同浓 度 的 脲 和 盐 酸胍 对 B F L凝血活性的影响表明：随着变性剂浓度的增加，B F L的结构逐渐被破坏 关键 词：黄 牛肝 菌凝 集素；分 离纯化；凝 血 活性 中 图分类 号：$6 4 6 3 文 献标 识码：A 文 章编 号：0 4 9 0 6 7 5 6(2 0 1 5)0 2 0 4 0 9 0 7 P u r i f i c a t i o n a n d c h a r a c t e r i z a t i o n o f l e c t i n f r o m Bo l e t u s f u l v u s B AO Xi a o M i n，LU Ba n g M i n，BAO J i n Ku (C o l l e g e o f Li f e S c i e n c e s，Si c h u a n Un i v e r s i t y，Ch e n g d u 6 1 0 0 6 4，Ch i n a)Ab s t r a c t：Bo l e t u s f u l v u s l e c t i n(BF L)wa s i s o l a t e d f r o m Bo l e t u s f u l v u s，b y e x t r a c t i o n，i o n e x c h a n g e c hr o ma t o gr a p hy o n CM Se ph a r os e a nd DEAE Se ph a r os e f ol l o we d by ge l f i l t r a t i o n o n Se pha c r y l S 一 1 0 0 BFL i s a ho mod i m e r wi t h a pp a r e nt m o l e c u l a r ma s s o f 3 2 k Da a nd c o m p o s e d o f t wo 1 5 8 kDa s ubu ni t s t h a t a r e h e l d t o g e t h e r b y n o n c o v a l e n t i n t e r a c t i o n s B FL c o u l d a g g l u t i n a t e r a b b i t e r y t h r o c y t e，a n d i t e x h i b i t e d s t r o n g h e ma g g l u t i n a t i o n a c t i v i t y t o r a b b i t e r y t h r o c y t e s a t t h e c o n c e n t r a t i o n 3 9 t g mLTh e r e s ui t o f c a r bo hy dr a t e i nhi bi t i on a s s a y s h owe d t ha t t h e ga s t r i c muc i n，t h yr o g l obu l i n，o vo muc oi d a nd ov a l bu m i n c o ul d i nhi bi t t he a gg l u t i n a t i ng a c t i v i t y o f BFLThe h e ma gg l ut i n a t i o n a c t i v i t y of BFL wa s s t a b l e u nde r 7 0 C a nd i n a pH r a ng e o f 6 0 9 8，wh i l e i t wa s we a k whe n t e m p e r a t u r e wa s h i g he r t ha n 9 O a n d i n e x t r e me p H r a n g e E f f e c t s o f d i f f e r e n t c o n c e n t r a t i o n s o f u r e a a n d Gu HC1 o n t h e h e ma g g l u t i n a t i o n a c t i v i t y o f BFL i nd i c a t e d t he i nc r e a s e o f de na t u r a nt c o nc e nt r a t i o n c o ul d d e s t r oy t he s t r u c t u r e o f BFL gr a d ua l l y Ke y wo r d s：Bo l e t u s fu l v u s l e c t i n；P u r i f i c a t i o n；H e ma g g l u t i n a t i o n a c t i v i t y 引 凝集 素(L e c t i n)是 一 类 非酶、非 免 疫 来源 的糖 收稿 日期 基金项 目 作 者简 介 通 讯作者 结合专一性 的蛋 白质或糖蛋 白，其普遍存在 于 自 然界动植物和微生物 中 凝集素具有广泛的生物 学 功 能“与多 种 生 理 过程 诸 如 细 胞 间 的粘 着，2 01 3 1 1 2 5 国家 自然科学基金(8 1 1 7 3 0 9 3，3 0 9 7 0 6 4 3，J 1 1 0 3 5 1 8)鲍小敏(1 9 8 9 一)，男，硕士研究生，研究方 向为 医学分子生物学E ma i l：z h j b x m1 6 3 c o rn 鲍锦库E ma i l：b a o j i n k u S C U e d u c n 言 目 4 1 O 四1 1 I 大 学学报(自然科 学fi t)第 5 2卷 受体介导的胞饮、细菌感染宿主、宿主巨噬细胞清 除入侵细菌、机体代谢的调节控制和胚胎发育、生 殖细胞的识别、共生 固氮、植物防御 病原体入侵等 密切相关”2 凝集素还可以识别糖蛋白和糖脂 中 复 杂 的碳 水 化 合 物结 构，特 别 是 细 胞 膜 表 面 的 糖 基，因此可将其作为研究细胞膜结构的有利工具 生物体 中一般起信号传递或转换的蛋 白质均为糖 蛋 白，其糖链末端的糖残基可 因可被凝集素特异 性识别并结合，从 而促使凝集素与糖蛋 白的产生 特异性相互作用，进 一步引发一系列 的下游的生 化信号级联反应 5 此外，植物凝集素具有细胞凝 集、抗病毒抗真菌及诱导细胞凋亡或 自噬等多种功 能-6 ，因此在生命科学、医学及农业 各领域均有 较 好 的研究 价值 和应 用前 景 9 黄牛肝 菌(Bo l e t u s f u l v u s)是一 种 常见 的食 用 菌，具 有 清 热 解 烦、养 血 和 中、追 风 散 寒、舒 筋 和 血、补虚提神等功效 在牛肝菌科凝集素的研究 中，研究 较 多 是 细 网 牛 肝 菌(B o l e t u s s a t a a s)凝 集 素 、红绒盖牛肝菌凝集素 n 、褐红绒盖牛肝菌凝 集素口。以及砖红绒盖牛肝菌凝集素对小 鼠脾细胞 有丝分裂表现出明显的增值 促进作用 1 引 本文 以 食用菌黄牛肝菌 为研究对象，从中分离纯化得到 一种新的凝集 素并研究其基本性质，以期 为牛肝 菌科凝集 素的进 一步开发提供一 定的理论参考，并 为 以后 的研 究 和应用 打下 基础 2材料 和方法 2 1实验 材料 冷冻黄 牛 肝菌：购 自四J I I 省 成 都 市 白家 蔬 菜 批发市场 新鲜血液：新鲜兔血、鸡血及 鸭血采于 市场 健康人体 A、B、O及 AB血型采集 自华西 医 院S D S P AG E中标准分子量蛋 白为上海东风生 物技术有 限公司产品；D 一 半乳糖(Ga D、N一 乙酰半 乳糖(Ga l NAc)、D一 甘 露糖(Ma n)、D一 果糖(F r u)、2 一 N一 乙酰 氨基 葡 萄糖、和 甲状 腺 球 蛋 白(Th y r o g l o b u l i n)均为 S i g ma 公司产品；其余常用试剂均为进 口分装或国产分析纯 2 2 实验 方法 2 2 1 黄 牛肝 茵凝 集 素(B F L)的 分 离纯 化 取 2 5 0 g黄牛肝菌洗净并切碎，加入生理盐水过夜浸 提，过 滤，于 6 0 0 0 r mi n离 心 1 5 mi n，收集 上 清 液得 B F L 粗 品 取 2 0 0 mL粗 品 以 P H 5 0，2 0 mM HA c Na Ac 缓 冲 液 充 分 透 析，以相 同 的缓 冲 液平 衡 的 C M S e p h a r o s e 离子 交 换柱，将 样 品 以 2 mL mi n的流 速上 柱，用缓 冲液 以 5 mL mi n流 速 洗脱至 OD z 8 0 0 0 2，用 0-0 5 mo l mL Na C 1 溶液 以 2 mL mi n流速连续梯度洗脱，以处理好 的新 鲜兔血细胞检测活性，收集 活性部分 用 p H 8 5，5 0 mM T r i s HC 1 缓冲液对活性部分进行充分透析 除 盐，再 以 相 同 的 缓 冲液 平 衡 DE AE S e p h a r o s e 离 子交 换 柱 将 透 析好 的样 品 以 2 mL mi n上 柱，用缓冲液 5 mL mi n流速洗脱至 O D2 。O 0 2，再 用 0-0 3 M 的 Na C 1 溶液 以 2 mL mi n流 速进 行 梯 度 洗脱，继 续 用 兔 血 细 胞 检 测 活 性，收集 活性 峰，透析除盐，冷冻干燥 将一份加有 B 一 巯基乙醇 和 一份 未 加 的 B F L样 品 通 过 S DS-P AGE不 连 续 系 统(分离 胶 浓度 为 1 5 ，浓 缩胶 浓 度为 4 ，以 考 马斯 亮蓝 R 一 2 5 0作 为染 液 1 )测 定 B F L纯 度 及 其 亚 基 分 子 量，参 照An d r e w【1 的 方 法 经 S e p h a c r y 1 S 一 1 o o 测 定表 观分 子量 2 2 2 B F L 的浓 度 及 凝血 活性 测 定 B F L的 浓 度 测定 采 用 L o wr y法(即 F o l i n-酚 试 剂一 分 光 光 度 计 法)以 牛 血 清 白 蛋 白 溶 液(2 5 0 t g mL)作 标 准 1 称 取 B F L冻 干 品用 生 理 盐水 配 成 0 5 mg mL，在 9 6孔“V”型 凝 血 板 中 采 用 倍 比稀 释 方 法 1 分 别测 凝 集 人 血，兔 血，鸡 血 及 鸭 血 细 胞 的 活性 所有凝 血 活性测 定结 果均 经过 三次 独立重 复 实验 验证 2 2 3 B F L 的糖 抑 制 实验 配制 糖 溶 液，单 糖、二糖 的初始浓度均为 1 6 0 mM，糖蛋白或多聚糖的 初始浓度为 4 mg mL 采用 了倍 比糖或糖蛋 白的 方法 1。将糖或糖蛋 白稀释，向每孑 L 中加入 2 5 L B F L样 品，振 荡 约 1 0 rai n，再 向每 孔 加 入 2 5 L 2 (V V)的兔红细胞悬液，振荡，于室温静置 3 O mi n左右，观察凝 血情 况 2 2 4 金 属 离子 对 B F L 凝 血 活性 的影 响 配 制 5 0 mM E DTA Na 溶液，将 1 mg mL B F L溶液进 行充 分透 析并 于 室 温 下 放 置 过 夜，再 用 生 理 盐 水 充分 透析 除去 过 量 的 E D TA-Na。在 9 6孔“V”型 凝血 板上 加入 经 E DTA-Na。透析 过 的 B F L样 品溶 液，用生理 盐水 进行倍 比稀 释后，分别 加入 2 O mM的KCl、Mn Cl 2、Z n S O4、Mg S O4、Hg C1 2、C a C 1 2、C u S O4、F e S O 4、C o C 1 2 和 F e C 1 3 溶 液 2 5 L，振荡约 3 O mi n，分别加入 2 5 L兔血红细胞悬液，室温放 2 h，观察凝 集 活性 2 2 5 温 度 和 P H 对 B F L 凝 血 活 性 的 影 响 B F L以生理 盐水配 制 为 1 mg mL，在 3 O 、4 O 、5 0 、6 O 、7 O 、8 0 、9 O 和 1 0 0 处 理 3 0 mi n，第 2期 鲍小敏，等：黄牛肝 茵凝集 素的分离纯化及 部分性质 4 1 1 再立即放冰浴冷却至室温，倍 比稀释测活性 分别用 0 1 M，p H值为 2 O 1 2 0的不同缓 冲液(柠檬酸钠缓冲液：p H 2 O 5 0；Na z HP O4 一 Na il2 P 04缓冲液：p H 6 0 8 0；Na 2 C O3 一 Na il C O3 缓 冲液：p H 9 O 1 1 0；KC l Na OH 缓 冲液：p H 1 2 O)配制 成 1 mg mL B F L溶 液，室温 放 置 过夜，倍 比稀释测活性 2 2 6 变性 剂脲 和 盐 酸胍 对 BF L 凝 血 活性 的 影 响用 生 理盐 水配 制 浓 度 分 别 为 0 M、1 M、2 M、3 M、5 M、4 M、6 M 和 7 M 的脲 溶 液 各 5 mL，分 别 用溶 液 将 B F L配 制 成 1 mg mL溶 液，室 温 放 置 2 h后，倍 比稀 释测 活性 用 生 理盐 水 分 别 配 制浓 度 为 0 M、1 M、2 M、3 M、4 M、5 M、6 M 的盐 酸 胍 溶 液各 5 mL，分 别 用 溶液 将 B F L配 制 成 l mg mL溶 液，室 温 放 置 2 h 后，倍 比稀 释测 活性 3 结 果 3 1 B F L的分 离纯 化 将 B F L的粗 品 溶 液经 过 C M S e p h a r o s e 离 子 交换层析，得到含有大量杂蛋 白及其色素 的穿透 峰 A1，得 到 的洗 脱 峰 中，活性 峰 为 图 1中 A3所 示 A3经 过 透 析进 行 DE AE S e p h a r o s e离 子 交 换 层 析，用 O 0 3 M 的 Na C 1 溶 液 进 行 连续 梯 度 洗 脱，得 到具 有凝 血 活性 的洗 脱峰 B 2 B 2用 P B S透 0 5 0 1 0 0 l 50 2 0 0 25 0 3 0 0 E l u t i o n v o l u me(mL)析后 经过 S e p h a c r y l S-I O 0柱 进 行 凝 胶 过 滤 层 析，得到两个峰，其中，C 2为活性峰 通过 S DS _ P AG E电泳结果显示分离纯化试验 最终得到的 B F L样 品呈现单一蛋白条带(图 2 A)在还 原条 件 与非还 原 条 件 下(不 含 巯 基 乙醇)大 小 均 约 为 1 5 8 k Da 经过 S e p h a c r y l S-l O O 凝 胶过 滤层 析，B F L呈 现接近对称的单一蛋 白峰，基 于已知几种标准蛋 白计算 出 天然 B F L的表 观分 子 量 约为 3 2 k Da(图 2 B)以上结 果表 明，B F L是 由两 个 分 子量 相 同 的 且 通过 非二 硫键 连接 的 同源二 聚体 3 2 B F L的凝血 活性 测定 实验结果表明：B F L可以凝集兔血红细胞 以 及人 的 A、B、AB、O 型血 红细胞，而 对 鸡血 红 细胞 和 鸭血红 细 胞 均 没 有 明显 的凝 集 活 性(表 1)此 外，B F L对兔血红细胞有 极其显 著 的凝集效 果，且凝血时间短暂，最低凝集浓度为 3 9 t g mL 3 3 B F L的 糖抑 制实 验 全部 受 试 的 单 糖 和 二 糖 浓 度 甚 至 达 到 1 6 0 mM 都对 B F L的凝血 活性 没有 影 响，表 明未 与 B F L发生特异性结合 胃粘蛋 白具有明显的糖结 合 活 性，能 强 烈 抑 制 B F L 的凝 血 活 性 甲状 腺 球 蛋 白、卵粘 蛋 白和 卵 清 蛋 白也有 一 定 的抑 制作 用 其他聚糖如甘露 聚糖，菊糖等对其凝血活性无 抑 制 作 用(表 2)C 0 2 0 4 0 6 0 8 0 1 0 0 E l u t i o n v o l u me(mL)图 1 B FL的 分 离纯 化 图 F i g 1 Pu r i f i c a t i o n o f BF L A：Ca t i o n e x c ha n g e c h r o m a t o g r a p h y o f t h e c r u d e e x t r a c tTh e a d s o r b e d A3 f r a c t ion wi t h h e m a g g l u t ina t i n g a c t i v i t y wa s e l u t e d wi t h O 0-5 M Na C1 g r a d i e n t B：Anion e x c h a n g e c h r oma t o g r a p h y o f t h e A3 f r a c t i o nTh e a d s or b e d B 2 f r a c t i o n wi t h h e ma g g l u t i na t i n g a c t i v i t y wa s e l u t e d wi t h O O 3 M Na CI g r a d i e n t C：Ge l f i l t r a t i o n o f B 2 f r a c t ion o n S e p h a c r y l S-I O O c o 1 u mnC2 r e f e r s t 0 t h e f r a c t i 0 n wi t h h e ma g g l u t i n a t i h g a c t i v i t y 1 0 0 0 O 0 暑口0 苗 岛 时 q J 0 0 O 0 0 O 0 0 g口0 0 0 I I一 工 o 2 1 O l I I 皇0 甚 0 口 时 q J 0 叽 4 1 2 四川大学 学报(自然科 学版)第 5 2 卷 A 2 3 4 5 6 M l 1 6 6 6 45 35 2 5 1 8 1 4 Or E l u t i o n v o l u me(mL)图 2 B F L的 S D S-P AG E效果 图及凝胶过 滤层析测定 B F L的表观分子量 Fi g 2 S DS-PAGE o f B FL a n d Na t i v e mo l e c u l a r ma s s e s t i ma t i o n o f B FL b y g e l f i l t r a t i o n S e p h a c r v l S-1 0 0 (A)La n e 1：Th e c r u d e e x t r a c t o f BF L La ne 2：Un a d s o r b e d f r a c t i o n o f Ca t i o n e x c h a n g e c h r o m a t o g r a ph yLa n e 3 Ac t i v e f r a c t i o n of Ca t i o n e x c h a n ge c h r o ma t o gr a p h yLa ne 4：Ac t i v e f r a c t i o n o f An i o n e x c h a n g e c hr o ma t o g r a p h y La n e 5：Pu r i f i e d BFL b y g e l f i l t r a t i o n c h r o ma t o g r a p h y L a n e 6：P u r i f i e d B F L wi t h o u t-me r c a p t o e t h a n o 1 L a n e M：Ma r k e r s (B)Re f e r a n c e p r o t e i n：b o v i n e s e r u m a l b u mi n (6 8 k Da)，o v a l bu m i n(4 5 k Da)，t r y p s i n i n h i b i t o r(3 0 2 kDa)，c h y mo t r y p s i n o g e n A(2 5 k Da)，c y t o c h r o me C(1 25 k Da)表 l B F L对各种血细胞 的凝集活性测定 Ta b 1 Er y t h r oc y t e a gg l u t i n at i o n a c t i v i t i e s o f BFL+：凝集 Ag g l u t i n a t i o n；一；不凝集 No n a g g l u t i n a t i o n 下同 Th e s a me b e l o w 表 2 糖 蛋 白或 多聚 糖 对 BF L凝 集 活 性 的 影 响 Ta b 2 C a r b o h y d r a t e s b i n d i n g s p e c i f i c i t y o f BF L(g l y c o p r o t e i n&p o l y s a c c h a r i d e)3 4金 属 离子、温 度及 p H 值 对 B F L凝 血 活 性 的 影响 3 4 1 金 属 离子 对 BF L凝 血 活 性 的 影 响 ED T A 作 为金属 离子 螯合 剂 能 去 除 B F L样 品 中 的金 属离 子 以未 经任 何 处理 的 B F L作 为对 照，经 E D TA 处理 后 B F L的凝 血 活 性 未 发 生 变化 再 用 双蒸水将 E D T A 处理的 B F L样 品充分透析 以去 除 多余 的 E DT A，此 时凝血 活性也 无 变化 再 向透 析 后 的样 品中分别 加入 金属 离子(即各 种盐溶 液)结 果表 明，B F L凝 血 活 性 随 着 Hg。和 F e 抖 加 入 后明显降低 了(表 3)，而其他各种金属离 子均对 B F L的凝血 活性 没有 影响 0 9 8 7 6 5 4 3 2 1 0 ，i1 B l q 暑 l 事葛I n l o I I l 。o，I 第 2期 鲍 小敏，等：黄牛肝菌凝集素 的分 离纯化及部 分性质4 1 3 3 4 2 温 度 和 p H 对 B F L凝 血 活 性 的 影 响 不 同温度 和 p H 对 B F L的凝集 活性 见 表 4和 5 B F L 在 3 O 6 0 ，活性 基 本 不 变；7 0 和 8 0 处 理 时，凝血活性明显减少最低凝集浓度分别为 6 2 5 g g mL和 5 0 0 p g mL；9 O C或 者 以上 时，B F L完 全 丧 失 了活 性，且 冷 却 不 可恢 复，说 明此 时蛋 白 发 生 了不可 逆 的 变 性 由此 可 以看 出 B F L属 于一 种 耐热 性 比较强 的凝 集 素蛋 白 表 4温度对 B F L凝 集活 性的影响 Ta b4 Ef f e c t o f t e mpe r at u r e o n he ma ggl ut i na t i on a c t i v i t y o f BFL p H 在 6 0 9 8之 问 时，B F L活性 基本 不变；p H 在 5 0以下及 1 O 8以上 时，B F L凝 血 活性 显 著 降 低；p H 值 在 2 0和 1 2 0时，依 然 还 保 持 部 分凝 血 活 性，其 最 低 凝 集 浓 度 分 别 为 5 0 0 t g mL 和 2 5 0 p g mL 由此 可 以看 出 B F L具 有 广 泛 的酸 碱耐 受性，其耐 碱性 略强 于耐 酸性 表 5 p H值 对 B F L凝 集 活 性 的影 响 Tab 5 Ef f e c t o f pH O n he m a g gl ut i na t i on a c t i v i t y o f BFL 4 1 4 四川大学学报(自然科 学版)第 5 2卷 3 5不 同变 性剂 脲 和盐 酸 胍 对 B F L凝 血 活 性 的 影响 如 表 6和 7所示 B F L凝 血活 性 随着 脲 与盐 酸 胍浓度的增加逐渐下降，总体看来脲对 B F L凝血 活性影 响不 大 当脲 浓 度 达 到 7 M 时，B F L的最 低凝 集浓 度也 才 1 5 7 t g mL，但 是 当盐酸 胍 浓度 达 到 6 M 时，B F L的 最低 凝 集 浓 度 却 上 升 到 5 0 0 t z g mL 结 果 表 明，相 比脲 而 言，盐 酸 胍 对 B F L 的变 性 作 用 强 于 脲，对 B F L 活 性 中 心 的 破 坏 更 强 表 6不同浓度的脲 对 B F L凝集活性 的影响 Ta b 6 Ef f e c t o f u r e a o n h e ma g g l u t i n a t i o n a c t i v i t y o f B FL 脲(M)B F L浓 度(,u g mL)+一+4 讨 论 本文通过对 黄牛肝菌凝集素研究表 明：B F L 是 由两个 分子 量约 1 5 8 k Da的亚基组 成 的表 观分 子量 为 3 2 k D a的二 聚体，两个 亚 基之 间 由非 二硫 键 相连 蛋 白结构的稳定决定其生物学活性，由温度 和 p H 对 B F L凝 血活性 影 响 的实 验 表 明：B F L 即 使在高温强酸强碱的条件下，B F L的凝血活性并 未 受 到太 大 的影 响，说 明 在 这 些 条 件 下，B F L 的 凝血 活性 中心 没 有 受 到 太 大 的影 响，其 结 构 变 化 不大 而通过凝血活性实验结果，B F L能够使兔血 红细胞发生凝集，而鸡血鸭血红细胞却不行，是 由于兔血 红细 胞表 面具 有 B F L可 识别 的糖 基，而 鸡 血鸭血 红 细胞表 面不 具有 B F L可 识别 的糖 基 已有研究报道己糖胺尤其是己糖半乳糖胺是 真菌类凝集 素最 有效的抑制剂_ 1 然而，结果表 明独 立 的单糖或 低 聚糖并 不能 抑制 B F L的凝血 活 性，糖 蛋 白及 多 聚糖能 抑 制 B F L的凝 血 活 性 的作 用的机理还有待进一步研究 因此，也不能仅依靠 糖抑制试验的结果将 B F L归类于已有的凝集素家 族 凝 集 素与寡 糖 的结合 专一 性不是 由凝 集素 分子 中的糖所 决定 的，而 与 凝 集 素 中肽链 的糖 结 合 区 的构象相 关 凝 集 素分子 中的寡糖链 也 不参 与凝集 素 与糖类 的结合 通过 确定凝 集素 糖结 合位 点 的专 一性可以进一步为其寻找最佳的吸附剂提供科学 依 据 凝 集素 具有 丰 富多样 的生物 学活 性如抗 肿 瘤，抗植物病毒，抗真菌等在抗肿瘤方面：凝集素不 仅可以诱导肿瘤细胞发生凋亡，而且还可 以作为 细胞 分化 标记，由于凝集 素 特异 性 的糖 结合 活 性，因而 在肿 瘤靶 向药 物 的开 发上 具 有 广 泛 的应 用 前 景 2 因此对黄牛杆菌凝集素深入研究及开发利 用具 有重 要意 义 +第 2期 鲍 小敏，等：黄牛肝茵凝集素的分 离纯化及部分性 质 4 1 5 参 考文 献：E 1 2 I-3 4 3 5 6 7 3 8 9 1 O Ma l i a r i k M J，Go l d s t e i n I J P h o t o a f f i n i t y l a b e l i n g o f t h e a d e n i n e b i n d i n g s i t e o f t h e l e c t i n s f r o m l i ma be a n Pha s e ol us Lun a t u s a nd t he ki dn e y be a n，P h a s e o l u s Vu l g a r i s J Th e J o u r n a l o f B i o l o g i c a l Ch e mi s t r y，1 9 8 8，2 6 3：1 1 2 7 4 Ba r o n d e s S H Bi f u n c t i o n a l p r o p e r t i e s o f l e c t i n s：L e c t i n s r e d e f i n e d J Tr e n d s i n b i o c h e mi c a l s c i e n c e s，1 9 88，1 3：48 0 Dr i c k a me r K，Ta y l o r M E B i o l o g y o f a n i ma l l e e t i n s J An n u a l r e v i e w o f c e l l a n d d e v e l o p me n t a l b i o l o gY，1 9 93，9：23 7 Ko r n f e l d S S t r u c t u r e a n d f u n c t i o n o f t h e ma n n o s e 6 一 p h o s p h a t e i n s u l i n l i k e g r o wt h f a c t o r I I r e c e p t o r s J An n u a l r e v i e w o f b i o c h e mi s t r y(T o k y o)，1 9 9 2，1 1 9：1 Go l d s t e i n I J，Hu g h e s R C，Mo n s i g n y T，Os a wa T，S h a r o n NWh a t s h o u l d b e c a l l e d a l e c t i n?I-J Na t ur e，1 9 80，28 5：6 6 Va r k i A Bi o l o g i c a l r o l e s o f 0 l i g o s a c c h a r i d e s：a l l t h e o r i e s a r e c o r r e c t J G l y c o b i o l o g y，1 9 9 3，3：97 Li u B，Wu J M，Li J，a 1 P o l y g o n a t u m c y r t o n e ma l e c t i n i n duc e s mur i n e f i b r o s a r c oma L9 2 9 c e l l a p o p t o s i s a n d a u t o p h a g y v i a b l o c k i n g Ra s-Ra f a n d P I 3 K Ak t s i g n a l i n g p a t h wa y s J B i o c h i mi e，2 0 1 0，9 2(1 2)：1 9 3 4 Li u B，Ch e n g Y，Z h a n g B，e t a 1 P o l y g o n a t u m c y r t o ne ma l e c t i n i nd uc e s a po pt os i s a nd a u t oph a gy i n h u ma n me l a n o ma A3 7 5 c e l l s t h r o u g h a mi t o c h o n d r i a me d i a t e d R OS-p 3 8 一 p 5 3 p a t h w a y J C a n c e r L e t t e r s，2 0 0 9，2 7 5(1)：5 4 Li u B，B i a n H J，Ba o J KPl a n t l e c t i n s：P o t e n t i a 1 a n t i n e o p l a s t i c d r u g s f r o m b e n c h t o c l i n i c J C a n e e r Le t t e r s，2 0 1 0，2 8 7(1)：1 Li c a s t r o F，M o r i ni M C，Kr e t z 0，e t a1 M i t o ge n i c a c t i v i t y a n d i mm u n o l o g i c a l p r o p e r t i e s o f b o l e s a t i n e，a l e e t i n i s o l a t e d f r o m t h e mu s h r o o m B o l e t u s s a t a n a s L e n z J I n t e r n a t i o n a l J o u r n a l o f B i o c h e mi s t r y，1 9 9 3，2 5(5)：7 8 9 1 1 Tr i g u e r o s V，L o u g a r r e A，Al i-Ah r n e d D，e t a 1 1 2 1 3 1 4 1 5-1 6 1 7 1 8 1 9 2 O Xe r o c o mu s c h r y s e n t e r o n l e c t i n：i d e n t i f