农业微生物配套实验培养基的制备和灭菌专家讲座.pptx

农业微生物学试验农业微生物学试验农业微生物配套实验培养基的制备和灭菌专家讲座第1页试验二培养基制备和灭菌试验二培养基制备和灭菌1本试验目标和要求本试验目标和要求了解配制培养基原理，并掌握配制培了解配制培养基原理，并掌握配制培养基普通方法和步骤；了解加压蒸汽养基普通方法和步骤；了解加压蒸汽灭菌原理，并掌握其详细操作方法。灭菌原理，并掌握其详细操作方法。农业微生物配套实验培养基的制备和灭菌专家讲座第2页试验二试验二 培养基制备和灭菌培养基制备和灭菌2试验内容和原理试验内容和原理马丁氏培养基配制马丁氏培养基配制手提式高压蒸汽灭菌锅使用手提式高压蒸汽灭菌锅使用生理盐水配制生理盐水配制农业微生物配套实验培养基的制备和灭菌专家讲座第3页试验二培养基制备和灭菌试验二培养基制备和灭菌马丁氏培养基马丁氏培养基马丁氏培养基是一个用来分离真菌选马丁氏培养基是一个用来分离真菌选择性培养基。择性培养基。农业微生物配套实验培养基的制备和灭菌专家讲座第4页马丁氏培养基配方以下：马丁氏培养基配方以下：葡萄糖葡萄糖10g蛋白胨蛋白胨5gKH2PO41gMgSO47H2O05g琼脂琼脂1520g水水-1000mlpH自然自然此培养液此培养液1000ml加加1%孟加拉红水溶液孟加拉红水溶液3.3ml。临临用时每用时每100ml培养基中加培养基中加1%链霉素液链霉素液0.3ml。农业微生物配套实验培养基的制备和灭菌专家讲座第5页试验二培养基制备和灭菌试验二培养基制备和灭菌高压蒸汽灭菌是将待灭菌物品放在一个密高压蒸汽灭菌是将待灭菌物品放在一个密闭加压灭菌锅内，经过加热，使灭菌锅隔闭加压灭菌锅内，经过加热，使灭菌锅隔套间水沸腾而产生蒸汽。待水蒸汽急剧地套间水沸腾而产生蒸汽。待水蒸汽急剧地将锅内冷空气从排气阀中驱尽，然后关闭将锅内冷空气从排气阀中驱尽，然后关闭排气阀，继续加热，排气阀，继续加热，此时因为蒸汽不能溢此时因为蒸汽不能溢出，而增加了灭菌器内压力，从而使沸点出，而增加了灭菌器内压力，从而使沸点增高，得到高于增高，得到高于100温度。造成菌体蛋温度。造成菌体蛋白质凝固变性而到达灭菌目标。白质凝固变性而到达灭菌目标。农业微生物配套实验培养基的制备和灭菌专家讲座第6页试验二培养基制备和灭菌试验二培养基制备和灭菌需用仪器和试剂等需用仪器和试剂等KHKH2 2POPO4 4、MgSOMgSO4 47H7H2 2O O、蛋白胨，葡、蛋白胨，葡萄糖、琼脂、孟加拉红、试管、三角萄糖、琼脂、孟加拉红、试管、三角瓶、烧杯、量杯、天平、手提式高压瓶、烧杯、量杯、天平、手提式高压蒸汽灭菌锅，牛角匙、蒸汽灭菌锅，牛角匙、pHpH试纸、棉花、试纸、棉花、牛皮纸等。牛皮纸等。农业微生物配套实验培养基的制备和灭菌专家讲座第7页试验二培养基制备和灭菌试验二培养基制备和灭菌4试验步骤试验步骤培养基配制培养基配制称量称量溶化溶化调调pH过滤过滤分装分装加塞加塞包扎包扎灭灭菌菌无菌检验无菌检验农业微生物配套实验培养基的制备和灭菌专家讲座第8页马丁氏培养基配制马丁氏培养基配制1称量和溶化称量和溶化按培养基配方，准确称取各成份，并将各成份按培养基配方，准确称取各成份，并将各成份依次溶化在少于所需要水量中。待各成份完全溶依次溶化在少于所需要水量中。待各成份完全溶化后，补足水分到所需体积。再将孟加拉红配成化后，补足水分到所需体积。再将孟加拉红配成1%1%溶液，在溶液，在1000ml1000ml培养液中加入培养液中加入1%1%孟加拉红溶孟加拉红溶液液3 33ml3ml，混匀后，加入琼脂加热溶化。，混匀后，加入琼脂加热溶化。2分装、加塞、包扎、灭菌，无菌检验。分装、加塞、包扎、灭菌，无菌检验。3链霉素加入链霉素加入因为链霉素受热轻易分解，所以临用时，将培因为链霉素受热轻易分解，所以临用时，将培养基溶化后待温度降至养基溶化后待温度降至4545左右时才能加入。左右时才能加入。农业微生物配套实验培养基的制备和灭菌专家讲座第9页灭菌操作步骤灭菌操作步骤1首先将内层灭菌桶取出，再向外层锅内加入适量水，首先将内层灭菌桶取出，再向外层锅内加入适量水，使水面与三角搁架相平为宜。使水面与三角搁架相平为宜。2放回灭菌桶，并装入待灭菌物品。注意不要装得太放回灭菌桶，并装入待灭菌物品。注意不要装得太挤，以免防碍蒸汽流通而影响灭菌效果。三角烧瓶与试挤，以免防碍蒸汽流通而影响灭菌效果。三角烧瓶与试管口端均不要与桶壁接触，以免冷凝水淋湿包口纸而透管口端均不要与桶壁接触，以免冷凝水淋湿包口纸而透入棉塞。入棉塞。3加盖，并将盖上排气软管插入内层灭菌桶排气槽内。加盖，并将盖上排气软管插入内层灭菌桶排气槽内。再以两两对称方式同时旋紧相正确两个螺栓，使螺栓松再以两两对称方式同时旋紧相正确两个螺栓，使螺栓松紧一致，勿使漏气。紧一致，勿使漏气。农业微生物配套实验培养基的制备和灭菌专家讲座第10页灭菌操作步骤灭菌操作步骤4加热，并同时打开排气阀，使水沸腾以排除锅内冷加热，并同时打开排气阀，使水沸腾以排除锅内冷空气。待冷空气完全排尽后，关上排气阀，让锅内温空气。待冷空气完全排尽后，关上排气阀，让锅内温度随蒸汽压力增加而逐步上升。当锅内压力升到所需度随蒸汽压力增加而逐步上升。当锅内压力升到所需压力时，控制热源，维持压力至所需时间。压力时，控制热源，维持压力至所需时间。本试验用本试验用105kg/cm2，1213，25分钟灭菌。分钟灭菌。5灭菌所需时间到后，切断电源，让灭菌锅内温度自灭菌所需时间到后，切断电源，让灭菌锅内温度自然下降，当压力表压力降至然下降，当压力表压力降至0时，打开排气阀，旋松螺时，打开排气阀，旋松螺栓，打开盖子，取出灭菌物品。栓，打开盖子，取出灭菌物品。6将取出灭菌培养基放入将取出灭菌培养基放入37温箱培养温箱培养24小时，经小时，经检验若无杂菌生长，即可待用。检验若无杂菌生长，即可待用。农业微生物配套实验培养基的制备和灭菌专家讲座第11页试验二培养基制备和灭菌试验二培养基制备和灭菌生理盐水配制生理盐水配制0.85%氯化钠水溶液氯化钠水溶液比如：比如：100ml生理盐水配制：称取生理盐水配制：称取0.85克氯化钠，克氯化钠，溶解在少许蒸馏水中，溶解在少许蒸馏水中，定容定容到到100毫升。毫升。农业微生物配套实验培养基的制备和灭菌专家讲座第12页试验二培养基制备和灭菌试验二培养基制备和灭菌1.制备培养基制备培养基马丁氏培养基马丁氏培养基400ml/瓶，共瓶，共3瓶瓶2.2.制备无菌生理盐水（供稀释平板计数用）制备无菌生理盐水（供稀释平板计数用）9ml/支支20支；支；90ml/瓶，瓶，4瓶（加玻璃珠）瓶（加玻璃珠）3.3.灭菌灭菌 121 25min121 25min农业微生物配套实验培养基的制备和灭菌专家讲座第13页试验二试验二 培养基制备和灭菌培养基制备和灭菌五、试验汇报五、试验汇报1结果结果检验培养基灭菌是否彻底。检验培养基灭菌是否彻底。2思索题思索题什么是选择培养基？它在微生物学工作中什么是选择培养基？它在微生物学工作中有何主要性？有何主要性？农业微生物配套实验培养基的制备和灭菌专家讲座第14页