抗化学性肝损伤功能食品课件.ppt

抗化学性肝损伤功能食品抗化学性肝损伤功能食品范瑞霞范瑞霞201323104003食品科学食品科学抗化学性肝损伤功能食品抗化学性肝损伤功能食品为什么研究为什么研究？如何评价如何评价“主力军是谁们主力军是谁们”了解肝脏了解肝脏肝脏是人体内最大的实质性腺体，是体肝脏是人体内最大的实质性腺体，是体内新陈代谢的中心站，被喻为内新陈代谢的中心站，被喻为“人体最大人体最大的化工厂的化工厂”。肝脏生理功能肝脏生理功能u糖原生成、分解、异生，维持血糖浓度糖原生成、分解、异生，维持血糖浓度u肝脏中的胆汁酸能促进脂类的消化与吸收肝脏中的胆汁酸能促进脂类的消化与吸收u肝脏除能合成本身所需蛋白质外，还能合成大部肝脏除能合成本身所需蛋白质外，还能合成大部分血浆蛋白，如清蛋白、纤维蛋白原、凝血酶原分血浆蛋白，如清蛋白、纤维蛋白原、凝血酶原等；等；u储存脂溶性维生素储存脂溶性维生素A、D、E、K及维生素及维生素Bu能吞噬或胞饮血液中的细菌、衰老破坏的红细胞、能吞噬或胞饮血液中的细菌、衰老破坏的红细胞、病毒、抗原及变性蛋白体等，使血液净化病毒、抗原及变性蛋白体等，使血液净化u解除氨的毒性解除氨的毒性u在胚胎期，肝脏还能生成红细胞，具有造血功能在胚胎期，肝脏还能生成红细胞，具有造血功能什么是化学性肝什么是化学性肝损伤呢？损伤呢？概念篇概念篇“不良分子入侵不良分子入侵”u肝炎病毒：甲、乙、丙、丁、戊型肝炎病毒：甲、乙、丙、丁、戊型u化学药物化学药物u酒精：长期大量饮酒引起肝病酒精：长期大量饮酒引起肝病u霉菌毒素霉菌毒素u化学污染的食品化学污染的食品参考文献参考文献:蓝莓提取物对急性化学性肝损伤的干预作用蓝莓提取物对急性化学性肝损伤的干预作用2010“亲肝亲肝”毒物毒物是怎么损害肝脏是怎么损害肝脏的呢？的呢？机理篇机理篇 肝损伤的化学机制主要通过细胞色肝损伤的化学机制主要通过细胞色素素P450及其结合反应产生的中间代谢及其结合反应产生的中间代谢产物引起的损伤。产物引起的损伤。化学性肝损伤主要与化学性肝损伤主要与自由基损伤自由基损伤、抗氧化体系不足或耗竭抗氧化体系不足或耗竭、磷脂的、磷脂的崩解崩解、钙超载钙超载有关。有关。1 自由基（自由基（OFR）自由基是人体进行生命活动时所产生的一种自由基是人体进行生命活动时所产生的一种活性分子。活性分子。正常生理情况下，自由基在机体内能够持续正常生理情况下，自由基在机体内能够持续不断的产生，并具有调节细胞间的信号传递、细不断的产生，并具有调节细胞间的信号传递、细胞生长、抑制病毒和细菌等生物学作用。胞生长、抑制病毒和细菌等生物学作用。当人体处于病理状态，或在吸烟，过度饮酒当人体处于病理状态，或在吸烟，过度饮酒和不健康饮食等因素影响下，或在放射线照射、和不健康饮食等因素影响下，或在放射线照射、环境污染等因素作用下，均会引起自由基过量产环境污染等因素作用下，均会引起自由基过量产生。生。当自由基产生过多超过了机体的抗氧化当自由基产生过多超过了机体的抗氧化防御能力或机体的抗氧化防御系统削弱时，防御能力或机体的抗氧化防御系统削弱时，自由基不能被及时清除，就会攻击细胞组自由基不能被及时清除，就会攻击细胞组织，造成蛋白质、核酸等生物大分子变性，织，造成蛋白质、核酸等生物大分子变性，导致细胞和组织器官发生氧化损伤，诱发导致细胞和组织器官发生氧化损伤，诱发各种疾病，并加速机体衰老。各种疾病，并加速机体衰老。OFR 肝损伤肝损伤 OFROFR细胞能量代谢障碍细胞能量代谢障碍Na+/K+ATP酶酶 多不饱和脂肪酸多不饱和脂肪酸过氧化脂质过氧化脂质肝肝细细胞胞膜膜线线粒粒体体膜膜呼吸功能受损，呼吸功能受损，肝损严重肝损严重（1）机制一）机制一（2）机制二机制二Ca2+Ca2+Fe2+Fe2+Fe2+非酶促反应非酶促反应产生自由基，产生自由基，加重肝损，加重肝损，肝坏死肝坏死+OFR肝肝细细胞胞膜膜OFR酶活酶活干扰干扰(3)机制三机制三抑抑制制或或改改变变酶促反应酶促反应抗氧化酶活性抗氧化酶活性抗氧化防御能力抗氧化防御能力影影响响影响影响OFRDNA分子分子 氢键氢键 特殊密码特殊密码 多聚酶结合多聚酶结合位点位点 模板结构模板结构(4)机制机制四四2抗氧化体系不足或耗竭抗氧化体系不足或耗竭 防防护护系系统统酶抗氧化系统酶抗氧化系统非酶抗氧化系统非酶抗氧化系统氧化氢酶氧化氢酶超氧化物歧化酶超氧化物歧化酶谷胱甘肽过氧化物酶谷胱甘肽过氧化物酶维生素维生素A、C、E还原型谷胱甘肽还原型谷胱甘肽褪黑素褪黑素-硫辛酸硫辛酸微量元素铜、锌、硒微量元素铜、锌、硒 当细胞，组织或机体产生过多氧化物，当细胞，组织或机体产生过多氧化物，在机体抗氧化防御系统与自由基产生失衡在机体抗氧化防御系统与自由基产生失衡时导致氧化应激，最终造成时导致氧化应激，最终造成DNA、蛋白质，、蛋白质，脂类等生物大分子氧化损伤，引起细胞损脂类等生物大分子氧化损伤，引起细胞损伤。伤。（3）磷脂的崩解）磷脂的崩解 磷脂是细胞膜的构成成分，具有亲水性磷脂是细胞膜的构成成分，具有亲水性和亲脂性重属性，对细胞的物质转运、吸和亲脂性重属性，对细胞的物质转运、吸收和代谢有重要作用。收和代谢有重要作用。细胞膜磷脂被自由基攻击而崩解，磷脂细胞膜磷脂被自由基攻击而崩解，磷脂酶被激活催化细胞膜上的磷脂释放花生四酶被激活催化细胞膜上的磷脂释放花生四烯酸、前列腺素等介质，加重肝细胞损伤烯酸、前列腺素等介质，加重肝细胞损伤。（4）肝细胞钙超载）肝细胞钙超载 钙对维持体内细胞正常生理状态，调节钙对维持体内细胞正常生理状态，调节神经肌肉兴奋等有重要作用。神经肌肉兴奋等有重要作用。钙钙稳态对维稳态对维持细胞正常功能极为重要。持细胞正常功能极为重要。大量钙离子涌入细胞并主要聚集在线粒大量钙离子涌入细胞并主要聚集在线粒体内，会激活钙依赖蛋白酶，诱发黄嘌呤体内，会激活钙依赖蛋白酶，诱发黄嘌呤氧化反应生成更多的氧化反应生成更多的OFR，从而加重肝细，从而加重肝细胞损伤甚至导致肝细胞坏死。胞损伤甚至导致肝细胞坏死。“后果很严重后果很严重”肝损伤是多种严重肝脏疾病的发生、发肝损伤是多种严重肝脏疾病的发生、发展及最终走向肝功能衰竭的始动环节和共展及最终走向肝功能衰竭的始动环节和共同途径。各种有害因素所致的肝损伤可表同途径。各种有害因素所致的肝损伤可表现为肝坏死、脂肪肝、胆汁郁积、肝纤维现为肝坏死、脂肪肝、胆汁郁积、肝纤维化、肝硬化及肝癌等。化、肝硬化及肝癌等。“主力军一主力军一”-中草药、植物及提取物研制而成中草药、植物及提取物研制而成原料：原料：灵芝、大豆、茶、灵芝、大豆、茶、枸枸杞杞、当归、黄芪当归、黄芪、芦、芦笋、笋、山楂山楂、香菇、香菇、银银杏杏、苦参等、苦参等有效成分：有效成分：多糖、黄酮类、萜类多糖、黄酮类、萜类及甙类化合物及甙类化合物如大豆皂甙、银杏黄如大豆皂甙、银杏黄酮类、香菇多糖、黄酮类、香菇多糖、黄芪多糖等芪多糖等提高免疫能力、抗脂质过氧化、抗肿瘤、抗衰老等。提高免疫能力、抗脂质过氧化、抗肿瘤、抗衰老等。活血化瘀、清肝解毒、强肝益肝活血化瘀、清肝解毒、强肝益肝“主力军二主力军二”-某些营养成分及物质某些营养成分及物质维生素维生素C硒、维生素硒、维生素E牛磺酸牛磺酸减轻细胞脂肪性病变减轻细胞脂肪性病变,促进肝细胞再生及促进肝细胞再生及肝糖元的合成肝糖元的合成,增强肝脏的解毒功能增强肝脏的解毒功能自由基清除剂，保护肝细胞膜免受过氧化损伤自由基清除剂，保护肝细胞膜免受过氧化损伤调节肝脏脂肪代谢，稳定细胞膜通透性，调节肝脏脂肪代谢，稳定细胞膜通透性，增加机体抗脂质过氧化能力，清除氧自由基，增加机体抗脂质过氧化能力，清除氧自由基，抑制细胞因子的异常升高，抑制胶原沉积抑制细胞因子的异常升高，抑制胶原沉积“主力军四主力军四”-特殊生物因子特殊生物因子胎盘因子胎盘因子-解释一下解释一下多肽（以谷胱甘肽多肽（以谷胱甘肽(GSH)为例）为例）1、清除自由基：、清除自由基：2、抑制乙醇侵害肝脏产生脂肪肝、抑制乙醇侵害肝脏产生脂肪肝。3、中和解毒的作用：与进入体内的有毒化合物、重金属、中和解毒的作用：与进入体内的有毒化合物、重金属离子或致癌物质等相结合促其排出体外离子或致癌物质等相结合促其排出体外国内保健食品现状国内保健食品现状 国家食品药品监督管理总局保健食品库中可查的国产国家食品药品监督管理总局保健食品库中可查的国产保健食品中对化学性肝损伤有辅助保护作用的功能性食品保健食品中对化学性肝损伤有辅助保护作用的功能性食品共有共有146种。种。金娜牌青清含片金娜牌青清含片同仁堂牌警醒片同仁堂牌警醒片千元牌千元胶囊千元牌千元胶囊普比欧牌金利胶囊普比欧牌金利胶囊三奇堂牌京茶三奇堂牌京茶新动力牌甘保通胶囊新动力牌甘保通胶囊 评价：四氯化碳肝损伤模型评价：四氯化碳肝损伤模型1.1.原理原理CCl4CCl3P450酶系酶系共共价价结结合合蛋白质蛋白质O2CCl3O2蛋白合成障碍、蛋白合成障碍、脂质分解代谢紊乱，脂质分解代谢紊乱，引起肝细胞内甘油三酯引起肝细胞内甘油三酯(TG)蓄积蓄积脂质过氧化，脂质过氧化，引起细胞膜的变性损伤引起细胞膜的变性损伤,致使致使酶渗漏酶渗漏以及各种类型的以及各种类型的细胞病变，细胞病变，甚至坏死甚至坏死。2动物分组与处理动物分组与处理注：蓝莓提取物，花色苷含量注：蓝莓提取物，花色苷含量25%；葡萄籽提取物，原花青素含量；葡萄籽提取物，原花青素含量95%给予四氯化碳给予四氯化碳24h后：后：取肝脏，称重后，计算取肝脏，称重后，计算肝脏指数肝脏指数经眼球取血分离血清，测定经眼球取血分离血清，测定血清血清ALT、AST取肝左叶，置取肝左叶，置10%福尔马林中固定，待进行福尔马林中固定，待进行肝脏肝脏病理组织学检查病理组织学检查及及病变评分病变评分3指标测定指标测定3.1肝脏指数肝脏指数 实验开始时与实验结束时分别称量体重，实验开始时与实验结束时分别称量体重，解剖小鼠后立即用生理盐水冲洗肝脏并称解剖小鼠后立即用生理盐水冲洗肝脏并称量肝脏重量，计算体重增长值及肝脏指数。量肝脏重量，计算体重增长值及肝脏指数。3.2血清血清ALT、AST 分别采用丙氨酸氨基转移酶、天门冬氨分别采用丙氨酸氨基转移酶、天门冬氨酸氨基转移酶试剂盒酸氨基转移酶试剂盒（改良赖氏法）（改良赖氏法）测定测定血清中的血清中的ALT与与AST3.3病理组织学检查病理组织学检查(1)(1)制片制片 从肝左叶中部做横切面取材，常规病理制片（石从肝左叶中部做横切面取材，常规病理制片（石蜡包埋，蜡包埋，H.EH.E染色）。染色）。(2)(2)镜检镜检 从从肝肝脏脏的的一一端端视视野野开开始始记记录录细细胞胞的的病病理理变变化化，用用4040倍倍物物镜镜连连续续观观察察整整个个组组织织切切片片。分分别别观观察察每每个个视视野野中中各各种种病病变变所所占占视视野野的的面面积积并并累累计计所所观观察察视视野野的的病变总分。病变总分。(3)主要观察的病变类型有主要观察的病变类型有:肝细胞气球样变（细胞肿大，胞浆残留少许）肝细胞气球样变（细胞肿大，胞浆残留少许）脂肪变性（肝细胞胞浆内出现界限清晰的脂滴脂肪变性（肝细胞胞浆内出现界限清晰的脂滴空泡）空泡）胞浆凝聚（胞浆嗜伊红增强）胞浆凝聚（胞浆嗜伊红增强）肝细胞水样变性肝细胞水样变性肝细胞坏死（胞浆嗜伊红改变，凝固性坏死）肝细胞坏死（胞浆嗜伊红改变，凝固性坏死）增加正常细胞与肝损伤细胞图片并说明增加正常细胞与肝损伤细胞图片并说明3.4组织病理学评分组织病理学评分(1)肝细胞气球样变的病理组织学特征与评分值肝细胞气球样变的病理组织学特征与评分值(2)肝细胞脂肪变性的病理组织学特征与评分值肝细胞脂肪变性的病理组织学特征与评分值(3)肝细胞胞浆凝聚的病理组织学特征与评分值肝细胞胞浆凝聚的病理组织学特征与评分值(4)肝细胞水样变性的病理组织学特征与评分值肝细胞水样变性的病理组织学特征与评分值(5)肝细胞坏死病理组织学特征与评分值肝细胞坏死病理组织学特征与评分值4数据分析数据分析采用方差分析，采用方差分析，按方差分析的程序先进行方差齐性检验。按方差分析的程序先进行方差齐性检验。方差齐方差齐，计算，计算F值，若值，若FF0.05，P0.05,用多个实验组和一个对照组用多个实验组和一个对照组间均数的两两比较方法进行统计；间均数的两两比较方法进行统计；对非正态或方差不齐的数据进行适当的变量转换，待满足对非正态或方差不齐的数据进行适当的变量转换，待满足正态或方差齐要求后，用转换后的数据进行统计；正态或方差齐要求后，用转换后的数据进行统计；若变量转换后仍未达到正态或方差齐的目的，改用秩和检若变量转换后仍未达到正态或方差齐的目的，改用秩和检验进行统计验进行统计 5结果判定结果判定(1)血清血清 ALT、AST结果结果 受试样品组的受试样品组的ALTALT、ASTAST与模型对照组比较，差异有显著与模型对照组比较，差异有显著性，可分别判定性，可分别判定ALTALT、ASTAST结果阳性结果阳性。(2)组织病理分析结果组织病理分析结果 a a 受试样品任何一个剂量组与模型对照组之间，气球样变、受试样品任何一个剂量组与模型对照组之间，气球样变、脂肪变性、胞浆凝聚、水样变性或肝细胞坏死等肝细胞病脂肪变性、胞浆凝聚、水样变性或肝细胞坏死等肝细胞病变中，肝细胞坏死程度减轻，差异有显著性，而其它病变变中，肝细胞坏死程度减轻，差异有显著性，而其它病变类型与模型对照组比较明显减轻或无明显差异，可判断动类型与模型对照组比较明显减轻或无明显差异，可判断动物实验病理结果阳性。物实验病理结果阳性。最好能补充实例和图片最好能补充实例和图片 b b 受试样品任何一个剂量组与模型对照组之间，受试样品任何一个剂量组与模型对照组之间，气球样变、脂肪变性、胞浆凝聚、水样变性这四气球样变、脂肪变性、胞浆凝聚、水样变性这四种肝细胞病变类型加重和减轻同时存在，差异有种肝细胞病变类型加重和减轻同时存在，差异有显著性，且肝细胞坏死程度减轻，差异有显著性，显著性，且肝细胞坏死程度减轻，差异有显著性，则可将其各种病理变化的得分相加，肝细胞坏死则可将其各种病理变化的得分相加，肝细胞坏死评分评分2 2倍计入，以总分进行统计分析，若差异有显倍计入，以总分进行统计分析，若差异有显著性，可判断动物实验病理结果阳性。著性，可判断动物实验病理结果阳性。6结果判断结果判断 在在模模型型成成立立的的前前提提下下，ALT、AST两两项项血血液液生生化化指指标标中中任任何何一一项项和和病病理理结结果果为为阳阳性性，可可判判定定受受试试样样品品对对化化学学性性肝肝损损伤伤有有辅辅助保护作用。助保护作用。